Штамм бактерий SтRертососсUS воVIS, используемый для размножения бактериофага SтRертососсUS воVIS Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 

1

(21)4867633/13

(22)20.09.90

(46) 30.11.92. Бюл. Р 44

(71)Всесоюзный научно-исследовательский институт Физиологии, биохимии сельскохозяйственных животных

(72)Б.В.Тараканов

(56)Brnilsford П., Hartnan P. Cha- jacterization of Str. lurans bacteri- ophages/Can. J. llicrob., 1968, v. 14,

,4, 397-402.

Annual Report In St. of Aniomal Physiology Slovac Academy of Sciences, 1988, v. 8, p. 29-31. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ STREPTOCOCCUS BOVIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ РАЗМНОЖЕНИЯ БАКТЕРИОФАГА STREPTOCOCCUS BOVIS

(57)Область применения: микробиологическая промышленность, животноводство, кормление крупного рогатого скота. Сущность изобретения: получен новый штамм Streptococcus bovis ВКПМ В-5386, используемый для размножения бактериофагов Streptococcus bo- vis ВКПМ Ьч РН-689, применение которых в кормлении коров позволяет регулировать интенсивность и направленность метаболических процессов в преджелуд- ках, повыиать жирность молока и эффективность использования корма. Ежедневное скармливание бактериофагов высокопродуктивным коровам с 40-50% уровнем концентратов по общей пита- 1 тельности рациона повышает содержание жира в молоке на 0,12-0,24% и снижает затраты кормовых единиц и переваримого протеина на производство молока.

1/1

С

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения штаммов, используемых для размножения бактериофага, применяемого в микробиологической промышленности и животноводстве.

В литературе сообщалось о выделении фагов Streptococcus bovis, однако никаких сведений об индикаторных штаммах не представлено. Таким образом, прототипа предлагаемому штамму в патентной и научно-технической информации нами не выявлено.

Целью изобретения является получение нового штамма, используемого для размножения бактериофагов (бактериальных вирусов), применение которых

в кормлении коров позволяет регулировать интенсивность и направленность метаболических процессов в лреджелуд- ках.

Новый штамм Str. bovis БТ-28 и вирулентный мутант бактериофага Str% bovis DM 28/28 получены с использованием традиционных микробиологических приемов в результате широкого скрининга свежевыделенных природных штаммов Str. bovis на лизогению и чувствительность к бактериофагам.

, Полученный штамм бактерий Str. bovis БТ-28 и его бактериофаг Str. bovis BM 28/28 депонированы во Всесоюзной коллекции промышленных

VI VI 00

00 О

317

микроорганизмов (ВКПМ) под К В-53В6 и Г РН-689 соответственно.

Lh-амм Str. bovis БТ-28 (ВКПМ N В- 5386) характеризуется следующими культурально-морфологическими и фи- зиолого-биохимимескими признаками.

Культурально-морфологичеекие признаки .

Клетки имеют овальную или ланцетовидную Форму и размеры 0,8-1,2 мкм. В мазках располагаются преимущественно попарно, реже небольшими скоплениями и короткими цепочками. Непод

вижны. Спор не образуют. Размножают- 15 сахарозу, раффинозу, маннит, трегалося путем поперечного деления. По Гра- му окрашиваются положительно.

Агаризованная среда Хамли°на с глюкозой и мальтозой (39°С, 72 ч). Образует округлые с ровным краем, выпук- „л лые, непрозрачные, серобелые с желто-- ватым оттенком колонии, размером от точечных до 1-1,2 мм в диаметре.

Мясопептонный агар с глюкозой (39°С, 72 ч). Образует округлые, цветные, выпуклые, точечные колонии.

Жидкая среда Хамлина с глюкозой и мальтозой (39°С, 2 ч). Интенсивное помутнение и аморфный, серобелый осадок, легко взмучивающийся при ,,« встряхивании. Пленки на поверхности среды не образует.

бизиолого-биохимические признаки.

факультативный анаэроб.

Оптимум температуры 37-39dC, pacзу, целлобиозу, сорбозу, рамнозу и фруктозу. Не использует салицин, сорбит, инулин, пектин, дульцит, инозит мелибиозу, мелизитозу, арабинозу, ксилозу и глицерин. Способность к ферментации крахмала штаммом утрачена.

При хранении в холодильнике (4 - 6°С) в жидкой среде штамм сохраняется в течение 3-х месяцев.

Генетические особенности

Штамм лизогенен и способен к спонтанному лизису с образованием вирулентных частиц бактериофага.

Штамм не патогенен.

Штамм БТ-28 (ВКПМ К В-5386) идентифицирован по определителю Ьерги (1974) как штамм вида Streptococcus bovis.

Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами ис40

тет при 15°С, но не при . Погиба-35 пользования штамма Str.bovis ВКПМ ет после 30 мин прогревания при 63°С.

Оптимум рН 6,8-7,2. Растет при рН 8,6. Конечный рН в среде с глюкозой 4,8-4,9.

Образует газ из глюкозы.

Каталазоотрицателен, толерантен к МН3 и H20.

Образует аммиак из аргинина.

Молоко свертывает.

iртиленовую синь восстанавливает.

Нитраты не редуцирует.

Желатину не разжижает.

Ацетилметилкарбинол и индол не продуцирует.

45

№ В-5386 для получения бактериофага Str .bovis BM 28/28 (ВКПМ РН-689) и использования бактериофагов в кормлении коров.

Пример 1. Приготовления препарата бактериофага сводится к следующему. Чувствительную к фагу культуру Str.bovis БТ-28 выращивают на питательной среде следующего состава, г/л: - 0,5, КНгР04 - 0,2, NaCl - 1,0, (NH4)SO - 0,5, MgSO,. - 0,1, СаС12 -0,1, МаНСОэ - 5,0, глюкоза - 5,0, мальтоза - 3,0, пептон - 10,0, гидролизат казеина - 5,0, цис- теин солянокислый - 0,7.

Гликолиза на кровяном агаре не дает.

Растет в средах с 2,5; 4 и 6% хлористого натрия, 10 и 40% желчи.

В среде с 5% сахарозы слизи не 55 образует.

При выращипании в Жидкой среде Хамлина с глюкозой и мальтозой под

резиновыми пробками и температуре 39°С имеет следующие параметры роста: Продолжит ел ь ноет ь лаг-фазы1б4±1,8мин

Удельная скорость рос- 0,064± та±0,02 час

Время удвоения биомассы65i2 мин Время перехода в стационарную фазу 8,3±0,43 ч Отношение к источникам углерода: Сбраживает глюкозу, нутрозу, ман- нозу, лактозу, галактозу, мальтозу,

сахарозу, раффинозу, маннит, трегалозу, целлобиозу, сорбозу, рамнозу и фруктозу. Не использует салицин, сорбит, инулин, пектин, дульцит, инозит мелибиозу, мелизитозу, арабинозу, ксилозу и глицерин. Способность к ферментации крахмала штаммом утрачена.

При хранении в холодильнике (4 - , 6°С) в жидкой среде штамм сохраняется в течение 3-х месяцев.

Генетические особенности

Штамм лизогенен и способен к спонтанному лизису с образованием вирулентных частиц бактериофага.

Штамм не патогенен.

Штамм БТ-28 (ВКПМ К В-5386) идентифицирован по определителю Ьерги (1974) как штамм вида Streptococcus bovis.

Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами использования штамма Str.bovis ВКПМ

пользования штамма Str.bovis ВКПМ

№ В-5386 для получения бактериофага Str .bovis BM 28/28 (ВКПМ РН-689) и использования бактериофагов в кормлении коров.

Пример 1. Приготовления препарата бактериофага сводится к следующему. Чувствительную к фагу культуру Str.bovis БТ-28 выращивают на питательной среде следующего состава, г/л: - 0,5, КНгР04 - 0,2, NaCl - 1,0, (NH4)SO - 0,5, MgSO,. - 0,1, СаС12 -0,1, МаНСОэ - 5,0, глюкоза - 5,0, мальтоза - 3,0, пептон - 10,0, гидролизат казеина - 5,0, цис- теин солянокислый - 0,7.

рН среды доводят до 6,8-7,2, разливают по пробиркам, колбам или термостойким бутылям и стерилизуют при 0,5 атм - 30 мин..Культивирование ведут под резиновыми пробками, в которые при приготовлении фага в объеме 0,1-5 л устанавливают дефлегматоры, заполненные водой.

51

В качестве посевного материала ис пользуют суточную культуру Str.bovis БТ-28, которую добавляют из расчета 2,5-5% к объему среды. Посевы выращивают при 39°С. К 3-5-часовой культуре добавляют 0,5-1 мл фага Str.bovis ВМ 28/28 на 100 мл культуры (мно жественность инфекции 0,1-1,0) и инкубируют инфицированную культуру до наступления лизиса в течение -5 ч. Лизис культуры наблюдают визуально. Титр фага в получаемых таким образом лизатах обычно варьируют в пределах 1 -109 - 1 -10 .

Пример 2. В опытах на лакти рукнцих коровах установлено, что бактериофаги Str.bovis являются эффективным средством регуляции интенсивности и направленности метаболических процессов в преджелудках. Еже781 ПО 6

дневное скармливание эффективного ко личества препарата бактериофагов приводило к нарастанию концентрации (птк- - териофагов в содержимом рубца, что сопровождалось снижением численноеги амилолигических бактерий или их активности, увеличением целлюлозолити- ческой активности и количества бакте- п рий, использующих ксилан, целлобиозу и ксилозу. Направленность брожения обычно смещалась в сторону большего образования пропионата и бутирата за счет снижения ацетата.

15

Формула изобретени

Штамм бактерий Streptococcus bo- vis ВКПМ № В-5386, используемый для 20 размножения бактериофага Streptococcus b-ovis ВКПМ К РН-689.