Хлоргидрат О-изобутил-О-2-(N-пиперидил)изопропил-метилтионфосфоната, обладающий антихолинэстеразной активностью Советский патент 1993 года по МПК C07F9/40 C07F9/576 A61K31/675 

Изобретение относится к фосфорорга- нической химии, а именно к новому биологически активному соединению формулы

%f

изо-с нэо/ Хо-сн-сн2-м(3

СН3 НС1

обладающему способностью ингибировать холинэстеразы.

Целью изобретения является синтез хлоргидрата 0-изобутил-0-2-(М-пиперидил) изопропил-метилтионфосфоната с более выраженной ингибирующей эффективностью и избирательностью действия по отношению к АХЭ и БуХЭ крови теплокровных.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве ингибитора АХЭ и БуХЭ предложен хлоргидрат 0-изобутил-0-2-(М-пипери- дил) изопропил-метилтионфосфоната.

Предложенное соединение формулы I в три стадии:

а) взаимодействием изобутилового спирта с дихлорангидридом метилтиофос- фоновой кислоты получают хлорангидрид 0- изобутил-метилтиофосфоновой кислоты получают хлорангидрид 0-изобутил-метил- тиофосфоновой кислоты;

б) взаимодействием хлорангидрида 0- изобутилметилтиофосфоновой кислоты с N- /3-оксипропилпиперидином получают 0-изосо

о со N о

со

бутил-0-2-(М-пиперидил) изопропил-метил- тионфосфонат;

в) конечный продукт хлоргидрат 0-изо- бутил-0-2 (пиперидил)-изопропил-метилти- онфосфоната получают действием хлористого водорода на 0-изобутил-0-2-( пиперидил) изопропил-метилтионфосфона- та.

Пример 1. Получение хлорангидрида 0-изобутилметилтиофосфоновой кислоты.

В трехгорлую колбу объемом 250 мл, снабженную обратным холодильником, механической мешалкой и капельной воронкой, помещают 14,9 г (0,1 моль) дихлорангидрида метилтиофосфоновой кислоты, растворенного в 50 мл абсолютного эфира. При охлаждении (t 0 - (-5)°С и перемешивании постепенно, по каплям добавляют 7,8 г (0,1 моль) изобутилового спирта и 10,1 г (0,1 моль) сухого триэтиламина в 50 мл абсолютного эфира. После этого реакционную смесь нагревают на водяной бане при температуре 30-35°С в течение 2 ч. Реакционную смесь оставляют на ночь. Выпавший солянокислый триэтиламин отфильтровывают, осадок промывают два раза абсолютным эфиром (по 20 мл). Растворитель отгоняют, осадок перегоняют в вакууме. Выход 10,8 г (58%).

Т.кип. 76-78°/4 мм. по 1,4862, d42 1,1176.

Получение 0-изобутил-0-2-(М-пипери- дил) изопропилметилтионфосфоната.

В трехгорлую колбу объемом 100 мл, снабженную обратным холодильником, механической мешалкой и капельной воронкой, помещают 1,43 г (0,01 моль) N- / -оксипропилпиперидинаи 1,01 г(0,01 моль) сухого триэтиламина, растворенного Б 50 мл абсолютного эфира. При охлаждении (t 0-(-5)°С) и перемешивании постепенно, по каплям добавляют 1,86 г (1,01 моль) хлорангидрида 0-изобутилметилтионфосфоновой кислоты, растворенного в 20 мл абсолютного эфира. После этого реакционную смесь нагревают на водяной бане при температуре 30-35°С в течение 2 ч. Реакционную смесь оставляют на ночь. Выпавший солянокислый триэтиламин отфильтровывают, осадок два раза промывают абсолютным эфиром по 20 мл. Из фильтрата эфир отгоняют, осадок очищают на колонке с А120з (II степени активности). Элюент - абсолютный эфир. Ход реакции и колоночной хроматог- рафии контролируют методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинке с в незакрепленном слое. Система для ТСХ - бензол:эфир:этанол (10:5:2). Проявитель - пары иода. Фракции с одинаковыми Rf объединяют, эфир отгоняют, остаток выдерживают в вакууме в течение 30 мин при температуре 35-40°С, остаток - светло-желтое маслообразное вещество. Выход конечного продукта 55%, по 1,4848, (to 1,0243, Rf 0,91, МРонайд. 816,92. МРовыч. 82,33. Найдено, %: С 53,40; Н 9,02; Р 10,39.

C13H2802PNS

Вычислено, %: С 53,24; Н 8,87; Р 10,58. ИК-спектр (v, см 1): Р S - 750, Р-О-СЮ55, СНз, СН2-2940 - 2850.

Спектр ПМР (б , м.д.), 1,90 (6Н, д, СНз, J 6,8 Гц), 1,7/ЗН, д, СНз, J - 6,0 Гц), 1,2 - 1,б(6Н, С-СН2), 1,75(ЗН, д, Р-СНз, J 16 Гц), 1,7 - 2,6 (6Н, м, N-CH2), 3,52 и 3,74 (2Н, м,

0-СН2).

Получение хлоргидрата О-изобутил-0-2- (М-пиперидил)-изопропил-метилтионфрс- фоната.

1 г (0,003 моль) 0-изобутил-0-2-(М-пиперидил) изопропил-метилтионфосфонат растворяют в 10 мл абсолютного эфира и перемешивают стеклянной палочкой, по каплям добавляют 10 мл насыщенного хлористым водородом эфира. Выпавший хлоргидрат отфильтровывают, промывают 3 раза (по 10 мл) абсолютным эфиром и сухим пет- ролейным эфиром. Осадок сушат в вакууме

масляного насоса, без доступа влаги. Получают белое аморфное вещество. Выход продукта реакции 95% (1,06 г.).

Найдено, %: С 47,59; Н 8,50; Р 9,61; CI 10,45.

Ci3H2902PNSCI

Вычислено, %: С47,34; Н 8,80; Р 9,40; CI 10,77.

Пример 2, Определение обратимой антихолинэстеразной активности хлоргидрата 0-изобутил-0-2-(М-пиперидил) изопро- пил-метилтионфосфоната,

Антихолинэстеразную активность заявляемого соединения определяли на фермен- тных препаратах АХЭ (К.Ф.3.1.1.7) из

эритроцитов крови человека и БуХЭ (К.Ф.3.1.1.8) из сыворотки крови лошади, производства Пермского НИИ вакцин и сывороток. Удельная активность АХЭ 2,7 Е/мг, а БуХЭ 28 Е/мг.

Изменение скорости ферментативной активности АХЭ и БуХЭ осуществляли колориметрическим методом Эллмана 3 на колориметре Speco-221 (ГДР), принцип которого заключается в-изменении интенсивности окраски (при Я 420 нм), образующегося продукта при взаимодействии тиохолина с 5,5-дитиобиснитробензойной кислотой.

Скорость гидролиза ацетилтиохолина измеряли в пробе, содержащей 0,4 мл 0,001 М раствора 5,5-дитиобиснитробензойной

кислоты, 0,7 мл 0,1 М фосфатного буфера (рН 8,0), 0,3 мл водного раствора АХЭ (или БуХЭ), 0,2 мл раствора субстрата, 0,2 мл водного раствора хлоргидрата 0-изобутил- 0-2-(1М-пиперидил)изопропилметилтионф осфоната.

Для определения величин К| измеряли скорости ферментативного гидролиза в широком диапазоне концентрации ацетилтио- холина в опытах без заявляемого вещества и с ним.

Константы (К|) обратимого ингибирова- ния АХЭ и БуХЭ определяли по методу Кор- нкша-Боудена 4. Результаты определения антихолинэстеразного действия заявляемо- го вещества формулы I и известного II представлены в таблице.

Сравнение данных таблицы показывает, что заявляемое вещество формулы I я в- ляется более сильным ингибитором, чем известное II. При одинаковых условиях проведения ферментативной реакции для соединения II нет резкого различия в торможении активности АХЭ и БуХЭ. Хлор- гидрат. 0-изобутил-0-2-(М-пиперидил) изо- пропил-метилтионфосфоната в 97,2 раза

активнее по отношению к АХЭ и 10,7 раза к БуХЭ, чем соединение II.

Важным преимуществом заявляемого соединения перед известным является избирательность действия по отношению к АХЭ, что достигается значительно меньшей величиной Ki равной 3, М по сравнению с известным, KI которого равно 1, М.

Таким образом, предлагаемое биологически активное соединение ввиду его высокой антихолинэстеразной активности дает возможность использовать его в качестве селективного ингибитора холинэстераз.

Формула изобретения

Хлоргидрат 0-изобутил-0-2-(М-пйпери- дил) изопропил-метилтионфосфоната формулы

CHvs

ИЗО-СЦН90/ X0-CH-CH2-N0

СН3 HCI

обладающий антихолинэстеразной активностью.

Использование: в медицине в качестве препарата, обладающего антихолинэсте- разной активностью. Сущность изобретения:продукт хлоргидрат 0-изобутил-0-2-(М-пиперидил) изопропил- метилтионфосфоната формулы СН3Р(5)(ОС Н9-изо)(0-СЖСН3КН2-Ы0, НС1 БФС1зН2э02РМ5С1, выход 95%. Реагент 1: СНзР(5). Реагент 2: изо-С4Нд-ОН. Реагент 3: но-сн№3)сн2-ьО Реагент4:HCI. Условия реакции: в среде ди- этилового эфира в присутствии триэтилами- на. 1 табл. со с