СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ В КРОВИ Советский патент 1971 года по МПК G01N21/64 

Изобретение относится к биохимии.

Известный способ определения лимонной кислоты 3 крови с использованием реакции лимонной кислоты с пиридином в уксусном ангидриде, недостаточно чувствителен, а при использовании для концентрирования растворов экстракции и лиофилизации весьма трудоемок.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа и упрощение методики его проведения.

Для достижения этой цели проводят флуорометрическое определение продукта реакции лимонной кислоты с пиридином в уксусном ангидриде при возбуждении флуоресценции в области 420 ммк и флуоресценции при .

В процессе определения 0,3 мл крови смешивают с 1,0 мл 0,1 М оксалата аммония, добавляют 0,2 мл 15%-ной метафосфорной кислоты и центрифугируют при 4000 об/мин в течение о мин. Полученный экстракт используют для анализа. В три толстостенные пробирки помещают 0,5 мл 2%-ной метафосфорной кислоты, 0,5 Л1л стандартного раствора цитрата {0,03 мМ) в 2%-ной метафосфорной кислотен 0,5 мл экстракта крови. Затем в пробирки вносят по 4 мл перегнанного уксусного ангидрида, прогревают 10 мин на водяной бане при 60°С и охлаждают в воде со льдом в течение 5 мин. К охлажденным растворам добавляют по 1 мл перегнанного сухого пиридина, перемещнвают.

снова охлаждают до О-2°С и флуорометрируют при возбужденнн синим фильтром (УФС) н флуоресценции при 455 ммк и постоянной температуре. Затем растворы выдерживают в водяной бане при 60°С в теченпе 40 мин, охлаждают в воде со льдом н производят замеры флуоресценции при температуре 0±0,2°С. Определение количества цитрата производят по формуле

ДФп

-ЛФо

0,15 мА оль/л,

Дф Дфд

где ДФо - разность интенсивностей флуоресценции до и после нагревания пробы с пиридином при наличии в пробе только метафосфорной кислоты (эта величина, как правило, равна нулю);

ДФь- - разность ннтенсивностей флуоресценции в контрольной пробе с 0,03 мМ растпора цптрата; АФп - разность интенсивностей флуоресценции до и после нагревания с пиридином в исследуемой пробе. Ощибка определения составляет нрпмерно 4%, чувствительность метода при использовании прибора ЭФ-3 около 0,02 мкг:.ил. 3 КИСЛОТЫ с Пиридином в уксусном ангидриде, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и упрощения его, проводят флуорометрическое определение про4дукта реакций лимонной кислоты с пиридином в уксусном ангидриде при возбуждении флуоресценции в области 420 и 455 ммк.