СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИТИДИН-5'-ДИ- И ТРИФОСФАТОВ Советский патент 1974 года по МПК C12P19/30 

1 .

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения нуклеозид-ди- и трифосфатов, применяемых в различных областях биохимии и медицины.

Известен способ получения пуклеозидфосфатов путем биохимического фосфорилирования с использованием в качестве источника биологического катализатора водного экстракта зеленых водорослей.

Для ускорения процесса биосинтеза, активации биокатализатора и увеличения выхода и чистоты получения продукта зеленые водоросли в качестве биокатализатора вводят в реакционную смесь в виде свежезамороженной размельченной пасты, а процесс фосфорилирования проводят при облучении красным монохроматическим светом с длиной волн больше 620 нм при температуре, преимущественно равной 18-20°С, в течение 6-10 мин.

Пример 1. С 200 мг цитидин-Б-Мсиофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору добавляют Na2HPO4 12П2О и КИ2РО4 в весовом соотношении 2,9% и 0,65%, 0,014 г КС1, 0,014 г MgCb HzO и 15 г размельченных зеленых водорослей.

Свежие зеленые водоросли выдерживают в течение 30 мин при температуре -5° С, а затем размельчают и получают зеленую пасту. ФерМ|ента цию проводят в течение 6-8 мин.

при температуре 19-20°С, рН 6,5-7,0 и облучении монохроматическим красиым светом.

Для прекращения реакции прибавляют 0,5 г трихлоруксусной кислоты при 0°С. Осадок центрифугируют.

К фильтрату добавляют 10-кратный объем этилового спирта. Осадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход про:ду1КТОВ, в: цитиди1Н-5-трифосфат 0,16 и цитиднн-5-дифосфат 0,13.

ПрИмер 2. 220 мг цит1ид1Ин-5-мо«офосфорной кислоты растворяют в 8 мл воды. К раствору прибавляют Na2HPO4 12И2О и КН2РО4 в весовом соотношении 3,0% и 0,7%, 0,014 г КС1, 0,014 г MgCb и 15 г размельченных зеленых водорослей.

Свежне зеленые водоросли -выдерживают в течение 30 мин лрн тем(иерату.ре -50°, а затем размельчают и получают зеленую пасту. Ферментацию проводят в течение 4-8 мин

при температуре 19-20°С, рП 6,5-7,0 и облучении монохроматическим красным светом.

Для прекращения реакции прибавляют 0,5 г трихлоруксусной кислоты при 0°С. Осадок центрифугируют.

К фильтрату прибавляют 10-кратный объем этилового спирта. Осадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход продуктов, г: цитнднн-5-дифосфат 0,18 и цитидин-5-триф:осфат 0,10.

Предмет изобретения

Способ получения ц«11иди Н-5-Дн- и трифосфатов путем биохимического фосфорилирования :Ц.ити|ДИН-5-манофосфата IB реа.кционной омаои, состоящей из цитидин-5-мо,нофосфата, хлористого калия, хлористого магния, неорганических фосфатов и воды при рН 6,5-7,0, с введением в фосфорилирующую смесь в качестве источника биокатализатора зеленых водорослей, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса биосинтеза, активации биокатализатора, увеличения выхода и чистоты полученного продукта, зеленые водоросли в качестве источника биокатализатора вводят в виде свежезаморожениой размельченной пасты, а процесс фосфорилирования проводят .при температуре, преимущестйенно равной 18-20°С и при облучении красным монохроматическим светом с длиной волн больше 620 нм в течение 6-10 мин.