Способ получения антибиотиков Советский патент 1980 года по МПК C12D9/00 

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к получению антибиотиков.

Известен способ стимулирования биосинтеза леворина путем совместного культивирования продуцента а 1тибиотика и дрожжеподобных грибов.

Для повьндения выхода целевого продакта предлается к ферментационной среде добавлять фильтрат культуральной жидкости дрожжеподобных грибов, например, Candida или Rhodotorula . Можно также использовать предвари- тельно лиофильно высушенный фильтрат

Предлагаемый способ получения антибиотиков включает два этапа: первый заключается в приготовлении биостимулятора, а второй - в проведении ферментации продуцентов антибиотиков на средах, содержащих биостимулятор.

Для получения биостимулятора.применяют один из видов дрожжеподобных грибов родов: Candida, Rhodotorula, например Candida tropicalis, Candida utilis, Candida lypolytica, Rhodotorula aurantica Rhodotorula mucilaginosa, или какой-либо другой организм этих родов. Один из указанных кмкроорганизмов выращивают на суслоагаре в пробирках или бактериологических матрацах при 37вС в течение 24 ч и затем смывают физиологическим

раствором для получения суспензии, содержащей 10 млрд. микробных клеток, в 1 мл. Приготовленную суспензию вносят в количестве 1-2% в качгшочные колбы со средой рН 6,8-7,0 следующего состава, г:

Кукурузная мука20 Соевая мука10 Гидфол (по редуцирующим веществам)10 Хлорид натрия5 Углекислый каль ций1 вода, л1

Колбы -устанавливают на качалку

и инкубируют 24-48 ч при 27-28 С. Полученную культуральную жидкость сливают и отделяют фильтрованием или

центрифугированием от взвешенных час тиц. Дпя Лучшей фильтрации или центрифугирования культуральную жидкость предварительно з 1мораживают при минус 10-15®С и оттаивают при комнатной температуре. Для удаления пигментов фильтрат обрабатывают активир ванным углем. Для этого к нему доба ляют 1% осветлйющего угля марки А и перемешивают его с помощью мешалк в течение 30 мин, после чего уголь отфильтровывают на плотной фильтровальной бумаге. Получают осветленный фильтрат, содержащий в растворе ном виде биостимулятор (продукт 1). Осветленный фильтрат разливают по Ьроби кам или флаконам и лиофилирую Остаток после лиофильной сушки, выход которого составляет 12-14 г на 1л культуральной жидкости- (продукт 2), используют как биостимулятор. Лиофильно высушенный остаток является многокомпонентной смесью/ .и содержит, %:. Редуцирующие вещества20-23Неорганический фосфор30-35Белок2,25-2,5 Органические кислоты4-5Зола30-40 Влажность порошка8-10 Важной особенностью биостимулятора является его термостабильность благодаря чему свойства вещества со храняются после добавления его в ер ды и их стерилизации. Для проведения ферментации испол зуют регламентные Культуры и среды а также известные способы подготовк посевного материала, выращивания микроорганизмов и стерилизации сред Пример 1. Ферментация Acti norayces levoris штамм 28 продуцента .леворина. В качалочные колбы емкостью 5 л, содержащие 1 л соево-кукурузно-гидрольной среды вносят 10 м 10 млрд-ед.взвеси Candida tropical Колбы устанавливают на качалку и культивируют при 27-2В С в течение 2сут. Затем клетки отделяют центрифугированием и получают биостимул тор в виде продукта 1. В качалочные колбы на 750 мл, каждая из которых содержит 50 мл соево-кукурузно-гид рольной среды следующего состава, Кукурузная мука20 Соевая мука10 Гидрол (по редуцирующим веществам )10 Хлорид натрия 5 Углекислый кальций1Биостимулятор (продукт 1)600 мл : Вода, л .До 1 рН до стерилизации7,3-7,4 После стерилизации и охлаждения среды в нее вносят 5 мл двусуточно инокулюма культуры Actinomyces everis, выращенного при 27-28с на реде следующего состава, г: Соевая мука10 Глюкоза10 Хлорид натрия5 Углекислый кальций1Вода, л1 Затем проводят ферментацию при бычном режиме в течение 120 ч. Активность культуральной жидкости по окончании процесса ферментации составляет 61000 ед/мл, при ферментации на той же среде без биостимулятора активность культуральной жидкости составляет 452DO ед/мл. Пример 2. Ферментация Actinomyces nodosus штамм 510/13 продуцента амфотерицина в. В качалочные колбы емкостью 5 л, содержащие 1 л соево-кукурузно-гидрольной среды, вносят 10 мл 10 млрд. ед. взвеси Rhodotorula aurantica. Колбыустанавливают на качалку и выращивают культуру при 27-28с в течение 2 сут. Затем центрифугируют и из недостаточной жидкости получают биостимулятор (продукт 1). После этого готовят ферментационную среду следующего состава, -г: Кукурузная мука 50 Глюкоза10 Сернокислый аммоний5Кукурузный экст5 (по весу) ракт Углекислый кальций Биостимулятор (продукт 1) 600 мл До 1 вода, л рН среды до.стерилилизации6,9-7,1 . Среду разливают в качалочные колбы емкостью 750 мл по 50 мл. После стерилизации и охлаждения среды в нее вносят 5 мл двусуточного посевного материала Actinomyces nodosus, выращенного при 27-28С на среде, rs Соевая мука30 Глюкоза .20 Углекислый кальций2,5 Хлорид натрияГ Вода, л-1 рН 7,2-7,3. до стерилизации Ферментацию при обычном режиме проводят в течение 96 ч. Активность культуральной жидкости по окончании процесса ферментации СОставляет 5500 мкг/мл против 41UO мкг/мл в контрольной ферментации без биостимулятора.

54573426

Формула изобретенияфильтрат культуральной жидкости дрож1, Способ получения антибиотиковCandida или Rhodotorula.

путем глубинного биосинтеза, о т -2. Способ по п.1, отличаю -

личаюцийся тем, что, с целью,щ и и с я тем, что (я{льтрат культуповьвиения выхода целевого продукта,5 ральной жидкости предварительно лиок ферментационной среде добавляютфильно высушивают.

жеподобных грибов, например / рода