Способ получения рифамицина в. Советский патент 1975 года по МПК C12D9/14 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИФАМИЦИНА В

следы светло-желтого растворимого пигмента.

Дрожжевой экстракт, мелассный агар. Рост сильный, морщинистая поверхность, вегетативный мицелий горело-коричневого цвета € оранжево-корнчневыми краями, следы розоватого воздушного мицелия; темно-желтый, цвета охры, растворимый нигмент.

Сахарный агар по Чепеку-Доксу. Рост сильный, гладкая поверхность, вегетативный мицелий светло-оранлсевый, воздушного мицелня нет. Светлый, цвета лимона, растворимый пигмент.

Картофельный агар. Сильный рост, гладкая поверхность; янтарно-розовый вегетативный мицелий.

Сахарно-аспарагиновый агар. Рост сильный, тонкая и гладкая поверхность, светлооранжевый вегетативный мицелий; воздушного мицелия нет, растворимых пигментов нет.

Агар Придхэма. Сильный рост, г ладкая поверхность, вегетативный мицелий светлооранжевый с маленькими красными пятнами, следы розоватого воздушного мицелия, желтый растворимый пигмент.

Сахарный триптоновый агар. Сильный рост, морщинистая поверхность, оранжевый вегетативный мицелий, воздушного мицелия нет; желтый растворимый пигмент.

Кобальтовый агар по Треснеру и Хикки. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий янтарно-розовый, следы розового воздушного мицелия; янтарно-розоБый растворимый пигмент.

Тирозиновый агар. Сильный рост, морщинистая поверхность, вегетативный мицелий темно-оранжевый коричневатого оттенка, воздушный мицелий отсутствует, желтый растворимый пигмент; тирозиназа - ярко положительная реакция.

Агар на основании кальциевой соли яблочной кислоты. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий светло-оранжевый, воздушного мицелия нет; светлый, лимонного цвета растворимый пигмент; незначительное усвоение кальциевой соли яблочной кислоты.

Желатин. Пигментации нет; разжижение - положительно.

Нитратный бульон. Поверхностный рост с розоватым воздушным мицелием, восстановление нитратов; бульон становится желтоватым.

Лакмусовое молоко. Ни коагулирования, ни пептонизации.

Снятое молоко. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий оранжевый, желто-золотой растворимый пигмент, воздушного мицелия нет; казеиновый гидролиз - положительная реакция.

Пептонно-дрожжевой экстракт, железный агар. Средний рост, тонкая и гладкая поверхность, бесцветный вегетативный мицелий, воздушного мицелия нет; растворимого пигмента нет; выделения сероводорода нет.

Крахмальный агар. Сильный рост, гладкая поверхность. Вегетативный мицелий темнооранжевый с коричневатым оттенком, большой розоватый воздушной мицелий, хромовожелтый растворимый пигмент; крахмальный гидролиз - отрицательная реакция.

Пример 1. Взвесь 10 г рифамицина В в 10 л воды обрабатывают стехиометрическим количеством гидроокиси натрия, причем получают раствор мононатриевой соли рифамицина В с рН 4,1. Через 20 дней при комнатной температуре рН раствора доводят до 2,2 путем добавления соляной кислоты, затем экстрагируют этилацетатом. Экстракт упаривают до 50 мл. Неизменившийся кристаллизовавшийся рифамицин В отфильтровывают, фильтрат выливают в л петролейного эфира. Сырой осадок собирают и очищают противоточным делением в аппарате Крэйга

(200 трубок), применяя смесь из фосфатного буфера (рН 7,6) : бутанола : лигроина 1:1: : 0,25. После 170 прохождений максимальная активность обнаруживается в 160-ой трубке. Растворитель из 155-ой - 165-ой трубок упаривают досуха; образуется сырой рифамицин S.

В раствор 10 г рифамицина В в смеси 1000 мл метанола и 2000 мл ацетона добавляют раствор 50 г нитрита натрия в 500 мл

воды при 0°С. При внешнем охлаждении постепенно добавляют 2500 мл 10%-ной водной соляной кислоты, вызывая образование рифамицина О, который выдерживают в растворе в присутствии ацетона. Вследствие сильной

кислотности среды рифамицин О постепенно переводится в рифамицин S; преобразование заканчивается через 8 час при О-5°С. Реакционную смесь выливают в большое количество воды и экстрагируют этилацетатом.

Экстракт тщательно промывают водой, концентрируют в вакууме до объема -50 мл и выливают в --500 мл петролейного эфира. Рифамицин S собирают и выкристаллизовывают из метанола. Выход 6,5 г.

Пример 2. Смесь 13 г рифамицина S, 4,8 г основания Шиффа, полученного путем конденсирования эквимолярных количеств трет.-бутиламина и формальдегида, 1,5 г

трет.-бутиламина, 7,2 г двуокиси марганца и 130 мл тетрагидрофурана 6 час кипятят с обратным холодильником. После фильтрации твердого вещества фильтрат выливают в 350 мл этилацетата и 180 мл воды, рН доводят до 7,0 путем добавления разбавленной серной кислоты; органический слой отделяют, промывают, высушивают и концентрируют в вакууме до объема 100 мл. Затем добавляют 4,3 г 1-амино-4-метил-пиперазина, смесь

2 час выдерживают при комнатной температуре.

Путем разбавления петролейным эфиром осаждают трет.-бутил-аминную соль, из которой общеизвестными способами можно выде

лить 3-(4-метил-1-пиперазинилиминометил)5рифамицин SV с удовлетворительным выходом. Т. пл. 183-188°С (с разложением). Иредмет изобретения Способ нолучения рифамицина В путем вы-5 ращивания культуры Streptomyces mediterranei на среде, содержащей источники угле6рода, азота и минеральные соли, в аэробных условиях и выделения целевого продукта из фильтрата культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве продуцента используют штамм АТСС 21789 Streptomyces mediterranei.