Штамм р1-продуцент глюкоамилазы Советский патент 1975 года по МПК C12D13/00 C12K3/00 

1 Изобретение относится к микробиологии, а именно к вопросам получения глюкоамилазы микробиологическим методом. Известен штамм Rhizopus pygmaues PI, содержащий в амилолитическом комплексе ферментов глюкоамилазу, имеющую оптимум действия при 63-65°С. Однако глюкоамилазная активность этого щтамма низкая и составляет 80-100 ед/г воздушно-сухой культуры. Предлагаемый штамм Rhizopus pygmaues PI получен из спор исходного (известного) после действия на них УФ-лучами и этиленимином. Глюкоамилазная активность его в 2,5-3 раза выше известного и составляет 200-300 ед/г. ШтаММ характеризуется следующими признаками. Морфология. СталоНы и ризоиды короткие, светло-серые. Резоиды стержневидные слаборазветвленные. Длина спораагиеносцев 700-800 мкм, диаметр - 15-25 мкм. Они простые или с раздвоенной разветвленной верхушкой; нрямые и извилистые, отходят по. три, четыре штуки от шейки ризоида или сталоновидных гиф. Спорангиеносцы часто являются продолжением тиф. В диаметре спора«гии достигают 90-160 мкм, при достижении полной зрелости они раскрываются. Колонка большей частью обратногр И1евидная, реже округлая или удлиненная, размером 51-95X48-76 мкм. Споры шаровидные в диаметре 3,4- 4,08 мкм. Может образовывать хламидоспоры размером 45X22 мкм. Культуральные признаки. Минеральная ереда Чанека с 6% крахмала и 10%-ны.м водным экстрактом из солодовых ростков. Мицелий войлокообразный, сначала белого цвета, затем серовато-голубого. Спустя 24 час с начала выpaнJ,ивaния начинается спорообразование. Высота мицелия 1,5-2 мм. Органическая среда. Сусловый агар. Мицелий характеризуется врастанием в агар. Сначала белый, рыхлый, затем серый. Высота .мицелия 3-4 мм. Агаризованная среда из 5%-ной вытяжки из ишеничных отрубей и 5%-ного водного экстракта из солодовых ростков. Мицелий имеет сналача белый войлокообразный вид, а спустя 2-3 суток с начала роста становится темно-серым с голубоватым оттенком. Высота ми-целия 1 -1,5 см. Отношение к источнику углерода. Ассимилирует глюкозу, рамнозу, арабинозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, рафинозу. маннит, сорбит, фруктозу и инозит.

Ассимилирует слабо дульцит и галактозу.

Оптимальный рост при 30-55°С и рН 3,0-8Д

Пример. Поверхностное культивирование.

Штамм Rhizopus pygmaues PI выращивают на пшеничных отрубях с влажностью 65%. Причем отруби раскладывают на кюветы слоем не более 3 см. Кюветы помещают в камеры, где поддерживают относительную влажность на уровне 95%. Температура выращивания от 38 до 42°С. Максимальный разогрев культуры 55°С. Длительность выкашивания 36 час. В пшеничных отрубях содержится 18-20% крахмала, 8-12% клетчатки и 15- 17% белка. Культуру подсушивают в камере до влажности 40-50 путем подачи сухого воздуха, после чего ее досушивают в сушилке ВИС-42 до влажности 12-13%. Температура воздуха на входе в сушилку 85-90°С. Длительность сушки 80-90 мин. Активность глюкоамилазы в сырой культуре, определенная по глюкооксидазному методу, 180 ед/г.

Активность глюкоамилазы высушенного ферментного препарата 150 ед/г.

Штамм Rhizopus pygmaues PI термоустойчив. При культивировании его при 38-50°С активность фер.мента практически не снижается. В связи с этим его можно культивировать в камерах без кондиционирования воздуха.

Глубинное культивирование. Используют питательную среду, состоян1,ую из 7% пшеничных отрубей (содержание крахмала 18- 20%, белка 15-17%, КП2РО4 0,1% и MgSO40,05%).

Штамм Rhizopus pygmaues PI выращивают в коЛбах емкостью 0,75 л на круговой качалке, совершающей 200 об/мин. Объем среды 100 мк. Длительность выращивания 96 час, температура 38°С.

Активность глюкоамилазы от 15 до 20 ед/мл.

Предлагаемый штамм хра нится в музее культур кафедры микробиологии и биохимии Воронежского технологического института.

Предмет изобретения

Штамм Rhizopus pygmaues PI - продуцент глюкоамилазы.

Штамм хранится в музее культур кафедры, микробиологии и биохимии Воронежского технологического института. Морфология: Сталоны и ризоиды короткие, светло-серого цвета. Ризоиды стержневидные слаборазветвленные. Длина спорангиеносцев 700- 800 мкм, диаметр- 15-25 мкм, простые или с раздвоенной разветвленной верхушкой, прямые и извилистые. Снорангиеносцы часто являются продолжением гиф. Диаметр спорангий 90-160 мкм, при достижении полной зрелости они раскрываются. Колонка большей частью обратногрушевидная, реже округлая и удлиненная, размером 51-95X48- 76 мкм.

Споры шаровидные в диаметре 3,4 - 4,08 мкм. Образует хламидоспоры размером 45X22 мкм.

Культуральные признаки. Минеральная среда Чапека с 6% крахмала и 10%-ным водным экстрактом из солодовых ростков. Мицелий войлокообразный, вначале белого цвета, затем серовато-голубого. Спорообразование на чинается через 24 часа. Мицелий высотою 1,5-2 мм.

Органическая среда.

Сусло-агар. Мицелий врастает в агар, вначале белый рыхлый, затем серый. Высота мицелия 3-4 мм. Твердая среда, содержащая 5%-ную вытяжку из пшеничных отрубей и 5%-ного водного экстракта из солодовых ростков. Мицелий вначале белый, войлокообразный, через 2-3 суток - темно-серый с голубоватым оттенком, высотою 1 -1,5 см. Отношение к источнику углерода.

Ассимилирует глюкозу, рамнозу, арабинозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, рафинозу. мапнит, сорбит, фруктоз} и инозит.

Слабо ассимилирует дульцит и галактозу. Опти.мальный рост при 30-55°С.