. и концентрируют . Полученный остаток растворяют в 2 мл водного метанола и загружают в колонку, заполненную 10 мл нейтральной окиси алюми дая, затем элюируют 8С %-ным водным метанолом. После чего собирают фракиия, содержащие блёомицнн, концентрируют нх досуха я получают 62 мг сояянокйслого бпеомиаина (эффективность 12OOMKr/wr,: общая эффективность мг). Выход из культурнснго фильтрата 45%. Полученный Bpoii KT разделяют на отцельные блермициновые кбмпоненть водным раствором формиата аммония на СМ- Се фадексе в колонке, опредепаа, что он со .держит 90.8% блеомиаина А. Этот метод разделения стстоит в еледувмйем. 50 мг указанного продукта растворяют. в 0,5 мл воды и загружают в колонку, заполненную 5 мл С адекса О-25, затем элюйруют дистиллированной водой. Полученную грлубовато-зелвную фракцию содержащую блеомиции, сирдеяят, суспендируют в О,02 Н водном растворе хлористого аммония, вносят в колсдаку, аапсшненную 5 мл GM- Сефадекса, и эйлюируют М водньгм pacTiBopoM хлористого аммония. После этого полученчуК 4ч акнию, содержащую желаемое вещество, пропускают через колонкуг заполненную 2 мл активированного угля.для адсорбции желаемого вещества, которое элюируют смесью iJl аце тона и 0,02 Н соляной кислоты. Затем элюат концентрируют досуха, получая 15 м блеомицина А (эффективность 2540 мкг/ общая эффективность 38,1 мг). Выход про дукта составляет 78,24%. Ю мг полученного вещества растворяют в 1 мг метанола, и в раствор в течение 10 мин пропускают газообразный серо водород. Затем раствор фильтруют, фИльтрат концентрируют досуха, получая 7 мг свободного от меди солянокислого блеомицина А (эффективность 25ОО мкг/мг, , 5 , , , общвя эффективность 17,5 мг). Освобожденный от меди продукт гидролизуют 6 Н водной соляной кислотой, подвергают электрофорезу на бумаге и определяют спермидин. Пример 2. К среде, содержащей, %; 6,4 просяного желе, 0,5 глюкозы, 3,5 порошка соевых бобов, 0,75 крепкого отвара кукурузы, 0,3 хлористого натрия, 0,1 вторичного фосфата калия, О,О5 сульфата Цинка, 0,01 сульфата меди, 0,2 нитрата натрия. О,О1 кремния и О,О1 Тойо №1 (торговое наименование поверхностно активного агента), прибавляют-3-( :N -4аминобутил-аминопроциламин в количестве О,4мг/мл, установив рН среды 6,5. 12 л обработанной среды загружают в стеклянный ферментатор емкостью 2О л и стерилизуют. В эту среду инокулируют 8ОО мл куль- . туральной жкт хти-SPiaj}tom&ct Ci-Wiu (ATCG Nsf 15O03), которую в течение 48 час встряхивают для культивирования в среде того же состава, что приведён выше, и культивируют в течение 163 час при 27 С при перемешивании со скоростьк 350-370 об/ми , вводя через минуту воздух в объеме, равному объему среды. л культураяьной жидкости фильтруют, фильтрат (эффективность 122,2 мкг/мл, общая эффективность 611,0 мг) экстрагируют, очищают по методике примера 1 и получают 180 мг солянокислого блеомицина (эффективность 120О,О МКГ/МГ; общая эффективность 216 мг). Выход из культурального фильтрата составляет 35,4%Полученнь1й продукт растворяют в 1О мл дистиллировайной воды, раствор загружают в колонку емкостью 50 мл с еМ- СефадекGOM, сзгспендированным в 0,О2 Н водном раетвсфе формиата аммония для получения ф ракциИ| содержащей блеомицин А . Эту . - , . . О фракцию пропускают через колонку, заполненную 1О мк aRtHBHpciBaHHoro угля, и адсдрбиру Екг ее, промывают водой, элюируют смесью 1:1 (по объему) ацетона 0,02 Н водной соляной кислоты. Затем полученную активную фракцию элюата концентрируют досуха, получая 44,7 мг блеомицина А,, в виде coJ4ЯHOкиcлoй соли (эффективность 2543 мкг/мг, общая эффективность 113,7 мГ). Выход Солянокислой соли составляет 52,6%. Это вещество гидролизуют 6 Н соляной кислотой, обрабатывают 10%-ным раствором едкого натра и проводят газовую хроматографию; используя колонку, заполненную Флуропакк 8О (торговое наименование), покрытый Силиконом 5F 96 (торговое наименование). Так определяют пик спермидина. 30 мг полученного солянокислого блеомицина А„ (эффективйость 2543 мкг/мг, общая эф(ктивность 76,28 мг) растворяют в 50 мл метанола, в полученный раствор в течение ЗО мин вводят газообразный сероводород для получения осадка сульфида меди. Этот осадок отфильтровывают и промЫвают .метанолом. Потом объединяют промывные жидкости ь филь рат к смесь упаривают досуха, получая 25 мг свободного от меди блеомицина А в виде сопяпокяелой соли (эффективность 2ЛОО мкг/мг, эффективность 62.5мг). Bwisofl из содержашего медь вещества составляет 83i3%
20 мг этого освобожденного от меди солянокислого блеомицина на А (эффективность 25ОО 1Л{г/мг, общая эффективность 5О мг) растворяют в 2 мл дистиллированной воды, загружают в колонку, заполненную 5 мл анионо- обменной смо лы Амёеряит 11 А-4ОО (торговое наименование; сернокислый тип иоио- обменной смолы, производит Ром энд Хаас KoJ и затем элювруют дистиллированной водой, элюат конпентрируют досуха, получай 1S.S кг CBOfoflHoro от меди сульфата блеомкайна А (эффективность 2500 мкг/мг, общая Эффективность 38,75 мг), №1ХОД из свободной от меди солянокислой солй
Пример 3. Среда содержит ,%J 4,0 порошка соевых бобов. 1,0 Дрожжевого экстракта, О,3 хлористого натрия, J.O масла сои, О,ОО07 О.ООО1 Ре5 О -7 Н„0. О.ОООв 4 и
0.0002 ZvtS 7 HgOs РН устанавливают 7,0. Каждые 120 мл среды загружают : в колбы Сакагуши емкоетыо 500 мл и стерилизуют. В среду инокулйруют штамм МА 267-A.j, выделенный иа
почвы Мусашино-шо, Саитама-кен, который fern идентифицирован как разновидность I SHef tomuce« ve&ticUtud н который
продуцирует в особенности блеомицин Ад.
Затем 3-( W -4-амннобутил)-аминопроаи)1 амин фосфат, который был nooBeprujT стерилизации с фильтром Миллипор добавляют так, чтобы его количество составляло 0,5 мг/мл. Штамм культивируют при 27 С в течение 7 дней при перемешивании со ско|ростью 130 об/мин. Собирают 5,2 л культу ральной жидкости, фильтруют,. фильтрат (эффективность 196 мкг/мл, общая эффективность 25Э мг, 4.5 л) экстрагируют
и ОЧИШ8ЮТ по методике примера 1, получая 137 МР сырого порошка солянокислого блеомишша ng (эффективность 1846 ,мкг/мг, общая эффективность 253 мг). .Выход из куиь ур«о1ьной зкидкости составляет 28f8%, Сырс продукт хроматрографируют, используя копокку, заполненную 25 мл Сеф8Я€й са О-5О, и элюируют дис|тш1лирова|шо в водой,. Псч гченные голубые активные фракоиа собирают и концентриру;ют досуха, полная 53,5 мг голубого порошка с вйтивиостыо 2613 мкг/мг (общая активность 14О мг), получают толь1ко блеомкадае А. Бьгход из сырого порош ка составляет 55.4%.. Экстиикция (Гр )
1см
При 203 им нолучейного, продукта равна
. 13.6. сйермндйновая боковая цепь в нем была определена при помощи газовой хроматографии гндролизата продукта 6 Н соляной кислотой,
Формула изобретения
Способ получения антибиотика 3-(N 4-аминобутил)-аминстропиламино-6леомицина(блеомиаинй Ад) путем выращивания
продуцента рода Stfe6/i)tomyfle6 на среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли, отличающийс я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, выращивение осуществляют в врисутствии 3-( А/ -4-аминобутил) аминопропш1амйна или N,W -бис (3-аминопропил )-1,4-Диаминобутана,
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ получения антибиотика к 582 м | 1978 |
|
SU786915A3 |
Способ получения антибиотика в 508 | 1977 |
|
SU715034A3 |
Способ получения антибиотика казугамицина | 1964 |
|
SU454749A3 |
Способ получения -замещенных произ-ВОдНыХ блЕОМициНА | 1972 |
|
SU797584A3 |
Способ получения антибиотиков | 1975 |
|
SU528038A3 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА | 1970 |
|
SU420187A3 |
Способ получения антибиотика @ -19393 @ и/или @ -19393 @ | 1980 |
|
SU1075984A3 |
Способ получения замещенных винилцефалоспоринов | 1984 |
|
SU1407400A3 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2-АМИНО-4(ГИДРОКСИМЕТИЛ)-3А,5,6,6А-ТЕТРАГИДРО-4H-ЦИКЛОПЕНТ-[D]-ОКСАЗОЛ-4, 5,6-ТРИОЛА И ПРОДУЦИРУЮЩИЕ ЕГО ШТАММЫ АКТИНОМИЦЕТА MICROMONOSPORA И АКТИНОМИЦЕТА AMYCOLATOPSIS | 1992 |
|
RU2120997C1 |
Способ получения 7-метоксицефалоспоринов или их солей с щелочными металлами | 1980 |
|
SU948292A3 |
Авторы
Даты
1976-03-25—Публикация
1970-02-13—Подача