Способ получения противогрибкового антибиотика Советский патент 1979 года по МПК A61K38/08 C12N5/00 

Изобретение относится к фармацевтической про1ииишенности, а именно к производству антибиотиковi Известен способ получения противо грибкового антибиотика, заключающийся в том, что культуральную жидкость BidymocCadium iernatum Socc . экстрагируют хлороформом с последующим выделением целевого продукта путем многостадийной системы очистки,. Этот способ трудоемкий и Не обеспечивает достаточный выход и степень чистоты антибиотика. Отличительной особенностью предлагаемого способа является то, что iuTaMMl3 da oc (uw iepnoituni басе, выргидивают на питательной среде, содержащей глюкозу и пептон (2,6:1,5). Культуральную жидкость при рН 7.экстрагирувдт смесью растворителей, состоящей из насыщенных и хлорированных углеводородов (хлористый метилен, хлороформ, четыреххлористый углерод) например петролейный эфир (т.кип,40VO C) и четыреххлористый углерод (9:1 по объему). Растворители из объединенного экстракта частично отг гоняют в вакууме, а -зыпавшие кристал лы отделяют фильтрованием. Получен|НЫй препарат повторно кристаллизуют из смеси бензола с гексаном или гептаном. ,, Пример 1. Антибиотик получают путем глубинного культивирования T idymocEadium tenttottum при 28 С на среде, содержащей глюкозу (3,9%) и пептон (1,5%) в колбах на встряхиваемой качалке со скоростью вращения 220 об/мин, рН 6. Продолжительность ферментации 120 ч. Культуральную жидкость фильтруют. Фильтрат в объеме 10 л с содержанием антибиотика не ниже 100 мг/л (т.е. 1 г антибиотика По весу) экстрагируют при рН 7 четыре раза смесью петролейного эфира и четыреххлористого углерода (9:1) при соотношении культуральной жидкости и растворителя 2:1. После разделения сепарированием или центрифугированием объединенный экстракт упаривают в вакууме на роторном испарителе при температуре не выше 30°С до объема 150200 мл. Выпадающие при этом кристаллы белого или бледно-розового цвета отделяют фильтрованием. Получают 0,8 г кристаллического продукта с содержанием 90% по весу антибиотика. П р и .м е р 2. Кристаллизацию очищенного препарата, полученного по примеру 1, осуществляют из смеси бенэол-гексан (2:1). Для этого навеску препарата растворяют в 15-кратном объеме растворителя (15 мл на 1 г ве.щества) при температуре кипения. Зате раствор выдерживают при 0°С до полного выпадения кристаллического., продукта. После фильтрования и высушивания получают мелкокристаллический порошок антибиотика белого цвета. Полученный антибиотик характеризуется следукяцими свойствами: т.пл. 214-214, 39,9( с 0,4 в этиловом спирте); УФ-спектр в этиловом спирте Ямо«с211 (Е 9500); мол.вес 737 ИК-спектр имеет полосы поглощения в области 3426, 3360, 3325, 1640, 1520 см. Эмпирическая формула H(i,j К- Og,. На основании ИК-спектра, результатов титрования кислотами и щелочами и исследовании продуктов кислотного гидролиза установлено, что антибиотик нейтральный полипептид. При жестком гидролизе антибиотика 5н. НСЕ в 20%ной уксусной кислоте (20 ч ) об.г разуются, моль: Ь -лейцин 1;О-алло-изолейцин1J Ь - N -метиллейцин 1; D-эритро-1& -оксилейцин 1; U - М -метилаланин 3, При легком гидролизе (Зн. НС в 50%-ной уксусной кислоте) получают пептиды ,,„ H-MeUen-len-MeARa-OH, H-MeAea-HtfLen3Ee-MeAEa-OH, N-Len-MeAEa -MeAEa-HyLen-aee-MeAea-MeLen-OH. Антибиотик имеет формулу -SH. СНгСНМег Формула изобретения Способ получения противогрибкового антибиотика путем глубинного культивирования DidymocBadium ternaiumSoicc. на питательной среде, содержащей источники углерода, азота , минеральные соли, с последующим вьщелением целевого продукта из культуральной жидкости экстракцией органическими раст-. ворителями и очисткой кристаллизацией, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и чистоты антибиотика, продуцент выращивают на среде с пептоном и глюкозой, экстракцию осуществляют смесью углеводорода и хлорированного углеводорода при рН 6-7 и кристаллизуют из смеси бензол-гексан (2:1).