Способ выделения фермента нейраминидазы холерных вибрионов Советский патент 1977 года по МПК C07G7/02 

Полученный элюат концентрируют в 10 раз на установке для упьтрафильтрации с целлофаном в качестве фильтрующего материала. Концентрат гельхроматографируют по принципу груттового разделения на колонйе с сефадексом Г-50. Гельхроматосрафию проводят в О,85%-ном хлористом натрнв в присутствии С,1%-ного хлористого кальдегя. Собирают первую белковую фрикцию, которая содержит высокоактивйук нейраминиааау, Выход продукта составляет 38%,

П D и м е D 2. В ирнообразную колонку {диаметр 2,1; высота 8,О см) помёшакгг катионит КМТ в водородной форме с коэффициентом набухания 3,5; размер зерен 0,1-ОДб ммГ Через колонку пропускают 6ОО мл культуральной жидкости холерных вибрионов при рН 5,1 со скоростью 15 О мл/ч. Нейраминидааа полностьло сорбируете я на катйони-те, о чем можно судить по отсутствию нейраминидазной активности в фильтрате ва в ходе из коловки. Затем колонку промывают О,2 М ацетатным буфером с рН 5,0 в присутствии 0,5%-нЬго хлористого кальция со скоростью .iOO мл/ч при 25 С. Расход буфера составляет 300мл на колонку данных размеров. Десорбцию нейраминидазы проводят при 5 С 0,15 М раствором фосфатного буфера в присутст ВИИ 0,ОО1%-ного ацетонитрила при рН 6,4 со скоростью 39-45 мл/ч.

Выход активности нейратлинидазы при есорбции с колонки составляет 40%, а конентрирование в пике происходит в 4 раза по сравнению с активностью в исдамной

кульггуральной жидкости. Полученный элюат концена 5ируют в 8 раз на установке для ультрафильтрации, в качестве фильтрующего материала используют ацетатоеллюлознзто . Концентрат гельхроматографируют на колонке с сефадексом Г-50 при 5°С в ОД М растворе хлористого натрия в присут ствин ОД%-«ого хлористого кальция. Собирают nepsyjp белковую фракцию, которая содержит 32% активности от всей взятой на рааделвние активности нейраминидазы культуральной жидкости.

Форм у. л а изобретения

Способ выделения фермента нейрамини.дааы холерных вибрионов путем ионообменной 20 сорбции н десорбции, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода Еррду кта. и сокращения времени, культуральную жидкость тфопускают через карбоксиль ный катионит в водородной форме при 1525 25 С/ рН 5,1, колонку с катионитом промывают 0,1-О,2 М ацетатным буфером, рН 5,6 с добавлением хлористого кальция, десорбируют фермент с колонки 0,1-О,2 М фосфатг ным б5гфером, рН 6,0-6,5 при 5С в присутствии стаби71изатора 0,001-О,ОО2%-ного адетонитрила и из элюата гельхроматогра-, .фией выдел5пот конечный продукт.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:., 35 1. I. Атпеь Ctte-rn-Soc, i960, 82,4113.