Способ получения рибонуклеозид-5 @ -монофосфатов,меченных изотопами с @ или н @ Советский патент 1981 года по МПК C07H19/02 

Примеры. Приготовление бесклеточного экстракта Е coti AB259Hfr 3000. Растирают клетки EcoKi со стекЯЧНным порошком, разбавляют полученную массу двукратным объемом буфера (0,1 М трис-Нсе г рН 7,8; 0,05 М MgCBjj) , вносят 0,01 мг/мл раствора диэоксирибонуклевзы, центрифугируют 20 мин при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость подвергают ультрацентрифугированию при 100000 в течение 1 ч. Экстрат замораживают и хранят при . Синтез рибонукле6зид-5-монофосфатов Реакционная смесь содержит, M.s 5-10- трис-НСе , рН 7,8; 1,2 мдСб 0,8-10-3 СГ- или Н - основание 310 5-фосфорибозил-1-пирофосфат и 0,15 мл экстракта на 1 мл смеси. Время инкубации при З7с 10 мин при фосфорибозилировании аденина и гуанина или 30 мин. при фосфорибозилировании урацила, 5- торурацш1й и цитоаина. Инкубацию прекращают, помеща смесь в кипящую водяную баню на мин. Образовавшийся осадок удалйют, конечный Продукт выделяют при помощи препаративной бумажной хромо ографии: после концентрирования при 35 С смесь наносят на бумагу W 3/10С на 1 см стартовой линии) и хроматог рафируют в системе изомаслян ая кислота вода и концентрированная гидроокись аммония (66:33:5) нисходя liiTiiM способом в течение 20 ч. Хромотограммы сушат и повторно подввргаfoT нисходящей хромотографик в системе Н-бутанол,ацетон,уксусная кислота 5%-ный раствор гидроокиси аммония и вода (913:2:2:4) в течение 15 ч. Зоны нуклеозид-5-монофосфатов вырезают и элюируют водой. С целью .получения продукта в виде амониевой соли элюат обрабатЫвгиот катионитом Дауэкс 50 (Н) , смолу отфильтровывают, фильтрат нейтрализуют 5%-НЫМ раствором гидроокиси ё1ММОИиЯ. р случае необходимости раствор концентрируют, замораживают и хранят при -20°С. Подвижности полученных препаратов на бумажных хроматографах, а также основные.характеристики УФ-спектров соответствуют величинам, характерным для стандартных соединений. Формула изобретения Способ получения рибонуклеозид- . 5-монофосфатов, меченых изотопами С-или Н, взаимодействием соответствующих меченых оснований и 5-фосфорибозил-Ьпирофосфата под действием ферментативного катализатора при 3540°С и рН 7,8 в присутствии 0,05 М трис-лсе и 0,01 М MgCEij с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве катализатора применяют Ферменты Escherichia coEi AB259Hfi- 3000.