сить приблизительно в 2,5 раза при одинаковой удельной активюсти.
Получения как описано выше, креатинин-ами,. имеет константу равновесня креатин 1,27 (37° С; рН 8,0).«феатинин
Константа Михаэлиса для креашнина как субстрата KM 3,3-10М (37°С; рН8,0).
П р и м е р 2. Разделение креатинин-амидогидролазы и креатин- амидиногидролазы.
Выделение проводят, как в примере i. Однако, после злюирования креатинин-амидогидролазы;, с ионообменной колонки элюируют креатин-ами-. диногидролазу при помощи 0,2 М буферного раствора фосфата калия с рН8,О, содержащего 0,3 Nf NaCI (см. табл. 2).
Результаты активности и выхода препарата
П р и м е р 3. Первый этап выделения проводят, как в примере 1. 100 г осажденного изопропанолом а.1рца растворяют в 100 мл 0,02 М буферного раствора . фосфата калия с рН 8,0 и смешивают с ДЕАЕ- Сефадексом, Ионообменную смолу отфильтровывают, промывают приблизительно 100 мл 0,08 М буферного раствора фосфата калия с рН 8,0 и для общего злншрования обоих ферментов перемеишвают 15 мин при плюс 4° С со 100мл 0,2 М буферного раствора фосфата калия с рН 8,0, содержащего 0,3 М KCI и затем отфильтровьшают. В злюате находятся оба фермента. Осаждением сульфатом аммония можно получать препарат
с 31,5 едмг креатинин-амидогидролазы и 1,1 едгм креатин-амидиногидролазы (см. табл. 3).
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ определения содержания креатинина, креатина и саркозина в биологической жидкости | 1986 |
|
SU1582993A3 |
| Способ определения общего холестерина в сыворотке крови | 1974 |
|
SU1168103A3 |
| Способ получения тиаминтрифосфата | 1988 |
|
SU1594179A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА КОЛЛАГЕНАЗЫ | 1991 |
|
RU2008353C1 |
| Способ определения креатинкиназы МВ в сыворотке крови | 1980 |
|
SU1336941A3 |
| СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ ИЗ КЛЕТОК ЭУКАРИОТОВ | 1992 |
|
RU2039818C1 |
| Способ получения фермента, окисляющего холестерин до перекиси водорода и холестенона | 1973 |
|
SU584801A3 |
| Реактив для определения общего холестерина в сыворотке крови | 1974 |
|
SU717994A3 |
| Способ получения связанных носителем протеинов | 1972 |
|
SU463268A3 |
| Способ выделения оксидазы @ -аминокислот из яда гюрзы | 1982 |
|
SU1055769A1 |
2,8-1098,6
2,,2 2,16-10 32,6
1, 6,9
1,8-100,59
Разделение креатмнин-амидогидролазы и креатин-амидино гидролазы на анионообменной смоле ДЕАЕ-Сефадекс
После стадии осажде1шя изопропанолом
ДЕАЕ-Сефадекспромьшнаявода
0,20 М, рН 8,0
(Элюаты)
0,50 М, рН 8,0
(Элюаты)
2,8
100
3,9
93
6,6
77
28,5
71
303
64
ТаСлица2
0,25
44
8604,9
27
3,0
41
0,13
Выделение креатинин-амидогидролазы и креатагт-амлднногидролазы из 100 г на сухой вес Alcaiigenes spec. WS 51400
Разрушение
Вторая добавка изопропанола (осадок)
ДЕАЕ-Сефадекс элюат 0,5 М рН 8,0 Формула изобретения Способвьщелеиияфермента,катал 1зиругацегопре вращение креатининав креатин, и фермента, катализирующего превращение креатина в саркозин и мочевину,.
ТаблицаЗ
2,4Ю
6Ш
0,023
0,92
3,,265
1,98-10 13,9
4,,1 1,16-10 31,5 из клеток Alcaiigenes spec WS 51400 или Penicilliurn WS 90001, отличающийся тем, что клетки разрушают, отделяют балластш11е белки, осаждают активную фракшчю органическим растворителем, например изопропанолом, и выделяют и очищают целевой продукт известными приемами.
