Штамм т-54-продуцент фибринолитического фермента Советский патент 1977 года по МПК C12D13/10 C12K1/00 

Изобретение относится к микробиопогической промьтитенностк, в частности произ водстау ферментных препаратов. Известен штамм Ас1 ножусее omrcofaci ЛС-., продуцирующий фибринолитические вещества. Фибринолитическая активность штамма при развитии на сложной среде - 16 усл. ед/мл, на синтетической 147 усл. ед/мл за 18 час инкубации фи бринрвых пластинок при 37°С. I Известный штамм имеет продолжительный цикл развития и недостаточно высокую ;фнбринолитическук) активность; оптимальная температура роста штамма , в с чем продуцируемый фермент менее устойчив в условиях кровотока. Целью изобретения является устранешю указанных недостатков. Уто достигается использованием штамм Scfinohiycas tt1e иovuEga 6T-54. Штамм Act ко m у с е S i k е и mo vu Р а T-S вьщелен из ила горячего источника, распо- ложенного на свртло-сероземной почве вбл аи поселка Янги-Юль Ташкентской области Штамм ,Act(Howj/ces ihermovuB ar -ls Т-54 хранится в коллекпии кафедры микробиологии биологического факультета МГУ под номером 54 и характеризуется следующими признаками. Морфологические признаки. Спороносны короткие спиральные с 1-6 не плотно сжатыми завитками. Споры овальные,, оболочка споры ребристая. Культуральные признаки. Пептонно-кукурузный агар. Рост хороший. Воздушный мииелий белый, с возрастом серый или темно серый. Колонии плотные. Среда не ожрашена, Крахмало-аммиачная среда. Рост хороший. Воздушный мицелий от светло-серого до серого. Колонии сероватые. Среда не окрашена. Среда с рыбным экстрактом,агаровая. Колонии буроватые или коричневые. Мелланоидный пигмент не образует. Синтетическая среда, жидкая. Мицелий гомогенный или в виде мелких шариков размером О,2-1,О мм. Среда цвета некрепного чая.

Й1Ьнолого-6иохимвческие признаки. Эвритемный термсх{щльный актиномицет с карднвалы1ыми точками роста: максималпьной 6О С, оптимальной 40-50 С, минималь ной 27 С,

{итраты восстанавливает до нитритов. Крахмал гидропиаует. Молоко пептонизирует. Желатин разжвжаэт. Гидролизувт фибрин, фи иноген, плазму, .

Хорошо усваивает пептон.

Отношение к сахарам. Хорошо усваивает глюкозу, фруктозу, мальтозу, лактозу,.коилозу, арабинозу, раленозу, галактозу, слабо усваивает сахарозу.

Отношение к спиртам. Усваивает маннит, сорбит, дульцит, инозит.

Отношение к органическим кислотам. Усваивает сукцинат, лактат, цитрат.

Интенсивность развития у предлагаемого штамма выше, чем у известного. Сравнительные данные фибринолитической активности фермента, выделяемого в среду предлагаемым и известным штаммами, представлена в таблице.

Ас1шогиусе5 Hiet HiovuP)ar siT-54 (предложенный штамм)

clJHOtTtyces auf eofacifiKs 1ЛС-Б-16 (изввстш 1й штамм)

Как видно из таблицы, предложенный штаммAciiHom ces tkehmovuEjgar 5;T- 4 отличается от известного штамма высокой продуктивностью активного фибринолитического фермента.

Пример 1. Термофильный актиномицет Ас1 иошусб5 Ihet-rtfOvuEj ai Sj Т-54ввидесухихспор, снятых с поверхности агаровой среды известного состава, содержащей г/л: крахмал растворимый 10,0; NaCE -5,О; 0,5, с помощью бактериальной петли вносят в посевную того же состава (50% спор с 1 косяка на 1ОО мл среды) и культивируют глубинным способом прк рН 7,0-7,2 в течение 1S-24 час при 35-55 С в качалочных колбах емкостью 750 мл (объем среды 1ОО мл). Затем посевной материал в количестве 5% вносят среду того же состава и выращивают тем же с особом в течение 18-24 Час при температуре 35-55 С. По истечеаии указанного времени культуральная жидкость содержит ЗООО усл. ед/мл.

Культуральную жидкость отделяют от мицелия при помощи бумажных фильтров. Фибринолитический препарат осаждают из фильтрата сернокислым аммонием при насыщении 0,6-0,8. Полученный ферментный

190О

3000

147

16

препарат содержит удельную активность 2ООО-ЗООО усл. ед. на 1 мг белка.

Пример 2.Термофильный актиномицет Actinomyces tkermovuH avis Т-54ввидесухих спор, снятых с поверхности агаровой среды известного состава, содержащей, г/л: крахмал растворимый 10,Oj аСР5,0; пептон 5,0j CaCtjH O 0,5,- с помощью

бактериальной.петли вносят в посевную среду того же состава (50% спор с 1 косяка на 1ОО мл среды) и культивируют глубинным /способом при рН 1,0-7,2 в течение 18-24 час :при 35-55°С в качалочных кол-f бах емкостью 75О мл (объем среды ЮОмл). Затем посевной материал в количестве 5% вносят в синтетическую среду известного состава, содержащую, г/л: К N0,1,0 j ;NH4)jbC,-l,0;Na,HP04-l2H20 -1,77;

,5;Ге304 7HjO-O,001 ; СаСбз4,0; крахмал растворимый 2О,0 и выращивают тем же способом в течение 2-3 суток при . 35-55 С. По истечении указанного времени культуральная жидкость содержит 1900 уел, ед/мл.

Культуральную жидкость отделяют от мицелия при помощи бумаж1Л1х фильтров, Фибринолитический препарат осажцак т из фильтрата сернокислым аммонием при члсьпивНИИ 0,6-0,8. Полученный ферментный препарат имеет уцельную активность 35ОО5500 усл. ед. на 1 мг белка. Использование предлагаемого штамма по сравнению с известными актиномицетами имеет следующие преимущества: короткий цикл развития; высокая температура культивирования j высокая фи инолитнческая активность продуцируемого ферме та; увеличение выхода фибринолитического фермента. Формула изобретение Штамм Actinotnyces tkerhHOVufgoifis Тпродуцент фибринолиткческого фермента. Хр нится в коллекции кафедры микробиологии Биологического факультета МГУ под номером 54. Морфологические признаки. Спороносцы короткие спиральные с 1-6 неплотно ежатыми завитками. Споры овальные, оболочка споры ребристая. Культуральные признаки. Пептонно-кукурузный агар. Рост хороший. Воздушный мицелий белый, с возрастом серый или темно-серый. Колонии плотные, среда не окрашена. Крахмало-йммиачная с ;еда. Рост хороший. Воздушный мицелий от светло-серого до серого. Колонии сероватые. Среда не окрашена. Среда с рыбным экстрактом, агаровая. Колонии буроватые или коричневые. Мелланоидный пигмент не образует. Синтетическая среда, жидкая. Мицелий, гомогенный или в виде мелких шариков размером 0,2-1,0 мм. Среда цвета некрепкого чая, Физиолога-биохимические признаки, Эвритемный термофильный актиномицет с кардинальными точками роста; максимальной 60 С, оптимальной 49-50 С, минимальной 27°С. Нитраты восстанавливает до нитритов. Крахмал гидролизует. Молоко пептонизирует. Желатин разжижает. Гидролизует фибрин, фибриноген , плазму, альбумин. Хорошо усваивает пептон. Отношение к сахарам. Хорошо усваивает глюкозу, фруктозу, мальтозу лактозу, ксилосу, арабинозу, рамнозу, галактозу, слабо усваивает сахарозу. Отношение к спиртам. Усваивает маннит, сорбит, дульцйт., инозит. Отношение к органическим кислотам. Усваивает сукцинат, лактат, цитрат,