Штамм -продуцент лимонной кислоты Советский патент 1977 года по МПК C12K1/02 C12D1/04 

(54) ШТАМЛ1 ASPERGILLUS NIGER Р-1 - ПРОДУЦЕНТ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ

12 Длина Конидиеносцев 3-4 мм, диаметр сечения конидиенасцез 20 мкм. Органическая среда. Сусло-агар. У пятисуточной культуры форма «анндий йрутлая, .в диаметре 6 мкм. Конидиальные головки в среднем 125-145 мкм. Везикулы круглые, в среднем 27-29 мкм. Конидиеносцы длиной выШе 4 мм. Диаметр сечения 15 мкм. По морфологическим признакам штамм Р-1 отличается от исходного штамма ЭУ-119, что видно-из приведенного в табл. 1. Таблица 1

Примечание. Длина конидиеиосцев штамма ЭУ-119 0,7-5, Р-1 3-4 мм.

Культуральные признаки. Среда ЧапекаДокса. Гигантская колония, выращенная в чашке Петри ири 32° С, на пятые сутки имеет круглую форму диаметром 45-50 мм. Край колоний ровный, аспорогенная зона - 6 мм.

Субстратный мицелий радиально складчатый. Спороношение тоже радиальное (под влия1нием складчатого мицелия), скудное, тймно-коричневое, с пушистым воздушным мицелием.

Среда сусло-araip. Пятисуточная гигаигская колония, круглая. Диаметр колонии 90 мм. Центр колонии с редким возвышенным споро1ношением, затем следует пояс с густым, низким спороношекием, которое в направлении края становится редким.

Ферментационная среда. На ферментационной Ораде, употребляемой для получения лимонной кислоты, 24-часовой мицелий тонкий, складчатый, коричневатый. В ходе цикла мицелий становится беловатым, более плотным и складчатым. Основание мицелия становится буроватым. Мицелий эластичный, коПри/мер. Посевной материал (конидии) штамма Aspergillus niger Р-1 получают при посеве чистой культуры штамма на сусло-агаровой среде. Культивирование производят при

нидий не Oi6pa:3yeT или образует очень мало. Антагонистические свойства. Штамм Р-1, обладает более высокой устойчивостью к бактериям-антагонистам, чем ЭУ-1-19, и подавляет развитне газообразующих, кислотообразующих и денитрифицирующих (.нитр-итообразующ,их) .бактерИЙ (Bact. coli, Leuconostock гаеsentericides; Pseudomonas (Ps) fluorescens),

встречающихся в ферментационном (процессе лимонной кислоты.

Биохимические признаки. Хорощо сбраживает мелас1сные и синтетические среды при поверхностном способе культивирования, шыход лимонной кислоты от сахара мелассы достигает 99-100%.

Кроме того, съем лимонной кислоты с единицы площади мицелия увеличивается в среднем на 14,8% и на мелассных средах штамм образует в среднем 97,8% лимонной кислоты от суммы кислот.

Полученные результаты приведены в табл. 2.

Таблица 2

30 30-32° С в течение 9 сут в кюветах площадью 10-12 дм . ЗрелыеКОНИДИИ отделяют от м-ицелия цри помощи вакуумного устройспна. Выт ход опор (конядий) с 1 дм площади среды

1,0-1,1 г. Собранные конидии смешивают со стерильным активированным углем в соотношении 1 : 2. Такой посев-ной материал используется для .микробиологического получения лиманной «нслоты. Для роста мицелия и образования кислоты готовят ферментационную среду следующего состава, г/л;

Меласса250

Ферроцианид калия1,1

Фосфорнокислый калий однозамеш,енный0,16 Сернокислый цинк 0,005

рН среды6,8-7,0

.Мелассный paCTBoip нагревают до 100° С и до|ба|Вляют раотепное количество фер.роцианида калия. Простарилизованный раствор охлаждают до 45° С и добавляют фосфорнокислый калий и сернокислый цвнк. Приготовленный раствор наливают ,з бродильные кюветы высотой слоя 12 см и вводят споры штамма Р-1 из расчета 100 мг/м илощади кювета. В стадии роста и .развития мицелия (в течение 24-36 ч) температура культивироваиия должна быть 34-36° С и аэрация воздуха 3-4 Л43 в 1 ч на 1 м .мицелия. После шолного образования мицелия в период активного кислотообразования температура культивирования должна быть 31-3-3° С и аэрация воздуха 15-18 м в I ч на I м мицелия. Испарение в продолжение иолного цикла ферментации составляет 45-50% от иачального объема раствора. При таком режиме через 9 сут кисло:пность раствора достигает 180-210 г/л, остается несброженным 0,5-0,7% сахара. В сброженном растворе содержится 97-98% лимонной кислоты и 2-3% глюконовой, щавелевой, яблочной, сахарной, фумаровой, янтарной, малоновой, адипиновой кислот. В течение всего цикла ферментации непрерывно происходит нарастание биомассы гриба, которая .в коице цикла достигает 1,8-2,4 кг/м в пересчете яа сухой вес.

Формула изобретения Штамм Aspergillus niger Р-1 - продуцент лимонной кислоты. Хранится в коллекции экспериментального завода биохимических ирепаратов института микробиологии И1М. А. Кирхенштейна, г. Рига. 5 Морфологические признаки. У пятисуточной культуры иа среде Чатека-Докса канидиальные головки имеют круглую фор:Му диаметром 205-215 мкм. Пузырьки (везикулы) вытянутой фор.мы диаметром 27 мкм. Стеригмы однослойные, длина стеригм 10 .икм. Конидии круглые, их средний диаметр 7 мкм. Длина конидиеиосцев 3-4 мм, диаметр 20 мкм. Культуральные признаки. Среда Чапека-Докса. Пятисуточ1ная гигантская колония, круглой формы, диаметром 45-50 мм. Край колонии равный, аспорогенная зона - 6 мм. Субстратный мицелий радиально складчатый. Спороношение скудное, темно-коричневое, с пушистым воздушным мицелием.

Среда сусло-агар. Пятисуточная гигантская колония диаметром 90 мм. Центр колонии с редким возвышенным спороиошением, затем следует пояс с густым, низким спороношением, который по направлению к краю становится редким.

Ферментационная среда. 24-часовой мицелий тонкий, складчатый, коричневого цвета. В ходе цикла - после 3 сут мицелий становится беловатым, более плотным и складчатым. Основание мицелия становится буроватьим. Мицелий эластичный, конидий не образует или образует очень мало. Антагонистические свойства. Обладает высокой устойчивостью к бактериям-аптагоиистам.

Подавляет развитие газообразующих, кислотообразующих и денитрифицирующих (|нитритообразующих) бактерий (Bact. coli, Leuconostock mesentericides, Pseudomonas (Ps) fluorescens), встречающихся в ферментаци0 онном процессе лимонной кислоты.

Биохимические признаки. Хорошо сбраживает мелассные растворы при поверхностном способе культивирования. Выход лимонной кислоты на 14,8% больше с единицы площади

5 мицелия, а на меласоных средах штамм образует в среднем 97,8%

лимонной кислоты от суммы «ислот.