Способ получения посевного материала для производства лимонной кислоты Советский патент 1982 года по МПК C12P7/48 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения посевного материала для производства поверхностным или глубинным методами лимонной кислоты. Известен способ получения посевного материала, используемой для получения лимонной кислоты, путем выращивания штамма Aspergil niger ЭУ-119 на питательной среде Однако применение этого штамма на стадии приготовления посевного материала дает низкий выход спор (конидий) с низкими показателями биохимической активности. Наиболее близким решением по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получен посевного.материала для производства лимонной кислоты путем рырациеания штамма A pcrgillus niger Р-1 на сусло-агаровой питательной среде, содержащей все необходимые компоненты питания. j Выход спор с 1 дм площади споруляции составляет 1,0-1,1 г. Всхожесть спор - 80. Содержание спор в 1 г - до Zt млрд. В условиях поверхностного культивирования штамм синтезирует лимонную кислоту из сахара мелассы с выходом до ЭЭ° 2. Недостатки известного способа-низкий выход спор с единицы площади споруляции, невысокое качество посевного материала за счет незначительного содержания спор в посевном материале, что является следствием морфологических особенностей штамма - длинных конидиеносцев, а также высокая себестоимость целевого продукта (719 РУб. за 1 кг. Цель изобретения - увеличение выхода спор с единицы площади споруляции и улучшение качества по39севного материала всхожести и содержания спор в 1 г , а также снижение его себестоимости. Указанная цель достигается тем, что в способе получения посевного материала для производства лимонной кислоты, предусматривающем выращивание спор плесневого гриба вида Aspergillus niger на питательной среде, содержащей истриники углерода, азота и минеральные соли, из вида Asper iilus niger используют штамм Aspergillus niger R-3. Штамм Aspergillus niger R-3 получен в результате селекции путем ступенчатой обработки этиленимином N-нитрозометилмочевиной и ультрафиолетовыми лучами штамма Aspergillus niger ЭУ-119. Мутантный штамм хранится в коллекции микроорганизмов Института микробиологии им. Августа Кирхштейна ЛатвССР, депонирован под № F 28 Штамм также депонирован во ВНИИгене тики и имеет коллекционный номер ЦМПМ F-13.2. Штамм имеет следующую характерис тику. Морфологические признаки. У пятисуточной культуры на среде Чапека-Докса конидиальные головки округлые, в диаметре 200-220 мкм. Везикуль слегка вытянутой формы З х37- 6х50 мкм. Стеригмы однослойные. Длина стеригм - 9-15 мкм. Кони дии темно-коричневые, круглые, в ди метре 5-7 мкм. Конидиеносцы длиной 1-3 мм. Культуральные признаки. Гигантская колония штамма R-3 выращивается на среде Чапека-Докса в чашке Петри при , на пятые сутки имеет круглую форму, диаметр колонии мм, аспорогенная зона 4-8 мм. Колонии на сусло-агаре (5 сут, при 32°С)имеют круглую форму диаметром мм. Аспорогенная зона 6-10 мм. Центр колонии выпуклый с редким темно-коричневым спороношением, обладает высокой устойчивость к бактериям-антагонистам, встречающимся в процессе лимоннокислого бро жения . Биохимические признаки. Хорошо сбраживает мелассу. Выход лимонной кислоты от сахара мелассы до 100%. Из суммы синтезированных кислот на долю лимонной приходится 55-99, на долю щавелевой кислоты Отношение к источникам углерода. Ассимилирует сахарозу, глюкозу, фруктозу, мальтозу, гидролизаты растительного сырья, этанол. Не ассимилирует уксусную кислоту. Отношение к источникам азота. Усваивает органический и минеральный азот.. На сусло-агаровой питательной среде в условиях поверхностного культивирования штамм Aspergillus niger R-3 дает выход спор 1,3-1,5 г с 1 дм площади споруляции. Всхожесть спор 90-98%. Содержание спор в 1 г 30-35 млрд. Посевной материал штамма Aspergillus niger R-3 готовят следующим образом. Готовят споруляционную среду, содержащую источник углерода, азота и минеральные соли. В качестве источника углерода используют пивное сусло илисолодовый экстракте содержанием в среде 5-9% по сухому веществу. Остальные компоненты питательной среды берут в следующих количествах, вес.%: Мочевина0,05-0,1 NaCl1-2 5Н О 0,0001 2-3 Агар рН среды поддерживают на уровне Среду засевают культурой штамма Aspergillus niger R-3. Культивирование производят в поверхностных условиях, регулируя температуру и влажность. Длительность процесса 9-10 сут. Камеры аэрируют в течение всего процесса культивирования. По данной технологии получают 1,,5 г спор с 1 дм споруляционной площади. Для. определения всхожести суспендируют в мелассном растворе и культивируют при в течение 10 ч. Соотношение проросших и непроросших спор определяют под микроскопом. Всхожесть спор штамма R-3 90-981. Посевной материал готовят смешивая споры с активным углем 1:1, смесь тщательно перемешивают. Количество спор определяют в 1 г полученного таким образом посевного материала; Для данного штамма этот показатель 15-17,5 млрд. Споры