Антибиотик коралломицин и способ его получения Советский патент 1979 года по МПК C12D9/14 

Коралломицин активен по отношению к грам-положительным и кислотоустойчивым бактериям, включая штаммы, резистентные к антибиотикам, широко применяемым в медицинской практнкс.

Даиные об активности коралломицина но отношению к различным бактериям нриведены в таблице.

Антибиотик Коралломицин синтезируется культурой актиномицета Act. longispororuber, которая выделена из почвы Средней Азии, штамм 6795-38-12, на среде, содержаш,ей основные источники углерода, азота и минеральные соли. Антибиотик экстрагируют из мицелия органическим растворителем, экстракт унаривают, из полученного при этом водного остатка антибиотики извлекают органическим растворителем, после отгонки которого получают неочищенный коралломицип в смеси с малоактивными индикаторными антибиотиками. Разделение осуществляют, используя различную растворимость антибиотиков в воде при и в органических растворителях. Затем коралломицин очищают хроматографированием на водной кремневой кислоте и переосаждением из органических растворителей.

Для хроматографии как в тонком слое, так и в колонках используют кремневую кислоту, освобожденную от ионов металлов путем последовательной промывки

1%-ЯОЙ соляной кислотой, водой, 0,5%-|НЫМ

водным раствором трилона Б, водой, метанолом и ацетоном.

. Индивидуальность коралломицина установлена методом тонкослойной хроматографии на водной К|ремневой кислоте в трех системах растворителей: хлороформ- метанол (9:1), J / 0,55; петролейный

эфир - эфир (3:7), R 0,6; хлороформ - эфир (35:15), R 0,5, при нанесении на .пластинки 25 у вещества, проя влении при дневном свете по желтой окраске антибиотика или парами йода. На контрольных

хроматограммах проявляется 1 у вещества. Методика осуществления предлагаемого способа показана на следующих примерах.

Пример 1. Процесс глубинного биосинтеза осуществляют путем кулад-ивирования штамма 6795-38-12 Act. longispororuber на среде следующего состава, %: соевая мука 3,0; глюкоза 2,5; мел 0,5; NaNOs 1,0; кукурузный экстракт 0,25; рН

7,0-7,1.

Примерно через 96 ч ферментации от 16л глубинной культуры отделяют мицелий (1,9 кг), Антибиотики извлекают из мицелия экстракцией 5,7 л ацетона. Экстракт упаривают в вакууме до объема около 1 л. Полученный водный остаток подкисляют 10%1ным раствором соляной кислоты до рП 1-3 и антибиотик экстрагируют этилацетатом (3X300 мл).

К объединенным экстрактам добавляют фосфатный буфер с рП 8 и 10%-ный раствор едкого натра до рП 9,0-10.0. При этом в водную щелочную фазу переходит коралломицин, а в органическом слое остаются индикаторные антибиотики, обладающие слабой антибактериальной активностью.

Водную фазу отделяют (0,5 л), подкисляют 10%-ной соляной кислотой до

рП 1-3 и антибиотик извлекают этилацетатом, после отгонки которого получают 1,5 г темно-красного маслообразного продукта. Его растворяют в эфире, наносят на 4 г водный кремневой кислоты, высушивают на воздухе, вносят в колонку (d 3 см, / SB 18 см) в смесь петролейный эфир - этилацетат (3:2) и элюируют той же системой растворителей.

Первые две фракции (бесцветную и

светло-фиолетовую) отбрасывают, третью- оранжево-красного цвета - собирают, проверяют хроматографическую однородность в TOHKOiM слое и растворители упаривают

досуха. Получают 0,42 г продукта, который растворяют в минимальном объеме эфира и выливают в 10-кратный объем гексана. Выпавший аморфный осадок отделяют и второй раз переосаждают из смеси эфир-

гексан. Получают коралломицин в виде

порошка оранжевого цвета (оттенки могут варьировать от оранжево-красного до оранжево-желтого), который высушивают в вакууме при 60°С. Выход 110 мг. Состав коралломицина отвечает формуле Сз4Н28О9, мол. вес 580 (масс-спектрометр высокого разрешения).

Ацетилированне коралломицина (60,9 мг) ук1су|Сным ангидридом в пиридине при комнатной температуре приводит к получению смеси двух ацетильных производных, которые извлекают из разбавленной водой реакционной массы эфиром и разделяют на пластинах с водной кремневой кислотой в системе гексаи - этилацетат (3:2). После двукратного проявления ацетильные производные № 1 (/0,49) и № 2 ()R/0,2) элюнруют эфиром, растворитель удаляют и остатки высушивают в вакууме при комнатной температуре.

Ацетильное производное № 1 представляет собой темно-желтый порошок состава Сз8Нз2О11.

Ацетильное производное № 2 получают в виде светло-желтого порошка состава

С42НзбО13.

пример 2. Антибиотики экстрагируют из 0,4 кг мицелия, полученного как в примере 1, экстракт упаривают до водного остатка, из которого смесь антибиотиков извлекают этилацетатом. После удаления растворителя получают малиново-красный препарат. Обработкой эфиром при комнатной температуре из пего удаляют антибиотики-индикаторы. Остаток (20 мг) переносят в воду с рН 2 и антибиотик извлекают этилацетатом. Растворитель упаривают досуха, остаток растворяют в эфире, наносят на пластинки с водной кремневой кислотой, проявляют в системе петролейиый эфир - этилацетат (3:2).

Оранжевый слой с R 0,6 собирают, обрабатывают метанолом, полученный после отгонки растворителя продукт переосаждают из смеси эфир - гексан аналогично примеру 1. Получают 8 мг коралломицина.

Формула изобретения

1.Антибиотик коралломицпн, обладающий антибактериальной активностью.

БруТТО-форМуЛа Сз4Н28Од.

Мол. вес. 580.

Максимум поглощения в УФ-спектре (в спиртовом растворе), им; 228, 268 и 420.

Максимальные частоты поглощения в ИК-спектре (в КВг-диске), см ; 3400, 2980, 2935, 2865, 1710, 1625.

Порошок оранжевого цвета, легко растворим в эфире, хлороформе, этилацетате, диметилформ амиде, диметилсульфоксиде, спирте, метаноле, в воде при ,0, нерастворим в воде при рН 7,0 и в водных растворах кислот.

В УФ-свете не флуоресцирует.

2.Способ получения антибиотика коралломпцииа по п. 1, отличающийся

тем, что штамм Actinornyces lougispororuber № 6795-38-12 выращивают на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отделяют мицелий, обрабатывают его органическими растворителями и из экстракта выделяют целеной продукт.