Способ получения производных лейрозина или их солей Советский патент 1977 года по МПК C07D519/04 A61K31/475 

тем реакционную смесь тщательно обрабатьшают холодным (-40) -(-50)° С водным аммонием с доведением рН до 8-9, смесь разбавляют водой и экстрагируют несколькими частями органического раств(фителя, предпочтительно метиленхлорида до тех пор, пока не останется алкалоида. Экстракты объединяют, промывают водой, сушат н выпаривают досола при пониженном давлении. Получают белый, пеноподобный, аморфный сухой остаток, состоящий главным образом, из N- формиллейрозина и N-димегиллейрозина. Эти соединения отделяют дру от друга хроматографией, используя колонку, заполненную окисью -«люминия (IV-V степень активности) . Насадку готовят из суспензии алюминия в 1бензоле. Первым элюентом является бензол и по следующими элюентами служат смеси бензола с разными количествами хлорированного углеводорода, предпочтительно хлороформа. Находящиеся в различных вытекающих фракдиях вещества ндентифищ руют тонкослойной хроматографией. Вначале из колонки выходят сопутствующие вещества, затем N - диметиллейрозин ив заключение злюируется N - формшшейрозин. Фракщ1и, содержащие аналопгп1ые вещества, объединяют, выпаривают досуха при пониженном давлении и можно полученные основания переводить в cojm, предпочтительно в соответствующие моносульфаты. Эти соединения могут быта очищены также перекрисгаллизащ1ей. Такой метод очистки применяют главным образом на солях. Далее смесь, содержащая N - диметиллейрозин и N - формиллейрозин или сам N диметиллейрозин , может быть формияирована следующим известным методом. Сухой остаток, полученный в результате окисления реакционной смеси, подвергают формилировакию смесью муравьиной кислоты и уксусного ангидрида. В зтой реакции N - диметиллейрозин переводят в N - формиллейрозин. Реакционную смесь нейтрализуют, экстрагируют Метиленхлоридом, экстракт промывают водой и выпаривают досуха при пониженном давлении. Полученный сухой остаток очищают хроматографией. Полученный N - фсфмиллейрозии можно перевести в его соли, щ едпочтитеяьно в сульфат. Пример 1. 12 г (0,0132 моля) лейрозинсульфата растворяют в 2640 мл ацетона, после чего добавляют 0,6 г ледяной уксусной кислоты, свежеотогиашюй из смесн, содержащей хромовую кислоту. Раствор охлаждают до (-55) С и к перемешиваемой смеси в течение 3 мин добавляют холодный уксусный ангидрид, содержаицш 5,94 г (0,135 моля) хромовой кислоты. Смесь оставляют для выдержки в течение 5 мин,затем рН раствора доводят до 6, используя холодный концентрированный водный аммоний. Эту шерадию проводят в течение 7 мин и используют около 6 л раствора аммония. В период зтой нейтрализации смесь охлаждают, чтобы предотвратить рост температуры выше (+50)° С. Полученную смесь помещают в стеклянный сосуд, снабженный стеклянной мешалкой и краном на выходе, который содержит 9 л дистиллированной воды. Разбавленный раствор с помощью добавочных количеств водното аммиака превращают в щелочной с рН - 8,5. Затем реакцисжную смесь экстрагируют 4x1,5 л метиленхлорида. Алкалоидные основания переходят в метиленхлоридкую фазу. Фазы разделяют, органические растворы объединяют и промывают 3x1 л дистиллированной воды для удаления уксуснокислого аммония, образованного на стадии нейтралнзацЕН. После этого органическую фазу сушат над сульфатом иатрия и выпаривают досуха при пониженном давлении. Получают 10 г светло-бежевого сухого остатка, щюдукт является сырой смесью N формиллейрозина и N - диметиллейрозина. Сухой остаток растворяют в 60мл бензола и раствор переливают в хроматографическую колонку диаметром 36 мм, заполненную 500 г окиси алюминия (IV-V - степень активности). Насадку готовят из бензольнсш суспензии окиси алюминия. Колонку элюируют растворителями или смесями растворителей, перечисленными в табл. 1. Та. блица 1. Вытекающий поток собирают по фракциям каждую объемом по 400 мл. Различные фракщш анализируют тонкослойной хроматографией. Фракции 1-5 не содержат алкалсавдов. Первые следы алкалоида появляются в основном в фракщш 6, которая содержит главным образом нереагируюпщй лейрозин. N днметиллейрозин появляется впервью в фракщш 7 и аошюстью злюируется к фракщш 15. Элюироваиие N формиллейрозина начинается в фракдаи 13 и заканчивается к фрак1ЩЯМ 19-21. Фракции, которые по результатам тонкослойного хроматографического анализа содержат одинакоые алкалоиды, объединяют и выпаривают досуха ри пониженном давлении. Получают 5,6 г сырого аморфного N - формилейрозина и 1,5 г сырого аморфного N- диметилейрозина. На следующей стадии эт1Г сьфые, аморфные снования раздельно превращают в их моносульаты. 1 вес.ч. сырого продукта растворяют в 5 об.ч. ухого этанола, после чего раствор подкисляют до Н 4 добавлением 1%-ной серной кислотой в сухом таноле. Отделение кристаллического сульфата натанается немедленно. Смесь вьщерживают при комнатной температуре в течение несколькнх часюв и затем вьщелнвшнеся кристаллы отфильтровывают.

Соли перекристаллизовьшают затем следующим образом.

1 вес.ч. кристаллического сульфата растворяют в 5 об.ч. метанола н объем раствора увеличивают в пять раз за счет сухого этанола. Раствор выдерживают прн комнатной температуре, затем отделившийся продукт ОТфИЛЬТрОВЬШаЮТ, промывают сухим этанолом и высуцшваюгг.

В этом процессе получают следующие вещества: 4,8 г (40,1%) моносульфата N-формиллейрозина, т.пл 248-252°С, (afo +37° (с 1,вводе) и 1,1 г (9,3%) моносульфата N-диметиллейрозина, разлагается без Плавления, 3,2° (с 1, в воде).

Для определения физических констант N - формиллейрозинового основания часть полученного таким образом моносульфата N - формиллейрозина растворяют в воде, рН раствора доводят до 8-9 концентрированньпл водным аммиаком, смесь трижды экстрагируют мегиленхлоридом. Органические фазы объединяют, высушивают и вьшаривают досуха при пониженном давлении. Пот ченный аморфтак N - формиллейрозин перекристаллиэовывают из этанола.-Кристалличесгсий N - формилпейрозии плавится при 209-211° С, ,3° (с 1, в хлороформе).

ИК - спектр N - формиллейрозина отличается от спектра лейрозина появлением сильной абсорбционнш полосы формильной груш1ы, которая появляется щж 1672 .

На основании масс - спектрометрии массовое число N - формиллейрозина составляет 822. Измеренная точная масса М 8223977, из которой может быть вычислена эмпирическая формула С4бН54М40 с теоритической массой 8223909.

Вычислено,%: С 67,14; N 6,81, О 19,43; Н 6,61.

C46H54N4OlO

Найдено,%: С 66,95; Н 6,58; N 6,75; О 19,27.

Ион этой молекулы дает рост до ионного пика с массовым числом 793, соответствующим удаленит формильной группы, Kafc это подтверждается точной массой (м. е. - масса электрона) м.е. (измерено) - 93,3866, что соответствует эмпирической формуле C45Hs3f 409с вычисленной массой м.е. (вычислено) 793,3882.

Аналогично массовому спектру лейрозинового основания ионный пик, соответствующий массовому числу 353, появляется также в массовом спектре N - ффмиллейрозинового основания, что отвечает эпоксивельбанаминовой половине. Этот факт также был доказан измерением точной массы: м.е. (измерено) 353,1874, что соответствует эмпирической формуле CjiHjsNjOs с вычисленной массой м.е. (вычислено) 353, 1858.

Для О1феделения физических констант N - ди метиллейрозиновсяо основания моносульфат N 6

диметиллейрозина растворяют в воде, рН раствора доводят до 8-9 водным аммиаком и свободное основание экстрагаруют метиленхлоридом. Органические фазы объединяют, высушивают и выпаривают досуха. Аморфный, сухой остаток перекристаллизовьшают из метанола.

Кристаллический N - диметиллейроэинимеет следующие физические константы: т.пл. 208210°С, а 20 +50,1° (с 1, в хлороформе).

ИК спектр N - диметиллейрозина отличается от спектра лейрозина появлением сильной абсорбщюнной полосы вторичной аминогруппы, образованной при диметилировании, появляющейся при 3350см.

На основе массового спектра массовое число иона молекулы N - диметиллейрозина составляет 794. Из приведенного ниже точного массового числа вычислена эютирическая формула €45454 4ОВычислено,%: С 68,00; Н 6,85; N - 7,05; О 18,10.

C45HS4M409,

Найдено, %: С 67,85; Н6,79; N6,90; О 17,95.

Измеренная масса, м.е. (измерено)-794,3895, м.е. (вычисжно) 794,3882.

Пример 2. 1 г N - диметиллейрозина растворяют в смеси I из 6 мл концентрированной муравьиной кислоты и 1 мл уксусного ангидрида, и смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. После этого смесь выливают в 30 мл холодной (0-5° С) воды и рН смеси доводят до 9,0 с помощью холодного, концентрированного водного раствора аммиака. Аммиачный раствор добавляют при перемещивании Алкалоид экстрагируют из водного раствора с помощью 3x30 мл метнленхлорида. Метиленхлоридные растворы объединяют, высуишвают и вьшаривают досуха при псиоокенном давлении.

Получают 0,95 г аморфного белого N - формиллейрозина, который переводят в его моносульфат, как описано в примере 1. В этой реакции получают 1,01 г моносз/льфата N - формиллейрозина.

Пример 3. 10г светло-бежевого, пеноподобного сырого остатка, содержащего N - формиллейрознн и N - диметиллейрозин, полученного окислением 12 г (0,0132 моля) лейрозинсульфата, как описано в примере 1, растворяют в смеси из 60 мл концентрированной муравьиной кислоты и 10 мл уксусного ангидрида и смесь выливают при перемешивании в 300мл холодной (О-5° С) воды, рН смеси доводят до 9,0 с помощью холодного, концентрированного водного aMNfflaKa при перемешивании. Раствор экстрагируют с 3x100 мл метиленхлорида. Метиленхлоридные фазы объединяют, высушивают н выпаривают досуха при понижением давлении. Получают 9,8 г аморфного, белого, сьфого N - формиллейрозина.

Полученный сырой N - фсфмиллейрозин очищают колоночной хроматографией. Сырой продукт растворяют в 60 мл бензола и этот раствор загружают в колонну диаметром 45 мм, заполненную 500 г окиси алюминия (III степень активности) в бензоле. Колонку элюируют растворителями, перечисленными в табл. 2.

Таблица 2.

Количество элюирующего

Состав элюирующего агента агента,

1200

а и хлоро5000

3000

800

розий, перерабатывают как описано выше с дополнительным выходом 1,05 г чистого, кристаллического Моносульфата N - формиллейрозина. Общий выход 7,10 г (63,7%) моносульфата N - формиллейрозина. Физические константы этого соединения идентичны константам, приведенным в табл. I.

Формула изобретения

1. Способ получения производных лейрозина общей формулы I

Вытекающий раствор собирают по фракциям, каждая по 400 мл объема. Фракции 1-3 не содержат алкалоидов. Фракции 4-10 содержат сопутствующие материалы. Начиная примерно с фракции 11 также появляется N - формиллейрозин в дополнение к сопутствующим материалам. В фракциях 15-20 содержится один N - формиллейрозин. В последующих фракциях количество элюированного N- формидаейрозина постепенно уменьшается. Фракции, содержащие один N - формиллейрозин, объединяют и вьшаривают досуха при пониженном давлении. Получают 6,5 г сырого, аморфного N формиллейрозина.

Сырое, аморфное N - формиллейрозиновое основание превращают в его моносульфат следующим образом:

6,5 г N-формил-лейрозина растворяют в 32,5 мл сухого этанола, после чего раствор окисляют до рН 4 добавлением 1%-ного раствора серной кислоты в сухом этаноле. Отделение кристаллического вещества начинается немедленно. Смесь вьщерживают при комнатной температуре в течение нескольких часов, посл чего отфильтровьшают кристаллы и промывают их сухим этанолом. Получают 6,5 г кристаллического монсульфата N - формиллейрозина.

Элюаты, собранные до и после фракций, содержащих N- формиллейрозин, содержат сопутствующие вещества и N - формиллейрозин. Эти фракции объединяют и вьшаривают досуха. Полученное таким образом аморфное вещество (1,75 г) растворяют в бензоле и очищают хроматографическим способом, как описано выше, лишь с той разницей, что для обеспечения лучщего разделения колонну злюируют 1200мл смеси бензола и хлороформа 2:1. Фракции, содержащие один N - формиллейгде R - водород и/или формил, или их солей, отличающийся тем, что лейрозин или его соль подвергают окислению хромовой кислотой в среде органического растворителя при (-90) -(-30) с последующим выделением полученных продуктов, или реакционную смесь, содержащую N диметиллейрозин и N - формиллейрозин общей формулы I или N - диметиллейрозин подвергают обработке муравьиной кислотой при комнатной температуре и вьщеляют целевой продукт формулы I, где R - формил, в свободном виде или в виде соли.

2.Способ но П.1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют ацетон и/ или уксусную кислоту.

3.Способ по П.1, отличающийся тем, что ттроцесс обработки муравьиной кислотой проводят в присуствии уксусного ангидрида.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.Бюлер К., Пирсон Д., Органические синтезы . М., Изд.Мир, 1970, ч. 1, с. 406-407.

2.Там же, с. 384-385.