отцоштся к обяасш щафйййае ШЕ; К raifeiOTHKa, яздяетаг Еыоокоэффектнввнм зща ннгйбЕрова1ИИ роста разлшнмх грвджоягзскйтельгзмх н ,г|®мо1|швдтея 5к5 ьйихрооргаймзш)з. Предлоз жнный шособ получения атибистиса тнешми1аша новый, в патеягаой н шучно-тахнячгсШвыо взо етвшд яоБявется а шбиошкг . Эта яосгагвЕтся там, «по шга&ш StreptOf myces caltleya NRRL Й357 культивируют в аэробных глубинных условиях в пнтателыюй среде- со1 ржап5ей источшкн угларода, азота и мишральные соли, с послвдуиицйм выделением н очисткой вгелвврго продукта. . АнтЕ&отнк тяешйшпзн формулы ЙНа-йНШ-1-г . VS-tHrt-HrNHi 0 Y получают путем вырапщвания микроорганизма Streptomyces cattleya. Этот штамм выделен из образца почвы н обозкаяен как МА-4297 в коллекция культур Мерк ендК°, Инк, Ренвей, Нью-Джер2-. KvHbtypa ш щктокнвое хравекве в дг шгекйягп культур региошльных лабораторий Ео ЕссхшдоБакнкм, Северного отделення по айшльэовааиа нссзкйзшаиЁ к сгжрьпкй служ-оы се;5а(2сохозяйствеяных гкхзггдов11Егй отделгнЕЖ сельского хозяйства ОНА, Щар&&, Илляш:в1с а el присвоен номгр NRRL 8057. КуШ)турага)И -морфологические пркзашси шт&маа Streptomy s cattleya NRBL 8057, Морфогтатет. Сиорофоры являнпся шкггвымг етиралямн, встречзлнци.мася в вада боковых s ко1эчных ветвей та воздуяшом ша5влшн. Qio{ эднзйсондалгвьЕ до цнлк5пфн5е«жзц 0,9 х ,2 бвкм с цзяямн до 10 мкм н боже. Куяьтуралылаз признака. Агар нз томатной пасты и свежий ггукя. тзтигный рос переменный.р скевато-корвчшвыЁ плоский, пространственные, воздушньШ МНЦБЛЕ§ орхидея с белым, растворимого пягмеша ввт, Агар Чапека. Вегетативный рост бесцветный, плоский, пространственный. Воздушный миовл редкий, розовато-бельш, раство1шмого пнгмешя нет. Агар яичного альбумина. Вегетативный роет рыжевато-ко шчневый со следаяш серо-оркидейао
го, плоский, пространственный. Воздуишын мицелий - орхидея со светлыми тенями орхидеи м белого, рвстворимого 1шгмента нет.
Агар глицероля аспаргина. Вегетативный рост перемеыио рыжевато-коричневый со следами серорозового, плоский, пространственный. Воздушный Ш11|елий - орхидея с белым, створымого шгмента нет.
Агар пептон-железодрожжевого экстракта. Вегетап вньш рост рыжевато-коричневый, воздушного мицелия нет, растворимый пигмент слегка коричневатый, меланин не усваивает, HjS не образует.
Питательный агар. Вегетативаьш рост светлый рыжевато-коричневый, воздушного мицелия нет, }acTBoj Moro нигмента нет.
Агар питательного крахмала. Вегетативкьй росг кремовый до рыжевато-корич1«зого, воздушного йощелия нет, растворимый пщ-оаент огсутстзугт. Крахмал гихфолизуе умеренно.
Питательный йселатиновый агар. Взгеягагваый рост крвмоаыйз аозд щного мицелия нет. Желйзиу |жзжмй а2т уь-зерзнно.
SopOHlO yCSS2I2aST ГИЭКОЗу, iiiaSSBuIOiSs 5M5p2SJ5Ш усзаизае фрухстаэу, хсилозу маотоау, гйвжксЗУ, шхаэоэуз S уоЕШЕаез ара&шйзу, д ллкжа у, Еноэмтел, лактозу, рафш-юзу, ра «1козу.
Ойавйальйой эзйшературсй рост Esjjjisrfss 28 Cj Eps3 теьшературе 37° С pecir. умережгэй:.
Нитраты восстанавливает.
Акшбнотик тненамнцнн аолуашт а афсш.есга аэтн5быой фермвктащЕ яодходкидэй интзшяьг-х) водной арэ,дь в р8-гул; руэ лых уеж;зг-шк. :лшKyn.ssJC«5S3 оргйШ13ма Streptomycss esttSs a. Taxass q;«Ma содйржнг аеточшжа углерода, азэш н кзоргаг-шческюс золей, ассимщшруегАЫй -йткросргаш-гз}ЛОМ.
-TBSQOjsss, KBEpaMLSp offiiapg - гл;Егкозу5 фрулИ
Зу, Ый) СакЯр-ЗЗу, ксилозу р. MaiEffiED;;: Ш ДЗаТЕй;
а Tsixste KpajcMsjEsij шпкяг зер, озса, , крзлмал, кукуруз1- -ю муку, кстюгзгщг «шеяьКЭ ЙГЕ.1 в сз%,ташш э качэзЕзз ысточнгзкоз 2e sa5®ira.3eyeMsfQ уггэрода в мгшгелъкой cpsде. lCo)i5S4ecTso узжзода socyamjiae j аир-жйернс- 1-6% 0t средш.
В ка«зстБ« мсючнЕка азота Morj-r бьгк; 53ШйльiOBPJSiii; s i 3pH ;rat;, .uposc-AsaH-g н лд -эля-га м, лз/:щн ше щэойэсШр зв5Я saysa,. шюикоэал , sw cMiKssi-b каэгпй растэор- 1 ды8 гщсглляяль: кгзг ом§ий « iseta. l-kro ssECK asoim ййггойьзрв в 5.о/шчзстэе 0/2-6% от зеса зоджзй .
Прн8«еняют питательные неоргашгдаскне соли, ко Topbse 1ШОТ натрий, калий, аммогшм, кальций, фоофа сульфат, , карбошт, можж также эклгоаггь сгаедёз 8Вбтадш ®, г аярймер кобальта, магнйя, jsejs: и .
Фермсшацню щхжодят при 20-37° для полуЧЕЮ1Я овт19мальных результатов - при 22-30° С, рН mttsfKitHidi среды 6,0-8,0.
Фвр е11гащга осуществляют в глубинных условиях.
Незначительную ферментацию антибиотика проводят путем инокуляции питательной среды антибиотиком-продуцентом и после переноса в средупродуцент ферментацию проводят при постоянной температуре около 24°С в течение нескольких дней. Сосуд с посевом встряхивают при постоянной комнатной TCMnepaiype (28° С) в течение двух дней или до полутения удовлетворительного роста и некоторые из вновь культур используют для инокуляции ; второй стадии посева или среды-продуцента.
Для получеш5я юлы154х кояетеств анга5иотика ф€р1 гнтащ о проводат в баках, снабженкьи смзсятелем и средстваьй-: дпя а жр-овагшя фзpм€ rпtциo:
ной средьз. nKTaTejibHjiu cpsKy no.Tiy-ia T в баке к стерилизуют нагрзвашзем прк тгмперагуре сзсоио 4 20° С. Яри охчаждез-ии oiepasssosai-it-rjic сред} яркЕйвают предварительно п эоросиз-гм культур продуцгнта,. затем фзрьйнтйьупс прозадят в isvsims 3-5 джзй щт и-г ггмеазЕганиЕ к зэвгфовашш ьшктат злькоЁ сздь:. пс. Tiviv Hepaiypy ирмьйрко 24С.
Тнена «н11 ; огйсЕ ;:;s-jr;c2 С-глсз jESJUBCTBOj sSfrKu jsaiK-c; p-.:r3-j;o;-;j.ac.3 л .ij : зпи;-:с
р8Спг;йЕ|К5й ;- з ЙЗТЗКЭ Р. -/. jr/;r;2;;t ;3CJtViO -ОуАЭЬШОзицаЯ; ;с-огш7Сйзушибал; эглякк чгскс формузге, (чэ) 43,52 шгерсг-;, 5,92 : c-oродДг 10,23 ssora, 23,5 кислорода к 11,77 ospbi.
г. :-Я--% , 10 -;,
Sp3ai.
аэйдого фсжвалЯШС . рН ЗрГ. Нолоязтзльгйыз iCKJCio ;
гЕЗН-ГаДШКОг-г. 5О5;:375П1;:;йЗШй: :. ;S;,«.,
ягак. :..чО5Г14Щзт отс..:. ;-;,:::t::r,a: ч-г;,т ..г-Т енайжцяЕ uCucasais is G;irJSiC-ii:i. Е е-сгь 3 зодйо;й ра jiacp ::r5;j ;:::;;a;;-;.u:vv: ; 5ЕИ;(8 У1Г/Г.1;:; ;: ., а г гг - :-;:: ;; ;-.
Oy ISSpUj p-rf j-f .ril..Sp .. V.jr/iVTJ: :,T
(pH7,9) Ери |5€ ихзет iapsot 23 дша, с. insji -ой д-з ;;C-s SKp:;.i3Si з ;
2В KSJIME Лрг2 рЕ 7,0 :Ггл;р:1С:Ц ,:огу;:асяг,е.бмодЯКЁ 3 10 Ajw Фосчга:алсго бог;:-;
период полураслада соскаляз:: гслько
, HSS3с: К1а.йьно &ге,г: ;:;-35г;;:Г1;.;й
нрогиз разлхкЕйя. rjJSS SGiiiCBcaisSEiSMj; п грамотжггштэЕьимх SfiKirepssi @ коаогг si&ss «p jeiffiKHe в
аЖДК1ЩНг.
Его 5ШОЛ 53ОЕ311. Э ЗНТНб-Щ-ШpifflHoro ирегара - дав 5яфек1щй в результате З5фай®№1я грампетюкжтельныйсн я грамотркцательнышс QsK-K ntm, , Staphyioc«xxus aureus, Proteus msrebilis, Escharidiia , KlebsisJIs pneumoniss, .а5 ssruginosa к Eutsrobaeter cSisoJs. Его можно использовать как дополнение к корму животным и как дезинфектант. Применять в водных композициях можно в концентрации 0,1-100 г антибиотика на 1 млн.ч. раствора для ингибировакня роста вредных бактерий на медицинском и зубном оборудовании и в качестве бактерицида в промышленном масштабе, нагфимер, в водных красках для ингибирования роста разрушительных бактерий. Антибиотик тиенамицин можно использовагь в различных фармацевтических рецептах в качестве ингредаента или в сочетании с одним или бопее антибиотиками или одним или более фар макалогичесхи активными веществам Антибиотик используют в форме капсул или таблеток, порошков, жидких растворов, суспензий иш эликсиров. Его можно ввод}ггь орально, топнвдски, внутривешю, внутримьшючно. Таблетки и капсулы для орального ввздеяня могут бытъ в дозировке длн одноразового применещ1Я в могуг содержать, нащжмер, связующие аганты, сироп, камедь, желатин, сорбитол, т агант, iioji i3HjSUinHpporotfiOH, ншолкктели, лакюзу, сахар, крахмал, фосфат кальция,, сорбйтол или ГЕЩик, ймсзываюпще sesjecas, mпример стеарат магякя, тальк, йогшэпызпглйколь; крем1 езем, дезеггзграторы, шпрщлер каршфельный крахг.щл, илн соответствующие сглачиваюшие аге.и.гы. нглример лаурилнатрийсртьфокат. Таблетки можно покрьшггь известным методом. смесЕ могут быть а форме воднызс или масляшк сусгшнзкй, растзоров, змульсш, сиропов, эшжс;чров ИЛИ в виде сухого продукта для растзорения с водой :-jJ3i ру утЛМй Jcидs ocтя ш. Tajoig згаздкие смеси могут содержать условные добазкй, например агенты по;г/чения суспензий, например сорбитолозый сироп, метшщеллюлозу, глюкозу (еахаркый сироп), хсеиавш, гидроксюталцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, стеарат алюлшния в геле шш гидрогеккзованнь;е пищевые ясиры, агект-э гульгаторь - ле1Штш-1, сорбйтанмоноолеат или камедь, неводные носители, которые могуг включать ишдевые масла, waupnMsp миндальное масло, фракцио нировадшое кокосовое масло, масляные эфиры, пропилеетшжоль или зтиловый спирт, презерванты, например метил кли пропил п-гидроксибензоаты или сорбиновую кислоту. Суппозитории должны содержать достаточное котйпестзо основ, например масло какао или другае глицериды. Композиции для инъекций могут быть в одноразовых дозах в ампулах или в дозах для многоразового использования с дополнительными агентами-консервантами. Композиция могут быть в виде суспензий, растворов, змульсий в масле или водных носителях. Композиции могут быть также в виде порошка или жидких спреев или ингалянтов, лепешек или .полосканий для горла. Для закальшания в гтза или уши используют индивидуальные капсулы. Дозировка введения зависит от сосгояввя большого, веса и типа инфекции, частоты введения и яюсоба введения, при зтом парентеральное введение является предпочтительным для большинства инфекций, а оральный путь - для кншечяых ЕШфекций. Орально или парентер&пьао антибиотик вводят в кол1ркстве 2-600 мг/кг в деиь, предвочтикльно 5-1(Юмг/кг в день раздельными дозами, т.е. 3-4 раза в день. Можво применять одворезояые дозяр жки, у&прюлгр 25, 250, 500 или 1000мг активного ннгредвента с подходаионии фнзнологвчески приемлемыми носнтелями или эксцкпиентами. Полученный антибиотик имеет активность 50-400 ад/мл. Очинённый тяешмицян шлучают путем примекз.ния фнлырацнк геля через гель полнакрнлалн-ща с р23 «8ром пор, нсключгипщнм молокуль Е«сом более 1500. ПредЕЗЧ1:-11ельЭ1г.а гелзк ЕЕ-ляется биогель р ЛцсарйароваЕЕьш .зизйпопж :а xsiiiOHoc5s53-so3 гьале soдны гн рзггворзлш ай-гмстя клгг cprsK; 4eQKiix оско.зааа, напркмгр нкриднщ, UiEiOKiiHOBs лутк.щшоз, коляндйксз 51 ашскламиков. Получгнньш элкйт мокко очистить к друтягл .feiiTOflaj/m очкст;;н-. -Предпочтителы-1ы)й спсгобом o-rKCTfa восста Еозлеш-юго о&11деш сгс Пенамкщ-гкз является рропуск21шэ раствора яь.ткбиоткка, например фильтрованного ферме шг1даокнсго бульош ; pFI 4-5; через колошсу. содер;кащ ю СЕЛЬН Зд кзтнаносбмеаную смол}- с иьфоштного гнпа в шгклг натркл. ЯолзчешЕхЕ ад,с.зрбат затем nafr ходящем э/ава ггом, жпример 2%-Еым кадрг&ш ззрйднном. ЭлБйты собирают во фракяна, раз1й8р фра1сщж зависит от размера ко;юшс1. Затвм о етку а.вергшют последовательньЕчги процессами со спёд тйэдн Ароматографическнми средамк: аняоггообмгшгью смолы типа полисттфолтрнметнламмошш1 кагио} ообмешаые смолы гнпа полястыролсульфонзга, гелепроняцаекые смолы н полимерные абсорбенпг. Бнозктивнссть э.пкаюв измеряют нтутем пробы с пркмЕненкем Stsphyiococojs aureus АТСС б538Рв качестве организма пробы. Пример. Трубку с лиофилизованной культурой Streptomycas cattleya открьтают асеитично и содержимое взвешивают в трубке, содержащей 0,7 мл стерильных солей Дениса сзждующей композиции (г) СО.1Ш Девиса Цитрат натрияо,5 KjHP047,0 КН2Р043,0 (NN4)23041,0 MgSp47H2O0,1 Дистиллированная вода1000 мл
Порцию 0,2 мл этой суспензии исгг. щш прививки косяка культуры q)eW)i А (;:гасс агар) следующей композиции (г).
Среда А
Автолиза дрожжей10,0
Глюкоза10,0
Фосфатный буфер2,0
MgSO4- 7HjO0,05
Дистиллированная вода1000 мл
(рН до 6,5 применением NaOH)
Фосфатный буферный раствор KHjPO491,0
NaHP0495,0
ДЬ1стшшированная вода1000 мл
Дня косяков добавляют агар 25,0 г/л.
Привитый косяк подвергают инкубации 8 дней при 28° С и хранят при 4° С.
Порцию спор и воздушного мицелия косяка используют для прививки колбы Эрленмейера емкостью 250 мл, содержащей 50 мл среды А (без агара). Колбу с посевом встряхивают прш 28° С на шейкере со скоростью 220 об/мкн в течение 2 дней, в течение этого времени получают удовлетворительный рост.
15 колб Эрлейнмейера по 250 мл, каждая содерашт 40 мл среды В, прививают 1 мл на колбу культуры из посева. Среда В илеет следующую ко шозицию (г).
Среда В
Кукурузная мука20,0
Барда10,0
Соевая мука15,0
Нитрат натрия4,0
CaCl22H200,5
MgS04-7H200,1
CaClj-eHjO0,01
FeS04-7H2O0,01
Поянгликоль 20000,25 об
Дистиллированная Н201СХЮмл
(рН доводят до 6,5
применением NaOH)
15 кодй с продуктом встряхивают при 28° С иа шейкере со скоростью 220 об/мин в течение 3 дней с пробами, Полуниными в процессе ферментацноииого цикла. В пробах применяют бульон, подверг нутый центрифугированкю.
Через 53 час бульоны из 13 колб сливают. ЧЬсть подвергают центрифугированию и опробированию. Оставшийся бульон фильтр}тот, доводят до рН 7 и 500 мл суиит при температуре ниже 0° С с получением 10,7 г твердого вещества. 1,5 г последнего соединяют с 25 мл смеси п-бутилового спирта и воды (1:99). рН раствора составляет 7,0. if cTSop наносят иа колонку 5 х 118 см биогеля Р 2 (200-400 меш), которую предварительно уравновешявахгт смесью л-бутклового спирта и воды. Гель щхмвляют тем же раствором со сксфостью 10 мл/мин я собяракп 650 мл головного погона с 75 фракциями, 20 мл каждая. Поток элюента на правляют записывающим дифферещшалькым
гесорактомефом . фракцию опробирукт на антибактерийнум ЕКГАЗНОСТЬ. Тиенамицин обнаружен во фракциях 34-40 с максимумом во фракции 37. 10 мл фракции 37 сушат при темкературе ниже 0°С с получением 2,0мл твердого вещества. Последнее соединяют с 5 мл воля для пробы. Пластины с пробок повергают янкуоации в течение кочи при 28° С. Пс;;учили следующие резульraroi:
Концентрация, мг/мл PasNtef эонь., мм, к
Staphyiceoccjs aureus АТСС 5533 F
8030
4025
2021
1017
П р и м е р 2. Открывают асептически трубку с лиофмлизованной культурой Streptomyces cattleya и содерхммое ззвещивают в 0,8 мл стерильных солей Девиса композиции примера 1.
Суспензию иотользуют для инокуляции косяков среды А (плюс агар) с композицией, приведенной в примере 1.
Привитые косяки подвергают иьжубации в течение недели при 28° С и затем храня прк 4° С.
спор и воздущного М15це1шя одного из косяков используют для П жвивки в колбе Эрленмейера емкостью 250мл с посевом, содержащей 50 :.. 1 pe:ibi 4. Колбу с :.iccBnvi встряхивают при 28° С со скоростью 220 об/мнн в течение 2 дней, затем получают удовлетворттельный рост.
Исгтолъзуют 15 колб Эрленмейера емкостью по 250 мл, каждую с 40 мл среды В. Каждую колбу прививают 1 мл культуры из колбы посева. Колбы ргтрячивзют при 28°с со скоростью 220 об/мин на шейкере в тече({ие 3 дней с пробами, вьшолненными в процессе ферментационного цикла. В пробах применяют плавающий бульон, прошедцшй центрифугирование. Получают следующие результаты: Возраст, час4853 72
рН6,- 6,4 5,5
Активность к Staphylococcus aureus АТСС 6538Р,
размер зоны, мм38 40 38
Через 53 час бульоны из 13 колб собирают и фильтруют. рН порцин фильтрата в 400 мл доводят до 4,8 разбавленным HCI и его адсорбируют на 140 KUi Довекс 50 х 2Na при скорости 14 мл/мин. Адсорбат промьшают 200 мл деионизированной воды и злюируют 2%-ным пиридином в воде, собирая 6 X 70 мл фракций. рН фракций доводят до 7,0 Пробы брали на всех фракциях. Пробы указьтают ш 45%-ную активность эяюатов.
Элюатную фракцию сушат при температуре ниже 0° С с получением 117 мг твердых веществ.
Последние растворяют в 1,5 мл смеси fi-бутилового спирта и воды (1:99). Раствор наносят на слой биогеля 1,4x81,5 см, который предварительно урайновешивают смес.ью л-бутилового спирта, я во
(смачивающая основа)-15,0
Барда10,0
Хлопковая среда
(фар ламедая)5,0
СоОг-бНаб0,01
СаСОз (послг регулировадаш pli)3
Полигликош, 2000ОД 5%
Ворсшроаодляя вода1000 мя
(рН доводят до 73
применением NaOH)
Температуру в баке доводят до 24° С в течен .120 час. Добавляют не более 1% дополнительного ногасителя полкгликоля 2000. Проводят атжбактарвые пробы..
400 л бульона фильтруют на пресс-фильтре н добавляют 1,2 г натриевой соли (этилендшштрило) - тетрауксусяой кислоты к фильтрату. Фильтрат охлаждают до 6° С, доводят рН до 4,0 ±0,2 и поддерживают при 6° С. Холодный фильтрат адсорбирунгт на 38 л Довгкс 50x4Nat 20-50 меш, при скоростл 4 . / сорбат промьшазот 4G мл деионизироBSfflioS зодЫ; злкзируют 2%-ным зодным кирадйыом к три фракиди (по 19 к кая-эдая) -юбирЕКП is osipcoHpyfoT. Аншбактерийные пробы яоказываю, «jjfo элаат фракций 2 и 3 содержит 22% акгг1вностзг.. Три фракции собирают, концентрируют до 3,8 л и доводят рН до 7. 3j8 л полученного выше концентрата aj: cop6npyf;iT на 2,5 п Довекс (смола хлориднога щжла) при скорости 200 мл/мин. Смолу элюир пот деиснизировашюй водой в том же кош честве. € ракции собирают и кахсдую доводят до рН 7,0. Пробы показывают 75%-ную биоактивносга во фракщаж 5-S. Эти фракции собнрают и . руют. 3 л этого фильтрата сушат при темпэрапре ниясе , получают 1ь,6г твердых вещасд с активность 70 едУмг.
4 г BbiCjiueHHorb при температуре ниже 0°С твердого вещества соединяют с 50мл 0,1 М 2,6 лутидинлцета-шого буфера. Раствор с рН 6,3 наносят ш колонку, полученную следуиндим образом.
2,5 л Довекса 50x8 (200-4Шмеш) смоль: водородного 15нкла преобразуют в 2,6 луткдаковый цикл. Смолу уравновешивают с 5 объемамз-; колонки 2,6 лутидинацетатного буфера, 0,1 М, рН 6,3. Размеры уравновешенной смолы в елоэ . Колонку проявляют буфером (0,1 М) со скоростью 14 мл/летн.
Поток элкюнта направляют записьюающим дкф, ферекадгальным рефрактором Меккоматкк. Проявляют до получения 220 фраквдй по 20 мл каждая, Каждую следующую фракцию от 44 до 142 опробируют при разбавлении 1:50. Биоактивность наблюдается во фракциях 78-136, максимальная во фракциях 92-94. Фракции 82-116 отбирают и собирают с получением 700 мл раствора. Раствор разделяют на две порция 350 мл и сушат при температуре ниже 0° С.
Одну порцию высушенных веществ растворяют в 2,6 - лутидинадетатном буфере, 0,1 М, рН 7,0.
Раствор 27 мл наносят на колонку бногеля Р-2 (200-400 меш) 5x108 см, которую предварительно уравновешивают буфер (0,1 М). Гель затем проявляют буфером при скорости 10 мл/мин.
Поток злюента гащ авляют за1шсывавшшм ферешщальным рефрактометром Меккоматик. Проявление продолжаЕгт до повуче м 105 фракдай (20 мл каждая), фракпдя собирают, Кажцую фра;« цаю 51-90 сшро&руит щ® разбавлении 1:50. Проба показывает них feosKTSSHociB во фракциях 67-75, максимум в 70 н 71. (| ак1щк 68-75 сс рают с псзлу низм объемЕ 162 мя. К 145 мя собраайой фракция добавляют 3 мл (рН 7,0) буфера фосфата катрйя и растз кош№нтряруют до 9 мл. Концент1йт с содержанием 78% общего биовктнвного материала оскт т кояонку бзгагеяя Р-2, сушат прн тампграгуда щи:йсе 0°С с получгяне&а 185 мг. Оставпжеся 11 й«л фршсцнй S8-75 c-jfrnai прн TeMsepatjps нзсзсе 0°С с псвту Енгм 1,9кк теардых зеществ с актшзностью 10Ю ад/мг.
П р н М е р 5. Tpj-eicy с лпоф лиз-г-ванной кулыз-рой Strsptcmyces jattSsya отхрьЕВзгс-т асго13гческн и содер к1ййос гзвешгазан s Gs-S мг; -г таршхьньпс солзк Девйса кслшсзщнн прй ш 1.
Эту суспензию нспслйзугот для йнз5суляцш1 5тыргх кэсгкоз среды А (шлос агар) ксмпсзгазс: примера i.
Инок янрованные косяки подЕергаит KHscjea1ИИ в течение недели при 2 8° С и затем хранят при 4° С.
10 1Л среды А асептично nepesccsT за одян ic косякоз, споры и воздушный Еоэ шца-зт г су;т.-:пз;::: : 3,3 мл последней использутат для 5Шокуляцку. 2л терзгоро: {сзннг-§ Эряйзоёе-рс,, содержащей 5001иш ср5ДЬ 4, с Есеезсэя 3crp -x;L;ji3i при 28° С со скоростью 160 c6/M.;s т шейкзре в течение 48 fsc.
Культуру ш коябь sccgES ssstsiKsyErr длг ино1суляцго-: бака еглкостггвэ 190 п т ssjXJ sejoiKsE СТЕЛИ, .щего 160 г.-;л среды А. Te mepar py Е баке доводят до 2§° С, яеремещйваит со жоростью ISO , пропуская псугок зоз,н5тш ® Ts jggse , Пекогаситель - йолиглихэль 2СЮО эсшапь зукт в количестве ке болгз 1%. рН нзменяется следугощям образом:
Возраст, часG, 12 24
рЕ6,3 6,65,6
35 л культуры из бака посева исэользушт для инокулящи фернектерЕ (srviKocTbso 756 л) лз нерхсавеющей стали, содержэлдего 467 л среды Е кэмпоз1Щ н примера 4.
Процесс проводят прн 24° С прн скоростк язремешивання 95 об/мнн в течение . Пеногаситель - полигликоль 2000 добавляют в количестве не более 1,1%.
400 л бульона фильтруют через фильтр-пресс к порошок для фильгр-ования добавляют к 1,2 г (этнлендинитрило) тетрауксусной кислоты, к фильтрату добавляют соль . Фильтрат охлаждают дс 6° С, доводят до рН 4,0 ± 0,2 и вьщерживают 9 ды. Гель проявляют смесью п-бутилового сгофта и воды при скорости 1 мл/мин и собирают 2 мл фракций Поток эпюента направляют записьшающим рефрактометром Меккоматик. Фракции опробируют на антибактерийную активность разбавлением 1:20. Биоактивный пик наблюдали на фракциях 44-53. Фракции 46-49 и половина фракции 50 собирают. 1 мл обраэид последних фракций снова спробнруют н остаток сушат при температуре ниже 0° С с выходом 4,2 мг частично очищенного антибнотмка. П р и м е р 3, Трубку с лиофнлизованной культурой открьтают асептнчио и содержимое взвешивают в 0,8 мл сте1жльных солей Девиса композиции примера 1. Суспензию используют для инокуляции четырех косяков среды А (плюс агар) композиции, указанН(ж в примере 1. Привитые косяки подвергают инкубации в течение недели при 28° С и хранят при 4° С. Порцию спор и воздушного мицелия одного из косяков используют для прививки трех колб Эрленмейера (250 мл) с перегородками, каждая содержит 50 мл среды А. Три колбы с посевом встряхивают при 28° С на шейкере со скоростью 220 об/мин в течение 1 дня, получают удовлетворительный рост. 12 колб Эрленмейе (2000 мл), каждая содержащая 250 мл среды С, прививают 7 мл суспензии, полученной с аптечным собиранием содержани.. 3 колб с посевом. Среда С имеет следующую композицию (ч.): Кукурузная мука20,0 г Барда 10,0 Соевая мука15,0 CaCl22HjO0,5 MgS04-7H200,1 .CoClj- бНзО0,01 FeS04-7H200,01 СаСОз4,0 Погао-ликоль 20000,25 об. Дистиллированная вода10000 мл (рН доводюш до 6,5 применением NaOH) Три колбы встряхивают при 28° С со скоростью 220 об/мин на шейкере в течение 72 час. Бульсшы соединяют и часть центрифугируют для . Собранный бульон имеет рН 7,4, антибактерийная проба с применением плавающего 1 нтрифугованногр бульона - 43 мм. Бульон фильтруют, рН фильтрата доводят до 4,0 разбавлением HCI. 3000мл адсорбируют на 300мл Довекс 50x2 Na при 30 мл/мин. Адсорбат промьшают 300 мл деионизированной воды и элюяруют 2%-ным пиридином, собирая 8x150 мл фракций. рН фракций доводят до 7,0. Элюат фракций 2 и 3 (300 мл) соединяют и с содержанием 48% общего &«оактивного мате{тала наносят на колонку Довекс 50x2 Na 280 мл порции соединенных фракций элюата с рН 7,0, полученного вьпие, пропускают через колонку (40 мл) смоляного цикла. Смолу промывают 160 мл деионизированной воды. Элюент и промытые фракции собирают с получением 440 мл раствора. Раствор доводят до рН 8,2 разбавлением гидроокисью натрия, концентрируют при пониженном давлении доЗОО мл, доводят до рН 7,0 разбавленным HCI и сушат при температуре ниже 0°Сс получением 189 мл твердых веществ, которые растворяют в смеси fi-бутилового спирта и воды (1:99). 25 мл раствора наносят на колонку биогеля Р (200-400 мещ), который предварительно уравновешивают смесью п-бутилового спирта и воды. Гель проявляют и-бутиловым спиртом со скоростью 6,7 мл/мин. Поток злюента направляют записывающим дифференциальн м рефрактометром Меккоматик. 500 мл головного погона соединяют с фракциял™ (20 мл каждой). Каждую фракцию опробируют на антибактерийнутп активность при разбавлении 1:25. Биоактивиость наблюдают во фракциях 37-42, максимум во фракщ1и 39. Фракции 38-41 общим объемом 80 мл собирают. Раствор концентрируют до 10 мл при рН 7,0 и сушат при температуре ниже 0°С. Твердое вещество (13,5 мг) имеет сравнительную силу в щесть раз больще, чем образец на биогеле р 2 колонки в пробе с дисковой диффузией на Staphylococcus aureus. П р и м е р 4. Трубку с лиофилизованной культурой Streptomyces cattleya открьшают icenтически и содержимое взвешивают в 0,8 мл стерильных солей Девиса композкшш примера . Эту суспензию используют для прививки четырех косяков среды А (плюс агар) композиции примера 1. Привитые косяки подвергают инкубации в течение недели при 28° С и затем хранят при 4° С. 10 мл среды А асептически переносят на один из косяков, споры и воздушный мицелий помешают в суспензию. .3,3 мл суспензии используют для инокуляции 2 л перегороженной колбы Эрленмейера с 500 мл среды А. Эту колбу с посевом встряхивают при 28° С на шейкере со скоростью 160 об/мин в течение 48 час, получают удовлетворительный рост. Культуру из этой колбы с посевом используют для прививки, в баке емкостью 190 л из нержавеющей стали, содержащем 160 мл среды А, проводят процесс при 28° С при перемешивании со скоростью 150 об/кош в течение 24 час. Пеногаситель полиглико 2000 используют в количестве не более 1%.рН изменяется следунвдим образом. Возраст, час О1224 рП6,4 4,40,3 43л культуры в этом баке используют для инокуляции 756л ферментера из нержавеющей стали, содержащего 467 л среды Е следующей компоэиции (г): СредаЕ Церелоза Кукурузная жидкость
при 6° С. Холодный фильтрат адсорбируют на 38 л Довекса 50x4 Na (20-50 меш) при скорости 4 л/мин. Адсорбат элюируют 2%-ным водным пиридином и три фракции (по 19 л каждая) собирают и опробируют. Пробы показывают 27%-ную биоактивность во фракциях 2 и 3. Элюат фракхщй 2 и 3 собирают, концентрируют до 3,7 л и доводят рН до 7.
В 3,7 л концентрата элюата доводят рН до 7,4 и адсорбируют со скоростью 200 мл/мин. Смолу элюируют деинизированной водой с той же скоростью, фракции собирают, доводят рН до 7,0. Фракцию 4 (4л), содержац{ую 50% активности в концентрате, фильтруют через фильтр Миллипор 0,45мкм. Светлый фильтрат высушивают при температуре ниже с получением 12,4 г твердого вещества с активностью 270 ед/мг.
4 г высушениых при температуре ниже ОС твердых веществ соединяют с 2,6 - лутидинацетатным буфером, 0,1 М, рН 6,3. Раствор (50 мл) доводят до рН 6,3 добавлением уксусной кислоты, наносят на колонку Довекс 50x8 2,6 - лутидинового Щ1кла смолу (200-400 мещ), которую предварительно уравновеиивают буфером (0,1 М). Смолу проявляют тем же буфером, 0,1 М, рН 6,3, при скорости 14 мл/мин.
Поток элзоента направляют записьшающим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Проявление продолжают до получения 150 фракций (20мл каждая). Другие фракции 72-150 сяробируют при разбавлении 1:50. Единственный биоактивный пик во фракциях 76-148, максимум во фракциях 92-102. Фракции 86-113 собирают с получением 580мл раствора, содержащего 71% биоактивности при нанесении на колонку Довекс 50x8. Этот раствор подвергают сушке при температуре ниже 0° С. Полученный раствор растворяют в 2,6 лутидинацетагном буфере, 0,1 М, рН7,0, с получением 25 мл. Раствор наносят на слой биогеля Р-2 (200-400 меш), которьт предварительно уравновешивают буфером (0,1 М). Гель проявляют тем же буфером при скорости 9 мл/мин. Поток элюента нагфавляют записывакицим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Проявление продолжают до получения 105 фракций (по 20 мл каждая). Каждую фракцию 65-80 опробируют при разбавлении 1:200. Наблюдают биоактивный пик во фракциях 67-76. Фракции 70-72 собирают и высушивают, при температуре ниже 0°С с получением 16,0 мл раствора с активностью 13,800 ед/мг. Фракции 69,73 н 74 собирают и высушивают щж reivmeратуре ниже О С с получением 20,2 мг с активностью S,200 ед/мг.
16 г высушенных при температуре ниже веществ растворяют в 2,6 лутиданацетатном буфе(х, 0,1,М, с получением 10мл. Раствор наносят на слой биотеля Р-2 (200-400 меш) 5x108 см, кото| 1й предва{нггельнр уравнстешивают тем же буфером. Гепь проявляют буфером при скорости 9 мл/мин. Поток элюента направляют записывающим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Проявляют до палученм 105 фракций (каждая по 20 мл). Каждую фракцию 65-80 опробируют при разбавлении 1:200.
Бноактивнын пик наблюдают во фракциях
67-75. Фракции 68-72 со&1рают и высушивают при температуре ниже с получением 9,1 мг с активностью 15,000 ед/мг.
П р н М е р 6. Трубку с лиофилиэованной культурой Streptomyces cattteya открьшают асептически и содержимое взвещивают в 50 мл стершпг ной среды А (с композицией 1), находящейся в перегороженной колбе Эрленмейера емкостью 250 мл.
Инокулированную колбу встряхивают при 28° С со скоростью 220 об/мин в течение 48 час. 40 мл бульона асептично смешивают с 20%-ным стерильным гликолем. 2 мл полученной смеси шшеткой закапывают в стерильную ампулу, затем замораживают и хранят на паровой фазе холодильника с жидким азотом.
Замороженное содержимое ампул ишользуют для инокуляции пе{)егороженнсш колбы Эрленмейера (250 мл), содержащей 50 мл среды А . Колбу с
посевом встряхивают при 28° С со скоростью 160 об/мин в течение 24 час.
Порцию 10 мл из этой колбы с культурсш используют для инокуляции перегороженных KOJ Эрленмейера (2 л каждая), содержащих 500 мл
среды А. Эти колбы с посевсмл встряхивают со
скоростью с 160 об/мни оря 28° С в течение 24 час.
По;н{ив 100 мл содержимого этих колб исооль
зуют для инокуляции ферментера из нержавеющей
стали (756 л), содержащего 467 я среды А. Бак
подвергают обработке при 28° С со «жоростью 130 об/мин в течение 24 час. Полигликоль 2000 используют в качестве веногасителя в количестве ве более 0,1%.
453 я культуры используют для инокуляции
ферментера (5670л) из нержавеющей стали, содержащего 4082 л феды Е композиции примера 4. Процесс приводят при 24° С при скорости вращения 70об/мнн в течение 144 час. Пзногаситель (полнгликоль 2000) добавляют не
более 0,1%. Пробы проводят с использованием плавающего дентрифугированного бульона. Пробы ва дисксшую диффузию проводят с щжменением фильтровальнсж бумаги.
4,082 л ферментацисйшсн-о бульона фильтруют.
Фильтрат охлаждают до 6° С, доводят рН до 4,5Ю,2 н поддерживают при 6° С, Холодный фильтрат адoapSupytoi. Адсорбат промывают 480 л денонизированной воды н элю1фук т 2%-ным водным пи тдином аря скорости 24 л/мин н грл фракции 300, 520
и 240 л со&1рают и отро& руют пр« fti 7,0. Пробы показывают, что злюат фракщй содержит 4, 16 н 6% (соответствешю) биоактнвностн щш ванесеыт на колонку Довекс 50x4 Na.
Элюат фракции 2 концентрируют др 48 я
доводят рН до 7. 48 л концентрата доводят до рК 7,3 и адсорбируют на 76 л Довекс 1x2 (50-100 меш) смолой хлорщцюго цикла при скорости 76 л/мин. Смолу ЭЛЮ1ФУЮТ деионнзированной водой при той же скорости. Собирают 4 фракции, две по 48, одну 70 и одну 48 л. Фракции доводят до рН 7. Пробы показывают, тто 689с исходной биоактивностн гт жсутствует во фракции 70 л. Эту фракцию концентрируют де i 8 л при рН 7,0 и фильтруют с нием фильтра Миллшюр 0,45 мкм. Фильтрат высушивают при температуре ниже 0°С с получением 99 г продукта активностью 310 ед/кг. 10 г высушенного при телшературе ниже твердого веирства соединяют с 2,6 - лутйдинш татным буфером, 0,1 М, рН 6,3. Раствор 125 мя дс одят до рН 63 уксусной кислотой и шносят на колонку, которую щмдаарнтелъяо уравновешивают буфером и проявляют буфером (0,1 М) нри скорости 25 мл/мин. Каждую «йтвертую фракщш от 36 до 192 опробируют при разбавле1®и 1:200. Биоактнность проявляется во фраетщях , s iaKCSiмум во фракщшх 92-%, Ф|жквдш 80-136 cofej рают, дсйавляют 590 мл деяонизироаанной всйк. получают 1760 мл. Собрашаш разбавленный райвор содержит 62% исходной бяоактйзноста, его наносят на колонку Довекс 50x8, сушат кри TSMISратуре ниже 0° С. Высушенные при температуре ниже 0° С твердые веиестза р 1ствир 1юг в 2,6 лутидииацетатко:.; буфере, 0,1 М, рН 7,0. Раствор 27 мл шносяг ш колонку биогеля Р-2 (200-400 меш), которую гфедварител::;;: урарнсвешивают буфером (0,1 М). Гель проявляют тем йсв буфером гзри скорости 10 мл/мкн. Поток эяюента направляют загшсьшатилм Ш фференциалькым р рактометроы Маккомвтик. По лушю 105 фракдаш (по 20 мл каждая), их ССЙЕрают. Кахсдую фракция) 70-93 onpofepyssf прн ра: авлении 1:ЗСЮ. Бноактивность обнаруживаю во фракщих 73-82, максимум во фракдаях 77 и 73. Фрак1щк 75-Ж) высуишзают пгш теьшэрат ре ниже 0° С с полуЕкнем 90 мл антибаошка со средней активностью 10,000 ед/мг. 90 мг его соединяют с 4 мл буфера фосфата калы&ш, М, рН 7. Этот раствор, содерзгащий 596 ед гидфоксила -ШНгасящей оптической плотноси, наносят на колонку с 90 мл гфедв зрительно щкхмьгтого ХАД-2 и уравновешенного до использования с 180мл буфера фосфата кальция, 0,01 М, рН7, прн 5° С. ХАД-2 промьшакя последовательно пятью объемами i н. NaOH, затем деионизированной водой до получения нейтрального элюенха, пятью объемами 1 н. НС и деионкзированной водой до жйтрального элюента, пятью объемами (каяадого) метанола, адетона, 0,(Ю1 М ЗДГА тетранатрия и дистиллированной водьь Перед употреблением растворители вакуумируют. Далее образец наносят Ш1 колонку с двумя порциями фосфатного буфера по 2 мл. Колонку проявляют iipii 5° С буфером прн скорост потскг 2 ..ш/мин. 4 кп фракций элюата собирают. Фракции, полу 1енные после 100 мл эл5оата, собирают и при получении 253 мл концентрируют на вращяющемся устройстве в вазсууме и ниже 10° С до объема 6 мл. Этот раствор, содер/кащкй 436 ед. гщрокашамингасящгй оятнческой плотности, шносят на кс локку диал5етрС М 1,7 см е 90 мл ХАД-2; предварительно проьагПой, как ук&заво выцш, и уравнозе1ШННОЙ при 5С дйсткллирсБашшй . Образец промывают двумя порцйЯШ1 по 2 л дастшгтшрованной воды. Колонку проявляют дггстиллированшй водой со скоростью 2 мл/мин. 4 мл фракций злюата собирают. Фракцни, получ8Ш1Ыэ после 1(Ю м злюата, собирают, 151 мл концен7р фуют на зраЕцаюадемся вь париом устрсйстае до объема 2,73 мл и раствор jffloqJHjBiSHpyEST ДО патучгния 6,49 2,ш тненамищша. Фракции, пслуенкые K-gsorj 152 г.« Е 345 мл, собирают и коадйнтрируют ЕЕ зр31 даю цеыся вынарком устройстве до oSbsSS 3.34 ь5л F, лвофилЕшруют .щ) пшучеьзш ILSSftSi- -ааса. Эти фракций содер з. g сбщгм 369 es, rjijv роксипгл&шгасшдей аш-аческой алэтностн. Погг- агот 3 ЗД раза очгшденный материал ао сраЕнеЕЯш с влзте аалок, нанесзЕ-шь на Еервра ХДЛ, :гс зокку, аол л-ашт агсгйвность 31,000 ед/мг. Снекгроь-гз. рижский анализ образца нротзукта показывает Ei( при измерений з фосфатном буферз, рН пру Q7 нм. П р и м g р . Оорцню 10 г твердого вещестаа (99 г), nonyieiffioro шз SJBSSCC 1x2 очзспсзй, шедйннют с 2,6 . ByrijfiREas TaTKMrbi оуферой, 0,1 М рН 6,3. Paci-Bop 125 UIE доводят до рК 63 п|Ж пшйощи укс сгшй ю жсггы, гшэсгзт на scfgsoHK 7,6x142 см Довекс Й)хо в щйсж; 2,6 - я тщдаЕ-. которую . предвадтктельао ур@взш5ШЕвашт уфером. Колонку Е| айв®ж 5г ё-чгфероеа (0,1 М) прг скорости 35 Шл/ьйш. 3,6 л ггшвЕоаго coJtjsa собврают в. Ж) фракндй по каждая. четвертую ф|йК1Ию &s6 лр скробнр зэ зг« разбавлзшш 1:200. Биоакш ость 0бгТя5 жй35нг7 во фрщсциях 18-173, максйййум so фраквиях 62-82. Фраками 42-102 котлйшаруют к 640мл деиоаизараванной дсйазляют е нолуздЕием 1920мл. Соединенный, разбавленный раствор, со держыдЕй 63% биоглспшности, канооят гш кологщ; Довекс 50x3 т высушязают црк -темзаратуре шжО СТвердые вещества растворяют в 2,6 -лупад-пгацегатном буфере, ОД М, рН 7). гастзор 2S тг нанося на кшюнку 5x112 см Мотеля Р-2 (200-400 меш), йредварятельно уравновешеш уго буфером (0,1 М)- Затем гепБ проявляют тем же буфером 1фи скоросги 10 мл/мнн. Поток эяюента направляют записывающим дифференциальным рефрактометром Меккокштик. Проявляют до получения 125 фракций (каждая по 20 мл). Кажд) фракцию 70-89 опробируют при разбавлении 1:300. Биоактквиосп обнарухсквают во фракциях 72-81, максимум во фракции 77. Фракции 75-79 высушивают при температуре ниже 0° С с получеинем 100.S мл антябиотика с активиостью 8,320 ед/мг. 100,5 мл твердого вещества соединяют с 4 MJ( буфера фосфата кальция, 0,01 М, рН 7. Этот раствор, содержащий 692 ед гидрокошамингасящей оптической плотности, шиюсят на колонку (1,7 см диаметром) с 90 мл предварительно промытого и уравнсжешенного ХАД-2 до использования с 180 МП буфера фосфата кальция, 0,01 М, рН7, при 5° С, ХАД-2 промывают до вС11ош эоыния последовательно пятью объемами 1 а NaOH, затем деионизированной водой до жйтральнсго элюеыта, пятью объемами 1 H.HCI, затем деиоиизирсшшной водой до нейтрального элюента, цятыо объемами метанола, адетона, 0,001 М ЭДТА тетранатрня и затем дистиллированное водс. Вакуумируют все растворители оеред упоггреблением. Затем образец наносят на колсвосу дважды по 2 мл порциями фосфатнотх) буфера. Колонку проявляют при 5° С буфером при жорости 2 мл/мин. 4 мл фракций элюата собирают. Фракции, получениие после 109 мл злюата, собирают и после получения 309 щ снова собирают. К этому эяюату добавляют И,53мг образда ХАД-2 очищенного антибиошка, попу нКого в примере б, содержащего 185 ед гидр жсяла«ашгасящей отнческсЙ плотности. элюат вместе с добавленным ашябиотшсом концентрируют в вакууме на вращающгмся вьшарном устройстве при температуре нихое 10°С до объема 7 мл. Этот раствор, содержащий 720 ея гидроксиламингасящей оптической плотности, наносят на колсаку с 90 мл ХАД-2, предварительно щ омытс, как указано выше, и уравно шенной 1фи 5° С. Перед использованием образец промьшают дважды дистиллированной водсй (по 2 мл). Колонку проявляют дистяллнрованнсж водой со скоростью 2 мл/мин. 4 мл фракций злюата собирают. Фракции, попукааьк после 109 мЛ элюата, собирают и после получения 309 лет концентрируют на вращающемся выпарном устройстве до объема 10,3 мл. Этот раствор, содержаидай 589 ед гидрокснламннгасящей оптической плотности, лиофилизуют с получением 23,6 мг ашибиатнка с активностью 30,140 ед/мг. Полученный таким образом антнбиотнк представляет собой белое аморфное твердое вещество. Образец его помещахп в кашишяриую трубку, температуру повышают со сксфостью 3° С/мян, происходит разложеже без получения жидкой фазы ва следующих стадиях: размягчение при 130-140°С; сокращение в объеме твердото вещества до 70-174°С, где мате1жал желтел; интенсивное нарастание цвета до красновато-коричневого 1фм 180-200° С; карбонизация и остаточшле следы твердого веще стра - п(М 205° С. Щю«1Й образец материала ва ятяяж спектромырни шжазывает гаос абсорбции п 2%,5 нм с Е 268,2. Элементаргалй анализ дает следующие результаты: 5,67% потерь веса нрясуносеори комнатной температуре в течение 4 час в вакууме. КомпоЗИЩ1Я содержит (%) 47,68 углерода, 6,22 водородд, 11,48 азота. Эти результаты совпадакгт с эмпирической формулой CiiHi6N204 S(NH3)o,28- ВЬРШСлеиная эжментарная композиция содержит (%) С 47,68, K6,13,N 11,52, S 11,57, О 23,1. Поляриметрн ский анализ 1 мг/мл раствора этого образца в 10 мм буфера фосфата кальция показал специфическое оптическое вращение + 80°. ИК-спектр этого образца выявил характерный пик абсорбции ш 1765, 1650-l550, 2800-2500 и 3500-3100см . Спектр ЯМР на ЮОмГцобразца ЭТОГО продукта. Формула изобретения Способ получения антибиотика тиенамицина формулы CH,-tH(OH)-,-Г -N (HrNH, о отличающийся тем, что щтамм Streptomyces cattleya NRRL 8057 культивируют в аэробных глубинных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением и очисткой целевого продукта.
