Когда применяют диазоалкан формулы Г,, получаемый эфир соответствует формуле QCGKDCt-iRv R-, где и К имеют указан™ ные значеиня. Примерами -N -защищенных аминокислот, которые могут быть подвергнуты экстрактивной этерификапии по предлагаемому способу, являются N -защишеннью производные простых аминокислот: аминоуксусной кислоты цистеитш, метионипа, аспарагиновой кислоты, глутаминовой киспрты, фенилапанина, трипто({)ана и Ь - ДОПА, NT «защищенные пептиды, в частности, via ферментационных жидкостей, растительных и животных экстра ктов и сложных водных реакционных Смесей, получаемых при синтезах пептидов, например глутатиона, и натуральный или полусингетический пенициллин и пефалоспорин и соответствующие продукты разложения, нагфимер пеницигшиновая кислота или пенициплановая кислота, в частности, из ферментационных и другиж процессов, катализируемь Х энзимом. I:k)дныe растворы N -защ1Ш енных аминокислот, кого))ые подвергают экстрактивной этерификации, могут содержать небольшие количества (например, до 20 об,%/об.) одно ипи более сорастворителей, например водо pacтвopи ыx органических растворителей, та ких как низшие алканолы (например, метанол), кетошл (например, ацетон), сложные эфиры (например, этилацетатД N,N -дизаме- шейные амиды (например, диметилацетамид) и эфиры (например, циклические эфиры, такие как диоксан), например, для того, что- бы придать растворимость Kf -защищенным аминокисаотам в водной среде, С другой стороны, в случая-к, ког да N-защищенные аминокислоты проявляют особенно, низкую растворимость в воде, водный раствор може принять форму шлама, вкучючающего насыщен ный водный раствор N -защищенных аминокислот в контакте и равновесии с твердой, нерастворимой Ы -защищенной аминокислотой Примерами пениииллинов и цефалоспори- нов, которые подвергают экстрактивной этерификации по пpeдлaгaeмo fy способу являют ся соединения, структурную форму- лу raeZ- S X является двухвалентной группой, выбр аниой из соон соон где Y явпяется метилом, замещенным метилом, например , где Y является остатком нуклеофила, включающим такие группы, как ацетокси-, окси- или карбамоилокси, или ненасыщенной группой такой, как винил или замещенный винил, и пунктирная линия между 2-, 2- и 4 положенйями в формуле |5 указывает на то, что соединение может быть цеф-.2-ем или цеф-3-ем соединением; R является защищенной аминогруппой, например карбоксильной ациламидогруппой (например, содержащей атомов углерода) ипи протонированной аминогруппой (HH)j R является водородом или низшей (например, С - ) алкильной, алкокси- или ал- килтиогрувпой, например метоксигруппой, В соединении П К является карбоксильной ациламидогруппой, ацильная часть которой может быть выбрана из ацильнык групп пенициллина и цефалоспорина, описан1п 1х в литературе. Структурная формула П включает в себя таюке соединения, не охваченные специально группами Ш Ш 1 например 2- цетоксиме- типпенишшлииы и 2 метил- и 2-метиленце- фалоспорин. Когда экстрактивной этерификации подвергают кислоту, содержащую одну или нес- KOjibKO свободных аминогрупп, например простую аминокислоту или пенициллиновую или цефалоспориновую кислоту, содержащую аминогруппу в 6- или 7-положении боковой цепи, такие группы защищают перед этери- фикацией протонированием или введением защитной группы. В качестве водонерастворимого растворителя, применяемого при проведении экстрактивной этернфикатш, применяют инертный к реакционным условиям и обладающий спо- собностью частично растворять этерифициро ванную N -защшценную аминокислоту. Применяют предпочительно хлорированные углеводороды, например метиленхлорид, хлороформ или хлорбензол; алифатические и ароматические эфиры, например этилацетат, бутилацетат или этилбензоат; водонерастворимые кетоны, например метилэтилкетон или метипизобутилкетон; алифатические или ароматические углеводороды, например бензол, или спирты, например водонерастворимые низшие апканолы, такие как н бутанол, а также смеси указанных растворителей. Экстрактивную этерификацию проводят, прибавляя раствор диазоалкана в выбранном органическом растворителе к водному раствору N -защищенной аминокислоты. Экстрактивную этерификациюЫ ных аминокислот проводят, предпочтительно в присутствии одной ипи нескольких сильных кислот, имеющих рКо меньше, чем рКа N -защищенной аминокислоты, например минеральной кислоты, такой как серная кислота, ортофосфорная кислота. Экстрактивную этер11фикацию в некоторых случаях проводят в присутствии кислот более слабых, чем N -защищенная аминокислота. Так, например, (Пенициллин и i - за- . щишенный цефалоспоринС могут быть селективно подвершуты экстрактной этерифи- кашш в присутствии более слабых кислот феноксиуксусной и уксусной соответственно. Порядок добавления диазоалкана, органического растворителя и кислоты к водной К -защищенной аминокислоте зависит от природы аминокислоты. Водные растворы кислоточувствительных N -защищенных аминокислот можно стабилизировать до начала экстрактивной этерификании, сохраняя рН, при котором разложе ния К -защищенной аминокислоты не происходит, например при . Понижение рН при подкислении раствора после добавления диазоалка.1а и органического растворения дает возможность быстро осушествить эте- рификациюМ-защищенной аминокислоты диа- зоалканом. Количество диазоалкана, требуемое для проведения реакции, находится в пределах 1,О-1,5 моль на эквивалент кислоты. Так, например, при экстракции двухосновной ие- фалоспориновой кислоты используют 2-3 мо диазоалкана, например, около 2,1 моль н 1 моль двухосновной кислоты. Процесс экстрактивной этерификации по предлагаемому способу осуществляют при температуре от -50 до +10О С, предпочтительно при 0-50 С, например при комнат НОЙ температуре. Целевые продукты выделяют известным пособом. Пример. Бисш{фенилметиловый эфир (б 1 , 7 R ) -7-(R -5-бензоиламино-5-карбоксипентанамидо-З-оксиметилцеф-3-ем-4-карбоновой кислоты. К раствору (б R , 7 F )-7-(К -5-амино-5-карбокс шентанамидо)-3-оксиметилцеф- -3-ен-4-карбоксилата калия 709о-ной чистоты (6,0 г, 10 ммоль) в воде (l50 мл) добавляют смесь бензоилхлорида (3,5 г, 30 ммоль) и ацетона (З мл). Смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, причем рН 8,5 поддерживают добавлением фосфата калия. Устанавливают рН 5,0 при помощи ортофосфо})ной кислоты и раствор экстрагируют хлороформом (ЮО мл) для удаления бензойной кислоты и бензоилхлорида. К водному раствору добавляют этилацетат (90 мл), содержащий дифеннлдиазометан (5 г, 26 ммоль). дихлорметан (5О мл) и этанол (Ю мл), и смесь перемешивают в течение 45 мин, в течение которьгх рМ доводят до 2,0 при помощи ортофосфорной кислоты. После отделения слоя растворителя его промывают 5 /о-пым раствором бикаобоната натрия (ЮО дмл) и водой (ЮО мл). Растворитель удаляют в вакууме и смолу растворяют в изопропанол (25 мл) при 30 С. Добавляют 10 мл петролейного эфира (т.кип. 30-40 с) и раствор охлаждают до -5 С. Продукт промывают петролейным эфиром (15 мл) и сушат в вакууме при комнатной температуре. Выход продукта 1О,5 г. П р и м е р 2, Днфенилметил-(38 , 5 F , 6 1 )-2,2-диметил-6-феноксиацетамндопенам-3-карбоксилат-1-)ксид. К раствору (3S , 5 R , 6 R )-2,2-диметил-6- еноксиацетамидопенам-З-карбоксилата калия (7,8 г, 20-ммоль) в воде (ЮО мл) добавляют раствор дифенилдиазометана (4 г, 2О ммоль) в дихлорметане (75 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин при , в течение которых рН доводят до 3,5, добавляя ортофосфорную кислоту. Смесь отделяют и слой растворителя промывают водой (100 мл), раствором бикарбоната натрия (ЮО мл )и водой (ЮО мл). Добавляют надуксусную кислоту (18,5 мл, 37 вес%/об.) к растворителю в течение 15 мин при 1О С с дальнейшим перемешиванием в течение 30 мин. Растворитель промывают водой (ЮО мл), 5°/о-ным раствором бикарбоната натрия (ЮО мл) и опять водой (100 мл), затем удаляют его в вакууме и продукт кристаллизуют из горячегхэ изопропанола (9,1 г). Данные ИК- и ЯМР-спектров подверя дают структуру це- евого соединения. П р и м е р 3. Бнодифенил-метйловый эфир (б R , 71 )3-адегоксиметил-.7(R -5-9ензонлам1 Но 5-карбоксипеатанами до)иоф-3--ем-4-карбоноБой кислоты. К раствору (6 9 , 7 R )-3 ацетоксиме ({ -5-бензоялами«о-.5-карбоксипен- танамицо)-цеф-3-ем-4-карбоновой кислоты (4,8 г, 10 ммояь) в воде (ЮО мл) добаЕ ляюг раствор дифенилдивэометана (4 г, 2О ммоль) в дихпорметане (75 мл), эгилацегат (25 мл) и этанол (Ю мл). Смесь перемешивают в течение ЗО мин при комнат ной температуре и устанавливают рН 2,0
при помоши ортофосфорной кислоты. После отделения растворителя его промывают 5%- ным раствором бикарбоната натрия (100 мл)и водой (ЮО мл). После высушивания растворитель удаляют в вакууме, остаток обра- 29 батывают петролейным эфиром (4О-60 С) и вьшепяют целевой продукт. ,
П р и м е D 4. Бисдифенилметиловый эфир (б R , 7 Н )-R -.5-.карбокси-5-изобу-. тидоксикарбонил (аминопентанамидо)--3-окси- 25 метилцеф-3-ем 4-.карбоновой кислоты.
Иэобутилхлорформат (бО мл, 375 Ммоль) добавляют в течение 1 ч к раствору (б f , 7 R )7-(R .-5-амино-5-карбоксипвнтанами.до-3-оксиметчлцеф-3-ем 4-карбоксилата каЛИЯ (34,4 г 6О ммоль) в войе (35О мл) при рП 7,8-8,0 и 5 С, Смесь перемешивают в течение 5О мин, поддерживая температуру 5 С и рН 7,8-8,0. Раствор экстрагируют хлороформом (25О мл) при рН 5,0 и добавляют к водному раствору раствор дифенилдиазометана ( г, 126 ммоль) в Дихлорметане (250 мл), этилацетат (100 мл) и этаноп (ЗО мл). Смесь перемешивают в течение ЗО мин при 15 С, устанавливают рН 2,0 при помо- ортофосфорной кислоты. После отделения растворитель промывают 5%-ным раствором бикарбоната натрия (2x1 ОО мл) и водой (100 мл). Поспе высушивания растворитель удаляют в вакууме, остаток обрабатывают петролейным эфиром (4О-60 с) и вьгделяют целевой продукт (45,5 г). П р и м е р 5. Дифенилметил (б R 7 Ц )-3-оксиметил-7-(тиен-2-илацетамидо)- -цеф-3-ем-4-карбоксилат,. ; К раствору (6R , 7 Ч)-3-7(тиен-2-илацетамидо -цеф-3-ем-4-.карбоксилата калия (4,0 г, 10 ммоль) в воде (ЮО мл) , добавляют раствор дифенилдиазометана (2,0 г 100 ммоль) в дихлорметане (75 мл) и этаноле (ЮО мл). Смесь перемешивают в т&чение 25 мин, в это время рН доводят до 2,0 при ортофосфорной кислоты. | После отделения растворитель промывают
перемещивают в течение 15 мин, в это время рН доводят до 2,0 при номоши орто- фосфорной кислоты. Смесь затем перемеши-. вают в течение еще 75 мин при комнатной температуре. После отделения растворитель промывают 5%-ным раствором бикарбоната натрия (2x25 мл) и водой{25 мл). После высушивания растворитель удаляют в вакууме, остаток обрабатывают петролейным эфиром (40-60 с) и выделяют целевой продукт (0,38 г).
П р и м е р 7. .Бисдг1фенилметиловый эфир (6R, 7R )-7- Н-5-карбокси-5-(3,5-диэтоксикарбонил-2,6-диме тил-1, дроводой (ЮО мл), раствором бикарбоната натрия () и водой (ЮО мл). После высушивания растворитель удаляют в-вакууме, остаток обрабатывают петро- лейным эфиром ( С) и выделяют целевой продукт (5,15 г). Пример 6. Бисдифенилметиловый эфир {6R., 7R )-3-ацетоксиметил-7-(4-.карбокрибутанамидо)-цеф.-3-ем-4...карбоновой кислоты К шламу (б R , 7 R )-3- цетоксиметил-7-(4-карбоксибутанамидо)-цеф-3 ем-4-кар боновой кислоты (о,24 г, 0,575 ммоль) добавляют дифенилдиазометан ( 0,3 г 1,5 ммоль) в оизслорметане. (15 мл/. Смесь пиридин-1-и; пентанамидс -3-оксиметилцеф-3-ем-4-карбоновой кислоты. К раствору (6R , 7R )7-(R-5-амино-5-карбоксипентанамидэ)- 3 -эксиметилцеф - -3-ем-4-карбоксишата калия 7О%-ной чистоты (12 г, 249 ммоль) добавляют 37%-ный раствор формальдегида (18,7 мл, 249 ммоль и этилацетат (25,2 мл, 199 ммоль) отдельно в течение 1 ч при 5 С.рН раствора поддерживают 7,0 доба&ляя 25%-ный раствор фосфата калия. После перемешивания в течение 30 мин, раствор экстрагируют дихлорметаном (20О мл). Дихлорметан (15О мл) содержащий дифе- нилдиазометан (Ю г, 52 ммоль) добавляют к водному раствору и смесь перемешивают течение 4 5 мин, в это время рН доводят до 2,О ортофосфорной кислотой. После отделения слой растворителя промывают водой (2ОО мл), 5%-нь1м раствором бикарбоната натрия (2ОО мл) и водой (200 мл). После высушивания над сульфатом магния раствор концентрируют ввакууме до объема, равного 75 мл, с получением раствора целевого соедшшния. П р и м е р Ь. ьисдифенилметиловый эфир (61, 7/)-7- --5-карбокси-5-(2,2,2- . -/грйхлортоксикарбониламинэ)-пентанамидо - -З-карбамоилоксиметил-7-метоксидеф-ЗeM-4-карбоновой кислоты. 2,2,2-Трихлорэ.тилхлорформаг (З мп) добапляют в течение 1 ч к перемешиваемому раствору моноаммоний{ой соли (бН , 7S .7- R -5-амино-5-кapбoкc meнтaнaмиao)-2 кapбaмoилoкcн eтнл-7-метоксицеф-3-etv --4 карбоновой кислоты (4 г в 80 мл воды содержащей бикарбонат натрия (б г) при 10 С, рН поддерживают 7,8-8, добавляя, едкий натр. Смесь перемешивают при и рН 7,8-8 в течение 90 мин, рН доводят до 5 при помощи ортофосфортюй кислоты и раствор промывают хлороформом (2x1 ОО м к водной фазе добавляют этилацетат (50 5л этанол (Ю мл) и раствор дифепилдиазоме- тана в мотиленхлориде (5О мл, примертю 0,2 ммоль). Смесь перемешивают при 1 в течение ЗО мин, в это время рИ доводят до 2 ортофосфорной кислотой. После отделе ния органический слой пpo rывnют 5 -о-ным водным раствором бикарбоната натрия (2х8О мл) и водой (ЮО мл), сушат (NajSO )и выпаривают .с получением СМОЛЬ (2,8 г). Очищают при помощи хроматографии на колонке (силикагель; хлороформ и этилацетат) с последуютдей тонкоспойной хроматографией (силикагель; хлороформ и метанол) и получают целевой продукт в виде белой пены (410 мг). Данные , ЯМР-, УФ-сггехтров микроанализов подтвердили, что структура полученного соедит1ения соответствует структуре целевого соединения. П ри N е р 9. Бисдифенилметиловый эфир (6R , 71 )-7- 1 -5-окси-5-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламинО пентанамидо{-3-оксиметнлцеф-3-ем-4-карбоноБой кислоты. 2,2,2-Тр1гхлорэтилхлороформат (S мл, 37 ммоль) добавляют к раствору (б{ , 71 -7-(ц -5-амино-5 карбоксипентанамидо/- 3-оксиметилцеф-3-ен-4-карбоксйлата калия(20 ммоль) в воде (ЮО мл), рН раст вора поддерживают 7,5-8,0 в течение 30 мин. используя 10%-,ный раствор гидро- оксида натрия. Г-аствор затем экстрагирую дихлорметаном (ЗО мл) при рН 5,0., раствор дифенилазометана (8,5 г 44 ммоль/ в днхлорметане (150 мл) добавляют в вогь ной фазе и рН доводят до 3,5 используя серную кислоту. После отделения растворитель промывают водой (Зх150 мл) Растворитель удаляют в вакууме и выделяю целевой продукт (20,5 г). Данные ИК- и ЯМР спекгров подтвердили, что структура полученного соединения соответствует структуре цепевого П р и м е р 10, Биснафтилфеннлмепшов эфир (6R , 7Щ )-7- Ц-5-окси 5 (2,2,2- -тр1гхлорэтоксикарбопиламино)-пентанамидсЯ -3-оксиметнлцеф 3-ем-4-.карбоновой кислог Процесс проБОДят по примеру 9, за исключением того, что вместо раствора дифенил- диазометана в днхлорметпне используют раствор нaфтилфeниnдIШзo eтaнa (примерно 44 мьлоль) в Д1гхлорметяне (150 мл). Выход целевого продукта 23,3 г. П р и м е р 11. Бис-( п-метоксифенило-февилмет-иловый эфир (6R , 7Ц )-7- R-5-карбокси-5- (2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)- пентапамняо -3-оксиметилцеф-3 ем-4-картбоновой кис.чоты. Процесс проводят по npHNsepy 9 зп исключением того, что вместо раствора дифеиил- диазометана в днхлорметане используют раствор гг -метокспфенил -(фенилдиазометана) (примерно 44 ммоль в штхлорметане (l5O мл). Выход целевого продукта 6,4 г. При м е р 12. Дяфент лметил (бГ , 7R)-3-ацетоксик етил-7-(тиен-2-илацетамидо)- пеф-З-ем-4-карбоксилат. К раствору (GR , 7R )-3-ацетоксиметил-7-(тиен-2-илацетамидо)-цеф-3-ем-4-кар- боксилата натртш (4,2 г, 10 мкюль) в воде (50 мл) добавляют дихлорметан (ЗО мл), содержащий дифенилдиазометан (2,1 г, 11 ммоль) рМ раствора доводят до 3,0 в течение 15 MiiH, используя Ю о-ный раствор серной кислоты. Смесь разделяют и органическую фазу .вaют водой (4 х 50 кш). Р астворитель удаляют в . Выход целевого продукта 6,96 г. При м е р 13. Бисдифонил тетиловый эфир N -(2,2,2.-трнхлорэтоксикарбонил - .. -глутаминовой киспоты. 2,2,2-Трихлорэтилхлорформат (5,5 мл, 40 ммоль) и добавляют к растворуБЬ -глу- таминовой кислоты (3,38 г, 20 ммоль) в воде (ЮО мл), рН раствора поддерживают 7,5-8,0 в течение 30 мин, испопьзуя 1О9о-иын 1 аствор гидроокиси натрия. Раствор экстрагируют диxлop eтaнoм (2 х ЮО мл) при рН, равном 5,0. Раствор дифенилдиазо- метана (85 г, 44 ммопь) в диxлop eтaнe (140 мл) добавляют к водной фазе и pil доводят до величины, равной 2,0, используя 109с -15ый.раствор серной кислоть, в течение 15 ЛП1, После отделения растворитель промывают водой (3x150 мл), Растворитель удаляют в . Выход продукта 14,3 г. П р и м е р 14. М -Бензилоксикарбонилглицинбисднфенилметиловый эфир. Раствор дифенилдиазометана (2,1 г, 11 ммоль) в дихлорметане (32 мл) добавляют к раствору N бензилоксикарбонилглици- на (2,1 г, 1О г-лмоль) в воде (50 мл), рН доводят до 3,5 используя Ю/о-ную серную ккслоту в течение 15 мин. После огделення растворитель промывают водой (3,К5О ,ч;л), затем удаляют в вакууме. Про
