Способ получения маннана Советский патент 1977 года по МПК C12D13/04 

Полученный илокулум вносит в ферментационные колбы в количестве 10 мл п выращивают нри тех же температуре и режиме неремешивания.

Полученную в результате ферментации культуральную жидкость отделяют от клеток суперцентрифугированнем при 28-29 тыс. об/мин. Натнвный раствор, имеющий рН 1,95, нодщелачивают до рН 6,7 добавлением 6 н. раствора КаОН (около 5 мл 6 н. раствора NaOH на 1 л нативного раствора) и концентрируют в 8-10 раз но объему вынариванием иод вакуумом нри 38-40°С. Упаренный раствор подкисляют соляной кислотой до рН 4,8- 5,0 и добавляют 1 л этилового снирта к 1 л раствора полисахарида. Получают осадок маннана-сырца, который отделяют от водноспиртового маточника, промывают этиловым спиртом и пспользуют для получения чистого маннана.

Маннан-еырец содержит не менее 70% углеводного компонента, в котором не менее 60% приходитея на маннан и примерно 10% на углеводные примеси (глюкоза и галактоза).

Очищенный маннан из маннана-сырца получают следующим образом. 2 г маннана-сырда растворяют в 100 мл дистиллированной воды, раетвор центрифугируют при 6000- 7000 об/мин. К центрифугату добавляют 12,5 мл реактива Фелинга. Выпавщий осадок медно-маннапового комплекса отделяют от маточника на воронке Бюхнера, промывают 2%ным водным раствором КОП, а затем этанолом. Промытый осадок переносят в стакан, добавляют 80 мл дистиллированной воды, 6,25 г катиопита КУ-2-8 (П+) и перемещивают в течение 30 мин. Деионизированный раствор мапнана отфильтровывают от катионита КУ-2-8 (Си++) на воронке Бюхнера.

Последний промывают 80 мл дистиллированной воды, промывные воды присоединяют к основному раствору, производят корректировку

р11, доаодя еги значение до 1,8 5,0 растворо.м КаОП, и осаждают двумя объемами этилового спирта. Осадок чистого маннана промывают этиловым спиртом п сущат в вакууме. Выход очитцеппого маннана составляет около 55% но отнопгению к маннану-еырцу.

Выход маннана составляет 1,1

г/л.

Чистого нрепарата:

содержание маннозы не менее

зольность более 0,4%;

удельное вращение „83° (0,25%, НгО)

температура разложения 260°С

содержание меди не более 0,003%

рН водных растворов 6,5-7,0.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получить активный препарат со стабильными параметрами, пригодный для использования в качестве биологичееки активного вещества.

Формула изобретения

Способ получения маннана путем культивирования дрожжей рода Rhodotorula, отделения культуральной жидкости от биомассы, осаждения маннана-сырца из нативного раствора с последующим выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повыщения активности препарата, нативный раствор подщелачивают до рП 6,5-7,0, упаривают в вакуудге в 8-10 раз, затем осаждают манная-сырец равным объемом этанола при рП 4,8-5,0 и осадок обрабатывают реактивом Фелинга, полученный осадок деионизируют катионитом и осаждают этанолом при рН 4,8-5,0.

Псточники информации, 40принятые во внимание при экспертизе

1. Canadian Journal Chemistry, 1965, 43, 950-954.