(54)ШТАММ BocJEPuS &ubliP s
С -19-ПРОДУЦЕНТ Ц -ЛиЕТИЛГЛЮКОЗАМИНИДАЗЫ
На поверхности мясо-пептонного бульона после 18-24-часовой инкубации в термостате образуется толстая сморщивающаяся бело-желтоватая пленка, сам бульон остается прозрачным.
Оптимальная температура роста 3537 С при рН 6,2-6,6, Дыхание строго аэробное, Гидролизует крахмал, разжижает желатину, пептонизирует молоко с образованием, сгустка.
Усваивает глюкозу, сахарозу и фруктозу. Не усваивает лактозу, мальтозу, ксилозу, арабинозу, рамнозу, сорбит, маннит, дульцит н инозит. Нитраты восстанавливаются до нитритов. Растет в среде с цитратами. На среде Кларка Образуется ацетилметилкарбинол. Индола и сероводорода не образует. Гемолитическими, плазмокоагулирующими и фибринолитическими свойствами не обладает.
Для выращивания нового штамма Вас. &иЬ1Н б4 19 служит специальная среда, содержащая источники органического углерода, азота и минеральные соли Стерильную питающую среду в котбах засевают штаммом Вас.subtt 1 9 Q -19 и инкубируют в термостате при на круговой качалке (180 об/мин), а также на бродильных установках типа Биолофит.
На 16-24 ч роста в культуральной жидкости определяют Я -ацетилглюкозаминидазную активность вискозиметрическим методом.
За единицу активности принимают такое количество фермента, которое снижает вязкость культуральной жидкости Вас. эй Ы I s (используемой для получения препарата Амилосубтилина с вязкостью 9600-10100) мП на 100 мП за 1 мин при 40°С.
В табл. 1 приведены данные об активности фермента Ч -ацетилглюкозаминидазы.
Штамм Вас. 3ubl4 45Q-19 обладает способностью синтезировать кроме эндо-N -ацетилглюкозаминидазы и экзо-N-ацетилглюкозаминидазу, активность которой определяют по синтетическому
субстрату п -нитрофеннл-N -ацетил-/3-глюкозаминиду.
В табл. 2 приведены данные сравнительного анализа предложенного штамма и прототипа.
При использовании штаммаВас. Q- -19 получают комплексные препараты N -ацетилглюкозаминидазы с повышенной -активностью и различной степенью очистки.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Штамм @ @ | 1977 |
|
SU677504A1 |
| Способ получения ферментного препарата N-ацетил-глюкозаминидазы | 1976 |
|
SU622282A1 |
| Штамм -78-продуцент -маннаназы | 1978 |
|
SU740830A1 |
| Штамм @ @ @ -38 продуцент экзо- @ - @ -ацетилглюкозаминидазы | 1982 |
|
SU1060678A1 |
| Штамм -43-продуцент -амилазы | 1975 |
|
SU538024A1 |
| ШТАММ ИНМИ АРМ 647 BACILLUS THURJNGIENSIS VAR. THURINGIENSIS (BERLINER) | 1970 |
|
SU268796A1 |
| Штамм всти-301-продуцент нуклеотидов | 1977 |
|
SU726161A1 |
| Штамм 163-продуцент амилосубтилина и протосубтилина | 1977 |
|
SU737442A1 |
| Штамм @ @ -65-продуцент @ -амилазы | 1981 |
|
SU1089118A1 |
| Штамм 310-продуцент щелочной протеазы | 1977 |
|
SU659615A1 |
Предложенный штамм
Экзо-N - ацетилглюкозаминидазная активность по синтетическому субстрату п -нитрофенил- J -ацетил- /3 -глюкозамнниду 6,67 мед/мл
Эндо- N - ацетилглюкозаминидазная активность (вискозиметрический метод) 15,2 ед/мл
Наибольшая часть ферментов адсорбирована на клетках бактерий
Таблица 2
Результаты
Прототип
сопоставительного
анализа
Выше почти в 2 раза
Bac.aubli Bis Q- 19 обладает более богатым спектром биосинтеза ферментов N -ацетилглюкозаминидазы
Облегчаются технологические операции при выделении ферментов из культуральной жидкости Bac.aubtt Q - 19 Формула изобретения Штам BaciBRus виЫд Ris С, -19-продуцент W -ацетилглюкозаминидазы. Хранит ся в коллекции лаборатории чистых ми робных культур Всесоюзного научно-ис следовательского института прикладной энзимологии. Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размерами (l, 7-3 , (0 , 5-0, б) мкм. Палочки располагаются цепочками. Палочки подвижные с помощью перетриховых ресниц-жгутиков, гра положительные, окрашены разбавленным основным фуксином, причем протоплазма окрашивается однообразно, темных форм нет. Культура образует споры размером (1,0-1, 5) (О , 7-0 , 9) мкм, форма спор эллипсоидальная, реже цилиндрическая. Прорастают споры экваториально путем разрыва мембраны вдоль экватора. Кулыуральные признаки. На мясопептонном агаре после 24-часовой инкубации в термостате культура образует колонии диаметром 2-6 мм. Колонии сероватые, желтоватые, непрозрачные, иногда края гладкие,, складчатые в центральной части поверхности. Иногда культура твердо врастает в агар. Культура на ломтиках картофеля по ле 48 ч роста образует пленку беложелтоватого цвета. Пленка сморщена и окружена выступами, быстро образует субконечные споры, иногда центральные не деформирующиеся. Пленка сухая в начале роста, становится далее вязкой. На поверхности мясо-пептонного бульона культура образует толстую сморщивающуюся пленку бело-желтоватого цвета, гри этом мясо-пептонный бульон остается прозрачным. Физиологические признаки. Оптимальная температура роста 35-37 с при рН 6,2-6,6. Дыхание строго аэробное. Усваивает глюкозу, сахарозу и фруктозу с образованием кислоты без выделения газа. Не усваивает лактозу, мальтозу, ксилозу, арабинозу, рамнозу, сорбит, маннит, дульцит и инозит. Гидролизует крахмал, разжижает желатину, пептонизирует молоко с образованием сгустка. Растет в среде с цитратами. Нитраты восстанавливают до нитритов. На среде Кларка образует ацетилметилкарбинол. Индола и сероводорода не образует. Гемолитическими, плазмокоагулирующими и фибринолитическими свойствами не обладает. Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках, лишенных кислорода, с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1 .J.M..R.c.w. B ochem Jouhnae.134, 271-281, 1973.
