Штамм -78-продуцент -маннаназы Советский патент 1980 года по МПК C12K3/00 C12D13/10 

НИИ на среде с глюкозой или на картофельной среде отличаются большой вариабельностью в отношении размеров как правило соединены в цепочки. Клетки окрашиваются разбавленным основным фуксином, протоплазма окрашивается однообразно. Грамм-полсякительные палочки без капсул, подвижные с помощью перитриховых жгутиков. Культура образует споры размером: 1,2-1,6x0,8-0,9 мкм, форма спор элипсоидальная, споры расположены эксцентрально, прорастают экваториально путем разрыва мембраны вдоль экватора.

Культуральные признаки. Культура на мясо-пептоннсм агаре после суточной инкубации в термостате при 37°С образует колонии диаметром в 4-7 мм. Колонии серовато-белого цвета, радиально-морсаинистые, с верхушкой белого цвета, непрозрачные, матовые, края ровные. Колонии легко снимаются петлей. Культура на ломтиках картофеля образует равнс 1ерную пленку серовато-желтого цвета с морщинистыми складками, пленка сухая, окружена выступами. На поверхности мясо-пептоного бульона культура образует тонкую пленку желтовато-белого цвета, бульон остается прозрачным. Физиологические признаки. Оптимальная .температура роста 37°С при рН 6,5-6,7. Дыхание аэробного типа.

Усваивает фруктозу, сахарозу, глюкозу и арабинозу, с образованием кислоты без выделения газа. Не усваивает лактозу, мальтозу, рамнозу, сорбит, маннит, инозит и дульцит.

На среде Кларка образует ацетилметилкарбонил, нитраты восстанавливают до нитритов. Желатину разжижает .крахмал гидролизует, метиленовое молоко обесцвечивает.

Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках Ру, лишенных кислсч ода, с дополнительной пробкой, смоченной пирагаплолс 4 и гидроокисью калия, а также в лиофилизированном виде.

Пример. Для выращивания штамма Bacillus subtilis G-78 готовят питательную среду следующего состава,: крахмал 6,5; кукурузный экстракт 2,7; сухие пивные дрожжи 0,12; (NH )2 НРО4 0,5; K2.SO40,33; MgSO 7Н20 0,016; MnSO 0,1; CaCl 0,013; вода - остальное.

Стерильную питательную среду в колбах засеивают штаммом Bacillus siobtilis G-78, инкубируют в термостате при на круговой качалке (180 об/мин), а также на бродильных установках типа Биолафит .

На 20-24 ч роста культуральной жидкости определяют -маннаназную активность вискозиметрическим методом. За условную единицу активности принимают такое количество фермента, которое уменьшает относительную вязкость гапактоманнана {полигалактоманнан из семян Ceratonisa Siligua, фирма Сигма, США) на одну миллиединицу за 1 мин при 40с.

В табл.1 приведены средние данные ферментативной активности эндо- -маннаназы штамма Bacillus subtilis G-78.

Таблица 1

Штамм Bacillus subtilisG-78 обладает способностью синтезировать кроме эндо- -маннаназы и экзо- -маннаназу, активность которой определяют по методу Сомоджи.

В табл.2 приведены сравнительные данные предлагаемого штамма и прототипа.

Таблица 2

Не синтезирует эндо- -маннаназы

Эндо- -маннаназная

активность по методу Сомоджи 1,1 ед/мг РОСТ культуры и биосинтез фермента - Э -маннаназы происходит за 45 часов

Вас.subtilis G-78 обладает более богатым спект ром синтеза ферментов Р -маннаназы Эгзо- -маннаназная ак тивность выше почти в 3 раза.

Применение штамма Вас. subtilis G-78 уменьшает расход энергоресурсов в 2 раза. Штамм Вас. subtilis G-78 будет применяться в микробиологической промышленности для получения фермен ного препарата -маннанаэы.Применение очищенного препарата р-манн назы в винодельческой промышенности страны в качестве стабилизатора столовых и крепленных вин дает возможность получить экономический эффект около 2 млн.руб в год. Формула изобретения Штамм Bacillus subtilis G-78-про дуцент р -маннаназы. хранится в кол лекции лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-исследов тельского института прикладной .энзи мологии. Регистрационный номер ИПЭ-77. Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размером 1,8-3, хО,5-0,8 мкм, в основном одиночные. При выращивании на среде с глюкозой или на картофельнсЛ среде отличаются большой вариабельность в отноиении размеров, как правило соединены в цепочки. Клетки окрашиваются основным фуксином, протоплаз ма окрашивается однообразно, граммположительные, подвижные с псилоцью перитриховых жгутиков, без капсул. Культура образует споры размером 1,2-1,6x0,8-0,9 мкм, форма спор элипсоидальная, споры расположены« эксцентрично, прорастают экваториально путем разрыва мембраны вдоль экватора. Культуральные признаки. Культура на мясо-пептонном агаре после суточной инкубации в термостате П1ж обр зует колонии диаметром в 4-7 мм. Колонии серовато-белого цвета, радиально-морсцинистые, с верхушкой белого цвета, непрозрачные, матовые, края ровные. Колонии легко снимаются петлей. Культура на ломтиках картофеля образует равномерную пленку серовато-желтого цвета с морщинистыми складками, пленка сухая, окружена выступами. На поверхности мясо-пептонного бульона культура образует ТОНКУЮ пленку желтовато-белого цвета, бульон остается прозрачным. Физиологические признаки. Оптима:1Ьная температура роста . при рЯ 6,5-6,7. Дыхание аэробного типа. Усва нвает фруктозу, сахарозу, глюкозу, и арабинозу с образованием кислоты без вьщеления газа. Не усваивает лактозу, мальтозу, рамнозу, сорбит, маннит, инозит и дульцит. На среде Кларка о азует ацетилметнлкар нол, нитраты восстанавливает до нитрилов, не растет на среде с цитратами.Молоко пептинизирует и свертывает, желатину разжижает, крахмал гидропизует, метиленовое молоко обесцвечивает. Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках IV t лишенных кислсфода, с до-, полнвтельной пробкой, смоченной пирога 1лопом и гидроокисью кгш0я,а также в л оф1шизированнс 4 внде. Источники инфо{: ации, принятые во внимание при экспертизе , i.Кузнецов А«А и Степаненко Б.Н. Глюкоманнанаэа из Aspergillus avamori. П{жкладная биохимия и микробиология, 1971, т. VII,.вып.6, с.651-658, 2.S.Ebi, J.Pukumoto, T.Jamomoto, Agr. Biol, Chem, 1972, c.366, 9911001 (прототип).