Холерный бактериофаг 7106 для проготовления диагностических препаратов Советский патент 1978 года по МПК C12K7/00 

(54) ХОЛЕРНЫЙ БАКТЕРИОФАГ 7106 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

lO. Продуцентами бактериофага являются специально подобранные нелизогенные штаммы виб;рионов Эль Тор. Оптимальная множественность инфекции 0,05-0,5. Продолжительность одиночного цикла развития 24 мин. Урожай 60 корпускул на одуу микробную клетку. ..

.Специфичность. Строго специфичен. Не лизирует микробов других видов.

Диапазон -литической активности в пределах гомологичного вида микробов. Бактериофаг обладает широким диапазоно -«итического действия навибрионы Эль тер. По диапазону литической активности превосходит известный бактериофаг В.

Полезность изобретений заключается в том, что с помощью бактериофага 710 осуществляется приготовление -новых фаговых препаратов для диагностики и идентификации возбудителя современной холеры Эль Тор.

П |з и м ер 1. Для приготовления диагностического холерного фага- используют фаг 7106 в виде монофага. Дл этого фаг 7106 в количестве 4 мл вносят во флакон с 200 мл бульона Мартена (рН 7,6) и одновременно добавляют 2 мл 3-часовой бульонной культуры хо, лерных вибрионов биотипа Эль Тор штам 75 М. Через 3 час инкубации при 37°С содержимое флакона фильтруют через .фильтр Зейтца с асбестовой стерилизующей пластиной -для освобожд.ения от мик робных клеток. Приготовленный препарат фага 7106 (фильтрат) проверяют на специфическую и неспецифическую стерильность и активностьизвестными методами. Определяют титр фага методом агаровых слоев по Грациа. Для этого в растопленный, остуженный до 45С и разлитый по пробиркам полужидкий агар вносят 0,2 мл 3-часовой бульо.1ной културы чувствительного Штамма холер ных вибрионов. В эту смесь вносят 1 мл фа в разведениях 10 и 109. Содержимое пробирки перемешивают и выливают на поверхность 1,5 агара в чашке Петри. После застывания агара чашки пемещают в термостат при и через 1218 час учитывают количество негативных колоний фага. Титр диагностического фага должен быть не ниЗке п-Ю.

Полученный таким способом диагностический фаг 7106 используют для быстрого определения холерных вибрионов . Холерный диагностический фаг используют неразведенный. Для этого пастеровской пипеткой или платиновой петлей (диаметром 5 мм) наносят каплю цельного фага 7106 на газон, приготовленный двухслойным методом йз 3-часовой культуры испытуемого подозрительного на холерные вибрионы шталма. Через 6-12 час инкубации при 37°С пройэ

водят учет результатов по следующей схема:

++++ - полный лизис культуры на месте нанесения фага;

+++ - хорошо выраженный лизис и слабый вторичный рост;

++ - отчетливый лизис с более обильным вторичным ростом или единичные негЬтивные колонии;

+ - слабые следы лизиса и обильный вторичный рост на месте нанесения фаг - - .следов лизиса культуры нет.

Положитель.ным считается лизис культуры на ++++,+++ и ++. Исследуемая культура не может быть признана холерной при результатах оцениваемых на + и -. Использование диагностического мнофага 7106 для определения вида 480 штаммов вибрионов Эль Тор, выделенных в различных очагах холеры, позволило быстро в течение 6-12 час определить принадлежность к холерным вибрионам 4 штаммов из 480 исследованных (98,7%). Использование применяющегося для этой цели фага Эль Тор позволило правильно диагносцировать только 415 штаммов (86,4%) .

П р и м е р 2. Способ использовани фага 7106.для получения антифаговой сыворотки.

Приготовление антигена-фага для иммунизации животных производится следующим образом: фаг 7106 в количестве 4 мл вносят во флакон с 200 мл бульона Мартена (рН 7,6) и одновременно добавляют 2 мл 3-часовой бульонн й культуры холерных вибрионов Эль Тор штамм 75 М. Через 3 час инкубации при 37°С содержимое флакона фильтруют через фильтр Зейтца с асбестовой стерилизующей пластиной для освобождения от микробных клеток. Приготовленный фаг 7106 (фильтрат) проверяют на специфическую и неспецифическую стерильность известными методами и определяют его титр. В качестве антигена используют фаг с титром ПЮ.

Для иммунизации используют взрослых кроликов весом 2,5-3 кг. Фаг вводят стерильно шприцем в краевую вену уха кролика. Иммунизацию кроликов производят тремя циклами по четыре . инъекции фага в каждом цикле. Фаг 710 вводят в следующем количестве:

1инъекция 2 мл Фага

2инъекция 4 мл фага

3инъекция 6 мл фага

4инъекдия 8 мл фага.

Интервал между инъекциями 4-5 дней между циклами 10-14 дней.Через 14 дней посл.е последней инъекции фага в третьем цикле производят тотальное обескровливание кролика путем взятия стерильно (шприцем) крови из серца. После отстаивания и свертывания форменных элементов крови при помощи .стерильной пипетки отсасывают сыворот