Способ получения пиримидиновых блоков Советский патент 1978 года по МПК C07H21/02 

Изобретение относится к способу па лучения пиримидиновых блоков, оканчивающихся с З-конца адениловой или гуаниловой кислотой, которые могут на ти применение в фармакологии и биохимни. Известны способы специфического расщепления полирибонуклеотидов рибонуклеазами (гуанил-РНКг.за и пирими- дил-РНКаза) с предшествующей блокиров кой определенныхзвеньев полирибонуклеотидов химическими модификаторами таким образом, чтобы специфические и неспецифические РНКазы не могли расщеплять связи между этими звен-ьями, вследствие чего приобретали новую спе цифичность. К таким способам относится расщепление полирибонуклеотида пи римидил-РНКазОй по цитидиновым звеньям после модификации уридиновых остат ков водорастворимым карбодиимидом. Из вестно также, что гуаниловые звенья пос.пе их модификации кетоксалем становятся устойчивыми к действию неспецифической РПКазы т. Целью изобретения является способ, позволяющий получать пиримидиновь е блоки, оканчивающиеся сЗ-конца/ аденилОЕОй или гуаниловой кислотой, путе избирательного расщепления полирибонуклеотидов по пуриновым звеньям рибонуклеазой Tjj.. Предлагаемый способ заключается в TOMf. что полирибонуклеотид предварительно обрабатывают смесью метоксигшина и метабисульфита натрия при рН 7,0±0,1 и температуре 37-40 с, а подвергают расщеплению рибонуклеазой Tj. Способ основан на устойчивости фосфодиэфирных связей между 5,6-дигидро6-сульфо-N -метоксицитидиловой и 5,6- дигидро-6-сульфо-уридиловой кислотами, полученными в результате обработки полирибонуклеотида смесью метоксиамина и метабисульфита-натрия, и соседними с ними с 3 -конца нуклеотидами к расщеплению под действием рибонуклеазы Tj. В результате происходит расщепление лишь по пуриновым остаткам полирибонуклеотида. Полученный пиримидиновый блок может быть использован для синтеза фармакологических препаратов направленногчэ действия, для синтеза полинуклеотидов заданной структуры, при анализе первичной структуры нуклеиновых кислот, как биохимический реактив. Приме р 5. 0,5 мг РНК из рибосом выдерживают при в течение 4 час с.О,О5 мл раствора, содержащего (г/л) 125 метоксиамина и 380 метабисульфита натрия при рН 7,0±0,1. По окончании реакции инкубационную смесь разбавляют водой до 2,5 мл, добавляют 0,002 мл раствора рибонуклеазы Тд, содержащего не менее 500 единиц активности в 1 мл, и доводят до рН 5 ацетатом натрия. Раствор выдерживают 2 час при , изменяют рН до 8 бикарбонатом аммония, добавляют 0,02 мл раствора фосфомоноэстеразы (0,6 г/л) и выдерживают еще 2 час при . Полученный образец упаривают и наносят на пластинку 16 х 16 см, покрытую тонким слоем целлюлозы (3,5 г). Пластинку помещают в герметичный резервуар, на дно которого наливают 100 мл раствора нормального бутанола насыщенного водой. Восходящую хроматографию .в этой системе проводят при комнатной температуре в течение 3-5час пока граница поднимающегося раствора rte достигнет верхнего края пластинки. При такой хроматографии устойчивый к действию нуклеазы материал остается на месте нанесения, а неустойчивый движется в данной хроматографической дистеме. После расщепления материал можно разделить по длине цепи или по составу известным методом хроматографии на колонке, наколненной ДЭАЭ-Сефадексом . с использованием раствора, содержащего мочевину (420 г/л). После такого разделения собранные продукты обессоливают пропусканием через .колонку со смолой биогель или через колонку с ДЭАЭ целлюлозой. Формула изобретения Способ получения пиримидиновык блоков, состоящих из цитидиловой и уридиновой кислот и оканчивающихся с З-конца адениловой или гуаниловой кислотой, отличающийся тем, что полирибонуклеотид предварительно обрабатывают смесью метоксиамина и, метабисульфита натрия при рН 7,0+0,1 и температуре 37-40с, а затем подвергают расщеплению рибонуклеазой Tjj