(ствр,ил,изова«1ньгй); биотин 50 .иг/л; тиамин . Н€1 200 (рН 7,0).
Каждьгми 0,1 мл взвеси «летсж засевают 3 мл среды В, содержащей определенное йчоличество а-а1м«нолаур иллад та ма (АЛЛ), у-метиллйзина (МЛ) или N -Kap6o6eH30:Kсил.изина (КБЛ), л микроорганизмы выращивают iB цробирке на 10 мл три 30° С 20 час прИ периодическом взбалтывании.
В npOiUecce вы1ращиваНия рост взвеси определяют измерением оптической плотности .в 562 мм 1бульоиа «ультуры, .разбавленной I : 26. В табл. 1 приведены полученные результаты.
Таблица 1
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ЛИЗИНА | 1974 |
|
SU440848A1 |
Способ получения -лизина | 1973 |
|
SU526295A3 |
Способ получения L-аланина | 1988 |
|
SU1719433A1 |
Способ получения -гомосерина | 1978 |
|
SU840107A1 |
ШТАММ БАКТЕРИЙ BREVIBACTERIUM FLAVUM - ПРОДУЦЕНТ L-ГЛУТАМИНА (ВАРИАНТЫ) | 1994 |
|
RU2084520C1 |
ШТАММ БАКТЕРИЙ BREVIBACTERIUM SP. - ПРОДУЦЕНТ ЛИЗИНА | 1991 |
|
RU2027761C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ЛИЗИНА ПОСРЕДСТВОМ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ШТАММА БАКТЕРИЙ | 1992 |
|
RU2099424C1 |
Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм LастоFеRмеNтUм-продуцент лизина | 1990 |
|
SU1788011A1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ЛИЗИНА | 1971 |
|
SU298132A1 |
Способ получения -лизина | 1974 |
|
SU759056A3 |
АТСС 13869 является исходным штаммом для А1 3985, AI 3986, А1 3987. AI 3988, А1 3989 и AI 3990.
А 3989 и А 3990 выращиваются в среде В, содержащей, кроме того, 500 мг/мл Ь-алаппаа к 5 мг/м.1 иикотииамида.
АТСС 15806 является исходным штаммом для AI 3991, AI 3983 к А1 3984.
А1 3445 (АЕС) является мутантом, производящем Ь-1Л|ИЗИ1Н, вида лактофермент Brevibacterium, .который не обладает стойа остью 1ПО Отношению к |КБЛ, МЛ или АЛ
Полученные мутанты м.огут производить большое (Количество L-лизина в среде даже и то,м случае, когда обладают только теми характеристиками .стойкости « АЛЛ, .ИЛ ;: КБЛ, Которые приведены выще; Боди они имеют дополлительную стойкость по отн;;шению к 5-(2-аминоэтил) - L - цистеину (АЕС) ИЛИ (Потреблению аланина, то производствО L-лизииа значительно -возрастает.
В качестве источника углерода могут быть использованы карбогидраты: глюкоза сахароза, меласса или гидролизат крахмала; органические кислоты: уксусная, пропионова1Я или бензойная; спирты; этанол, пропанол; а для некоторых штаммов - углс вадородЬ.
В Качестве Источника азота можно использовать -аммиак, сульфат аммония, нират аммолия, фосфат аммония, мочевину т. д.
в качестве ростовых веществ можно использовать гидролизат сое-вых бобов, лшеничный ,нтр|Ир|Ованны:й .раствор, э«стpaiKT дрожжей «ли яептоя. Выращивание осуществляют в аэробных условиях при 24-37° С в течение 2-7 дней при рН 5-9, поддерживаемам добавлением щелочи, кислоты, карбоната кальция или газооб;разного аМмиа,ка. L-лизи.н отделяют от Сре,ды с помощью иоНОобмениых смол или кристаллизацией. Пример 1. 20 мл среды выращивания культуры, соста,в которой приведен даиже, помещают в колбу емкостью 500 мл, которую 1пер,иодически взбалтывают и нагревают до :110° С 5 мин. Состав среды, г/дл: глюкоза 10; сульфат аммония 5; КН2РО4 0,1; MgSO4 7Н2Ь 0,04; FeSO4-7H20 1,0 мг/дл; MnSO4 4Н2О 1,0 мг/дл; биотин 5,0 мг/дл; тиамин НС1 20,0 жа/фг; гидролязат Соавых -бобов 1,5 мг/дл (о;бщее содержащие азота 7%); карбо.нат кальция (стерилизоваиный) 5% (рН 7,0). Каждый ви|д микроорганизмов, приведенных в табл. 2, прививают .на среду для выращивания культуры я температуру .среды .поддерживают на уровне ЗГС 72 час, при этом лериодичеоки 1ВЗбалтывают. Таблица 2 Количество накопившегося L-лизина, Микроорганизм
2,0 1.5
27
28
37
36
18
После защершбния процесса выращиван.ия определяют общее содержание L-лизи.на в (Получаняом таким образом медиуме (в табл. 2 это количество пр.иведено в виде гидрохлор.ида L-лиз.и.на).
Пример 2. Corynebacterium acetoglutamicum AI 3983, AI 3984, AI 3991 или ATCC 21491 (AEC) выращивают, как в примере 1. В соответствующей среде для выращивания культуры обнаруживают произведенный L-лизин в количестве 25, 24, 3,0 и 15 г/л, соответственно.
.Пример 3. МикрооргакиЗМы, которые Приведены iB табл. 3, выращи1вают аэробно в 50 мл орады, содержащей вытяжку из семян, При 31° С 18 час.
Таблица 3
Количество
накопившегося L-лизииа,
.Микроорганизм г/л
94 41
Таблица 4
35
Порции объемом 300 мл той же среды, которую используют в примере 3, с концентрацией глюкозы 1 г/дл и добавлением 1 г/дл этилового спирта вместо 0.5 г:дл ацетата аммония, помещают в сосуд для ферментации, объемом 1 л и сосуд нагревают. Среду для вьгращи.вания культуры помещают в бульон семенной культуры объемом 15 мл, состав которой приведен выше. Выращивание осуществляют аэробно при 31° С.
В процессе выращпваиия .рН среды поддерживают 7,2-8,2 при помощи газообразного аммония. Концентрацию спирта в среде для выращивания культуры периодически контролируют при помощи газовой хроматографгШ. Пх ддерживая на уровне 0,3 г/дл полплткой этиловым спиртом.
Предлагаемый способ обеспечивает по сравнению с известным повышенный выход L-л.изина. Состав среды, содержащей вытяжКу из се.мян. eid.i: глюкоза 1,5; ацетат аммония 0,3 мочев 1на 0,1; Ms:SO4 7Н9О 0,4; 1 Н2РО4 0,01; MnSO4.4H2O 1 мг/дл; FeSO4 7Н2О 1 мг/дл; биотин 50 лгг.л; тиамин НС 200 гидролизат соевых бобов 3 мл/дл (общее содержание азота 7% рН 7,5). Триста частей среды для выращиванил культуры, состав которой приведен .выше, но.мещают в сосуд для ферментации объемом I л, нагревают, а затем в сосуд вносят 15 мл бульона среды состава, глюкоза 2; ацетат аммония 0,5; .мочевина 0,2; {XH4)9SO4 0.5: 1 Н2Р04 0,1; MgSO4 7Н.,О 0,04; FeSO4 7Н2О 1 мг/дл; MnS04 4Н2О 1мг:дл; биотин 50,иг/л; тиамин 60 мг/л: гидролизат соевых бобоз 3 мг/дл (рН 7,5). Выращивание осуществляют аэробно при 30° С. В процессе выращива.н.пя добавляют ВОДНЫЙ раствор, содержащий уксусную кислоту и ацетат аммония, для ноддержания рН среды на уровне 7,2-8.0. Спустя 72 час в пгооцессе выращивания в образова.Бщейоя таким образом среде накапливается L-лизин, общее количество которого приведено в табл. 3. Пример 4. Микроорганизмы, приведенные в табл. 4, выращивают аэробно при 31° С IB течение 18 час в 50 мл среды для выраЩивания культуры согласно ир.имеру 3 с добавлением 0,5 г/дл этилового спи.рта и 0,3 г/дл мэчевл.нь вместо 0,3 г/дл ацетата аммония и 0,1 г/дл мочевины.
Выращивание осуществляют 56 час. В табл. 4 лриведены количества Ь-лизн«а, Котарые были .найдены в соответствующих среда1..
Пример 5. Приготавл-ивают среду для (Выращивания «ультуры, состав .которой приведен .ниже, и 20 мл среды иомешают в катбы объемом 500 мл, рреду нагревают, лер.иод.ически взбалтывая.
Л пкрооргаиизм
Приготавливают 1 л бульона, засеянного микроорганизмами вида AI 3989,1ка,к описано выще, затем засеянный бульои помещают в центрифугу для извлечения клеток; всплывающую часть .среды обрабатывают кислой ионообменной смолой «Amberlite lR-12Q--. Абсорбированный «а смоле L-лизин вымывают 3%-ной аммиачдой .во. до и, а из элюата извлекают кристаллы двугидрата гидрохлорида Ь-лизииа (28,5 г).
Ф О р .м .у л а и 3 о б р е т е -н и я
Среду засевают .микроорганизмами, которые ириввдены в табл. 5, и выдерживают при 30° С 72 час, периодически взбалтывая.
Полученная среда содержит L-лизин в количествах, Котарые .приведены в табл. 5.
Таблица 5
Количество накопившегося L-лизина, г/л
меласса свеклы , меласса тростника
19 27 29 37 18 23 25
щийся тем, что, с целью повыщения выхода, в качестве микроорганизмов, продуцирующих L-лизии, используют щтаммы Brevibacterium lactofermentum FERMР 3382, FERM-P 3383, FERM-P 3384, FERM-P3386, FERM-P 3387 или Corynebacterium acetoglutamicum FERM-P 3380, FERM-P 3381 или FERM-P 3414, устойчивые no отнощанию к а-аминолауриллактаму, 7Мбти.ллизи.ну или N -жарбобензоксилизину.
Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:
СССР
Авторы
Даты
1978-12-15—Публикация
1977-02-18—Подача