Способ получения три -п- толуолсульфоната -аденозил- -метионина Советский патент 1979 года по МПК C07H19/16 A61K31/7076 

Изобретение относится к способу получения новой ферментативной соли-три- -п-толуолсульфоната S -аденозил-L-ме тионина. Цепь изобретения - получение нового полезного соединения, расширяющего: ассортимент средств воздействия на живой организм. Ч-Ж СН-СН- Н-СН-СН2Цель достигается путем синтеза, основанного на известной реакции получения кислотных солей органических соединений tilОписывается способ получения три-п-толуолсульфоната S -аденозил-I.-метионина формулы 2- 5Н2-б11-еООН-2СН5 2бН4-$ОзН (Е)

ауют, упаривают до объема 2/20-4/20 от начального объема и целевой осаждают путем добавления водорастворимого органнмескрго растворителя, пред, почтительно выбранного из группы, вклю: чающей метанол, этанол, пропавол, изопропанол ацетон, Метипэтилкетон, или в олучае применения водного раствора серной ши соляной кислоты полученные сульфаты кпв хлориды АМ перед осаждением водо растворимым органическим растворителем растворяют в воде и водный раствор обра батывают п-толуолсульфокислотой при молярном соотношении кислоте: 6AM от 3 До10.

П р и м е р 1. К 90 кг дрожжей, обогащенных SAM (5,5 г/кг), приливают 9 л этил ацетата при комнатной температуре. После эн гичного перемешивания массы в течение 1 ч ее раэбавля ют 4О л воды, фнльтругот и промывают, Получают 140 л раствора, содержащего 3,55 г/л SAM (выход 99,5%).

14 п полученного раствора адсорбируют на 1 л амберлита в НЦюрме, а затем последовательно элюируют водой, 0,025 н. уксусной кислотой и 1 М раствором п-толуолсульфокислоты.

Фракции, богатые чистым SAM, сое.тавпягот 18,1 л исодержат 85% продукта. Раствор обрабатывают 1,7 л амберлита 3 RA-900 в ОН-форме. После фильтракии и промывки смолы водой получают раствор, включающий 2,2% п-толуолсульфокислоты и 0,85% SAM/

Раствор упаривают при комнатной температуре в вакууме; до объема 60О мл и приливают к нему ацетон. Выпадает белая порошкообразная микрокристалличес- кая гидроскопичная соль (90 г) без запаха, которая не очень хорошо растворяется В метаноле и этаноле и не растворяется в ацетоне, метилаэтилкетрне, хлороформе, высших спиртах и бензоле.

При анализе соли получают следующие результаты.

Найдено, %: С 46;9 j Н 5,3; N9,2;

Sl3,8.

S( 4 (Мол. вес 915,1)

Вычислено, %: С 47,20; Н 5,15| W 9Д8г S 14.00.

Найдено, %; п-толуолсульфокислота 55,S| SAM 42,5.

Вычислено, %: п-толуолсульфокислота 56,4} SAM 43,6.

Потери в весе в результате сушкя -В течение 12 ч при комнатной температуре в вакууме на s составляет 1,52,0%. Влажность (по Фишеру) 1,5-2,0%.

Новое соединение обнаруживает в УФ-спектре максимум поглощения при 25.6 нм, Е 15600 (в 6 н. серной кислоте) при 2бЪ нм, f 16300 (при рН 7).

Все эти данные согласуются с соединением формулы (1),..

Количество три-п-толуолсульфоната $АЛ, получаемого в данном процессе, соответствует выходу 95% (96 г).

Пример 2. Описанным в примере 1 способом обрабатывают 9 кг дрожжей и после лизиса клеток получают 13,8л раствора, включающего 3,60 г/л SAM, что соответствует 99% от количества, содержащегося в обработанном материале. Этот раствор адсорбируют на 1 л амберпита Л в H-форме и элюируют водой, 0,025 н. уксусной кислотой и 4 н, соляной кислотой. Фракцйи, богатые чистым S AM, составляют 0,8 л и содержат 87% продукта, поступившего в колонку. З.атем их упарившот . досуха в вакууме при. , после чего приливают воду до получения раствора, содержащего 5% $АМ, , поддерживая . температуру раствора оКолЪ , и прибавляют смолу Дауэкс 50 в ОН -форме, . пока; рбразец раствора обнаружит отсутствие хлорвдов.

Смолу отфильтровывают, добавляют 110 г п-толуолгульфокислоты и упаривают, доведя объем до 600 мл. Затем приливают метшюл до полного осаждения, фильтруют и сушат. Получают 75 г три-п-толуолсульфопата SAM (выход 75%) с теми же свойствами, что у соединения, полученного в примере 1.

Пример 3. 13,8 л раствора S AM, полученного после лизиса дрожжевых клеток (по описанному в примере 2 способу; 3,60 г/л S AM), адсорбируют на 1,1 л амберяита 3RC-50 в Н -форме и элюируют последовательно водой, 0,025 М уксусной кислотой и, наконец, 1 н. серной кислотой. Фракции, богатые 5 AM (1,8 л, 86% вещества, поступившего в колонку), обрабатывают суспензией гидрата окиси бария при О С. до полного устранения сульфатов. : После фильтрации и промывки сульфата бария добавляют 108 г п-толуолсульфокйслоть и поступают далее, как описано в примере 2. Получают 75 г три-п- олуолсульфоната SAM с теми же свойствами, что у вещества полученного в примере 1, Выход 79%, 5/6 Пример 4. 13,8 л растиора/со держащего 43,3 г SAM,, адсорбируют в колонке со смолой и элюируют (аналогич но описанному в примере 2) водным раствором соляной кислоты. Фракции, богатые SAM, упаривают досуха при 40 С в вакууме. Затем приливают воду, получая 10%-кый раствор хлорида, после чег осаждают добавлением адетона. Анализ образовавшейся соли (35 г, выход 69%) Флориды 16,86%j SAM 78,85%; вода 4,2%. 10 г полученной соли растворяют в 200 мл воды и хлориды удаляют при .при помощи смолы Дауэкс 50 в Он -форме. Затем в раствор вносят 19,7 г п-толуолсульфокислоты, смесь упаривают в вакууме при 40 С до объа.ма 80 мл, после чего приливают ацетон для осаждения 14 г три-п-толуолсульфЬг ната SAM (выход 78%) с теми же свой ствами, что у вещества, полученного в примере 1. Пример 5. 13,8 л раствора, со держащего 3,60 г/л 5AM (полученного, как описано в примере 3), адсорбиру ют в колонке амберлитом 3RC-SO в Н -форме. Фракции, богатые SAM, обрабатывают карбонатом бария, пока молярная конце- трация сульфата не станет равной молярной концентрации SAM, Затем раствор Ч- ц,; СН-ОН2отличающийся тем, что водную суспензию дрожжей, обогащенную S - денозил- U -метионином ( S AM), обрабатывают этил- или метилацетатом в концентрации 1/20-1/5 от веса влажных клеток, получе1й1ый раствор адсорбируют в колонке,, содержащей слабо катионообмен- ному смолу кислотной 4ормы, колонку последовательно промывают водой, О,О25 н уксусной кислотой, водным раствором п-толуолсульфокислоты концентрацией вплоть до 1 моль или водным раствором серной или соляной кислоты, раствор нейт 5 отфильтровывают и фильтрат упаривают до объема 500 мл. При добавлении ацетона выпадает 6О г соли, выход 88%. Ее анализ: сульфаты 28,2%; SAM 58,9%; вода 5%. . 10 г полученной соли растворяют в 12 О мл воды и обрабатывают амберлитом 3RA-90 в ОНЦюрме, пока не будут устранены сульфаты. Смолу отфильтровывают, добавляют 14,7 г п-толуолсульфокислоты, смесь упаривают до объема 6О мл и приливают ацетон. Выпадает 10,8 г п-толуолсульфоната 5 AM (вьпсод 78%) с теми же характеристиками, что у вещества, полученного в примере 1, Пример 6, 1г йодида $АМ растворяют в Ю мл воды и обрабатывают смолой Дауэкс в ОН -форме при О С, пока не будет выведен ион йодида. После отфильтровывания смолы добавляют 1,5 г п-толуолсульфокислоты и смесь упаривают до объема 6 мл, после чего 1филивают ацетон. Выпадает 1 г три-п-оолуолсульфоната SAM (выход 78%) с теми же свойствами, что у вещества, полученного в примере 1, Формула изобретения 1. Способ получения три-п-толуолсульфоната S -аденоаил- U -метионина формулы. t S-dH «eHjCeH - OjH (I) tHs-d H Oj рализуют, упаривают до объема 2-20 4/2О от начального объема и целевой продукт осаждают путем добавления водорастворимого органического растворителя или в случае применения водного раствора серной или солйной кислоты полученные сульфаты или хлориды SAM перед осаждением водорастворимым органическим растворителем-растворяют в воде и водный раствор обрабатьшают п-толуолсульфокислотой при молярном соотношении кислота: JAM от 3 до 10.

7 в469158

2.СпособпопД, о т л и ч а ю щ,и и с яИсточники информации, принятые во

тем, что водорастворимый органический . внимание при экспертизерастворитель выбирают из группы, включающей метанол, этаноя; пропаноп, изо-1. Патент США 338О995, пропаноя, ацетон, метилэтилкетон, 5 . 260-211, 1968.