54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАЛОГЕЯПРОИЗВОДНЫХ АНТИБИОТИКА ИЗО-ЛАЗАЛОЦИДА А плитках. Бромпроиэводное показало более высокое относительное действи по сравнению с лазалоцидом А (75:1) С другой стороны, бромпроизводное изо-лазалоцида А показывает значительно уменьшенную токсичность у мы поскольку ЛД 50 составляет выше 2000 мг/кг перорально, по сравнению с 150 мг/кг перорально для лазалоци да А. Согласно изобретению галЬгенпрои водные антибиотика изо-лазалоцида А указанной общей формулы (1) предлагается получать соответствующим гал текированием солей соединения общей формулы II путем обработки N-бром-или К-хлорсукцинимидом или бромом, хлором, йодом или монохлоридом йода в среде соответствующего рй.створителя с последующим внщелением соединения формулы (I) в свободном виде или в виде соли, Изо-лазалоцид А или соединение формулы П получают ферментацией подходящей питательной среды при помощи Streptomyces Х-537 в подводных условиях с проветриванием, причем значение рН бродильного раствор доводят примерно до нейтральной реа ции, т.е. до 6,5-7,5. Применяемая питательная среда содержит источник азота, например дрожжи или продукт дрожжей, кукурузную муку, бобовую муку или т.п., предпочтительно соевую муку; соли, например фосфат калия, карбонат кальция и микроэлементы.; источник углевода, например сахар, мелассу и т.п., предпочтител но крахмал; и растительное или животное масло, например соевое масло ИЛИ топленое масло, в качестве исто ника углерода и в качестве пеногаси теля. Брожение проводят при повышен ной температуре (25-35с), предпочтительно примерно при 31°С. После инкубационного периода в 4-9 дней фильтруют бродильный раствор и антибиотик получают экстракцией. После окончания ферментации можно прим нять много различных методов для вйделения и очистки изо-лазалоцида А. подходящими методами являются: экйУракция растворителями, наприМёр, йнте рмитирующая экстракция или экстракция способом противоточмЬгб распределения, а также гёльпермеационная хроматография в безводной системе. .---,-,-.-..-....-Соли изо-лазалоцида А получают общеизвестньзм методом, исходя из свободной кислоты антибиотика, на Вример, Путем промывки подходящим основанием или подходящей солью. Подходящими, основаниями для этой цели являются, например, основания . щелочных металлов, в частности гидроокись натрия, гидроокись калия и т.п.; основания щелочноземельных металлов, например гидроокись, кальция, бария-или т. п., и „окись аммония. Соли щелочных и щелочноземельных металлов, которые можно применять для получения фармацевтически совместимых солей согласно изобретению, представляют собой, например, карбонаты, бикарбонаты и сульфаты. В качестве растворителя при получении соединений формулы 1 согласно изобретению используют, например, хлороформ; тётрахлорметан или метиленхлорид. Температуру целесообразно выбирать в пределах между комнатной и температурой кипения реакционной смеси, причем соответственно варьируют длительность реакции, например примерно 12 ч при комнатной температуре или от 10 мин до 2 ч при температуре дефлегмации. Согласно другому варианту выполнения способа применяют бром, например, в одном из указанных галогенированных растворителей или сероуглерод или хлор, например в тетрахлорметане. Для этих реагентов целесообразно выбирать температуру (-10) (+10)с, а длительность 1-6 ч. Йодирование проводят, например, при помощи монохлорида йода в ледяной уксусной кислоте при комнатной температуре в течение 15 мин - 2 ч или при помощи йода в органическом основании, например морфолине, при комнатной температуре в течение 5-7 дней. Пример 1.К раствору 3,672 г натриевой соли изо-лазалоцида А в 500 мл метиленхлорида прибавляют при медленно в течение 1 ч 0,323 мл брома в 50 мл метиленхлорида. Раствор после 1 ч медленно нагревают до 15С и прибавляют 1 л воды. Слой растворителя отделяют и промывают воднкгм раствором бисульфита натрия,водным раствором карбоната натрия и водой.Раствор сушат сульфатом натрия и концентрируют,получая масло, из которого после прибавления ацетона/гексана получают 2,1 г кристаллов . Кристаллический материал растворяют в метйленхлориде и промывают 1 н. водным раствором соляной кислоты. Слой растворителей концейтрируют до маленького объема и после прибавления ацетона/гексана перекристаллизовывают из водного метанола. Получают бромпроизводное изо-лазалоцида А с т.пл. 185-186°С. ПрийёНйёиую в качестве исходного материала натриевую соль изо-лазалоцида А получают следуквдим образом. Получение изо-лазалоцида А. Организм Streptomyces инкубируют и подводных условиях с проветриванием в качалка;х. Значение рЯ бродильного раствора доводят до 6,5-7,5 прибавл нием водного раствора гидроокиси йалия, после этого стерилизуют бродил ный раствор. Проводят брожение в ба где применяют 5-10%-ный прививочный материал, состоящий из 3-дневной подводной культуры. Питательная сред содержит 2% расщепленного желтого го роха, 1% кукурузного крахмала, 0,1% фосфата дикалия и 2% топленого масла Брожение проводят при 28°С на воздухе, причем через раствор пропускают 150-300 л воздуха.. Брожение прекращают через 6 дней, бродильный раство фильтруют и антибиотик получают экс ракцией.. Экстракцию проводят следующим образом. 204 л бродильного раствора фильтруют. Мокрый остаток на фильтре взму чивают в 100 л этилацетата и смесь перемешивают в, течение 10-15 ч при комнатной температуре. После фильтрации отделяют водный слой и выбрасываю его. Раствор этилацетата, содержащий концентрацию антибиотика, соответствующую 30 млн.ед. бациллы Е, концентрируют до 3 л при уменьшен ном давлении, промывают 10%-ным водным раствором карбоната натрия и суш безводным сульфатом натрия. После концентрирования до 300 мл и разбавления 350 мл петролейного эфира (т.кип.50-60°С) выделяют 41 г твердого вещества, которое при проверке дает 25 млн.ед. бациллы Е. Это твердое вещество экстрагируют в аппа ратуре Сокслета с 4 л петролейного эфира (т.кип.50-60°С) в течение 40 ч Экстракт выпаривают досуха при умень шенном давлении и получаемый кристаллический осадок суспендируют в .петролейном эфире. Полученный раствор фильтруют. Фильтрат содержит изо лазалоцид А. Выделение изо-лазалоцида А. Порцию концентрированного фильтрата из указанного процесса хромато графируют в аппаратуре противоточно го распределения, снабженной 200 трубками (каждая емкостью в 80 мл). Пробу растворяют в 160 мл смешанных фаз (гептан:этилацетат:метанол:вода5 27:18:18:2) и раствор помещают в две первые трубки. После 380 шагов распределения получают следующие фракции после упаривания растворителя:A,Смесь з омологов лазалоцида Б,В,Г и Д, эти гомологи имеют отлич от лазалоцида А и изо-лазалоцида А структуру. Б. Лазалоцид А B.Сырой изо-лазалоцид А Фракция В находится в сыром виде и содержит натрий и калий в виде солей. Ее растворяют в метиленхлори де и промывают 0,1 н.водной соляной ислотой, причем получают очищенный зо-лазалоцид А в виде свободной ислоты. Вьвделенный таким образом зо-лазалоцид А плавится при 18385°С. Получение натриевой соли изоазалоцида А. 100 мг изо-лазалоцида А растворяют в метиленхлориде и обрабатыва-. ют насыщенным раствором карбоната натрия. Слой растворителя концентрируют гексаном, причем получают 104 мг кристаллической натриевой соли изо-лазалоцида А, которая плавится при 183-183,. Другие соли изо-лазалоцида А, которые также можно использовать для получения галогенпроизводных формулы Т, можно получать следующим образом. Получение калиевой соли изолазалоцида А. 387 мг изо-лазалоцида А растворяют в 200 мл этилацетата и обрабатывают 0,2 н.водным раствором гидроокиси калия. Слой .растворителя сушат карбонатом калия и концентрируют при уменьшенном давлении. Получают 360 мг калиевой соли изо-лазалоцида А в виде бесцветной пены. Получение бариевой соли изолазалоцида А. 0,77 г изо-лазалоцида А растворяют в метиленхлориде и обрабатывают насыщенным водным раствором гидроокиси бария. Слой растворителя отделяют и концентрируют при уменьшенном давлении. Получают примерно 0,62 г бариевой соли изо-лазалоцида А в виде пены. Пример2, Получение натриевой соли йодпроизводного изо-лазалоцида А. Раствор 1,8 г натриевой соли изолазалоцида А в 50 мл смеси ледяной уксусной кислоты и хлороформа обрабатывают 980 мг монохлорида йода (свежедистиллированная фракция 97-99 С). Монохлорид йода смешивают с 5 мл уксусной кислоты, и добавляют медленно, в течение 15 мин, к реакционной смеси. По окончании прибавления медленно добавляют воду (100 мл) и смесь экстрагируют эфиром. Слой растворителя отделяют и тщательно промывают водным раствором бисульфита натрия, бикарбоната натрия и карбоната натрия. Растворитель высушивают сульфатом натрия. После концентрирования и кристаллизации продукт получают путем фильтрации. Перекристаллизация из этилового эфира уксусной кислоты дает натриевую соль йод производного изо-лазайоцидаXCo4-Hf5,3NaOa) в виде белых крис таллой-с . 189-191° С сСд 45,5° (6,/рМ, СЯСе)„ Продукт содержит око лф 25% высшего гомолога (С Я 3NaOg П р и м е р 3, Получение натриевой соли хлорпроизводного йзо-лазалоцида А. К холодному раствору (приблизительно 3°С) из 6,12 г натриевой соли изо-лазалоцида А в 50 мл хлороформа, 3 мл четыреххлористого углерода медленно прибавляют 34 мл насыщённого четыреххлФристого углерода с 10 ммолъ хлоргаза,. Продолжительность реакции 1/2 ч, после чего раст вор фильтруют- и фильтрат обрабатывают насыщенным водным раствором NagCOj. Слой растворителя высушивают сульфатом натрия и концентрируют до малого объема, из которого после добавления гексана получают кристаллический продукт. Кристаллический продукт дважды перекристаллизовывают из метиленхлорида/эфира и ацетона/ге сана. Получают соль натрия хлор производного изо-лазалоцида А (С,. Н се NaQ) в виде белых кристаллов ст.пл„ 183-184С, oi.33 (-)60,77 (0,99%, CHCS). Продукт содержит око ло 25% высшего гомолога С,-,-Я... КаО„се 5 д4-о Формула изобретения Способ получения галогенпроизводых.антибиотика изо-лазалоцида А обей формулы I СвгН fu / ЪИд sr а J «о ц ( н( 1г где X хлору бром или йод, или их солей, отличающийся тем, что соли соединения общей формулы И ЙОгИ О Я подвергают соответствующему галогенированию путем обработки N -бром-, или N -хлорсукцинимидом или бромом, хлором, йодом или монохлоридом йода в среде соответствующего растворителя с последующим выделением соединения формулы (I) в свободном виде или в виде соли. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: l.a. isoEation of three new Criistae Antibiotics, 3-.Am.Cfiem.Soc.,-f95,T.73, c.5295-ff 98.
