Способ количественного определения вируса в вирусных смесях Советский патент 1979 года по МПК C12K7/00 

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСА В ВИРУСНЫХ СМЕСЯХ но-покровного агара флаконы перевора Ч ивают агаровым покрытием вверх и и кубируют при температуре 33-37с. Рецептура питательно-покровного агара Hia 100 мл (зависит от природы Вируса икультуры ткани), .-;::;;;:.:: Ра:створ Эрла 109 Дистиллированная вода 28 (30 мл безимунной сыворотки) Смесь имунных сывороток двух типов вируса 2 Нормальная бычья сыворотка или обезжиренная молога 1,8 Раствор бикарбоната на- трия (7,5%)е.Д Нейтраль-рот 1/1000 1,5 3%-ный раствор расплавленного агара Дибко 50,4 Окончательный подсчет блашек проводят на 5 день. Количественное Содержание отдельНйЗС в йрусных компонентов в 1 мл исслёДуёмойв акцйны определяется сле- дующим образом. Определяют среднее количе ство бля шек в одном флакй не в каждой опытной партии, соответственно примененной им -нной типоспедифической сыворотке или смеси таких сывороток. Это количество умножают на разведение вйкционной пробы и на обратную величину объема вирусного инокулята Полученная величина обозна гается Как число бляшкообразующих единиц в 1 мл (БОЕ/мл) и может быть выражена в абсолютных велйШ1нах или числом 10 с соответствующей степенью. Если необх:одимо определить содержание вируса в одной Прививочной дозе, то по -лученное значение делится на количествь доз в 1 мл исследуемого материала. Данный опыт сопровождается следующими контроНями. Контроль на чувствительность куль туры j{aHH к вирусу . Три флакона то же пйртии культур ткани, чтоИдйя основного опыта, заражают стандартными Вирусными штагАлами тех же типо что в исследуемой вакцине. Титры эт штаммов устанавливают заранёе путем многократного титрсзвания и вйведейи среднего эн аченйя титра. Количество бляшек., обраэуюдахся в -этих флакона не должно отклоняться от заранее ус тановленного среднего титра более чем в 2 раза. Контроль культуры ткани на отсут ствие бляшкообразу ощих вирУСов-крнта1У1ИнаТоВ а Два нёзаг ажённах .От ТбйГШйа тЙй культуры -псаш залйвают питггТёльно-покровнам агаром/ в который не добавляют имуинуйТйпо специфическуй сыворотку (или смесь сывороток). Контроль на общее содержание вйРУса в исследуемой поливалентной вак-Цйнё. Три (флакона с культурой заражают разведениями испытуемой вакцины , .М. описано ввде. Зараженные флаконы заливают питательно-покровным агаром, не содержащим имунные типоспецифйческие сыворотки. Установленный в этом опыте вирусный титр не должен отличаться более чем на 20% от суммы вирусных тйТров каждого компонент та поливалентной вакцины, установленных в основном опыте. Контроль на специфичность имунных сывороток. Каждую примененную в основном опыте имунную типоспецифическую сыворотку или их смесь исследуют в рабочем разведении со стандартными вирусами всех серотипов, из которых состоит испытуемая вакцина. Вирусы применяют в дозе, вызывающей образование 30-50 бляшек во флаконе в отсутствии имунных сывороток. В случае гомологичных сочетаний сыворотки (сывороток) с вирусом не должно образовываться бляшек в течение срока наблюдения. . - В случае гетерологичных сочетаний сывороток с вирусом количество образуемых бляшек не должно уменьшаться более чем на 10% по сравнению с титром вируса, установленного в отсутствии имунной Типоспецифической сыВЬрОТКИ. : П р и Мер. Количественное определение Отдельных типов вируса полиомиелита в живой трехвалейтной вакцине.- ДелайТ десятикратные разведения вакцины, до растворе Эрла или на среде с 0,5% гидроШизата лактальбумина. Флаконы с семидневной культурой почек зеленых мартыиек заражают по 0,1 мл как описано выше, и заливают питательно-Покровным агаром в который добавляют смеси и лунных типоспецифических сывОротОК. Для определёнИя титра вируса I типа в трехвалентной вакцийе (флаконы 1, 2, 3) в питательно-покровный агар добавляют смесь сывороток II и III типов; для определения титра вируса II типа ; (флаконы 4, 5, 6) - смесь сывороток I и III типов и дЛя. определения титра вируса III типа (флаконы 7, 8, 9)смесь сывороток II и I типов. Опыт .сопровождается всеми необходимьми контрольными испытаниями, описанны ми ВБЫе, Через 5 дней инкубации зараженных и контрольных культур проводят подсчет блягйек в каждом флакОне и высчитывают тиТры вирУсов. . Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность и точность определения. Формула изобретения пОсоб количественного определения йЙЕ усав ййрусных смесях, ВКЛЮ-. чающий заражение культуры ткани, инкубирование ее с последунвдим нанесением питательно-покровного агара и определением концентрации вируса бляшек, о т л и ч аю-щ и и с я тем, что, с целью повы- 5 шения чувствительности способа и точности определения, культуру ткани заражают вирусной смесью и после инкубирования наносят питательно-покровный агар, содержащий антисьшоротки ко всем вирусам, кроме искомого Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Руководство по и уноло ии Под ред. вязова О. Е. М., Медицина 1973, с. 281. едицина.