Способ выделения ферментного комплекса Советский патент 1980 года по МПК C12D13/10 

ферментный комплекс растворяют в во- да при 1-2°с и доводят рН раствора до 6,9-7,0, после чего ферментный комплекс осаждают из раствора сульфатом аммония 0,75-0,80 насыщения с последующим диализом водного раствора ферментного комплекса против р,005М раствора уксуснокислого кальция.

При этом сушку ферментного комплекса осуществляют лиофилизацией.

Сущность изобретения поясняется примером выполнения способа выделения ферментного комплекса с протеолитической и амилолитической активностью,

Пример. Исходным сырьем для выделения ферментного комплекса служат технические препараты типа Амилоризин П.0х или Амилоризин Г10х из плесневого гриба Aspergillus oryzae,

10 кг сырья обрабатывают семикратным количеством воды при комнатной температуре и перемё1ийванй й в тёчение 2 ч для экстракции ферментов, К 70 л экстракта при 2°С добавляют 162 Л охлажденного до 7°С этанола о конечно концентрации 75% для дновременного осаждения протеазы амилазы. Выпавший осадок растворяют в 32 л ледяной (0-2°С) воды, доводят рИ раствора до б,9-7,0 при осторожном добавлении 2М раствора едкого натра, после чего прибавляют равный объем (32 л) 0,25М уксуснокислого кальция. Выпавшие взвешенные примеси отделяют центрифугированием и в надосадбчную жидкость добавляют СУХОЙ .сульфат аммония - 54,5. кг до 0,75 насыщения..При этом осаждают ферментные белки, которые -через 1,5 ч отделяют центрифугированием при 7000 об/мин. Осадок раст воряют в ледяной воде и диашизуют против 0,005М piacTBOpa уксуснокислого кальция при 4°С до исчезновения реакции на Сульфат-ион, Полученный раствор ферментов сушат лиофилизацией. Поскольку полученный ферментный комплекс предназначен для медицины, то к. нему добавляют сахарозу в соотношении 1:7,.которая одновременно стабилизирует препарат и разбавляет его для гого, чтобы амилоЛитическая активность, препарата был порядка ,10000 ед/г и протеолитическ220 ед/г препарата.

Характеристика и выход очищенног ферментного комплекса из исходного сырья представлены в таблице.

6200

:-.-

100000 44-50

пВлученный очищенный ферментный комплекс . с протеолит,ической и амилодатической активностью предназначен для компенсации .ферментов кишечника. При изготовлении из него лечебной формы лиофилизированный комплекс с добавкой сахарозыпомещают в желатиновые капсулы, дважды покрйтые 5%-ным раствором ацетофталатцеллюЛозы. Такое покрытие обеспечивает сохранность капсул в желудочном соке более 2ч, а в кишечнике рни растворяются в течение 20 tm.

Клинические; и лабораторные исс.ледования фармакологических свойств пЬлученного ферментного комплекса подтверждают его нетоксичность и соответствие требовакийм, предг явля ёмым К лечебным препаратам.

Формула изобретения ,

20-30

лрлитической активностью из концентрата культуральной жидкости плесневого гриба Aspergilius oryzae, предусматривающий его осаждение этано-. лом и сушку, о т л и ч а ю ей и йен тем, что, с целью интенсификации процесса, Ловышения качества целевого

продукта и возможности использования его в качестве лечебного препарата, перед сушкой,осажденный ферментный комплекс растворяют в водб при 1-2°С и доводят рН раствора до

6,9-7,0, после чегоферментный комп;лекс осаждают из раствора сульфатом, .алшония 0,75-0,80 йашаенйя с послейующим Диализом водного раствора О -ферментного комплекса против 0,005М. раствора уксуснокислого кальция.

2. Способ по п,,- о т л и ч а ю щ и и с ятв, что сушку ферментного комплекса осуществляют лиофилизацйейТ . Источники информации, , принятые во внимание при экспертизе. V n pf° n°P свидетельство СССР №320528, кл. С 12 D 13/10, 1969. 2. Веселев И.Я., Воронов В.И. и Ильина О..П. Получения фе 1ентногс комплекса гриба Aspergillus oryzae 8F. , MикJюбиoлoгичecкaя пром пенность . вып.7 (103), 1973, с.22-25.