Питательная среда для выявления р детерминанты вирулентности Советский патент 1980 года по МПК C12K1/06 

Изобретение относится к области медицины, а именно и«кробиологии.

Известна питательная среда для выявления р детерминанты вирулентности, содержащая агар, калий фосфорнокислый однозамещенный, хлористый аммоний, сернокислый аммоний, галактозу, В-фенил-Х-аланин, метионин, цистеин, валив, изолейцнн, глицин, сернокислый магний, сернокислый цинк, сернокислый марганец, 4%-раствор молочной кислоты, аргинин, краситель, ростовой фактор и воду 1.

Однако известная среда является сложной и дорогосггояпдей.

Целью изобретения является упрощение среды с сохранением ее ростовых свойств.

Эта цель достигается тем, что среда содержит в качестве ростового фактора сернокислое закисное железо, в качестве красителя - Эванс голубой при спедуютем количественном соотношении компонентов (г/л воды):

Агар18,0-20,0

Калий фосфорнокислый одноза-;

метенный 4,0-4,2

Хлористый аммо0,4-0,7 ний

Сернокислый

0,4-0,7 аммоний 1,8-2,5 Галактоза В-фенил-А-ала0,10-0,18 нин

Метионин 0,05-0,10 0,04-0,08 Цистеин

10 0,04-0,08 Валин 0,05-0.,10 Изолейцин 0,04-0,10 Глицин Сернокислый

0,05-0,30 магний

15 Сернокислый 0,0001-0,0005 цинк

Сернокислый

0,0001-0,0005 марганец

IМолочная

20

|о,5-2,0 кислота 0,01-0,16 Эванс голубой Сернокислое закисное желе0,3-1,0 зо Аргинин

25 0,1-0,2.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Пример. Для приготовления 1 л дифференциальной среды с аванс

30 голубьпи 20 г агар-агара замачивгиот в дистиллированной воде. Набухший агар-агар промывают, меняя воду в течение 2-3 суток не менее 8-10 ра Отмытый агар расплавляют нагревани в 500 мл воды, устанавливают рН IN раствором NaOH до 7,0. Продолжая на ревание, добавляют 4,12 г KHjPO, , растворенного в 300 мл воды при оН 8,0 (добавляя IN NaOH), 0,53 г ,растворенного в 100 мл воды и 0,53 г (NH jgSOq, растворенного также в 100 мл воды. Агар перемеиювайт, доводят до кипения, устанавли вают рН до 7,4-7,5 и автоклавируют при 120 20 минут. После автоклавирования агар фильтруют и стерильно на 1 литр агара при температуре добавляют следующие коьтоненты среды: 2 г галактозы (10,0 мл 20% раствора) 120 мг /-феиил- аланина (30 мл 0,4% раствора) 60 мг метионина (5 мл 1,2% раствора) 48 мг цистеина (5 мл 0,96% раствора) 48 мг валика (5 мл 0,96% раствора) 55 мг иэолейцина (15 мл 0,363% раствора) 50 мг глицина (5 мл 1% раствора 100 мг MgSO (2,5 мл 4% раствор 0,1 мг ZnSOij (1 мл 0,01% раствор 0,1 мг MnSOq (1 мл 0,01% раство ра) 40 мг молочной кислоты (1 мл 4% раствора) 104 мг аргинина (10 мл 1,04% раствора) 30 мг Эванса голубого (5 мл 1% раствора) 800 мг FeSOii (16 мл 5% раствора Готовую среду разливают в чашки Петри, которые на сутки помещают в термостат при 37 для проверки на стерильность. На чашки высевают по 200-500 м.к. изучаемого штамма чумного микроба и выращивгиот при 28 течение 4-6 суток. Р колонии-те носиние, Р - светлые. Данная среда может быть модифицирована путем использования в кач стве стимулятора роста на рия в конечной концентрации 0,1% либо Мора в конечной концентр ции 50-;80 мг %, а в качестве краси теля - трипановогЬ синего, конго красного или амидочерного в конечн концентрации 3-5 мг %. Использование изобретения позволит явить Р детерминанту вирулентности умного микроба с использованием ее доступной и дешевой среды. Формула изобретения Питательная среда для выявления детерминанты вирулентности сожащая агар, калий фосфорнокислый озамещеншлй, шористый аммоний, нокислый аммоний, гашактозу, / нил-/-аланин, метионин, цистеин, ин, изолейцин, глицин, сернокисмагний, сернокислый цинк, сернолый марганец, 4% раствор молочкислоты, аргинин, краситель, товой фактор и воду, отлиющаяся тем, что, с целью ощения среды с сохранением ее товых свойств, она содержит в естве ростового фактора сернокисзакисное железо, в качестве сителя - Эванс голубой при слещем количественном соотношении понентов (г/л воды): 18,0-20,0 Калий фосфор4,0-4,2 нокислый однозамещенныйХлористый аммоний0,4-0,7 Сернокислый аммоний 0,4-0,7 Галактоза 1,8-2,5 -фенил-/О,10-0, 18 -аланин Метионин 0,05-0, 10 Цистеин 0,04-0,08 Валин 0,04-0,08 Изолейцин 0,05-0,10 Глицин 0,04-0,1 Сернокислый 0,05-0,30 магний Сернокислый 0,0001-0,0005 цинк Сернокислый 0,0001-0,0005 марганец Молочная кис0,5-2,0 лота Эванс голубой0,01-0, 10 Сернокислое закисное же0,3-1,0 лезо Аргинин 0,1-0,2 . Источники информации, нятые во внимание при экспертизе 1. J. Ехрег. Patho. (Brit.) 1956, VII, 6, 570-576.