Способ микродиализа Советский патент 1980 года по МПК G01N33/48 

(54) СПОСОБ МИКРОДИАЛИЗА

Изобретение относится к способам химического разделения веществ и может быть применено в химии, био химии, медицине, физиологии. Известен способ микродиализа путе помещения диализуемой жидкости в емкость из пори.стого материала с по ледующей инкубацией. Однако известный способ является трудоемким и обладает недостаточной воспроизводимостью. Целью изобретения является упроще ние способа. Эта цель достигается тем, что в качестве пористого материала исполь зуют 10 - 20%-ный полиакриламидный гель, содержащий акриламид и бисакриламид в соотношении 40 - 81:1-2, который инкубируют в диализуемом бу фере в течение 2 - 12 ч, а затем проводят инкубацию диализуемой жидкости в течение 2 - 6 ч. Пример. Готовят раствор 1, для этого берут 40,8 г акриламида и 1,1 г бисакриламида, растворяю в 200 мл 20%-ного раствора сахарозы Готовят раствор 2. Берут 0,8 М Трис-НС1 буфер рН 7,0 на 20%-ном растворе сахарозы. Готовят раствор 3. 2,2 мл исходного раствора ТЕМЕЛа растворяют в 20 мл 20%-ного раствора сахарозы. Готовят раствор 4. 1%-ный раствор персульфата натрия на 20%-ном растворе сахарозы. Готовя 10%-ный гель путем смешивания 1,47 мл раствора 1, 1,47 мл раствора 2, 0,03 мл раствора 3 и 0,03 мл раствора 4. Смесь быстро вакуумируют в течение 1,5 - 2,0 мин, разливают по 100 мкл в лунки серологической пластины и сверху заливают по 100 мкл метилцеллюлозы. Полимеризация геля проходит 15 мин. Гель вынимают из лунок пластины, промывают водой в те чение 2 ч в стакане, периодически меняя воду, затем промывают буфером и оставляют в нем на 12 ч. После инкубации гранул геля в буфере каждый гель обезвоживают фильтровальной бумагой, азвешива от, помещаиот в ячейки серологической пластины и прибавляют равный по весу объем водного раствора С-валина или С-тубокурарина. Пластину закрывают пленкой Парафилм. Пробы выдерживают при 1 - 20°С и через определенные промежутки премени из водной фазы отбирают по 50 мкл, наносят на бумажные фильтры и считают в толуольном сцинтилляторе на счетчике Марк-2.

П р и м е р 2. Для приготовления 15%-ного геля готовят раствор 1 путем смешения 61,5 г акриламида и 1,6 г бисакриламидаг и растворяют в 200 мл 20%-ной сахарозы. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.

Примерз. Для приготовления 20%-ного геля готовят раствор 1 путем смешения 31,6 г акриламида и 2,2 г бисакриламида и растворяют их в 200 мл 20%-но сахарозы. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.

Предлагаегллй способ позволяет почать равномерно набухаюспий гель с всокой однородностью пор проще, позволяет работать с большим количество проб, так как не требуется отделения геля от диализуквдего раствора, и дает возможность проводить микродиализ в объеме менее 100 мкл раствора.

Формула изобретения

Способ микродиализа путем помещения диализуемой жидкости в емкость из пористого материала с последующей инкубацией, отличающийс я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве пористого материала используют 10-20%-ный полиакриламидный гель, содержащий акриламид и бисакриламид в соотношении 40-81 : 1-2,5, который инкубируют в диализуемом буфере в течение 2 - 12 ч, а затем проводят инкубацию диализуемой жидкости в течение : - б ч.