Способ получения антибиотического комплекса Советский патент 1980 года по МПК C12D9/00 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается производства антибиотиков.

Предложенные антибиотики новые и способ их получения в патентной и научно-технической литературе не описан.

Целью изобретения является получение антибиотического комплекса общей формулы:

;оосн о он

СНдСНг .«

NlCHjlf

V

з-Т ОL-r-JГ он

о L,

где R - водород (антибиотик мусетамицин)

Нз

О

{антибиотик марцелГ

или

он

oil

ломицин).

10 Эта цель достигается тем, что

штамлм Ас t i nosporang i urn sp. ATCC 31127 выращивают в аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники азота и углерода с последующим делением из культуральной жидкости комплекса и раэлелением его на мусетамицин и марцелломицин.

Кроме того, целевой продукт выделяют экстракцией органическим раст2Q ворителем, несмешивающимся с водой.

А антибиотический комплекс разделяют с помощью гель-фильтрационной хроматографии.

Мусетамицин и марцелломицин допол25 нйтел.но очищают с помо1цью жидкостной хроматографии под высоким давлением.

Штамм АсtiпоSроrangiurn sp.ATCC 31127 получен из образца почвы, взятого в Онтарио (Канада) и депонирован в Американской коллекции типов культур, Бамингтон Д.С. Штамм образует спор нгиаподобное тело (ложный cnopaHr iftJ на конце спорофоры, представляющее собой агломерацию плотно извитой цепи спор. Споры .переплетаются с воздушными гифами. Спорангиеподобное тело и воздушный мицелий.образуются на глюкозо-аспарагиновомагаре, тирозиновом агаре, агаре с дрожжевым и солодовым экстрактом и агаре с овсяной мукой. Споры в телах спорангиевого типа гладкие на поверхности, эллипсо идальные по форме и неподвижные. Первичный мицелий разветвленный, не разделенный перегородками и не об разующий фрагменты. хорошо растет, на большинстве агаровых сред. Культуральные свойства. Сахарозо-нитратный агар. Рост умеренный, субстратный мицелий желтовато-красный, воздушный мицелий скудный, беловатый, пигмент отсутствует. Глюкозо-аспарагиновый агар. Рост хороший, субстратный мицелий от крас новато-оранжевого ,до красного, воздушный мицелий обильныйJ с сероватой листвой, пигмент - отсутствует или красновато-оранжевый. Глицерино-аспарагиновый агар. Рос хороший, субстратный мицелий розовый воздушный мицелий умеренный светлосерый до бледно-розового, пигмент от сутствует или красновато-розовый. Крахмальный агар с неорганическими солями. Рост умеренный, субстратный мицелий красновато-оранжевый до ярко-красного, воздушный мицелий пло хой, зеленоватая листва, пигмент све ло-оранжевый, частично светло-желтый Тирозиновый агар. Рост хороший, субстратный мицелий бурый до красновато-бурого, субстратный мицелий зеленоватая, листва, пигмент темиобурый Агар с солодовым н дрожжевым экст рактом. Рост хороший, субстратный мицелий ярко-красный(Воздушный мицелий умеренный, цвета аероватой листв частично зеленовато-розовой, пигмент светлобурый. Агар с овсяной мукой. Рост умеренный, субстратный мицелий яркий красновато-оранжевый, воздушный мицелий цвета сероватой листвы,пигмент ярко-оранжевый. Физиологические свойства. Оптимальный рост при 28-с. Умерен ный рост при 20-37°С. Медленный рост при , не растет при 10° и . Нитраты восстанавливает, на агаре со снятым молоком образует мицелиаль ный пигмент от ярко-желтовато-красно го до пурпурного цвета. 10%-ний раствор снятого молока не пептонизирует и не коагулирует, о.кра шивает в красновато-оранжевый цвет. Желатин разжижает, меланин образует. Усваивает арабинозу, О-ксилозу, рибозу, L-рамнозу, D-глюкозу, О-галактозу, фруктозу, маннозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, мелабиозу, раффинозу, растворимый крахмал, глицерин, инозит, маннит. Не усваивает 0-арабинозу, малезитозу, целлюлозу, сорбит, фульцит. Антибиотический комплекс получают культивированием штамма Асtimosporanglum sp. АТСС 31127 в аэробных условиях в водной питательной среде, содержащей -усваив.емые источники углерода, например сахарозу, лактозу, мальтозу, маннозу, фруктозу, глюкозу, глицерин и растворимый крахмал. В качестве усваиваемого источника азота используют, например, рыбную муку, пептон, соевую муку, арахисовый порошок, порошок семян хлопчатника или кукурузный экстракт. В среду также вводят неорганические соли, такие как соли натрия, калия, аммония, кальция, фосфата, сульфата, хлорида, бромида, нитрата, карбоната. Выращивание осуществляют при тем(Пературе 20-37-С, предпочтительно при температуре 270с. Среда должна быть слабощелочная. Ферментацию проводят в колбах Эрленмейера или ферментерах разной емкости. Для ферментации в резервуарах получают затравочный материал в питательном бульоне путем инокуляции небольшого объема культуральной среды. Затравку переносят в асептических условиях в резервуар с ферментативной средой. В культуральную среду вдувают стерильный воздух. Получение антибиотического комплекса достигают после инкубации в течение 190-210 ч во взбалтываемых ферментерах. За ходом ферментации следят путем анализа ферментативной среды на воздействие организма, чувствительного к комплексу, например D.pneum oniac, St.pyogefies или S.aureus. Антибиотический комплекс извлекают из ферментативной среды экстрагированием не смешивающимся с водой органическим растворителем, как этилацетат, метилизобутилкетон или н-бутанол при рН 7,5-8,5. Органическую фазу затем фильтруют и высушивают с получением твердого комплекса. Антибиотики мусеттамицин и марцелломицин разде.пяют друг от друга и других компонентов комплекса хроматографией на колонке, заполненного сефадексом LH - 20. Компоненты комплекса затем элюируют из адсорбента подходящим органическим растворителем, таким как хлороформ. Многочнс.ченные фракции со- бирают и при полходящем разведении. определяют их адсорбирующую способность при 490 нм. Полученные величины нанося на график в зависимости от номеров фракций для определения пиков для компонентов элюированных из колонки. Подходящие. фракции соединяют и упаривают с по- лучением отдельных твердых антибиотиков .

Исследуемый организм

Бактерии

Streptococcus pnemoniae

Streptococcus pyogenus

Staphy1ococcus aureus

Staphy1ococcus aureus

Escherichia coli

Escherichia coli

Rlebsiella pneumoniae

Proteus mirabilis Грибки

Минимальные ингибиторные концентрации, лег/мм Компоненты мусетамицин и марцелломицин подвергают дальнейшей очистке с применением жидкостной хроматографии под высоким давлением, в табл. 1 представлен противомикробный спектр мусетамицина и марцеломицина. Таблица 1

LDgQ, дающая острое отравление при внутрибрюшинном введении мышам, составляет 9,8-21,12 мк/кг мусетамицина и 6,35-10,56 мг/кг для марцелломицина Обработка животных ферментативным бульоном, содер кащим антибиотический комплекс, вызывает 73% ингибирования роста опухолей по сравнению с необработанными контрольными опухолями. Антибиотический комплекс и его компоненты мусетамицин и марцелломицин, их соли и смеси оказывают как противомикробное, так и противоопухолевое действие. Препараты могут быть в любой лекарственной форме - таблетках, капсулах, пилюлях, порошках и гранулах, а также жидкие препараты для пероралького введения, такие как растворы, суспензии, сиропы и элексиры. Для применения в качестве антибактериального средства препараты вводят в организм таким образом, что бы концентрация активного ингредиента превышала минимальную ингибиторную концентрацию. Дозировка для применения в качестве противоопухолевого средства для млекопитающего составляет 2,5-10 мг/м при однократной инъекции для марцелломицина и 10-40 мг/м при однократной инъекции для мусетамицина. Способ поясняется следующими примерами. Пример 1. Штамм микроорганизма Actinosporangiurn sp. ( ATCC 31127) выращивают на среде косого агара, содержащей 2 г Б -глюкозы, 20 г овсяной муки, 2 г соевого пептона и 2 г агара в одном литре дистиллированной воды. После вУращивания в течение не менее 6 дней при . 27°С споры переносят в колбу Эрленмейера емкостью в 500 мл, содержащую 100 мл стерильной среды, содержащей 30 гD-глюкозы, 10 г соевой муки, 10 г Фармамедиа и 3 г CaCOj на один литр дистиллированной воды. Полученhyi:; ;супьтуру выдерживают в термостате при 2.1-С во взбалтыгзающем многоярусном смесителе, дел иощем 210 об/ /мин. Через 48 ч 4 млкультуры переносят в колбу Эрлеымейера емкостью 500 МЛ, содержащую 100 мл стерильной продуцирующей среды, содержащей 50 г глицерина, 20 г соевой муки, 10 г арахисового порошка и 10 г CaCQj на один литр дистиллиЕЗОванной воды. Культуру выдерл ивают в термостате при в течение 144 часов, помещенном в устройстве для взбалтывания, производящего 230 об/мин. В этот момент определяют антибиотическую активность культурального и фильтрата, проявляющуюся за счет антибиотического комплекса кислоты.

П р и м .е р 2. Антибиотический комплекс получают в ферментерах со взбалтыванием с применением 48-часоБОй культуры, описанной в примере 1. 400 мл культуры переносят в 10 л стерильной продуцирующей среды, описанной в примере 1, содержащей 0,01% силиконового антипенного средства Ходак Р1, содержащейся во взбалтывателе емкостью 14 л. Взбалтыватель устанавливают в систему ферментеров. Поддерживают температуру , скорость потока воздуха (i л/мин, скорость перемешивания 300 06./МИН. Антипенное средство Ходаг Р1 подают автоматически по мере необходимости для контроля пенообразования. Примерно через 210 ч инкубацию заканчивают, и -в культуральной среде и мицеллии находят антибиотический комплекс. Пример 3. Ферментер-резервуар с 37,8 л стерильной продуцирующей среды (как в п.римере 1) инокулируют 1,89 л вегетативной культуры (полученной по методике примера 1}, и смесь перемешивают с помощью пропеллерной мешалки, делающей 300 оборото в минуту,. осуществляют аэрацию со скоростью 85 л/мин, и смесь выдерживают в термостате при в течение 190 ч. В культуральном фильтрате.и мицелии находят антибиотический комплекс.

Пример 4. Резервуар-ферментер с 3028 л продуцирующей среды (см пример 1) инокулируют 152 л вегетативной культуры (получение см. в примере 1 , перемешиваемой пропеллерной мешалкой, делающей 155 об/мин, аэрируют при скорости подачи воздуха 141,6 л/мин и выдерживают при в течение 190 ч. В этот момент в культуральном фильтрате и мицелии обнаруживают присутствие комплекса.

Пример 5. Весь.ферментативный бульон (7 л) со значением рН 8,1 перемешивают с равным объемом метилизобутилкетона в течение 20-30 мин. Затем добавляют большое количество диатомовой земли в качестве фильтрую цего средства и после тщательного перемешивания смеси ее фильтруют через фильтровальное средство при ва- куумировании. Фильтрат разделяют на две фазы, из которых нижнюю (водную отбрасывают. Органическую фазу упаривают под вакуумом до небольшого объема (50-100 мл),разбавляют Скеллисольвом В и осаждают твердое вещество ярко-красного цвета, которое высушивают под вакуумом с получением 1,9 г комплекса.

Пример 6. Весь ферментативный бульон (8000 л) при pri 8,0-8,5 охлаждгшт до и интенсивно- перемешивают с 3000 л метилизобутилкетона в течение 30 мин при 20-ЗООс. К эмульсии добавляют 360 кг фильтровального средства и смесь интенсивно перемешивают в течение еще одного часа. Затем смесь отстаивают в течение примерно 30 мин, после чего 23002500 л органической фазы декантируют и охлаждают до . Добавляют еще 800 л метилизобутилкетона при перемешивании смеси в течение 20 мин, декантируют после отстаивания в течение 30 мин и смесь соединяют с охлажденной первой фракцией с получением общего объема экстракта 33003400 л. Смесь фильтруют с получением i,B конечном счете 3100-3200 л метилизобутилкетонового экстракта, не содержацдего твердых частиц и нерастворимой водной фазы. Органический экстракт концентрируют под вакуумом при О-Ю-с до окончательного объема 6 л. Полученный концентрат добавляют к 60 л Скеллисольва В с перемешиванием при 20-25°С. Выпавший осадок собирают на нутч-фильтре, промывают 10 л Скеллисольва В и отсасывают с получением 900-1000 г несколько маслянистого и темно-красного аморфного продукта. Полученный продукт перемешивают с избытком эфира, фильтруют через воронку Бюхнера, промывают дополнительным количеством эфира, отсасывают в состоянии и высушивают под вакуумом с получением 351 г аморфного антибиотического комплекса красного цвета.

Пример 7. Сефадекс LH-20, пропитанный в течение 68 ч хлороформом, помещают в колонку, заполненную продуктом Фармасиа SK 25/100 (внутренний диаметр - 25 мм, высота - 100 TvUvi) , снабженную с каждого конца регулируемыми насадками из тефлона. Коло1П у наполняют таким образом, чтобы она оыла полностью наполнена от одного конца до другого с образованием эффективного слоя высотой 90-95 см. Комплекс богеминовой кислоты (500 мг) растворяют в 10 мл хлороформа и вводят в колонку, которую затем .проявляют хлороформом, пропускаем1г;1м сгре-рху вниз со скорое- тью 1 мл/мин. .1 актированную жидкость собирают в виде фракций по 6 мл в сборнике фракций. Образцы, помещенны в пронумерованные пробирки, разбавляют 80-ти кратным количеством хлоро форма и помещают в калориметр Боша при 490 MJU. Отмечают четыре следующие полосы антрациклиновых пигмента: P пробиркиВес после упаривания1-4 5-11 Первая полоса 66 мг 12-14 15-21 Вторая полоса 36 мг 22-35 36-44 Третья полоса 18 мг 4546-57 Четвертая полоса 48 мг 58 Полученные твердые вещества хроматографируют на силикагеле Бринкман на 607254, помещенном на пластины для тонкослойной хроматографии, с применением системы растворителей, содержащей толуол и метанол (80:20) . Первая полоса, как показывают резуль таты тонкослойной хроматографии, отражает комплексную неактивную смесь. Вторая полоса дает характерную оранжево-красную зону с величиной R 0,75. Эта фракция также неактивна, и, как было найдено, она содержит преимущественно пирромицинон. Третья фракция элюирования образует единичную зону с величиной Rj, равной при мерно 0,3. Эта фракция, как было установлено, соответствует .мусетамицин обладающему высокой активностью при испытании на системах лейкемий L-121 и Р-388 у мышей. Последняя полоса да ет зону со значением R, примерно 0,3 и содержит преимущественно марцелломицин. Этот компонент также обладает высокой активностью при испытании на два типа лейкемий у мышей. Хотя как мусетамицин, так и марцелфракцияОписани

0

1-й компонент, смесь , неактивный 6,74 44

2-й компонент, смесь, неактивный 53 впадина - отбрасывают 70

3-й компонент, одно соединение мусетамицин, активный

75

впадина - отбрасывают 110

4-й компонент, смесь, содержащая преимущественно марцелломицин, активный

-2.00 последующие фракции

показано тонкослойной хроматографией

XX преимущественно п -пирримицинон.

XX

4,18

0,385

1,45 0,198

4,03 1,72 ломицин при тонкослой})ой хроматографии дают величину R, , составляющую примерно 0,3, мусетамицин движетсяf немного быстрее. При разделении смеси мусеттамицина и марцелломицина образуются две зоны, весьма близкие по цвету. Пример 8. Стеклянную колонку диаметром 15,2 см и высотой 184 см снабжают у ее основания незабивающимся фильтром, на вершину которого помещают слой стекловолокна, а еще выше круглую пластинку из полиэтилена. Последнюю отрезают до диаметра 14,9 см с целью набухамия в хлороформе. Сефадекс , 8,73 кг перемешивают в течение 3 ч в хлороформе; фильтруют и твердый материал повторно наслаивают хлороформом, после чего отстаивают в течеьиге 16 ч. Смесь затем перемешивают в 15 -пп и загружают в колонку. 30 i- образца комплекса (получение отглсано з примере 6} нагревагот с 1,5 л хлороформа в течение 15 мин, а затем леремешивают в течение 16 ч. После филырования отделяют 7,5 г нерастворенного материала, содержащего некоторое количество активного вещества. Фильтрат вводят в колонку и начинают вести проявление хлороформо:-, подаваемым сверху вниз. В теченне всей операции поддерживают скорость потока хлороформа 16 мл/мин. Перед тем, как цветообразование достигнет дна слоя геля, начальный объем элюента ляет 1445 мл. В этот л омеит собирать фракции по 100 мл,- и эту операцию продоллсают до получения совершенно светлой жидкости (всего 906 фракций) . Равные 1 оличества как.цбй пятой фракции разбавляют и поднергают анализу, как описано в npiiwepe 7, Четыре компонента, способны к разделению, что показано . Т ц а 2 Вес после у париваии я, г

П р и м ер 9. Твердое вещество 421,4 мг, полученное из третьего компонента примера 8, растворяют в избытке кипящего хлороформа, и раствор фильтруют в горячем состоянии через гофрированную фильтровальную Зумагу. Фильтрат кипятят до получени менее 20 мл на паровой бане. Затем к теплому раствору добавляют Скеллисольв В до достижения момента помутнения, после чего добавляют несколько капель хлороформа. После ох лаждения до температуры окружаюгцей среды смесь помещают на ночь в холодильник при -20°С. Собирают кристаллические пластинки ярко-красного цвета и высушивают под вакуумом с получением 358 мг мусетамицина, т.пл. 162-1бЗОс.

Пример 10. Мусетамицин, промытый этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТК) , пропускают через четыре системы колонок jU-СТИРАГЕЛЬ с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы со.скоростью потока 0,7 мл/мин в начале процесса. Производят девять опытов с использов нкем по 100 г. Элюирование записывают с помощью детектора показателя преломления и собирают фракции, дающие основной пик (37,5-45 мин). Осйовную фракцию, взятую из девяти опытов, соединяют иупаривают досуха под вакуумом. Аморфное твердое вещество темно-красного цвета 660 мг растворяют в 22 мл смеси растворителей (45:55) из ацетонитрила и 0,01 М ацетата натрия, рН 4,0. Смесь центрифугируют для удаления небольшого количества .суспендированного материала, и прозрачный верхний слой переносят в за.крытую пенициллиновую склянку. Часть (1,25 мл, примерно 37 мг) раствора темно-красного цвета загружают.в инъектор, а затем образе загружают в колонку. Образец хроматографируют в колонке из нержавеющей стали длиной 1 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной Фенил/ПОРАСКЛОМ В (размеры частиц 3775 мкм). Подвижная фа5а содержит смесь ацетонитрила и 0,01 М ацетата натрия (35:65) с рН 4,0 (скорость потока - 1,9-2,0 мл/мин). Элюирование записывают с помощью регистратора показателя преломления. Фракции собирают с интервалами в 75 с с помощью автоматического сборщика фракций. Собирают фракции в 120 пробирок и колонку промываЕот со скоростью 3,0 MJi/мин метанолом в течение 15 мин, водой в течение 15 м-ин, смесью ацетонитрила и 0-,01 М ацетата нария (35:65) при рН 4 в течение 15 ми Скорость потока снижают до 2,0 мл/ми и систему нейтрализуют за 5 мин пере инъецированием. По 25 мкм элюента ка5кдой пятой пробирки хроматографируют на аналитической системе для оп

ределения состава перед комбинированием пробирок. Аналитическая система содержит колонку из нержавеющей стали длиной 61 см и внутренним диаметром .2,1 мм, заполненную Фенил/КОРАСИЛОМ .(состоит из твердых стеклянных шари-j ков, покрытых одним слоем кремнезема, к которому присоединен дифенилдихлорсилан, размер частиц 37-50 мкм).

Подвижная фаза представляет собой смесь (45:55) ацетонитрила с 0,01 М ацетатом натрия с рН 4., О, при скорости потока 0,7 мл/мин. Элюент записывают с помощью УФ-детектора при 254 нм. Комбина.ию пробирок выполняют на основании анализа хроматограмм. Пробирки 21-120 содержат целевой мусеттамицин. Содержимое этих пробирок соединяют и упаривают под вакуумом (45°С). Остатки темно-красного цвета промывают несколько раз метанолом и дважды по 100 мл дихлорметаном. Остаток затем растирают со 100 мл хлороформа и фильтруют для удаления неорганических солей. Твердый осадок затем упаривают досуха с помощью сухого азота и высушивают под вакуумом с помощью фосфорного ангидрида.

Мусеттамнцин, очищенный по методике , приведенной выше, характеризуется следующими данными:

Кристаллический порошок темнокрасного цвета.

Молекулярная формула: .Молекулярный вес: 715,76.

Элементарный анализ:

Теоретически: С 60,41; Н 6,34; N 1,95.

Найдено: С 60,27; Н 6,59;Kl,99.

Учитывая поправки на присутствие 0,83 воды и 0,83 остатка:

С 60,27,. Н 6,50, N 1,99.

ИК-спектр: Спектр поглощения инфракрасных лучей для мусеттамицина ( гранулы КВг)показывает большие полосы при следующих длинах волн: 3480, 2970, 2930, 2820, 2770, 1735, 1600, 1450, 1320, 1295, 1220, 1160, 1010 и 990 см

УФ-спектр: При концентрации 0,013 г/л в метаноле мусеттамицин показывает с.педующие максимумы поглощения: 233 MJU, 57,7, 256 ми, 33,2, 284 MJJ, 14,5, 466 MJJ, 14,3, 490 мд(, 17,4, 510 мр, 14,6, 524 MJJ, 12,9 и 570 мМ, 3,3.

Т. пл. 210-2120С.

Растворим в большинстве органических растворителей, нерастворим в воде, алифатических углеводородах и эфире.

Пример 11. Неочищенный марцелломицин, промытый ЭДТК, подвергают начальной очистке с применением системы из четырех колонок -СТИРАГЕЛЯ при использовании хлороформа в качестве подвижной фазы. Скорость потока для такого разделения составляет 0,6-0,7 МП/мин, и Элюирование записывают с помощью детектора показателя преломления. Производят 10 проходов по 100 мг, ив каждом случае 1робирают фракцию, элюирование которо происходит за 26-32 мин. Основную фракцию из 10 пропусканий соединяют и упаривают досуха под вакуумом. Аморфное твердое вещество темно-крас ного цвета разделяют на 25 фракций по 30-35 мг. Каждую фракцию растворя ют в 1,0 мл смеси (45:55) ацетонитрила и 0,01 М ацетата натрия (рН 4,O непосредственно перед загрузкой в хр матографическую систему, представляющую собой колонку из нержавеющей стали размером 1 м х4,6 мм,заполненн Фенил/ПОРАСИЛОМ В (содержит совершенно пористый кремнезем с жидкой фа зой из дифенилдихлорсилана, химическ связанного с кремнеземом (размеры частиц - 37-75 мкм). Подвижной фазой является смесь (45:55) ацетоннтрила и 0,01 М ацетата натрия, рН составляет 4,0, скорость потока 3,0 мл/мин Элюирование записывают с помощью монитора разности показателей преломления. Фракции собирают с интервалом 1,О минуты с помощью сборщика фракци М 1. Содержимое 59 пробирок собирают и колонку промывают со скоростью потока 4,0 мл/мин ацетонитрилом и в течение 15 мин подвижной фазой перед инъецированием. Элюенты, содержащився в каждой пятой пробирке, хроматографируют на аналитической системе, после чего содержимое пробирок соединяют. Ан алитическая система пре ставляет собой колонку из нержавеющей стали длиной 61 см и внутренним диаметром 2,1 мм, заполненной Фенил /КОРАСИЛОМ (содержит твердые стеклянные шарики, покрытые одним слоем кремнезема, к которому химически при соединен дифенилдихлорсилан(размер частиц - 37-50 мкм). Подвижная фаза содержит смесь (45:55) ацетонитрила с 0,01 М ацетатом натрия (рИ 4,0}, скорость потока 0,68-7,0 мл/мин. Элюирование записывают с помощью УФ-детектора при 254 ммкм.В эту систему инъецируют 25 мл элюеита. Комбинацию пробирок производят на основании аналитических хроматограмм. В общем, как было установлено, пробирки 18-35 содержат исключительно целевой марцелломицин. Содержимые этих пробирок соединяют и упаривают досуха под вакуумом при . Остаток быстро промывают метанолом и дважды по 100 мл дихлорметана. Остаток растирают с 75 мл дихлорметана и смесь отфильтровывают. Фильтрат упаривают под вакуумом (45°С) досуха. Ярко-красный остаток затем высушивают в высоком вакууме над фосфорным ангидридом. Марцелломицин после описанной выше очистки характеризуется следующими данными: Аморфный порошок темно-красного ивета. Молекулярная формула: C SS -IT Молекулярный вес: 845,90. Элементарный анализ: Теоретически: С 59,64; Н 6,55; N 1,65; о 32,15. Найдено: С 56,32; Н 6,64; N1,74. Поправка на воду и.остаток: С 58,77;-Н 6,77; N 1,82. ИК-спектр: Спектр поглощения инфракрасных лучей для марцелломицина (гранулы КВг) показывает большие полосы со следующими длинами волн: 3450, 2960, 2940, 2820, 2790, 1730, 1615, 1600, 1450, 1260, 1095, 1010 и 800 см. УФ-спектр: При концентрации 0,013 г/л в метаноле марцелломицин показывает следующие максимумы и адсорьционные способности: 233 Mf(, 47,5, 256 мм, плато, 24,7; 284 M|J, плато, 10,6; 490 м/х, 15,8; 410 MjL), плато, 3,4; 4,65 Mju, плато, 13,2; 480 м ц, плато, 14,7; 510 м|а, плато, 12,5; 524 м|ц, плато,, 10,6; 580 MjD, плато, 1,1. Точка плавления: размягчение при 134-135- С, постепенное загустевание без плавления при температуре до 300°С. Предлагаемый способ позволяет получить антибиотический комплекс, содержащий антибиотики марцелломицин и мусеттамицин, обладающие противоопухолевым действием. Формула изобретения 1. Способ получения антибиотического комплекса общей формулы СООСИ О ОН Р ОН О ОН СНзу н I К(СНз)2 J U-r-г он о где R - водород (антибиотик мусеттамицин) (антибиотик марцелломицин ,

отличающийся тем, чточеским растворителем, несмешивающимся

штамм Асtinosporang urn sp. ATCC 31127с водой.

выращивают в аэробных условиях в пи- 3, Способ по п. 1, отличаютательной среде, со, источникищ и и с я тем, что антибиотический

азота и углерода с последующим выде-ко «7лекс разделяют с помощью гельлением из культуральЕЮй жидкости ком- „Фильтрационной хроматографии, плекса и.разделении его на мусета мацин 4 Способ по п. 1, отличаюи марцелломицин.щ и и с я тем, что мусетамицин и

ю щ и и с я тем, что целевой про-с помощью жидкостной хроматографии

дукт выделяют экстракцией органи-под высоким давлением.