Способ получения 14 @ -оксиандрост-4-ен-3,17-диона Советский патент 1988 года по МПК C07J13/00 

;п Изобретение относится к усовершен ствованному способу получения 14 е6оксиандрост-4-ен-З,17-диона формулы он который находит применение в синтезе гормонов. Известен способ получения 14с6-ок сиандрост-4-ен-З,17-диона, заключающийся в том, что 14 ei.-оксикортексолон подвергают взаимодействию с висмутатом натрия в разбавленной уксусной кислоте. Выход целевого продукта - 73%. Однако, используемое в зто способе исходное вещество - 14е6-оксикортексолон малодоступен, так как он является побочным продуктом произ водства 11 ft -оксикортексолона и выход его не превышает 5-10%. Известны также способы микробиоло гического 14 о6-гидроксилирования анд рост-4-ен-3,17-диона. Так, под дейст вием культуры Absidia orchidis образуется смесь 6, -7oL, -lloi.- и 14о(,оксипроизводных, однако в ней преобладает продукт 7(х:.-оксистероид. Наиболее близким к описьш.аемому является способ получения 14о6-оксиандрост-4-ен-З,17-диона, заключающийся в том, что андрост-4-ен-З,17дион подвергают гидроксилированию с использованием культуры M.grisco-cya nus в водной среде при температуре . 25-28 С. Выход целевого продукта 10%. Недостатком этого способа является низкий выход целевого продукта. Цель изобретения - повышение выхо да целевого продукта. . Поставленная цель достигается опи сьшаемым способом получения 14с -оксиандрост-4-ен-3,17-диона, заключающимся в том, что андрост-4-ен-З,17дион при концентрации 0,5-1,5 г/л подвергают микробиологическому гидро ксилированию с использованием культу ры Curvularia lunata в водной среде при температуре 27-28°С. Выход целевого продукта -35-70%. Андрост-4-ен-З, 17-дион пре.дпочтительно используют в виде раствора в спирте или диметилформамиде. Отличительным признаком способа является использование культуры Curvularia lunata и андрост-4-ен-З,17диона в концентрации 0,5-1,5 г/л. Следует отметить, что только в пределах указанной концентрации соединения процесс .протекает однозначно. Увеличение концентрации исходного соединения приводит к снижению выхода и качества продукта. Следует отметить, что культура Curvularia lunata ранее использовалась только для II |3-гидроксилирования соединений прегнанового ряда, например кортексолина и 16|1 -метилкортексолона. Использование этой культуры для гидроксилирования соединения адростанового ряда в литературе не описано и полученный эффект при этом является неожиданным. Пример 1. Культуру Curvularia lunata поддерживают на агаровых косяках. 1 мл водной суспензии мицелия вносят в колбу емкостью 0,5 л со 100 мл водной среды (рН 6,0-6,1) следующего состава, г/л: Сахароза 30 . Дрожжевой автолизат2,5 Азотнокислый натрий2 Фосфорнокислый аммоний двузамещенный3Фосфорнокислый: калий двузамещенный1Хлористый калий 0,5 Сернокислый магний0,5 Выращивание мицелия проводят на качалке (220 об/мин) при 27-28 С. Через 30 ч выращивания мицелия в колбу емкостью 0,5 л со 100 мл среды того же состава переносят стерильно 3 мл культуры и продолжают выращивание мицелия Curvularia lunata еще в течение 24 ч. Затем переносят по 7 мл выросшего мицелия в каждую из 30-ти колб (емкостью 0,5 л) со 100 мл среды указанного состава, далее продолжают вьфащивание культуры в течение 24 ч, после чего мицелий из каждой колбы отделяют от среды фильтрованием, промывают стерильным фосфатным буфером (рН 6,0-6,1) и переносят в колбу (емкость 0,5 л) со 100 мл стерильного фосфатного буфера.

Затем в каждую колбу вносят по 2 мл раствора андрост-4-ен-З,17-диона, приготовленного растворением 3 г (0,0105 г/м) в 60 мл этанола.

Гидроксилирование проводят при 2728 С.

Контроль за ходом гидроксилирования осуществляют методом ТСХ на пластинках силуфола UV 254 с использованием системы хлороформ-ацетон-циклогексан (6 ;3:1). Гидроксилирование ведут до исчезновения исходного вещества. Через 40 ч встряхивания объе-диненную культуральную жидкость (3л) вместе с промывными водами тризеды экстрагируют хлороформом (1,7 л, 0,9 л, 0,9 л). Хлороформный экстракт промьшают водой (3x0,5 л), сушат сульфатом натрия и упаривают, получают 3,6 г продукта в виде масла, которое после кипячения с гексаном (2x10 мл)

кристаллизуется, отделяют 2,2 г (70%) целевого продукта, т.пл. 250-252 С (из метанола) ПЗ ()%п. i Пример 2.В условиях примера 1 с использованием культуры Curvularia lunata и 40 мл раствора, приготовленного из 2 г ( г/м) исходного вещества и 40 мл этанола, проводят гидроксилирование и прёрьшают его через 66 ч, когда в среде еще имеется исходный стероид. Вьвделение целевого продукта проводят в условиях примера 1. Выделяют 1,6 г продукта в виде масла, которое обрабатывают, как описано в примере 1, Получают 0,74 г (35%) целевого продукта, т.пл. 245247С (из метанола), М +166(С-1, спирт). Мицелий промывают хлороформом. По данным ТСХ экстракт содержит исходное вещество и небольшое количество целевого продукта.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 14о6-ОК- СИАНДРОСТ-4-ен-3,17-ДИОНА формулыР'.xsL_^rtV^о^^-'^бнпутем микробиологического гидроксиг лирования андрост-4-енч'—3,17-диона в водной среде при температура 27- 28''с, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, процесс проводят с использованием культуры Curvularia lunata при концентрации андрост-4-ен- 3,17-диона 0,5-1,5 г/л.2. Способ ПОП.1, отличающийся тем, что используют раствор андрост-4-ен-З,17-диона в спирте или диметилформамиде.(Л