Способ выращивания актиномицетов Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 C12P1/06 

(5) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ АКТИНОМИЦЕТОВ

Изобретение относится к микробиологии , в частности к способам выращи вания актиномицетов. Известен способ выращивания актииомицетов на питательной среде. Стимуляция роста достигается тем, что посев выдерживают в магнитном поле окол двух недель lJ. Недостаток этого способа - его длительность. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту к предлагаемому является способ выращивания актиномицетов на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал, необходимые минеральные сол в условиях аэрации среды. Согласно известному способу культуру продуцента Act.griseus выращивают, на качалке в колбах с питательной средой, содержащей кукурузную муку, крахмал, сернокислый аммоний, хлористый натрий, фосфорнокислый калий, мел и энантовую кислоту разобщения процесса окислительного фосфорилирования) в течение 36 ч. Выращенный посевной материал переносят на засев питательной среды того же состава в посевной аппарат, где культура выращивается при 27±1°С в течение 18-20 ч. Готовый посевной материал переносят в ферментеры со стерильной питательной средой того же состава. Ферментация длится k855 ч 2. Недостатком известного способа является то, что он не обеспечивает получение посевного материала в короткие сроки, протекает недостаточно интенсивно, а выход антибиотика относительно невысок и составляет всего 9бОО мкг/мл. Цель изобретения - ускорение прироста биомассы актиномицетов и интенсификация биосинтеза антибиотика. Поставленная цель достигается тем, что в способе выращивания актиномицетов на питательной среде, со3939держащей кукурузную муку, крахмал и необходимые минеральные соли в условиях аэрации среды, в качестве стимулятора роста используют М-метил-М-нйтро-Й-нитрозогуанидин или N-нитрозоэтилмочевину ja, концентрации соответственно Ь 10 -3-10 мг/л и 1-10 3-10 мг/л. Пример. Выращивают Act, gtiseus шт на синтетичес{кой среде следующего состава,: МаЫОз 0,1; КС 0,05, 0,1; МдЗОд-УНаР 0,05, сахароза 3, водопроводная вода до 100 мл, рН-7,6. Приготовленную среду разливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл, cteрилизуют автоклавированием при 0,8 ат в течение мин. Затем в колбы вносят стерильно раствор N-мeтил-N-нитро-М-нитрозогуанидина в концентрации 2, мг/л, приготовленный

П р и м е р 2, Выращивают Act. griseus шт, P- tZ-IIO аналогичным образом, но в синтетическую среду добавляют раствор N-нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,, приготовленный на фосфатно-цитратном буфере (табл, 1). Наивысшие показатели биомассы при использовании этого стимулятора в концентрации 2,510 мг/л превышают контроль на 130, Степень стимуляции прироста биомассы граничными концентрация х меньше.

П р и м е р 3, Инкубируют Act. griseus шт, Р-42-110 на питательной среде следующего состава,%: кукурузная мука 2,0; крахмал 1,5,

сернокислый аммоний 0,5-0,6; фосфорнокислый калий 0,03i поваренная соль 0,2/ мел 0,5, железо сернокислое 0,025, вода водопроводная до 100,0. Приготовленную среду разливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл, стерилизуют автоклавированием при 1,2 атм в.течение tO мин, затем в колбы вносят стерильно раствор N-метилна фосфатном буфере, и споровую суспензию (или кусочек картофельного агара с культурой) Act.griseus шт. P-tZ-IIO. Засеянные колбы ставят на качалку (220 об/мин) и выращивают при 27t1°C (1 пассаж,). Через 72 ч инкубирования выращенный мицелий передают на засев питательной среды того же состава и следят за накоплением биомассы (11 пассаж.). Количество биомассы определяют общепринятым ве-совым методом. В табл. 1 приведены данные о влиянии нитрозосоединений на накопление биомассы культурой Act.griseus шт, Р-42-110 на синтетической среде. Как видно из табл. 1, количество биомассы продуцента через 2Ц ч культирования во втором пассаже при концентрации стимулятора 2,5-10 мг/л составляет 300%. . Т а б л и ц а 1

-М-нитро-М-нитрозогуанидина в кокцентрации 2,510мг/л и суспензию (или. кусочек картофельного агара с культурой) , Act. griseus . Засеянные колбы ставят на качалку (220 об/мин) и выращивают при С в течение 18-2 ч (вместо положенных 36 ч). Выращенный в колбах посевной материал передают на засев пиАнтибиотикообразование шт. Р-42-ПО при стимулятора в посевную среду

Концентрация

Посевная среда стимулятора, мг/л

Контроль (без стимуля Числитель - использование 18-ча знаменатель - использование 2 материала. Как видно из табл. 2, влияние стимулятора на антибиотикообразование в граничных пределах вызывает меньшую стимуляцию. П р и м е р it. Выращивают Act. griseus шт. P-t2-110 аналогичным

Антибиотическая активность шт. Р- 2-110 Act.griseus при добавлении стимулятора в посевную среду

2172 /i890 956/i 875.

тательной среды приведенного состава в аппарат с посевной средой, где выращивают вегетативный посевной материал в течение 18-20 ч. Готовым посевным материалом засевают колбы с ферментационной средой того же состава. Антибиотическую активность определяют методом диффузии в агар с тесторганизмом Вас.subtil is АТТСС 6633.

Френментационная среда

5295/8960 13110/12820 Т а б л и ц а 2 добавлении го посевного материала, вого посевного образом, на в посевную среду добавляют раствор N-нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,, приготовленный на фосфатно-цитратном буфере. ТаблицаЗ

числитель - использование 18-часового посевного материала, знаменатель - использование 2 -часового посевного материала.

Данные табл. 3 показывают, что при использовании стимулятора в концентрации 2, сокращается срок выращивания посевного материала на 12-18 ч и увеличивается антибиотикообразование на 151%. Граничные концентрации НЭМ оказывают меньшую стимуляцию.

Антибиотическая активность при добавлении с-тимулятора

Концентрация

Посевная среда стимулятора, мг/л

Контроль (без стимуляЧислитель знаменательДанные табл. k показывают, что п внесении стимулятора в посевную сре с культурой шт. 223-70 ФУ увеличива ся антибиотическая активность проду цента на 132 и сокращается срок выращивания посевного материала на 12-18 ч. Таким образом, предлагаемый способ выращивания микроорганизмов с внесением в посевную среду малых 1ДОЗ нитрозосоединений интенсифицирует прирост биомассы и биосинтез антибиотика. Максимальное увеличение биомассы при введении нитрозоП р и м е р 5. Инкубируют Act. griseus шт. 223-70 ФУ аналогичным образомо В посевную среду добавляют раствор М-метил-М-нитро-М-нитрозогаунидина, приготовленный на фосфатном буфере, в концентрации 2,5 Ю мг/л.

Таблица

. 223-70 ФУ Act. griseus посевную среду.

Ферментационная среда использование 18-часового посевного материала, - использование 2 -часо80го посевного материала гуанидина в концентрации 2,5Ю мг/л составляет 300%, а нитрозоэтилмочевины в концентрации 2, мг/л 130%. Максимальное стимулирование процесса биосинтеза антибиотика при внесении нитрозогуанидина в концентрации 2, на ферментационной регламентной среде составляет 135% и при введении нйтрозоэтилмочевины в концентрации 2, 151%Изобретение дает возможность сократить срок выращивания посевного материала на 12-18 ч по сравнению с известным способом.

Формула изобретенияиспользуют N-мeтил-N-нитpo-N-нитpo

Способ выращивания актиномицетовв концентрациях соответственно

на питательной среде, содержащей ку-ЫО - и 1-Ю ЗТСГ мг/л.

курузную муку, крахмал, необходи-S

мые минеральные соли, в условияхИсточники информации,

аэрации среды, отличающий- принятые во внимание при экспертизе с я тем, что, с целью ускорения1. Авторское свидетельство СССР

прироста биомассы актиномицетов и№ 200122, кл. С 12 К 1/06, 196.

интенсификации биосинтеза антибио- °2. Авторское свидетельство СССР

тика, в качестве стимулятооа поста№ 675070, кл. С 12 О 9/00, 1976.

зогуанидин или N-нитрозоэтилмочевину