Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике холеры.
Цель изобретения - повышение точности способа.
Способ осуществляется следующим образом.
Лизогенные бактерии выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-20%, в течение 12-48 ч и затем наносят взвесь на газон индикаторного штамма Vibrio eltor 75.
Учет ведут через -12-14 ч по наличию лизиса индикаторного штамма фагом. При наличии лизиса индикаторной культуры дифференцируют I тип лизогенных штаммов (продуцирующих фаг, устойчивый к мочевине). Отсутствие лизиса свидетельствует о принадлежности штаммов ко II типу (продуцирующих фаг, чувствительный к мочевине).
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Для приготовления раствора мочевины берут навеску 10 г, вносят в 100 мл бульона Мартена (рН 7,6-7,8). Среду стерилизуют кипячением в течение 30 мин и разливают по 2 мл в пробирки. Бульон с мочевиной совершенно прозрачен.
Отсеивают в две пробирки с 2 мл бульона, содержащего 10% мочевины, по одной петле суточных агаровых культур лизогенных вибрионов эльтор 377 и 1540. Выращивают в течение
сл J
00
оо со
12 при 37 С. Готовят плотную питательную среду, содержащую индикаторную культуру вибрионов эльтор 75, для чего 0,2-0,3 мл 4-5-часовой бульонной культуры вносят в 4 мл 0,7%-ного растопленного агара Мартена и высевают на поверхность агаровой пластинки в чашки Петри двухслойным методом. Йа подсушенный газон наносят на расстоянии 5 см друг от друга по одной капле выросших бульонных культур и ставят посевы в термостат при 37°С на 1 сут. Учитывают результаты. вибрионов эльтор 377 образуют зону фаголизиса (I тип), штамм 1540 - не Дает лизиса индикаторной культуры (II тип).
Пример 2. Отсевают в пробир- /ку с 22 мл бульона, содержащего 15%- Ж Чевины, одну петлю суточной агаровой культуры классического холерного вибриона 5281. Посев и учет проводят так же, как в примере 1. Вре- мя контакта с мочевиной 24 ч. Штамм вызывает лизис индикаторной культуры (I тип) .
Пример 3. Отсевают в пробирку с 2 мл бульона, содержащего 20% мочевины, штамм V.eltor 377,, Время контакта с мочевиной 48 ч. Посев и учет проводят, как в примере 1.
Штаммы вибрионов эльтор 377 образуют зону фаголизиса (I тип).
Использование способа позволяет повысить точность дифференциации за счет выявления различий внутри лизо- генных штаммов по свойствам продуцируемых фагов - чувствительных (II тип) и устойчивых (I тип) к мочевине.
Формула изобретения
Способ дифференциации лизогенных штаммов холерных вибрионов путем выращивания исследуемой культуры в жидкой питательной среде с последующим пересевом выросшей культуры на плотную двуслойную питательную среду, один слой которой засеян индикаторной культурой, инкубированием посевов и учетом результатов по хд- рактеру лизиса индикаторной культуры, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, выращивание в жидкой питательной среде проводят в течение 12-48 ч в присутствии tO-20% мочевины и при наличии лизиса индикаторной культуры исследуемую культуру относят к лизогенной, продуцирующей устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса культуру относят к лизогенной, продуцирующей чувствительный к мочевине фаг,
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 | 2004 |
|
RU2268942C1 |
| СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ФАГА VIBRIO MIMICUS | 2008 |
|
RU2375437C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И РЕГИСТРАЦИИ МЕЧЕНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ НА МОДЕЛИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ | 2009 |
|
RU2422520C1 |
| СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ YERSINIA ENTEROCOLITICA | 2011 |
|
RU2460802C1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR 80 - источник умеренного фага ХП серотипа Х гетероиммунной категории | 1989 |
|
SU1631078A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR источник умеренного фага XI серотипа XII гетероиммунной категории | 1989 |
|
SU1623205A1 |
| Способ идентификации VIвRIо аLвеNSIS | 1990 |
|
SU1778188A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRас еLтоR-продуцент умеренного фага П серотипа у1 гетероиммунной категории | 1986 |
|
SU1388423A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR-источник умеренного фага ХШ серовара УП гетероиммунной категории | 1987 |
|
SU1454849A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR - источник умеренного фага х1 серотипа 1х гетероиммунной категории | 1988 |
|
SU1551735A1 |
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике холеры. Цель изобретения - повышение точности способа. Лизогенные культуры холерных вибрионов выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-20% в течение 12-48 ч, затем наносят взвесь на газон индикаторного штамма V.ELTOR-75, засеянного в один из слоев плотной питательной среды. Учет ведут через 12-14 ч по наличию лизиса индикаторной культуры фагом. При наличии лизиса индикаторной культуры определяют лизогенный штамм холерного вибриона, продуцирующего устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса - лизогенный штамм, продуцирующий чувствительный к мочевине фаг.
Составитель А.Завадская Редактор М.Недолуженко Техред М.Ходанич Корректор С.Черни
Заказ 1891
Тираж 497
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
| Микробиология и лабораторная диагностика холеры | |||
| Краткое руководство | |||
| Ростов-на-Дону, 1975, с | |||
| Шкив для канатной передачи | 1920 |
|
SU109A1 |
