Изобретение относится к способу получения новых производных стрепто варицина С, обладакядих ценными антибиотическими рвойствами. Цель изобретения,- получение новых полезных соединений, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм. Поставленная цель достигается путем синтеза новых производных, основанного на известной реакции зтёрифйкации| 1. Способ получения новых производных стрептоварицина С общей формулыгде R - аллил, циклопентил, циклогексил, адамантил, метил, этил, пропил,бутил, пентил гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, тридецил, пентадецил, октадецил, бензил, формилметил,ацетонил, оксибутил, цианопропил, метоксиметил, нитробензил, фенетил, фенацил,формил-. этил, хлорфенацил, метоксифенидйл, фенилфенацил, фуроилметил, теноилметил или карбамоилметил - радикал, заключающийся в том, что соединение (дамаварицин Fc или его оптический изомер атропизодамаварицин ,Fc) ОН О -н СЫэ подвергают взаимодействию с окисью серебра или гидроокисью калия при перемешивании в инертном растворе при комнатной температуре в течение от 30 мин до 5 ч с последующим взаи действием полученной серебряной или калиевой соли соединения формулы 1 с галогенидом общей формулы R-Hal III где R имеет указанные значения, На t галоген в инертной среде при комнатной температуре в течение от 30 мин до 24 Этерификацию проводят следутощи образом. Исходный продукт, отвечающий фор муле (П.), растворяют или диспергируют в растворителе и в раствор или дисперсию добавляют приблизительно 0,5-5 моль-экв. окиси серебра или гидроокиси калия, после чего смесь тщательно перемешивают при комнатно температуре в течение от 30 мин до 5 ч для получения соли серебра или калия. Затем проводят реакцию соли сере ра или калия с галогенидом формулы R-Hal, где значения R определены, Hal - ггшоген, в приемлемом раствор теле . . Класс приемлемых галогенидов фор мулы (111) включает в себя хлориды, бромиды и иодида. В качестве растворителя предпочт ,тельно использовать инертный в реак щионных условяих растворитель, в частности метанол, этанол, ацетон, 1,2-да1метокоиэтан и тетрагидрофуран. Указанную реакцию обычно проводят при комнатной температуре, прич продолжительность реакции зависит от галогенида формулы (Л1) и составляет приблизительно от 30 мин до 24 ч. Таким образом, новые производные стрептоварицина С формулы ()) .получают этерификацией фёиольной ги роксилъной группы в положении 19 . исходного продукта, которалй отвечает формуле (It). Выделение и очистку целевого сое динения формулы (1) можно прюводить обычными способами. Например, nr /:aie завершения реакции реакционную сгдас фильтруют через целит с отделением галогенида серебра, затем фильтрат концентрируют и сушат при. 35-45 С в , остаток растворяют в органиуерком растворителе, а полученный йродукт очищают хроматографической обработкой и/или перекристал лизацией. Новые производные стрептоварицина С формулы (I) представляют собой жел тые или желтовато-оранжевые кристаллические соединения, которые практически не растворяются в воде, но растворимы в органических растворителях, в частности в метаноле, этаноле, ацетоне, галоидированных углеводородах, сложных эфирах, диэтиловом эфире, тетрагидрофуране, диоксане, 1,2-диметоксиэтане, диметилсульфоксиде, диметилформамиде и бензоле. В том случае, когда соединения (1) обрабатывают восстановителем, в частности гидросульфитом, дитионитом, смесью цинка с уксусной кислотой или аскорбиновой кислотой, окраска изменяется на бледно-желтую, однако такие продукты можно легко превращать в целевые соединения (i) путем их введения в контакт с кислородом, воздухом или окислительным агентом, в результате чего окраска продуктов изменяется на первоначальную (желтую или желтоватооранжевую) . Конверсию целевых соединений (I) в их соли щелочных металлов можно проводить без каких-либо затруднений, причем водные растворы таких солей обладают практически нейтральной реакцией. Используемые в качестве исходного материала соединения формулы (li) представляют собой стрептоварициновые производные, называемые дамаварицинами. Новые производные стрептоварицина С формулы (I) обладают способностью ингибировать обратнотрагнскриптазную активность РНК опухолевого вируса, являющегося вирусом мышиной саркомы. Установлено, что обратнс транскриптазная активность РНК опухолевого вируса имеет непосредствен ное отношение к канцерогенному перерождению клеток животных, поскольку реверсивная транскриптаза является ферментом, необходимым для саморазмножения опухолевого вируса РНК. Производные стрептоварицина С формулы (11) также обладают способностью ингибировать процесс очагового образования почечных клеток в рганизме .крысы, вызываемой вирусом мышиной саркомы. Острая токсичность новых производных стрептоварицина С формулы (I) характеризуется зггметно низким уровнем. Напршу ер, для лялшей 10 р19-0-метиового соединения формулы (1) превышает 1000 мг/кг при внутримышечном введении и свыше 3000 мг/кг при введении через рот. Новые производные стрептоварицина С формулы (I) могут быть использованы в сбчетании с любой добавкой, днако предпочтительно их использовать S виде композиции, приготовленной смешением с твердой или жидкой органической или неорганической добавкой . Класс приемлекых добавок включает в себя воду, желатин, лактозу, крахмал, целлюлозоглюконат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, стеариновый спирт, стеарат магния, тальк, растительное масло, бензиловый спирт, пропиленгликоль, камель, полиалкиленгликоль, белое минеральное масло, 5 желатин и холестерин.
Такие компоненты могут быть приготовлены в различных формах, в частности в виде таблеток, гранул, покрытых слоем сахара, суппозиторий, 10 пилюль, капсул, растворов, суспензий, ампул, эмульсий и препаратов для инъекций, путем введения соответствующей добавки, например консервантов, стабилизаторов, смачивающих аген-15 тов, эмульгаторов, ускорителей растворения , солей, регулирующих осмотическое давление, буферов., связующих материалов; суспендирующих и диспергирующих добавок, а также смазочных 20 добч1вок при осуществлении обычных процессов. П р им е р 1. 19-0-метильное
соединение.
3 40 мл метанола растворяют 25 350 мг атропизодамавариципа Fc (содержащего приблизительно 25% дамаварицина FC) ив раствор добавляют 176 мг окиси серебра, после чего смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч для получения серебряной соли исходного продукта.
В полученную реакционную смесь
затем добавляют 2 г йодистого метила и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин,
а образовавшийся осадок йодистого серебра отделяют фильтрованием через целит с последующим концентрированием и сушкой при пониженном давлении с 40 получением красного маслоподобного продукта. Маслоподобный продукт пердкристаллиэовывают из смеси этанола с н-гексаном в соотношении 1:1 с получением 254 мг оранжевато-желтого кристал- 45 лического продукта, представляющего собой 19-0-метилатрапизодамаварицин F.C (содержащий 19-0-метилдамаварин FC).
Температура плавления 210-212с. 50 Данные элементного анализа.
Найдено, %: С 60,50, Н 6,42, N 1,72%.
СэтЧ 5 0 а-2Н2.0
Вычислено, %: С 60,72,- Н 6,74 N 1,91
ИК-спектрограмма (карбонильный диапазон), л КВг ( 1740; 1728 1670; 1650; 1625.
Масс-спектрографический- анализ: т/е 695 (молекулярный ион), 677 J 659; 643, 641; 625 623.
I . Ультрафиолетовая спектрограмма, :AniaiCH,,OH нм; 218; 265; 417.
ЯМР-спектр:(ГС1 OH( (S) и 11,845 (S)i(fco -МН(ч//«лм)7,б71 (S) и 7,954 (5),сГ оС,р-ОСШ ч/мли)В,7б9 (S) и 3,862 (S).
П р и м е р 2. 19-0-бензильное соединение.
В 20 МП метанола растворяют 200 мг атропизодамаварицина Fc (содержащего приблизительно 25% дамаварицина. Fc) и добавляют в раствор 100 мг окиси серебра, после чего смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Полученную суспензию сер бряной соли концентрируют и сушат прц пониженном давлении, после чего остаток суспензируют в 20 мл тетрагидрофурана, добавляют 800 мг бромистого бензила и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч. Образовавшийся осгщок бромистого серебра отделяют фильтрованием через целит, а фильтрат концентрируют и сушат при пониженном давлении. Осадок растворяют в небольшом количестве хлороформа и добавляют большое количество н-гексана, в результате чего получают желтовато-коричневый осадок сырого целевого соединения. Сырой продукт пропускают через хроматографическук колонку с силикагелем и элюируют с нее 5%-ным раствором метанола в хлороформе,
Соответствующие фракции собирают и концентрируют припониженном давлении , а остаток перекристашлизовывают из смеси хлороформа с н-гексаном в соотношении 1:1 с получением 90 мг желтого кристаллического продукта, представляющего собой 19-0-бензилатропизодамаварицин FC (содержащий 19-0-бензилдамаварицин FC).
Температура плавления 149-151 0.
Данные элементного анализа.
Найдено, %: С 66,80; Н 6,59 N 1,60
C4jH49NOii
Вычислено, %: С 66,91, Н 6,40, N 1,81 .
ИК-спектрограмма (карбонильный ;диапазон).
кВг, 1740; 1725; 1680; 1675; 1645; 1625.
Масс-спектрографйя, т/е 771 (молекулярный ион) 753, 735, 719; 701; 681,- 663; 645; 629,- бЮ.
55
Ультрафиолетовая спектрограмма: A CHjOH), им,211; 263; 410. П р и м е р 3. В 50 мл метанола растворяют 34.0 мг атропизодамаварицина FC (содержащего приблизительно 60 25% дамаварицина FC),B раствор добавляют 36 мг карбоната калия и смесь перемешивают при комнатной тем ;пературе в течение 1 ч с получением
калиевой соли. Реакционную смесь 65 концентрируют и сушат при пониженном давлении, а остаток высушивают в вакууме в течение 20 ч, после чего высушенный продукт суспендируют в 50 мл ацетона и добавляют в суспензию 600 мг иодацетальдегида. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч и -KQHцентрируют, затем высушивают при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате, после чего раствор последовательно промывают 0,5 н. раствором соляной кислоты, водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия, а затем высушивают над безводным сульфатом натрия в течение ночи. Далее раствор концентрируют и сушат при пониженном давлении. Оставшийся красный маслянистый продукт элюируют из хроматографической кблонки с силикагелем после пропускания через нее 10%-ного раствора метанола в хлороформе.
Соответствующие фракции собираю и концентрируют при пониженном давлении, а оставшийся оранжеватокрасный маслянистый продукт перекристалл из овывают из смеси этанола с н-гексаном в соотношении 1:1, в результате чего получают 153 мл оржевато-желтого кристаллического прдукта, представляющего собой 19-0-формилметилатропизодамаварицинFC (сйдержащий 19-0-формилметилдамаварицин Fc).
Температура плавления 211-213с
Данные элементного анализа..
Найдено, %: С 59,71; Н 6,37,tv/ 1,75/.
CjgH,NO,
Вычислено, %; С 60,70; Н 6,50; f4 1,84.
ИК-спектрограмма (карбонильный диапазон), л КЗг (см) ,4738; 1725 1680; 1673/ 1647; 1625.
Протонная HMP-cneKTporpaMr/ia . (100 мгГц, CDCU ) -ЗГСНоСч./млн,) д,,.60 (5)и 9,80 TS) . . Ультрафиолетовая спектрограмма: , нм: 218, 265; 420.
В соответствии с вариантами осуществления предлагаемого способа, которые описаны в примерах 1-3, получают другие производные стрептварицйна С, отвечающие общей формуле XI), которые перечислены в та
П р и м е р 35. Соединение 19-6-н-децил.
В 40 мл метанола растворяют 400 мг антропизодамаварицина Fc (содержащего примерно 25% дамаварицина FC) и добавляют 240 мл окиси серебра, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч с получением соли серебра исходного материала.
К реакционной смеси добавляют 2 г н-децилйодида и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, осадок в виде йодида серебра отделяют фильтрованием через целит, а фильтр упаривают досуха при пониженном давлении с получением масляного продукта красного цвета. Масляный продукт очищают хроматографией на силикагеле, злюируя 5%-ным метанолом в хлороформе.
Нужные фракции собирают, концентрируют под вакуумом и остаток перекристаллизовывают из смеси хлороформ- н-гексан с получением 180 мл желтого «кристаллического продукта, представляющего собой 19-0-н-децилатропизодамаварицин Fc (содержащий 19-0-н-дециламаварицин Fc).
Температура плавления 138-141 С. Элементный .анализ.:
Найдено, %: С 67,60; Н 7,91;
1,65.
N
г
Вычислено, %: С 67,2i; Н 7,73;
1,73.
N
ИК-спектр, -V КВг(см ):1740 1726; 1675; 1645; 1625.
УФ-спектр;Лу«с1хСН ОН ,(нм 218; .
. Йасс-спектр: т/е 822 (молекулярный ион); 804; 786, 770,- 768-, 752, 750.
Спектр протонного ЯМР (100 МН2, СОС13 ) , i CL ОН (чЛшн) П,59 (S) И 11,76 (S).
П р и м е р 36. Соединение 19-0-ацетонил.
К раствору 1,36 г атропизодамаварицина FC (содержащего примерно 25% дамаварицина Fc) в 100 мл метанола добавляют 2,32 г окиси серебра и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч с получением соли серебра исходного материала.
К реакционной смеси добавляют 3 г бромацетона и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч осадок бромистого серебра отделяют фильтрацией через целит и фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении с получением масляного продукта красного цвета. Масляный продукт перакристаллизовывают из ацетона -н-гексана с получением 474 мг желтого кристаллического продукта, представляющего собой 19-0-ацетонилатропизодамаварицин . Fc (содержащий 19-0-ацетонилдамаварицин Fc).
Температура плавления 193-195,С.
Элементный ансшиз.
Найдено, %: С 61,30, Н 6 ,24 ; N 1,62
S9 47NOi -H20
Вычислено, %: С 61,81; Н 6 , 78, N1,84.
НК-спектр, -af KBrcM : 1737, 1680 1670; 1640; 1625. УФ-спектрЛ vCH,OH нм: 217; 2б5 418.. Масс-спектр: т/е 737 (молекулярный ион); 719; 701,- 685; 683; 667; 665, Протонный ЯМР-спектр (100 MHZ, COCij . -ЗГ Ci-, ОН (ч./млн.) 11,85 (S) и 11,60 (S) П р и м е р 37. 19-0-Фенациловое соединение. К раствору 200 мл атрапизодамава рицина FC (содержащего примерно 25% дамаварицина Fc) в 20 мл метанола добавляют 100 мг окиси серебра |И смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа с получением соли серебра исходного iматериала. Затем к смеси добавляют 750 мг фенацилбромида и перемеигавают при комнатной температуре в течение 6 ч осадок бромистого серебра удаляют путем фильтрации через целит, и -фильтрат упаривают под вакуумом с .полученим красного маслянистого продукта. Маслянистый продукт очищают при помощи силикагелевой хроматографии с элюированием 5%-ным метанолом в хлороформе. Нужные фракции собирают и упаривают при пониженном давлении, остаток перекристаллизовывают из системы этилацетат-н-гексан с получением 168 мг оранжевого кристалличес кого продукта,представляющего собой 19-0-фенацилатропизодамаварицин FC (содержащий 19-0-фенацилдама варицик FC). Температура плавления 189-191 С. Элементный анализ. , Найдено, %: С 64,49; Н 6,05; N 1,76. V г Вычислено, %: С 64,61 Н 6,28/ N 1,71. ИК-спектр KB г см : 1720, 1680; 16 1642, 1620; 1600, 1580. УФ-спектр,Л. СН.ОН, нм: 248; 263 (плечо); 418. Масс-спектр: т/е (молекулярный ион); 781; 763; 747; 745; 729; 727. П р и м е р 38. 19-0-(2-Теноил)м тиловое производное. К раствору 200 мг атропизодамава рицина FC (содержащего примерно 25% дамаварицина Рс) в 20 мл метанола добавляют 120 мг окиси серебра и смесь перемешивают при комнатной тем пературе в течение 2 ч. Затем к сме си добавляют 750 мг 2-теноилметилбромида и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в т ечение 6 ч, осадок бромистого сере ра отделяют фильтрацией через целит и фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении с получением оранжево-красного масла. Масло очищают при помощи хроматографии на силикагеле, злюируя 5%-ным метанолом в хлороформе. Соответствующие фракции собирают и упаривают при пониженном давлении досуха, остаток перекристсшлизрвывают из этанола, н-гексана с получением 181 мг оранжевого кристаллического продукта/представляющего собой 19-0-(2-теноил/метилатропизо-, дамаварицина Рс (содержащий 19-0-(2-теноил/метилдамаварицин Рс). Температура плавления 191-193 С, Элементный анализ. Найдено, %s С 61,.00, Н 5,73, N 1 .ijS. C.-H. Вычислено, С 61,23, Н 5,99/ N 1 .70. ИК-спектр, v КВг см: 1720, 1680, 1670) 1645) 1627/ 1570. УФ-спектр,Л CHjOH, нм: 211/ 264; 417. п,ох . 5 масс-спектр: т/е 805 Ыопекулярный ион); 787/ 769; 751; 735, 733. Протонный ЯМР-спектр (100 MHZ, соси), (ч,/млн-) 11,85 (S) и 11,63 (S). Способность ингибировать реверсивную транскриптазу у вируса мышиной саркомы определяют следующим обра- . зом. а) Раствор пробы. Метанольный раствор, содержащий каждый активнодействующий компонент в концентрации 6 мг/мп. в) Раствор фермента Раствор, включающий в себя 240 мкг вирусного белка (MLV-melony в 1 мл буферного раствора/ 20 мМ трис-соляной кислоты (величина рН 7,8) 0,1 М хлорида натрия и 1 мМ дитиотерзита (ДТТ), е) Реакционная среда Реакционная среда, содержащая 46 мМ трис-соляной кислоты (величина рН 8,1); 92 мМ хлористого калия , 15,4 мМ хлорида марганца; .0,77 NM .dGTP/ 0,77 MM dGTP, 0,23 мкМ ЗН-ТТР (50 ci мМ); 7,7 мМ DTT и 0,038% NP-40. Реакционную смесь приготовляют путем последовательного смешения (а) 5 мкл с (в) 30 мкл и (с) 65 мкл, после чего смесь подвергают тщательному перемешиванию с выдержкой при в течение 5 мин. Далее реакционную смесь выдерживают при в течение. 60 мин и для прекращения реакции в реакционную смесь добавляют 1 Nir холодного 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Затем смесь выдерживают при в течение 20 мин и нерастворимые компоненты собирают на каждую из ватманских бумаг сорта GP (с)
(куски диаметром 2,5 см) с последующей промывкой 5 мл холодной 5%-ной трихлоруксусной кислотой. Остаток высушивают в печи при 80 С и помещаиот в вирусную склянку, содержащую 10 мл толуольного раствора , который содержит сцинтиллятор РРО-РОРОР, радиоактивность измеряют
с помощью сцинтилляционного спектрометра .
Способность производных стрёптоварицина С, отвечающих формуле (1 ) (300 мкг/мл),ингибировать реверсивную транскриптазу у вируса мышиной саркомы представлена в табл.2.
Таблица 1
Продолжение табл. 1
Плечо.
Метил
Этил
н-Пропил
н-Бутил
н-Пентил
н-Гексил
н-Октил
н-Ундецил
Циклогекс
Аллил
Бензил
Фенация
Ацетонил
JT а б л и ц а
Ингибнрующая способность, %
41 60 52 78 52 60 41 78 45 65 67 50 58 15 95 подвергают взаимодействию с окисью серебра или гидроокисью калия при перемешивании в инертном растворителе при комнатной температуре в течение от 30 мин до 5 ч с Последующим взаимодействием полученной серебряной или калиевой соли соединения формулы II с галогенидом общей формулы ill R - Hal, 586116 где R имеет указанные зиачения, Hat галоген, в инертной среде при комнатной температуре в течение от 30 мин до 24 ч, 5 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1, каррер П, Курс органической химии. Л., Госхимиздат , I960, г, 97-98.
