Способ определения фенола в аллергенах Советский патент 1983 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано на предприятиях по производству биологических препаратов для определения фенола в аллергенах.

ФeнoJ используется в качестве консерванта для инфекционных (туберкулин, орнтйтозный аллерген) и неинфекционных аллергенов и его определение в препаратах является важным, так как фенол относится к группе ядов.

Известен броматометрическийспособ определения фенола в медицинских биологических препаратах, основанный на бромировании фенола и последующем иодометрическом определении избытка брома tljНедостатками этого способа являются его длительность и трудоемкость.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является способ определения фенола в аллергенах путем обработки анализируемой пробы реагентом Фолина в щелочной среде с-последующим измерением оптической плотности полученного раствора 2.

Недостатки указанного способа его сложность и длительность.

Целью изобретения является упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно ;;способу определения фенола в аллергенах измеряют оптическую плотность анализируемой пробы при длинах волн Х 269 нм и А. 290 нм

10 и содержание фенола определяют по их разности.

Способ разработан для определения фенола в неинфекционных аллергенах и туберкулине, представляющих собой

15 коммерческие препараты, при содержании его 2-4 мг/мл. Однако.данный способ можно использовать для анализа любых растворов, в которых содержание 2Q примесей, поглощающих в области Л. 270 нм, не превышает определенных пределов.

Окраска аллергенов колеблетс,я от соломенно-желтой до темно-коричневой, ряд аллергенов (пищевые, тубер25кулин) представляют собой бесцветные препараты.

Сущность способа заключается в следующем.

Анализируемую пробу окрашенного аллергена,содержащую 0,01-0,045 мг/мл фенола фотометрирутот при 269 нм (длина волны, характерная для фенола) и при X 290 нм (длина волны, характерная для окрашенных примесей) . В случае неокрашенных раство ров содержание фенола определяют пр одной длине волны Д 269 нм. Измерение оптической плотности п водят на спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 10 мм против раство ра воды. Концентрацию фенола в ис ходном препарате вычисляют по разно ти оптической плотности, определенной при 290 нмк и Л - 269 нм по калибровочной кривой и рассчитывают по формуле а.ЮО Т lOOOOOO количество фенола, мкг/мл, найденное по калибровочной кривой, разведение препарата в мерной колбе) 100 - коэффициент для пересч та, %; 1000000 - коэффициент для пересчета из мкг в г. Определению фенола мешают примеси поглощающие в области 269 нм Такими примесями в биологических препаратах, в частности, могут быть ароматические аминокислоты, белки, в состав которых эти аминокислоты входят, нуклеиновые кислоты. Воспроизводимость способа +3%, чувствительность 5 мкг/мл, время ан лиза одной серии растворов 15 мин, Приготовление основного стандарт ного раствора фенола. 500 мг дважды перегнанного фенола отвешивают на аналитических весах и растворяют в воде в мерной колбе на 50 мл (10 мг фенола в 1 мл). Раствор хранится в склянке из темного стекла при 4-8®С и может использоваться в течение 1 г. Приготовление стандартного раствора фенола. Стандартный раствор фенола готовят в день определения из осг новного стандартного раствора разведением водой в 100 раз (100 мкг фенола в 1 мл). Построение калибровочной кривой. Из стандартного раствора фенола готовят растворы с концентрацией 10,20, 30,40 мкг/глл. Измеряют поглощение растворов при X 269 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм против контрольного раствора, которым является Вода. Строят график зависимости оптической плотности от концентрации фенола, П р и м е р. Аллерген, содержащий 2-4 мг/мл фенола (0,2-0,4%), разводят в 100-200 раз водой и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-16 при Д. 269 нм и Х 290 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм против контрольного раствора, которым является вода. Находят разность между первым и вторым показателем и, используя ее, по калибровочной кривой определяют концентрацию фенола в разведенном препарате. Концентрацию фенола в исходном препарате (Х,%) вычисляют по формуле а - 100 100 а 1000000100 где а - количество фенола, мкг/мл, найденное по калибровочной кривой. Результаты сравнительного анализа определения фенола в аллергенах, полученные предлагаемым (спектрофотометрическим) и извecтныlv1 (колориметрическим) способами, приведены в таблице.

9894106

Продолжение таблицы

Из таблицы видно, что результаты, полученные указанньоли способами, хорошо согласуются между собой. Однако предлагаемый способ не требует использования реактивов и сокращает время анализа в 2-3 раза в сравнении с известным. Формула изобретения Способ определения фенола в аллергенах с использованием фотометрйрования, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, измеряют оптическую плотность анализируемой пробы при длинах волн Х 269 нм и iH« 290 нм и содержание фенола определ1тт по их разности. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Государственная Фармакопея СССР Изд. X, с. 986. 2.Гавриленкова В.Ю. и др. Разработка методов химического контроля

79894108

биологических препаратов. Определение контроля бактерийных и вирусных префенола в вакцинных препаратах и аллер- паратов, М. , 1978, вып. 4, с. 192генах. Стандарты, штаммы и методы 197 (прототип).