Изобретение относится к способам получения неорганических сорбентов, в частности для хроматографической очистки ферментов, и может быть использовано в медицинской в. микробиологической промьицленностях.
Известен способ получения сорбента для выделения и очистки -биологически активных веществ, в частности альдегидосилохрома. В соответствии с известным способом силохром (с-1, с-2, с-3) смепшвают с хлористым тионилом и кипятят. Высушенный хлорированный силохром з ивают раствором 3,3-диметоксйпропиленмагнийхлоридом в тетрагидрофуране, полученный альдегиДосилохром промывают и сушат.
При пропускании через полученный сорбент раствора белка при 4-б°С изменение концентрации белка прекращается приблизительно через 2 ч Cl3.
Известен также способ получения сорбента для связывания ферментов, включающей обработку пористой основы из группы, вкточающей стекло, силикагель, коллои даый кремнезем, окись алюминия силаном или его производными в виде 0,1-10%-ных растjBOpOB в толуоле, бензоле, ксилоле.
Связывание фермента протекает в течение 1-16 ч 12.
Недостатком известных способов является значительная инактивация фермен:, низкий выход белка на стадии десорбции.
Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ
10 получения сорбента для очистки ферментов , включающий обработку силикагеля марки КСК-3,0 раствором азотнокислого кобальта в амкшачном буферном растворе, содержащем хлористый
15 г1ммоний и амАшак (отношение 1:100) при рН 8. При выдерж: вании раствора в контакте с силикагелем в течение 24 ч получшот продукт с Q соотношением СоО:SiO2 l:1,1 3 3.
Недостатками способа являются невысокие степень очистки и выход фермента на стадии десорбции за счет недостаточной избирательности
25 сорбции в отношении к ферментам, в частности протеолитического гигролитина.
Целью изобретения является повы-. шение степени очистки и выхода фер30мента . Поставленная цель достигается способом, включающим обработку крем кийсодержащего соединения раствором неорганической соли в присутствии аммиачного раствора комплексообразователя,в качестве кремнийсодержа щего сорбента используют силохром С-80, в качестве соли - хлорид каль ция, в качестве комплексообразователя - координационное соединение палладия с риванолом и обработку растворами соли и координационного .соединения ведут при рН 10-11. Полученный сорбент обрабатывают 0,1, н соляной кислотой. Способ осуществляют следующим образом. Силохром С-80 обрабатывают раствором хлористого кальция при рН 10выдерживают в течение нескольких ча сов, затем промывают водой и сушат. Готовят аммиачный раствор коорданационного комплекса палладия с риваноломя и в полученный раствор вносят силохром С-80, обработанный хлористым кальцием, полученный сорбент отфильтровывают, промывают водой и сушат. Высушенный сорбент об.рабатывают соляной кислотой. Пример, Юг силохрома С-80 обрабатывают 200 мл 10%-ного раствора хлористого Ксшьция при рН 10,5 (рН раствора создают 0,1 н ЫаОН) и выдерживают при перемешивании на качалке в течение 10 ч. Затем силохром промывают дистиллированной водой до нейтральных промывных вод и сушат при t . Обрабатывают силохром С-80, активированный ионами кальция, координационным соединением палладия с риванолом. 60 мг комплекса палладия с риванолом растворяю т в 200 мл дистиллированной воды и доводят рН раствора до 10,5 аммиаком. Затем в полученный раствор вносят 10 г силохрома С-80, активированного ионами кальция. Смесь выдерживают при комнатной температуре и постоянном перемешивании 10 ч. Затем сорбент отфильтровывают, промывают водбй до нейтральной реакции и сушат при ;105°С. Высушенный сорбент загружают в колонку и обрабатывают 50 мл 0,1 н соляной кислотой. Затем сорбент от1«ывают дистиллированной водой до нейтральных промывных вод. Результаты использования полученного сорбента приведены в таблице.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ очистки протеолитических ферментов | 1978 |
|
SU942427A1 |
| Биоспецифический сорбент для аффинной хроматографии трипсина | 1978 |
|
SU777041A1 |
| Способ получения сорбента для очистки белков | 1982 |
|
SU1061828A1 |
| Способ получения сорбента для аффинной хроматографии микробных липаз | 1979 |
|
SU935121A1 |
| Способ получения сорбента | 1981 |
|
SU979354A1 |
| Способ очистки микробных липаз методом аффинной хроматографии | 1979 |
|
SU943278A1 |
| Способ получения сорбента для очистки белков | 1982 |
|
SU1060217A1 |
| Способ очистки ферментных препаратов | 1975 |
|
SU551339A1 |
| СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ КОПРОПОРФИРИНА III | 2006 |
|
RU2334511C1 |
| Способ выделения полинуклеотидфосфорилазы | 1981 |
|
SU1076445A1 |
Известный Силохром
С-80
Силикагель 6,50 КСК-Со 6,45
Предло- Силохром женный С-80-Са7,0 -Pd-RiV Из таблицы следует, что сорбент .по предложенному способу резко .йревышает известные по степени очист- з
8,12
22,0 5,2 О
2,0
100
135
13,9 ки и по выходу по активности фермента. Возможно, в данном случае ° металла, связанный с риванолом.
оказывает на активный,ферментный белок специфическое действие, в результате которого меняется конформация белка, что приводит к уве личению его активности. При этом ионы тяжелых металлов, являюищеся ингибиторами ферментов, выступгиот в данном случае в роли активаторов. Исследование поверхностных . свойств образцов сообёнтов, приведенных в таблице, показало, что ;удельная поверхность в результате проведенных кюдификадий остается постоянной и равной удельной поверхности силохрома С-80. Измерения электрокинетического потенциала, т,е. заряда поверхности полученных образцов, показали, что все модаФицированные образцы сорбентов заряжены отрицательно, однако значения электрокинетического потенциала силохрома С-80, насыщенного ионами кальция, модифицированного координационным соединением паллгщия с риванолом и обработанного соляной кислотой, достигли наибольшего значения по абсолютной величине, равного 1,79 мВ, что на порядок превышает значение электрокинетического потенцигша сорбентов, полученных известным способом,,
Формула изобретения 1. Способ получения сорбента для хроматографической очистки ферментов путем обработки кремнийсодержащего соединения раствором неорганической соли в присутствии аммиачного раствора комплексообразователя, отличающийся тем, что, с целыо повышения степени очистки и выхода фермента, преимущественно протеолитического фермента - гигролитина, в качестве кремнийсодержащего сорбента берут силохрсим С-80, в качестве соли - хлорид кальция, в качестве комплексообразователя координационное соединение палладия с риванолом и обработку растворами соли и координационного соединения ведут при рН 10-11.
5
0 сорбент обрабатывают 0,1 н соляной кислотой.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
5
0
361979, кл. С 01 В 33/28, 01.12.69 (прототип).
