ШТАММ CHLAMYDIA PSITTACI, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА КОШЕК И ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 A61K39/118 

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к штамму Chlamydia psittaci, используемому для изготовления инактивированной вакцины против хламидиоза кошек.

Известен штамм Chlamydia psittaci, используемый для изготовления вакцины против хламидиоза кошек (1).

Недостатком данного штамма является то, что изготовленная из него живая вакцина обладает остаточной реактогенностью и, как следствие, не очень высокой иммуногенностью.

Целью изобретения является получение высокоиммуногенного штамма, обладающего незначительной реактогенностью.

Новый штамм Chlamydia psittaci получен из выделенного в 1995 году штамма от больной конъюнктивитом кошки путем его адаптации к культуре клеток McCoy. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко и имеет регистрационный номер Chlamydia psittaci K-1 ДЕП.

Штамм Chlamydia psittaci K-1 ДЕП характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки.

Элементарные тельца округленной формы диаметром 0,2 - 0,3 мкм, ретикулярные - 0,5 - 0,7 мкм, окрашиваются по Стемпу, Маккиавелло и Романовскому-Гимзе.

Окраска по Стемпу придает элементарным тельцам хламидий красно-фиолетовый цвет на синем фоне препарата; по Маккиавелло хламидии окрашиваются в ярко-красный цвет, клетки патологического материала - в светло-синий, ядра клеток - в томно-синий цвет; по Романовскому-Гимзе элементарные включения хламидий приобретают красно-фиолетовый цвет, а ретикулярные тельца пораженной клетки - синий, ядра клеток - бордово-фиолетовый и их цитоплазма - голубой.

Биологические свойства
Штамм Chlamydia psittaci K-1 ДЕП хорошо размножается в желточных оболочках 6 - 7-дневных куриных эмбрионов, в перевиваемой культуре клеток McCoy; титр хламидий при культивировании на указанных биологических субстратах при температуре 36 - 37^oC в течение 40 - 48 часов достигает 10^6,5 ЭИД₅₀/ 0,3 см³.

В культуре клеток McCoy штамм цитопатического действия не вызывает. Штамм пассируется в организме белых мышей при интраназальном, внутрибрюшинном и интрацеребральном заражении.

Штамм сохраняет стабильную инфекционную и антигенную активность на протяжении 15 пассажей.

Антигенные свойства
При интраназальном введении штамм Chlamydia psittaci K-1 ДЕП в организме кошек индуцирует образование антител в титре 1 - 256-512.

Патогенные свойства
Штамм Chlamydia psittaci K-1 ДЕП патогенен для кошек, морских свинок и белых мышей. При заражении культурной штамма у больных животных отмечают явления анорексии, ринита, конъюнктивита, паралича конечностей, а также аборты, рождение мертвых детенышей. Гибель среди больных кошек к 15 - 20 дню достигает 10%; среди морских свинок 20% больных животных погибает на 10 - 15 сутки. Полную гибель белых мышей (100%) устанавливают на 6 - 10 сутки.

Дополнительные сведения о штамме
Свободен от бактериальных, грибковых, микоплазменных и вирусных контаминантов.

Способность штамма к распространению в естественных условиях.

При экспериментальном интраназальном заражении кошек с 5 по 6 сутки происходит выделение хламидий в секретах со слизистых оболочек глаз и носа. Заражение животных в окружающей среде происходит через контакт с больными животными и их выделениями.

Основные условия хранения
Штамм Chlamydia psittaci K-1 ДЕП сохраняет свои биологические свойства в течение одного года при температуре минус 70^oC.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1
На монослой перевиваемый культуры клеток McCoy, выращенный во флаконе емкостью 100 см³, вносят взвесь элементарных телец (ЭТ) хламидий, приготовленных из штамма Chlamydia psittaci K-1 ДЕП. Адсорбцию на монослое проводят в течение 2 часов при температуре 35^oC, после чего во флакон вносят ростовую среду и осуществляют культивирование при той же температуре в течение 48 - 72 часов. После культивирования клеточный слой промывают диспергентом (0,4% раствор тринатрийцитрата) и вносят свежий диспергент, оставляют на 10 - 15 минут до полного отслаивания клеток. Клеточную взвесь осторожно встряхивают в растворе диспергента и оставляют во флаконе на 20 - 30 минут до полной седиментации клеток. Удаляют надосадок, оставляя небольшое количество диспергента для суспендирования клеток, инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci K-1 ДЕП. Суспензию инфицированных клеток подвергают проверке на бактериальную и грибковую контаминации. Устанавливают титр хламидий, равный 10^6,5 ЭИД₅₀/0,3 см³. К полученной суспензии культуры клеток McCoy, инфицированной хламидиями в количестве 99,85%, добавляют формалин в количестве 0,15% и в течение 120 часов при температуре 37^oC проводят ее инактивацию. После тщательного перемешивания вносят адъювант - 3% раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% от объема.

Готовую вакцину расфасовывают по 1 см³ в стерильные ампулы объемом 2 см³.

Вакцина представляет собой суспензию с рыхлым осадком на дне ампулы, при встряхивании легко разбивающимся в равномерную взвесь. Надосадочная жидкость желтовато-розового цвета, осадок - серовато-белый, при встряхивании - сероватая взвесь.

Вакцина сохраняет свои биологические свойства в течение 12 месяцев при условии хранения в сухом, темном помещении при температуре 4 - 8^oC.

Пример 2.

Формируют 4 группы белых мышей живой массой 18 - 20 г по 25 голов в каждой.

Белых мышей 1 - 2 группы прививают подкожно в дозе 0,2 см³ инактивированной вакциной против хламидиоза кошек и пушных зверей из штамма Chlamydia psittaci K-1 ДЕП, приготовленной по примеру 1.

Белых мышей 3 - 4 группы не прививают (контроль). На 15 сутки лабораторных животных 1 и 3 группы заражают подкожно в дозе 0,3 см³ культурой подтитрованного контрольного штамма Chlamydia psittaci K-1 ДЕП с титром 10^6,5 ЭИД₅₀/0,3 см³. Устанавливают заболевание у 5 белых мышей (29%) в 1 опытной группе (незначительное покраснение конъюнктивы) и полную гибель белых мышей (100%) в 3-й контрольной группе.

Аналогично заражают лабораторных животных 2 и 4 группы на 21 сутки после вакцинации. Устанавливают полную гибель белых мышей только в 4-й контрольный группе.

Таким образом использование инактивированной вакцины против хламидиоза кошек и пушек зверей способствует выработке надежного иммунитета у белых мышей на 21 сутки.

Пример 3.

Изучают иммуногенную активность приготовленной по примеру 1 инактивированной вакцины против хламидиоза кошек и пушных зверей на 10 кошках. Для этого формируют две группы животных по 5 голов в каждой. Опытную группу животных прививают вакциной внутримышечно, двукратно, с интервалом 21 сутки, в дозе 1 см³. Контрольную группу животных не прививают. На 21 сутки животных обеих групп заражают интраназально культуральной суспензией хламидий подтитрованного контрольного штамма Chlamydia psittaci K-1 ДЕП с титром 10^6,5 ЭИД₅₀/0,3 см³ в дозе 1 см³.

Устанавливают на 6 сутки явления конъюнктивита и ринита у кошек контрольной группы при их отсутствии у животных опытной группы.

Таким образом, вакцина, изготовленная из штамма Chlamydia psittaci K-1, обеспечивает у вакцинированных кошек 100% невосприимчивость к этому возбудителю.

Пример 4.

Аналогично, как в примере 3 изучают иммуногенную активность приготовленной по примеру 1 инактивированной вакцины против хламидиоза кошек и пушных зверей на 5 опытных и 5 контрольных тхорзофретках.

Устанавливают заболеваемость только среди животных невакцинированной группы с явлениями конъюнктивита и ринита у тхорзофреток.

Таким образом инактивированная вакцина из штамма Chlamydia psittaci K-1 эффективна при профилактике у пушных зверей.

Проведенные испытания показывают, что приготовленная из штамма Chlamydia psittaci K-1 инактивированная вакцина против хламидиоза кошек и пушных зверей является для них высокоиммуногенной и безвредной.

Ипользование инактивированной вакцины против хламидиоза кошек и пушных зверей в ветеринарной практике позволит расширить арсенал высокоэффективных и дешевых биопрепаратов.

Источники информации
1. Mitzel Jr. et al. Vaccination Against Feline Pneumonitis, Am.J. Vet. Res., 1977, 38(9), pp. 1361 - 1364.

Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ВИЭВ им. Я.Р.Коваленко и имеет регистрационный номер Chlamydia psittaci К-1 ДЕП. Вакцина, изготовленная из штамма Chlamydia psittaci ВИЭВ К-1 ДЕП, безвредна для кошек и пушных зверей и обеспечивает у вакцинированных животных 100% невосприимчивость к возбудителю заболевания. Вакцину, содержащую антиген из штамма Chlamydia psittaci ВИЭВ К-1 ДЕП, используют с профилактической целью против хламидиоза кошкам и пушным зверям двукратно, внутримышечно в эффективной дозе.

Штамм chlamydia psittaci ВИЭВ "К-1" ДЕП, используемый для изготовления инактивированной вакцины против хламидиоза кошек и пушных зверей.