ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЧУМНОГО МИКРОБА Российский патент 1997 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к микробиологии, в частности, к питательным средам, и может быть использовано для выращивания чумного микроба при температуре 37^oC.

Известна питательная среда для накопления чумного микроба при 28^o и 37^oC на основе дрожжевого экстракта. (Шеремет О.В. и др. ЖМЭИ 1987, N6, с.18-21). В состав этой среды входит питательная основа, гидролизат казеина или гидролизат мяса по Хоттингеру или гидролизат подсолнечного шрота, а также агар-агар, хлористый натрий и сульфит в разных пропорциях.

К недостаткам данной питательной среды следует отнести: низкие ростовые свойства, обязательное приготовление двух питательных основ, входящих в ту или иную пропись среды, что в конечном итоге увеличивает себестоимость целевого продукта.

Наиболее близкой является питательная среда для выращивания чумного микроба при температуре 37^oC, питательной основой которой служит основной перевар Хоттингера. (Ю.А.Козлов. Питательные среды в медицинской микробиологии, М. Медгиз, 1950, с.52-53, 165-166). Перевар Хоттингера (аминный азот 742 мг%) разводят водой до содержания аминного азота, равного 120-140 мг% К бульону прибавляют 27-32 г агар-агара (предварительно промытого водопроводной водой и сульфитом натрия) и варят при температуре 120^oC в течение 30 мин. Осаждают и отделяют примеси, затем добавляют 20%-ный раствор натрия гидроксида (5-6 г) до pH 7,2-7,3 и вносят натрий фосфорнокислый двузамещенный (1,9-2,1 г). При посеве 1 млрд микр. клеток суспензии чумного микроба штамма EB через 48 ч инкубирования при 37^oC накапливается 94-114 млрд микр. клеток.

К недостаткам данной питательной среды следует отнести: низкие ростовые свойства и ее высокую себестоимость, оба недостатка обусловлены необходимостью проведения предварительной подготовки агар-агара с сульфитом натрия, использованием перевара мяса по Хоттингеру.

Целью изобретения является увеличение ростовых свойств среды при одновременном снижении ее себестоимости.

Указанная цель достигается за счет того, что питательная среда, содержащая агар-агар, хлористый натрий, фосфорнокислый двузамещенный натрий и воду, в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы 20,0-25,0
Агар-агар 15,0-20,0
NaCl 4,0-5,0
Na₂HPO₄ 1,0-1,1
Увеличение ростовых свойств питательной среды обусловлено наличием в самой питательной основе незаменимых для чумного микроба аминокислот, большим содержанием низкомолекулярных пептидов, являющихся стимуляторами роста, и минеральных веществ. Сравнительная характеристика питательных основ представлена в табл. 1. В табл. 2 представлен аминокислотный состав питательной основы, подтверждающий ее качественную полноценность по незаменимым для чумного микроба аминокислотам.

Изобретение позволяет упростить технологию приготовления питательной среды. Кроме того, предлагаемая среда обладает лучшими ростовыми свойствами и для ее производства не требуются дефицитные препараты.

Пример 1. В реактор заливают гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы (или сухой гидролизат) и водопроводную воду до содержания аминного азота (150±10) мг% по расчету. Смесь перемешивают, нагревают до кипения и отбирают пробу для контроля и корректировки аминного азота. В случае необходимости добавляют воду или гидролизат, анализ повторяют. В бульон вводят агар-агар и соли по прописи, нагревают его до кипения и кипятят по полного расплавления агара. Горячую среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH 7,1±0,1 и стерилизуют в автоклаве при температуре 110^oC в течение 20 мин.

Готовая среда жидкость светло-коричневого цвета, не содержащая посторонних включений, с аминным азотом 150± мг% и pH 7,1±0,1.

Пример 2. Приготовление питательной среды из сухого гидролизата. Сухой ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы (20 г) растворяют в 1 л воды, смесь перемешивают и нагревают до кипения. Добавляют 4,0 г хлористого натрия, 1,0 г фосфорно-кислого двузамещенного натрия и 15 г агар-агара. Смесь доводят до кипения при постоянном перемешивании и кипятят до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH, равный 7,1 и стерилизуют в автоклаве при температуре 110^oC в течение 20 мин. В табл. 2 приведены данные по выходу биомассы чумного микроба на известной и предложенной питательных средах.

Пример 3. В емкость заливают жидкий ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы и воду до содержания аминного азота (150+10) мг% по расчету. Смесь перемешивают, нагревают до кипения и отбирают пробу для контроля и корректировки аминного азота. В бульон вводят из расчета г/л смеси: хлористый натрий 5,0, фосфорнокислый двузамещенный натрий 1,1, агар-агар - 20 г. Смесь доводят до кипения при постоянном перемешивании и кипятят до полного расплавления агара. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH, равный 7,1, и стерилизуют в автоклаве при температуре 110^oC в течение 20 мин. В табл. 3 приведены данные по выходу биомассы чумного микроба на известной и предложенной среде.

Использование: микробиология, питательная среда, выращивание чумного микроба. Сущность изобретения: в питательной среде для выращивания чумного микроба в качестве питательной основы используется ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы (20-25 г/л воды), а также агар-агар (15,0-20,0 г/л), NaCl (4,0-5,0), Na₂HPO₄ (1,0-1,1 г/л) и вода. Среда обладает хорошими ростовыми свойствами. 3 табл.

Питательная среда для выращивания чумного микроба, содержащая питательную основу, агар-агар, хлористый натрий, фосфорнокислый натрий двузамещенный и воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы 20,0 25,0
Агар-агар 15,0 20,0
Хлористый натрий 4,0 5,0
Фосфорнокислый натрий двузамещенный 1,0 1,1
Вода До 1 лв