Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для создания функционирующих тирозин-специфических протеинкиназных химер. Сконструированный химерный рецептор включает внеклеточную часть, которая специфически распознает клетку-мишень или инфекционный агент-мишень, трансмембранный домен и внутриклеточную часть, представляющую собой протеинтирозинкиназу Syk человека или свиньи, или протеинтирозинкиназу ZAP-70, или производную от CD28. ДНК, кодирующую химерный рецептор, клонируют в экспрессионный вектор вируса коровьей оспы, которым трансфицируют клетки млекопитающего. Трансфицированные клетки, экспрессирующие два или три различных химерных рецептора, имеющих соответственно внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы Syk и CD28 или внутриклеточную часть ZAP-70, Sre и CD28, вводят млекопитающему в эффективном количестве для разрушения клетки-мишени или инфекционного агента-мишени. Изобретение позволяет разрабатывать средства, способные нацеливать терапевтические клетки на специфическое распознавание и разрушение клетки-мишени или инфекционного агента-мишени. 8 с. и 24 з.п. ф-лы, 19 ил.
1. Способ разрушения клетки-мишени или инфекционного агента-мишени, включающий введение млекопитающему эффективного количества терапевтических клеток, при этом каждая из указанных терапевтических клеток экспрессирует первый рецептор, включающий (а) внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы Syk, включающую аминокислоты 338-630 Syk человека (SEQ 1D NO:5) или аминокислоты 336-628 Syk свиньи (SEQ 1D NO:6), которая передает сигнал указанной терапевтической клетке на уничтожение клетки-мишени, связанной с рецептором, или инфекционного агента-мишени, связанного с рецептором, (b) трансмембранный домен, (с) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень; второй рецептор, включающий (а) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, (b) трансмембранный домен, (с) внутриклеточную часть, производную от CD28.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная протеинтирозинкиназа Syk представляет собой Syk человека.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная клетка-мишень заражена вирусом иммунодефицита и указанная внеклеточная часть указанного первого рецептора и указанная внеклеточная часть указанного второго рецептора включают часть CD4, связанную с оболочкой ВИЧ.4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная терапевтическая клетка уничтожает указанную клетку-мишень, связанную с рецептором, или указанный инфекционный агент-мишень, связанный с рецептором, путем цитолиза.5. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная передача сигнала указанной внутриклеточной частью указанной протеинтирозинкиназы Syk является МНС-независимой.6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная внеклеточная часть указанного первого рецептора и указанная внеклеточная часть указанного второго рецептора включают часть рецептора, способную связываться с лигандом, часть лиганда, способную связываться с рецептором, или часть антитела, способную связываться с антигеном.7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный внеклеточный домен указанного первого рецептора или указанный внеклеточный домен указанного второго рецептора включает CD16.8. Способ разрушения клетки-мишени или инфекционного агента-мишени, включающий введение млекопитающему эффективного количества терапевтических клеток, при этом каждая из указанных терапевтических клеток экспрессирует первый рецептор, включающий (а) внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы ZAP-70, (b) трансмембранный домен, (с) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень; второй рецептор, включающий (а) внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы семейства Src, (b) трансмембранный домен, и (с) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, где указанные протеинтирозинкиназы семейства ZAP-70 и Src совместно передают сигнал указанной терапевтической клетке на уничтожение указанной клетки-мишени или указанного инфекционного агента-мишени, когда каждая из указанных внеклеточных частей указанного первого и второго химерных рецепторов связывается с указанной клеткой-мишенью или с указанным инфекционным агентом-мишенью; третий рецептор, включающий (а) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, (b) внутриклеточную часть, производную CD28.9. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная протеинтирозинкиназа семейства Src представляет собой Fyn или Lck.10. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная клетка-мишень заражена вирусом иммунодефицита и каждая из указанных внеклеточных частей включает часть CD4, связанную с оболочкой ВИЧ.11. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная терапевтическая клетка уничтожает указанную клетку-мишень, связанную с рецептором, или указанный инфекционный агент-мишень, связанный с рецептором, путем цитолиза.12. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная передача сигнала указанными внутриклеточными частями указанных протеинтирозинкиназ семейства ZAP-70 и Src является МНС-независимой.13. Способ по п.8, отличающийся тем, что каждая из указанных внеклеточных частей включает часть рецептора, способную связываться с лигандом, часть лиганда, способную связываться с рецептором, или часть антитела, способную связываться с антигеном.14. Способ по п.8, отличающийся тем, что по крайней мере один из указанных внеклеточных доменов включает CD16.15. Химерный рецептор, включающий (а) внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы Syk, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислот 338-630 Syk человека (SEQ 1D NO:5) или аминокислот 336-628 Syk свиньи (SEQ 1D NO:6), которая передает сигнал клетке, которая экспрессирует указанный рецептор, на уничтожение клетки-мишени, связанной с рецептором, или инфекционного агента-мишени, связанного с рецептором, (b) трансмембранный домен, (с) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, причем указанный рецептор экспрессируется клеткой, включающей химерный рецептор, который включает (а) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, (b) трансмембранный домен, (с) внутриклеточную часть, производную CD28.16. Химерный рецептор по п.15, отличающийся тем, что указанная протеинтирозинкиназа Syk представляет собой протеинтирозинкиназу Syk человека.17. Химерный рецептор по п.15, отличающийся тем, что указанная клетка-мишень заражена вирусом иммунодефицита и каждая из указанных внеклеточных частей включает часть CD4, связанную с оболочкой ВИЧ.18. Химерный рецептор по п.15, отличающийся тем, что указанная клетка уничтожает указанную клетку-мишень, связанную с рецептором, или указанный инфекционный агент-мишень, связанный с рецептором, путем цитолиза.19. Химерный рецептор по п.15, отличающийся тем, что указанная передача сигнала указанной внутриклеточной частью указанной протеинтирозинкиназы Syk является МНС-независимой.20. Химерный рецептор по п.15, отличающийся тем, что каждая из указанных внеклеточных частей включает часть рецептора, связанную с лигандом, часть лиганда, связанную с рецептором, или часть антитела, связанную с антигеном.21. Химерный рецептор по п.15, отличающийся тем, что по крайней мере один из указанных внеклеточных доменов включает CD16.22. Химерный рецептор, включающий (а) внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы ZAP-70, (b) трансмембранный домен, (с) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает клетку-мишень или инфекционный агент-мишень, причем указанный химерный рецептор экспрессируется клеткой, включающей химерный рецептор, который включает (а) внутриклеточную часть протеинтирозинкиназы семейства Src, включая аминокислотную последовательность протеинтирозинкиназы Fyn или Lck, (b) трансмембранный домен, (с) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, где указанные части протеинтирозинкиназы ZAP-70 и семейства Src совместно передают сигнал указанной клетке на уничтожение указанной клетки-мишени или указанного инфекционного агента-мишени, причем каждая из указанных внеклеточных частей химерного рецептора, содержащего указанные части протеинкиназы Zap-70 или семейства Src, связывается с указанной клеткой-мишенью или с указанным инфекционным агентом-мишенью, и химерный рецептор, включающий (а) внеклеточную часть, которая специфически распознает и связывает указанную клетку-мишень или указанный инфекционный агент-мишень, (b) трансмембранный домен, и (с) внутриклеточную часть, производную CD28.23. Химерный рецептор по п.22, отличающийся тем, что указанная протеинтирозинкиназа семейства Src представляет собой Fyn или Lck.24. Химерный рецептор по п.22, отличающийся тем, что указанная клетка-мишень заражена вирусом иммунодефицита, и каждая из указанных внеклеточных частей включает часть CD4, связанную с оболочкой ВИЧ.25. Химерный рецептор по п.22, отличающийся тем, что указанная клетка уничтожает указанную клетку-мишень, связанную с рецептором, или указанный инфекционный агент-мишень, связанный с рецептором, путем цитолиза.26. Химерный рецептор по п.22, отличающийся тем, что указанная передача сигнала указанными внутриклеточными частями указанных протеинтирозинкиназ семейства ZAP-70 и Src является МНС-независимой.27. Химерный рецептор по п.22, отличающийся тем, что каждая из указанных внеклеточных частей включает часть рецептора, связанную с лигандом, часть лиганда, связанную с рецептором, или часть антитела, связанную с антигеном.28. Химерный рецептор по п.22, отличающийся тем, что по крайней мере один из указанных внеклеточных доменов включает CD16.29. ДНК, кодирующая химерный рецептор по п.15, включающая нуклеотидную последовательность, определяющую аминокислотную последовательность химерного рецептора по п.15.30. Экспрессионный вектор вируса коровьей оспы для экспрессии химерного рецептора, включающий ДНК, кодирующую химерный рецептор по п.15.31. ДНК, кодирующая химерный рецептор по п.22, включающая нуклеотидную последовательность, определяющую аминокислотную последовательность химерного рецептора по п.22.32. Экспрессионный вектор вируса коровьей оспы для экспрессии химерного рецептора, включающий ДНК, кодирующую химерный рецептор п.22.
