ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Российский патент 2005 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к биотехнологии и, в частности, к получению питательных сред для культивирования чумного микроба.

Известна питательная среда, следующего состава, г/л: агар-агар - 20,0; пептон - 10,0; хлористого натрия - 5,0; дистиллированная вода до 1 л; 20% едкого натрия до рН 7,2 ("Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования", Биргер М.О., 1972 г., с.49). Недостатком данной среды является ее низкая продуктивность.

Наиболее близкой к предлагаемому изобретению относится питательная среда для культивирования микроорганизмов включающая, г/л: агар-агар - 20,0; гидролиэат говяжьего мяса, содержащий аминного азота 0,12%; натрий хлористый - 5,0; 20% гидроокись натрия - 0,002; дистиллированная вода до 1 л ("Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования", Биргер М.О., 1972 г., с.53). Недостатком данной среды является ее высокая себестоимость.

Целью изобретения является получение качественной дешевой питательной среды для культивирования вакцинного штамма чумного микроба. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда содержит питательную основу ферментативный гидролизат соевых бобов и стимулирующую добавку - натрий сернистокислый, в следующем соотношении ингредиентов, г/л: агар микробиологический - 11,0-13,0 ферментативный гидролизат соевых бобов - 250,0-350,0 натрий хлористый - 4,5-5,5 натрий фосфорнокислый 2-замещенный - 3,5-4,5 натрий сернистокислый - 0,0003-0,0005 дистиллированная вода - остальное. В качестве исходного сырья используют сою, плоды которой - бобы - содержат в среднем 40% белка, кроме того, соя богата микроэлементами и витаминами. Как известно (Y.P.Yupta, 1987) соевые белки характеризуются повышенным содержанием глутаминовой и аспарагиновой кислот, которые тесно связаны с углеводным обменом через цикл трикарбоновых кислот, поставляющий макроэргические связи. Соевые белки содержат также большое количество таких незаменимых аминокислот как лизин, лейцин, аргинин. Имеются также сведения о способности лейцина, как аминокислоты с разветвленной белковой цепью, инициировать синтез белка (Е.И.Чазов, X.С.Морган /США/ 1989).

Приготовления питательной среды для выращивания микроорганизмов заключается в следующем. Плоды сои - бобы, в количестве 0,5 кг, пятикратно вымачивают в 5 л горячей водой в течение суток, причем последний настой с бобами кипятят в течение 40 мин. Затем настой отливают в 10 л баллон, охлаждают, бобы измельчают мясорубкой и помешают в настой. Добавляют поджелудочной железы КРС из расчета 20,0 на 1 л, устанавливают рН до 8,2 20%-ным раствором натрия гидроокиси в количестве 0,0003, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при 37°С в течение трех суток. Первые 2 ч смесь перемешивают через каждые 15 мин по 5 мин, в последующем смесь перемешивают через каждые 6 ч. Ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на третьи сутки гидролиза достигает 0,6 + 0,05%.

Питательную среду на основе соевого ферментативного гидролизата для выращивания микроорганизмов готовят следующим образом. Ферментативный гидролизат из соевых бобов, разбавленный дистиллированной водой до показаний аминного азота 0,14% - 300 мл; натрий хлористый - 5,0:, натрий фосфорнокислый 2-эамещенный - 4,0; натрий сернистокислый - 0,0004; 20%-ный раствор натрия гидроокиси - 3 мл; агар микробиологический - 12,0; дистиллированная вода - остальное.

Среду кипятят до полного растворения ингредиентов, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем устанавливают рН 7,2±0,1 с помощью 20%-ного раствора натрия гидроокиси, разливают во флаконы, стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.

В качестве примера испытывали культуру вакцинного штамма чумного микроба выращивали на пластинках 2% агара Хоттингера рН 7,2 при температуре 28°С в течение суток. Затем готовили микробную взвесь 1-суточных культур тест-штамма, равную 10 ед по оптическому стандарту мутности по ОСО ГИСК им. Л.Д. Тарасовича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000; 100 м.к. Из каждого разведения взвеси культур высевали по 0,1 мл в три чашки Петри. Посевы инкубировали при 28°С в условиях термостата. Учет результатов проводили через 24-48 ч.

Пример 1. Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: агар микробиологический - 11,0; гидролизат соевых бобов - 250,0; натрий хлористый - 4,5; натрий фосфорнокислый 2-замещенный - 3,5; натрий сернистокислый - 0,0003; 20%-ный раствор натрия гидроокиси - 2,5; дистиллированная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний составило 51 диаметром до 1 мм.

Пример 2. Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: агар микробиологический - 12,0; гидролизат соевых бобов - 300,0; натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный - 4,0; натрий сернистокислый - 0,0004; 20%-ный раствор натрия гидроокиси - 3,0; дистиллированная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний составило 73 диаметром 1 мм.

Пример 3. Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: агар микробиологический - 13,0; гидролизат соевых бобов - 350,0; натрий хлористый - 5,5; натрий фосфорнокислый 2-замещенный - 4,5; натрий сернистокислый - 0,0005; 20%-ный раствор натрия гидроокиси - 3,5; дистиллированная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний составило 50 диаметром до 1 мм.

Таким образом, заявляемая питательная среда, приготовленная на основе ферментативного гидролизата сои бобов, вполне может заменить питательную среду на основе из говяжьего мяса.

Изобретение относится к биотехнологии и, в частности к получению питательных сред для культивирования вакцинного штамма чумного микроба, и может быть использовано в медицинской микробиологии. Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба дополнительно содержит в качестве стимулирующей добавки - натрий сернистокислый, а в качестве питательной основы - ферментативный гидролизат плодов сои при следующем содержании ингредиентов, г/л: агар микробиологический - 11,0-13,0; ферментативный гидролизат плодов сои - 250,0-350,0; натрий хлористый - 4,5-5,5; натрий фосфорнокислый 2-замещенный - 3,5-4,5; натрий сернистокислый - 0,0003-0,0005; дистиллированная вода - остальное. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды.

Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба, содержащая питательную основу, агар микробиологический, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве стимулирующей добавки натрий сернистокислый, а в качестве питательной основы - ферментативный гидролизат плодов сои - бобов при следующем содержании ингредиентов, г/л:

Агар микробиологический 11,0-13,0

Ферментативный гидролизат соевых бобов 250,0-350,0

Натрий хлористый 4,5-5,5

Натрий фосфорнокислый 2-замещенный 3,5-4,5

Натрий сернистокислый 0,0003-0,0005

Дистиллированная вода Остальное