4-АЦЕТИЛ-3-ГИДРОКСИ-1-(2-ГИДРОКСИЭТИЛАМИНОЭТИЛ)-5-ФЕНИЛ-3-ПИРРОЛИН-2-ОН, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИКОАГУЛЯНТНУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2007 года по МПК A61K31/4015 A61P7/02 

Изобретение относится к новому биологически активному веществу ряда 3-гидрокси-3-пирролин-2-она, а именно к 4-ацетил-3-гидрокси-1-(2-гидроксиэтиламиноэтил)-5-фенил-3-пирролин-2-ону формулы:

обладающему антикоагулянтной активностью, что позволяет предполагать возможность использования его в медицине в качестве препарата, эффективно снижающего свертываемость крови.

Ближайшим структурным аналогом заявляемого соединения является 3-гидрокси-1-(3-карбоксипропил)-4-метилсульфонил-5-фенил-3-пирролин-2-он (Катаева А.В. Синтез, свойства и биологическая активность 1-замещенных 5-арил-3-гидрокси-4-метилсульфонил-3-пирролин-2-онов: дисс.... канд. фармацевт. наук / Перм. гос. фармацевт. акад. - Пермь, 2000. - С.60) формулы:

который взят за прототип и не обладает антикоагулянтным действием. Эталоном сравнения является гепарин (Машковский М.Д. Лекарственные средства: практ. пособие. - 15 изд. - М.: "Новая волна", 2005. - С.475), который применяется в медицинской практике и является аналогом по действию.

Сущность изобретения - поиск в ряду 3-гидрокси-3-пирролин-2-онов соединения с выраженной антикоагулянтной активностью, снижающего свертываемость крови. Это достигается синтезом 4-ацетил-3-гидрокси-1-(2-гидроксиэтиламиноэтил)-5-фенил-3-пирролин-2-она, обладающего антикоагулянтным действием.

Заявляемое соединение получают взаимодействием метилового эфира ацетилпировиноградной кислоты, бензальдегида и 2-гидроксиэтиламиноэтиламина по схеме:

Пример получения заявляемого соединения.

Пример 1

4-Ацетил-3-гидрокси-1-(2-гидроксиэтиламиноэтил)-5-фенил-3-пирролин-2-он

К раствору 1.02 мл (0.01 М) бензальдегида и 1.01 мл (0.01 М) 2-гидроксиэтиламиноэтиламина в 5 мл 1,4-диоксана при комнатной температуре добавляют раствор 1.44 г (0.01 М) метилового эфира ацетилпировиноградной кислоты в 5 мл 1,4-диоксана и оставляют при той же температуре на 1 сутки. Образовавшийся осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из этанола и высушивают. Выход 1.76 г (58%). Т.пл.: 180-182°С. Найдено, %: С 63.08; Н 6.47; N 9.15. C₁₆H₂₀N₂О₄. Вычислено, %: С 63.14; Н 6.62; N 9.21.

Заявляемое соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в воде, этаноле, диметилформамиде, диметилсульфоксиде.

ИК-спектр (SPECORD, вазелиновое масло, ν, см^-1): 1648 (СО), 1706 (CON), 3150 (С₍₃₎OH), 3360 (NH), 3420 (AlkOH).

ПМР-спектр (Bruker DRX500, 500.13 МГц, DMSO-D₆, TMS, δ, м.д.): 2.11 (3Н, s, СН₃СО), 2.74 (1Н, m, ), 3.03 (2Н, m, C₍₄₎H₂), 3.12 (1H, m, , 3.25 (1Н, m, ), 3.68 (1Н, m, ), 3.73 (2Н, m, C₍₅₎H₂), 5.13 (1Н, s, C₍₅₎H), 7.16 (3Н, Н_аром), 7.24 (2Н, Н_аром), 9.40 (1Н, b.s, NH).

Заявляемое соединение и аналог по структуре исследовали на наличие антикоагулянтной активности. Опыты проведены с помощью коагулометра "Минилаб 701". Для исследования использовали цитратную (3,8%) кровь (9:1) собаки. Влияние соединений на свертываемость крови испытывали в концентрации 1 мг/мл крови. В качестве эталона антикоагулянтной активности использовали раствор гепарина, который испытывали в концентрации 1 ЕД/мл крови. В каждой серии опытов было использовано восемь животных. Степень антикоагулянтной активности соединений определяли по изменению времени свертывания нитратной крови в сравнении с контролем и эталоном. Результаты обрабатывали с использованием коэффициента Стъюдента (Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. М., 2000, с.312-313). Результаты испытаний представлены в таблице.

Как видно из таблицы, заявляемое соединение проявляет прямое антикоагулянтное действие, так как достоверно увеличивает время свертывания цитратной крови на 30,4%. Его структурный аналог достоверным антикоагулянтным эффектом не обладает. Эталон сравнения гепарин замедляет свертывание на 22,4%.

Острую токсичность заявляемого соединения определяли на беспородных белых мышах обоего пола массой 16-18 г. Соединение вводили внутрибрюшинно и внутривенно в виде водного раствора из расчета 0,1 мл на 10 г массы животного в возрастающих дозах. Результаты обрабатывали по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы DL₅₀ при Р=0,05 (Прозоровский В.Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. / В.Б.Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М.Демченко. // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т.41, №4. - С.497-502).

Установлено, что острая токсичность (DL₅₀) заявляемого соединения при внутрибрюшинном введении составляет 1460,0 (610,4-2734,4) мг/кг, а при внутривенном - 467,2 (195,3-875,0) мг/кг.

ТаблицаВлияние на свертывающую систему крови заявляемого соединения и эталона сравненияСоединениеВремя свертывания, с% изменения свертываемостиРконтрольопыт4-Ацетил-3-гидрокси-1-(2-гидроксиэтиламиноэтил)-5-фенил-3-пирролин-2-он35,5±1,4446,3±2,75-30,4<0,013-Гидрокси-1-(3-карбоксипропил)-4-метилсульфонил-5-фенил-3-пирролин-2-он40,2±2,6346,7±2,69-16,2>0,05Гепарин29,9±0,4836,6±1,82-22,4<0,01

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект №04-03-96042).

ЛИТЕРАТУРА

1. Катаева А.В. Синтез, свойства и биологическая активность 1-замещенных 5-арил-3-гидрокси-4-метилсульфонил-3-пирролин-2-онов: дисс.... канд. фармацевт. наук. / Перм. гос. фармацевт. акад. - Пермь, 2000. - С.60.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства: практ. пособие. - 15 изд. - М.: "Новая волна", 2005. - С.475.

3. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. М., 2000, с.312-313.

4. Прозоровский В.Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. / В.Б.Прозоровский, М.П.Прозоровская, В.М.Демченко. // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т.41, №4. - С.497-502.

Предложено средство, снижающее свертываемость крови, - 4-ацетил-3-гидрокси-1-(2-гидроксиэтиламиноэтил)-5-фенил-3-пирролин-2-он формулы (1). Средство проявляет прямое антикоагулянтное действие, так как достоверно увеличивает время свертывания цитратной крови на 30,4%. 1 табл.

Применение 4-Ацетил-3-гидрокси-1-(2-гидроксиэтиламиноэтил)-5-фенил-3-пирролин-2-она в качестве средства, обладающего антикоагулянтной активностью.