Настоящее изобретение относится к группе соединений, которые содержат хроменовое ядро и которые обладают способностью ингибировать пролиферацию лимфоцитов посредством блокирования взаимодействия TCR с Nck, в связи с чем указанные соединения можно применять для лечения заболеваний или состояний, при которых указанное взаимодействие вызывает осложнения, такие как реакции отторжения трансплантата, иммунные или аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания или пролиферативные заболевания.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Аутоиммунные и воспалительные заболевания, такие как астма, рассеянный склероз, аллергии, ревматоидный артрит, болезнь Крона или псориаз, представляют собой разнородную группу заболеваний, при которых адаптивная иммунная система, в частности, с помощью Т-лимфоцитов, атакует собственные антигены организма. Принято считать, что Т-клетки находятся в центре всех иммунологических механизмов. Т-клетки могут распознавать как чужеродные, так и собственные антигены и активировать иммунный ответ против них. Т-клетки распознают антигены с помощью Т-клеточного рецептора (TCR), ответственного за передачу сигналов в цитоплазму. Действительно, тот факт, что гаплотип главного комплекса гистосовместимости (ГКГС) является наиболее важным фактором генетического риска для аутоиммунных заболеваний человека, ставит Т-клетки в центр всех иммунопатологических событий.
Т-клетка распознает антигенный пептид, связанный с ГКГС (пГКГС), через Т-клеточный рецептор антигена (TCR) и способна переводить небольшие различия в химическом составе пГКГС в различные количественные и качественные результаты. В то время как существуют различные механизмы контроля предотвращения активации Т-клеток, несущих TCR со значительным сродством к ГКГС, несущему аутопептиды, в том числе подавление потенциально аутореактивных Т-клеток в процессе созревания в тимусе, эти механизмы являются в некоторой степени недостаточным у пациентов, у которых развиваются аутоиммунные заболевания, и аутореактивные Т-клетки активируются и расширяются, преодолевая гомеостатические контроли.
При стимуляции TCR активируется и претерпевает конформационные изменения, в результате чего получается набор различных белков, образующих "TCR сигналосому", ответственную за трансдукцию сигнала и активацию клеток. Этот комплекс включает цитозольный белок Nck, который связывается с PRS мотивом (богатой пролином последовательностью), присутствующим в CD3ε субъединице рецептора Т-клеток. В результате стабилизируется конформационное изменение TCR, и эффективно передается сигнал активации.
Современные методы лечения иммунных заболеваний представляют собой иммуносупрессивные стратегии, а не толерогенные/иммуномодулирующие подходы. Азатиоприн, метотрексат, микофенолат и кладрибин являются цитостатиками. Другие методы лечения вызывают истощение Т-клеток (алемтузумаб, анти-СD52) или их удержание в лимфатических узлах (финголимод). При другом подходе в качестве мощной стратегии (BG-12) также применяют непрямую модуляцию иммунной системы. Поэтому, несмотря на центральную роль сигнала TCR для активации Т-клеток при аутоиммунных заболеваниях, усилия последнего времени, направленные на модулирование активации Т-клеток, сосредоточены на модулировании дополнительных стимулирующих сигналов, рецепторов цитокинов и т.д. с последующим отсутствием специфичности и большого числа сопутствующих побочных эффектов.
Для того чтобы разработать конкретную иммуномодулирующую терапию, многочисленные усилия множества различных исследовательских групп были сосредоточены на описании роли Nck в активации Т-клеток. Nck приписывают важную роль в функционировании зрелых Т-клеток на основании исследований у нокаут-мышей, лишенных Nck1 во всех тканях и лишенных Nck2 условно только на Т-клетках. В этих моделях число периферических Т-клеток, экспрессирующих TCR с низкой авидностью к собственным антигенам, резко сократилось, и наблюдалось общее снижение активации Т-клеток путем стимуляции слабыми антигенами. Кроме того, важность Nck была также рассмотрена путем создания костномозговых химер, и было показано, что PRS мотив (место связывания Nck в TCR) имеет важное значение для активации зрелых Т-клеток слабыми, а не сильными агонистами. Аналогичным образом мутации в последовательности PRS изменяли способность мышей активировать адаптивный иммунный ответ in vivo. Кроме того, пептидный ингибитор с высоким сродством к домену SH3.1 Nck изменяет набор сигналосом TCR, на основании чего предполагают, что набор Nck является важным первым шагом в передаче сигналов TCR, который представляет собой мишень для модулирования иммунного ответа.
В документе WO 2010/064707 описан ряд соединений, полученных из 2Н-хромена, для профилактики или лечения заболевания, вызванного нежелательной инфильтрацией лимфоцитов, опосредованной сфингозин-1-фосфатным рецептором (S1P1).
В документе WO2012/042078 также описаны производные хромена, обладающие способностью ингибировать взаимодействие TCR-Nck в Т-клетках и их применение для лечения аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний или отторжения трансплантата.
Поэтому было бы желательным разработать новые соединения, которые способны ингибировать взаимодействие TCR-Nck в Т-лимфоцитах и которые являются хорошими потенциальными лекарственными средствами. Такие соединения должны проявлять хорошую активность в фармакологическом испытании in vivo, хорошую пероральную абсорбцию при пероральном введении, а также быть метаболически стабильными и иметь благоприятный фармакокинетический профиль. Кроме того, такие соединения не должны быть токсичными и должны вызывать минимум побочных эффектов.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соединения, описанные ниже, имеют высокую способность ингибировать взаимодействие между TCR-Nck, поэтому их можно применять для лечения заболеваний или расстройств, при которых происходит гиперпролиферация Т-лимфоцитов. Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению обеспечивают лучшую биодоступность, чем структурно подобные известные соединения, при такой же ингибирующей способности в отношении TCR-Nck, что является явным преимуществом соединений согласно настоящему изобретению при их применении в качестве лекарственных средств.
Первый аспект настоящего изобретения относится к соединению формулы (I) или 
или его фармацевтически приемлемой соли, изомеру или сольвату, где:
R1 выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C1-C6 алкила, замещенного или незамещенного С3-С6 циклоалкила, замещенного или незамещенного арила или замещенного или незамещенного гетероарила, - COR5, - C(O)OR5, - C(O)NR5Re, - CNR5;
R2 и R3 независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C1-C6 алкила, замещенного или незамещенного С3-С6 циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероарила, - COR7, - C(O)OR7, - C(O)NR7R8, - CNR7, - OR7, - NR7R8 и - NR7C(O)R8;
или R2 и R3 вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют замещенный или незамещенный гетероцикл;
R4 представляет собой галоген;
R5, R6, R7 и R8 независимо выбирают из водорода, С1-С4 алкила, С3-C6 циклоалкила, арила, гетероарила и галогена,
при условии, что соединение формулы (I) не представляет собой 1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин.
В настоящем изобретении термин "алкил" относится к радикалам углеводородных цепей, линейных или разветвленных, содержащих от 1 до 6 атомов углерода, и предпочтительно от 1 до 4, и связанных с остальной частью молекулы одинарной связью, например, к метилу, этилу, н-пропилу, изопропилу, н-бутилу, mpem-бутилу, emop-бутилу, н-пентилу, н-гексилу и т.д. Алкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, такими как галоген, гидроксил, алкоксил, карбоксил, карбонил, циано, ацил, алкоксикарбонил, амино, нитро, меркапто и алкилтио.
В настоящем изобретении термин "циклоалкил" относится к стабильному 3-6-членному моноциклическому радикалу, предпочтительно 3-членному, насыщенному или частично ненасыщенному, и который состоит только из атомов углерода и водорода, такому как циклопропил, циклопентил, циклогексил, и который может быть необязательно замещен одной или более группами, такими как алкил, галоген, гидроксил, алкоксил, карбоксил, циано, карбонил, ацил, алкоксикарбонил, амино, нитро, меркапто и алкилтио.
В настоящем изобретении термин "арил" относится к ароматической карбоциклической цепи, содержащей от 6 до 18 атомов углерода, предпочтительно от 6 до 14 атомов углерода и более предпочтительно от 6 до 8, и которая может состоять из одного или нескольких колец, при этом в последнем случае кольца могут быть отдельными и/или конденсированными. Неограничивающие примеры арильных групп представляют собой фенил, нафтил, инденил и т.д. Предпочтительно арильная группа представляет собой фенил или нафтил. Арильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, такими как алкил, галоген, гидроксил, алкоксил, карбоксил, карбонил, циано, ацил, алкоксикарбонил, амино, нитро, меркапто и алкилтио.
Термин "гетероарил" относится к арильной группе, содержащей по меньшей мере один гетероатом, выбранный из следующей группы: азот, кислород или сера.
В настоящем изобретении термин "гетероцикл" относится к стабильному моноциклическому или бициклическому радикалу, содержащему от 3 до 15 членов, который является ненасыщенным, насыщенным или частично насыщенным и который состоит из атомов углерода и по меньшей мере одного гетероатома, выбранного из следующей группы: азот, кислород или сера. Предпочтительно он содержит от 4 до 8 членов с одним или более гетероатомами, более предпочтительно от 5 до 6 членов с одним или более гетероатомами. Примерами гетероарила могут быть, не ограничиваясь ими: азепины, индолы, имидазолы, изотиазолы, тиадиазолы, фуран, тетрагидрофуран, бензимидазол, бензотиазол, пиперидин, пирролидин, пиперазин, пурин, хинолин. Предпочтительно гетероциклическая группа представляет собой пирролидин или пиперазин. Гетероциклические группы необязательно могут быть замещены в любом из своих положений одним или более заместителями, такими как алкил, галоген, гидроксил, алкоксил, карбоксил, карбонил, циано, ацил, алкоксикарбонил, амино, нитро, меркапто и алкилтио.
Термин "галоген" относится к фтору, хлору, брому или йоду.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил.
В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой СН3.
В другом более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой С1-С4 алкил, замещенный посредством С3-С6 циклоалкила. В еще более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой - СН2 - циклопропильную группу.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой С1-С4 алкил, замещенный посредством по меньшей мере одного фтора.
В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 выбирают из групп - CHF2 или - CF3.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой водород.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R2 представляет собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R3 представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил.
В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R3 представляет собой группу - СН2СН3.
В другом более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R3 представляет собой С1-С4 алкил, замещенный посредством группы - NR'R", где R' и R" независимо выбраны из Η или С1-С4 алкила. В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R3 представляет собой группу - СН2-СН2-N(СН3)2.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R2 и R3 образуют замещенный или незамещенный насыщенный 5-членный гетероцикл.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R2 и R3 образуют насыщенный необязательно замещенный 6-членный гетероцикл.
В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения насыщенный гетероцикл по меньшей мере в одном из его положений замещен посредством С1-С4 алкила.
В другом более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения насыщенный 6-членный гетероцикл содержит вставку из дополнительного атома азота N или кислорода О. В еще более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения N замещен посредством С1-С4 алкила.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R3 представляет собой насыщенный 6-членный гетероцикл, содержащий вставку из дополнительного атома азота N, незамещенного или замещенного посредством С1-С4 алкила.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения R4 представляет собой фтор.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения соединение формулы (I) выбирают из следующего списка:
- 4-(4-фторфенил)-3-(пирролидин-1-илметил)-2Н-хромен-6-ол (АХ-01),
- 1-((6-(дифторметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин (АХ-02)
- 1-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин (АХ-03)
- 1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин (АХ-04)
- 1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин (АХ-9)
- N1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин (АХ-10)
- 4-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин (АХ-11)
- N-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-этанамин (АХ-12)
- 1-((6-(дифторметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин (АХ-17)
- N1-((6-(дифторметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2, N2-диметилэтан-1,2-диамин (АХ-18)
- N1-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2, N2-диметилэтан-1,2-диамин (АХ-26)
- 4-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин (АХ-27)
- N-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)этанамин (АХ-28)
- 1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин (АХ-33)
- N1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин (АХ-34)
- 4-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин (АХ-35)
- N-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)этанамин (АХ-36)
В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения соединение формулы (I) выбирают из следующего списка:
- 1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин (АХ-9)
- N1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин (АХ-10)
- 1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин (АХ-33)
- 4-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин (АХ-27)
- 4-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин (АХ-35)
- N-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)этанамин (АХ-36)
Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I), как описано выше, для получения лекарственного средства.
Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I), как описано выше, для получения лекарственного средства для лечения заболеваний или расстройств, опосредованных взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах.
На протяжении всего данного описания термины "лечение" заболевания, "лечить" заболевание или другие грамматически связанные выражения относятся к лечебной терапии, а также паллиативному лечению или профилактическому лечению такого заболевания.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения заболевание или расстройство, опосредованное взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах, выбирают из отторжения трансплантата, иммунных, аутоиммунных и воспалительных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, гематологических заболеваний и пролиферативных заболеваний.
В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения заболевание или расстройство, опосредованные взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах, выбирают из отторжения трансплантата, ревматоидного артрита, псориатического артрита, псориаза, диабета I типа, осложнений, связанных с диабетом, рассеянного склероза, системной красной волчанки, атопического дерматита, опосредованных тучными клетками аллергических реакций, лейкозов, лимфом и тромбоэмболических и аллергических осложнений, связанных с лейкозами и лимфомами.
Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению формулы (I) для его применения для лечения заболеваний или расстройств, опосредованных взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах.
Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I), как описано выше, и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.
Соединения, описанные в настоящем изобретении, их фармацевтически приемлемые соли и/или их сольваты, а также фармацевтические композиции, которые их содержат, можно применять вместе с другими дополнительными лекарственными средствами, чтобы обеспечить комбинированную терапию. Указанные дополнительные лекарственные средства могут быть частью той же самой фармацевтической композиции или, в качестве альтернативы, могут быть предоставлены в виде отдельной композиции для ее одновременного или неодновременного введения в фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (I) или его изомер, сольват или фармацевтически приемлемую соль.
Если не указано иное, соединения согласно настоящему изобретению также включают соединения, которые отличаются только присутствием одного или более изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие указанную структуру, за исключением замены водорода дейтерием или тритием или замены углерода 13С или 14С-обогащенным углеродом или 15N-обогащенным азотом, находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Соединения формулы (I) для терапевтического применения получают в твердой форме или в форме водной суспензии, в фармацевтически приемлемом разбавителе. Такие препараты можно вводить любым подходящим способом введения, для которого указанное лекарственное средство будет приготовлено фармацевтически пригодным для выбранного способа введения способом. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения введение соединения формулы (I), полученного согласно настоящему изобретению, осуществляют пероральным, местным, ректальным или парентеральным (включая подкожный, внутрибрюшинный, внутрикожный, внутримышечный, внутривенный и т.д.) путем. Обзор различных фармацевтических форм введения лекарственных средств и вспомогательных веществ, необходимых для их получения, можно найти, например, в "Treaty of Galenic Pharmacy" С.Fauli i Trillo, 1993 
5, SA Ediciones, Madrid, или в других распространенных или аналогичных испанской, европейской или американской Фармакопеям.
Для применения в терапии соединения формулы (I), их изомеры, соли или сольваты предпочтительно будут находиться в приемлемой или по существу чистой фармацевтической форме, т.е. иметь фармацевтически приемлемый уровень чистоты, исключая фармацевтические добавки, которые являются обычными, такие как разбавители и носители, и не включая материалы, которые считаются токсичными при уровнях обычной дозировки. Уровни чистоты для активного вещества составляют предпочтительно выше 50%, более предпочтительно выше 70%, более предпочтительно выше 90%. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения они составляют выше 95% соединения формулы (I), или его изомеров, солей или сольватов.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть в кристаллической форме в виде свободных соединений или в виде сольватов, и подразумевается, что обе эти формы находятся в пределах объема настоящего изобретения. В настоящем документе термин "сольват" в контексте настоящего описания включает как фармацевтически приемлемые сольваты, т.е. сольваты соединения формулы (I), которые можно применять при производстве лекарственного средства, так и фармацевтически неприемлемые сольваты, которые могут быть полезны при получении солей или сольватов, которые являются фармацевтически приемлемыми. Природа фармацевтически приемлемого сольвата не имеет решающего значения при условии, что он является фармацевтически приемлемым. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения сольват представляет собой гидрат. Сольваты могут быть получены обычными способами сольватации, хорошо известными специалистам в данной области техники.
Соединения согласно настоящему изобретению, представленные формулой (I), и, в частности, конкретные соединения, относящиеся к этой общей формуле, описанной выше, могут включать изомеры, в зависимости от наличия кратных связей (например, Ζ, Е), включая оптические изомеры или энантиомеры, в зависимости от наличия хиральных центров. Эти изомеры, энантиомеры или отдельные диастереоизомеры и их смеси входят в объем настоящего изобретения. Индивидуальные энантиомеры или диастереоизомеры, как и их смеси, могут быть разделены обычными способами.
Другим аспектом настоящего изобретения является способ лечения заболеваний или расстройств, опосредованных взаимодействием TCR-Nck в Т-клетках, причем указанный способ включает введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) нуждающемуся в этом пациенту.
В контексте настоящего описания термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству активного вещества, достаточному для получения желаемого действия, при котором симптомы заболевания ослабляются. Доза не должна быть применена в количествах, которые вызывают нежелательные побочные эффекты, при которых клиническая оценка делает их неблагоприятными и терапевтически непригодными для лечения. Как правило, доза будет варьироваться в зависимости от возраста, состояния, пола и степени заболевания пациента, а также от способа и частоты введения, и будет определяться в каждом конкретном случае.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения формулы (I), как описано выше, включающему следующие этапы:
а) обеспечение взаимодействия соединения формулы (II) с соединением формулы (III) и соединением формулы (IV)
где R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в п. 1, и
b) обеспечение превращения соединения формулы (III) в соединение формулы (I) за один или более этапов.
В описании и формуле изобретения слово "включать" и его варианты не предназначены для исключения других технических характеристик, добавок, компонентов или этапов. Для специалистов в данной области другие задачи, преимущества и признаки настоящего изобретения станут очевидны частично из описания и практического применения настоящего изобретения. Следующие примеры и фигуры приведены в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1. Показывает возможность ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов для каждого из исследуемых соединений согласно настоящему изобретению.
Фиг. 2. Представляет собой оценку уровня повреждения нейронов в ходе исследования среди субъектов, получавших плацебо, и субъектов, получавших соединение АХ-104.
Фиг. 3. Представляет собой изменение массы в ходе исследования среди субъектов, получавших плацебо, и субъектов, получавших соединение АХ-104.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение будет проиллюстрировано с помощью испытаний, проведенных авторами настоящего изобретения, которые показывают эффективность соединений согласно настоящему изобретению.
Пример 1: Синтез соединений согласно настоящему изобретению.
Синтез АХ-101 (свободное основание): К раствору AX-24. HCl (1 г, 1 экв.) в сухом дихлорметане (10 мл), добавляли по каплям ВВr3 (0,79 г, 1,2 экв.) при -78°С и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения реакционную смесь выливали в холодный раствор насыщенного бикарбоната натрия и экстрагировали с помощью дихлорметана (2×20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над Na2SO4. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (100% этилацетат) давала 0,5 г целевого продукта (светло-коричневый твердый продукт) с чистотой 97,8%, определенной посредством ВЭЖХ. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 8,80 (s, 1 H), 7,31-7,27 (m, 2 H), 7,20-7,17 (m, 2 H), 6,68-6,66 (d, 2 H), 6,51-6,28, (dd, 1 H), 5,93 (s, 1 H), 4,73 (s, 1 H), 2,96 (s, 2 H), 2,29 (b, 4 H), 1,61 (b, 4 H). Теоретические данные MC для C20H20FNO2: 325,4; М++1 экспериментальные: 326,1.
Синтез АХ-104: К смеси АХ-101 (0,7 г, 1 экв.), К2СO3 (1 г, 3 экв.), циклопропилметилбромида (1,16 г, 4 экв.) в ДМФ (10 мл) и ацетоне (20 мл) добавляли тетраметиламмонийбромид (0,1 г, каталитическое количество). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°С в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения реакционную смесь выливали в холодную воду (40 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2×15 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (20% этилацетата в гексане) давала 0,1 г целевого продукта с чистотой 96%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,31-7,27 (m, 2H), 7,21-7,19 (m, 2H), 6,78-6,76 (d, 2H), 6,70-6,67 (dd, 1H), 5,97-5,96 (d, 1H), 3,58-3,56 (d, 2H), 2,97 (s, 2H), 2,3 (b, 4H), 1,61 (b, 4H), 1,8-1,2 (m, 4H), 0,49-0,44 (m, 2H), 0,21-0,18 (m, 2H). Теоретические данные MC для C24H26FNO2: 379,5, М++1 экспериментальные: 380,1.
Синтез соединения В: К раствору соединения А (10 г, 1 экв.) в сухом дихлорметане (150 мл) добавляли по каплям ВВr3 (11,4 г, 1,3 экв.) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения реакционную смесь выливали в холодную воду и экстрагировали дихлорметаном (2×150 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2×70 мл), солевым раствором (20 мл) и высушивали над Na2SO4. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (40% этилацетата в гексане) давала 4,7 г целевого продукта.
Теоретические данные МС для C16H11FO3: 324,12, М++1 экспериментальные: 325,2
Синтез соединения С: К смеси соединения В (5,5 г, 1 экв), К2СО3 (11,2 г, 4 экв.), циклопропилметилбромида (5,5 г, 2 экв.) в ДМФ (50 мл) добавляли тетраметиламмонийбромид (0,1 г, каталитическое количество). Полученную реакционную смесь нагревали при 75°С в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×70 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2×40 мл), солевым раствором (20 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (10% этилацетата в гексане) давала 1,7 г целевого продукта.
Теоретические данные МС для C20H17FO3: 324,12, М++1 экспериментальные: 325,2
Синтез соединения D: К смеси соединения С (3 г, 1 экв) добавляли по каплям борогидрид натрия (0,17 г, 0,5 экв.) в толуоле (20 мл), метаноле (2 мл) до комнатной температуры и перемешивали при этой температуре в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении давало 2,7 г целевого продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез соединения Е: К смеси соединения D (3,5 г, 1 экв) добавляли по каплям борогидрид натрия в толуоле (30 мл), тионилхлорид (1,78 г, 1,4 экв) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в ледяную воду (25 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (30 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении (упаривание в вакууме) давало 3,4 г неочищенного продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез АХ-133: Смесь соединения Ε (0,3 г, 1 экв.), К2СO3 (0,36 г, 3 экв.), Ν-метилпиперазина (0,13 г, 1,5 экв.) в диизопропиловом эфире (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (10% метанола в дихлорметан) давала 40 мг целевого продукта с чистотой 92,9%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,11-7,2 (m, 4 H), 6,78-6,75 (d, 1 H), 6,65-6,63 (dd, 1H), 6,15-6,14 (d, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,57-3,55 (d, 2H), 2,97 (s, 2H), 2,52 (b, 8H), 1,23 (s, 3H), 1,14-1,8 (m, 1H), 0,56-0,52 (m, 2H), 0,24-0,020 (m, 2H). Теоретические данные MC для C25H29FN2O2: 408,51, М++1 экспериментальные: 409,2
Синтез АХ-134: Смесь соединения Ε (0,3 г, 1 экв.), К2СО3 (0,55 г, 5 экв.), Ν,Ν-диметилэтилендиамина (0,28 г, 4 экв.) в диизопропиловом эфире (15 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (12% метанола в дихлорметане) давала 80 мг целевого продукта с чистотой 93,2%, определенной посредством ВЭЖХ.
1H ЯМР (CDCl3): δ 7,16-7,8 (m, 4H), 6,80-6,77 (d, 1H), 6,68-6,63 (dd, 1H), 6,18-6,17 (d, 1H), 4,85 (s, 2H), 3,60-3,58 (d, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,55-2,52 (t, 2H), 2,34-2,31 (t, 2H), 2,18 (b, 5H), 1,14-1,12 (m, 1H), 0,57-0,55 (m, 2H), 0,25-0,24 (m, 2H). Теоретические данные MC для C24H29FN2O2: 396,5, M++1 экспериментальные: 397,2
Синтез АХ-135: Смесь соединения Ε (0,2 г, 1 экв.), К2СО3 (0,24 г, 3 экв.), морфолина (0,1g, 2 экв) в диизопропиловом эфире (15 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (30% этилацетата в гексане) давала 45 мг целевого продукта с чистотой 95,8%, определенной посредством ВЭЖХ.
1H ЯМР (ДМСО-d6): δ 7,37-7,26 (t, 2H), 7,21-7,16 (m, 2H), 6,78-6,76 (d, 1H), 6,71-6,68 (dd, 1H), 5,97-5,96 (d, 1H), 4,75 (s, 2H), 3,58-3,56 (d, 2H), 3,52-3,50 (m, 2H), 2,87 (s, 2H), 2,21 (b, 4H), 1,8-1,3 (m, 1H), от 0,49 до 0,44 (m, 2H), от 0,21 до 0,17 (m, 2H). Теоретические данные MC для C24H26FNO3: 395,47, М++1 экспериментальные: 396,1
Синтез АХ-136: Смесь соединения Ε (0,3 г, 1 экв.), К2СO3 (0,36 г, 3 экв.), этиламин гидрохлорида (0,22 г, 3 экв.) в ДМФ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2×15 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (5% метанола в дихлорметане) давала 50 мг целевого продукта с чистотой 92,2%, определенной посредством ВЭЖХ. 1H ЯМР (CDCl3): δ 7,16-7,9 (m, 4H), 6,80-6,78 (d, 1 H), 6,68-6,63 (dd, 1H), 6,19-6,17 (s, 1H), 4,83 (s, 2H), 3,60-3,58 (d, 2H), 3,2 (s, 2H), 2,54-2,49 (q, 2H), 1,16-1,12 (m, 1H), 1,02-0,98 (t, 3H), 0,59 до 0,54 (m, 2H), 0,27-0,23 (m, 2H). Теоретические данные MC для C24H26FNO3: 353,43; M-44,3 экспериментальные: 309,1 (Этиламинная группа расщепляет массу).
Синтез соединения В: Смесь соединения А (3 г, 1 экв.), К2СО3 (3,06 г, 2 экв.), этилхлордифторацетата (2,2 г, 1,3 экв.) в ДМФ (20 мл), нагревали при 75°С в течение ночи. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2×30 мл), солевым раствором (20 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (10% этилацетата в гексане) давала 1 г целевого продукта.
1Н ЯМР (ДМСО-d6) Теоретические данные МС для C17H11F3NO3: 320,26; М++1 экспериментальные: 321,1
Синтез соединения С: К смеси соединения В (1 г, 1 экв.) добавляли по каплям борогидрид натрия (0,05 г, 0,5 экв.) в толуоле (10 мл) и метаноле (2 мл) при комнатной температуре и перемешивали при этой температура в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении (упаривание в вакууме) давало 0,9 г целевого продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез соединения D: К смеси соединение С (0,9 г, 1 экв.) в толуоле (20 мл) добавляли по каплям тионилхлорид (0,43 г, 1,3 экв.) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении (упаривание в вакууме) давало 0,9 г неочищенного продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез АХ-102: Смесь соединения D (0,25 г, 1 экв.), К2СО3 (0,5 г, 5 экв.) и пирролидина (0,15 г, 3 экв) в диизопропиловом эфире (15 мл) нагревали при 60°С в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (40% этилацетата в гексане) давала 50 мг целевого продукта с чистотой 94,4%, определенной посредством ВЭЖХ. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,12-7,11 (d, 4H), 6,88-6,81 (m, 2H), 6,47-6,10 (q, 1Η), 4,9 (s, 2H), 3,0 (s, 2H), 2,38 (b, 2H), 1,70 (b, 4H). Теоретические данные MC для C21H20F3NO2: 375,4; M++1 экспериментальные: 376,1
Синтез АХ-117: Смесь соединения D (0,25 г, 1 экв.), К2СO3 (0,3 г, 3 экв.) и N-метилпиперазина (0,11 г, 1,5 экв.) в диизопропиловом эфире (15 мл) нагревали при 60°С в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (8% метанола в дихлорметане) давала 40 мг целевого продукта с чистотой 96,3%, определенной посредством ВЭЖХ. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ 7,32-7,30 (b, 2H), 7,22 (b, 2H), 7,13-6,76 (1Н), 6,98-9,89 (2Н), 6,2 (s, 1H), 4,88 (s, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,67 (b, 4Н), 2,41 (b, 8H). Теоретические данные MC для C22H23F3N2O2: 404,43; М++1 экспериментальные: 405,1.
Синтез AX-118. HCl: Смесь соединения D (0,2 г, 1 экв.), К2СO3 (0,32 г, 4 экв.) и Ν,Ν-диметилэтилендиамина (0,15 г, 3 экв.) в диизопропиловом эфире (10 мл) нагревали при 60°С в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (7% метанола в дихлорметане) давала 50 мг целевого продукта с чистотой 92%, определенной посредством ВЭЖХ. Предыдущий продукт растворяли в диоксане (4 мл) и добавляли 0,5 мл 4 Μ HCl и перемешивали при комнатной температуре. По истечении 2 часов фильтрация полученного твердого вещества, которое промывали 10 мл н-пентана и высушивали под вакуумом, давала 40 мг чистого продукта с чистотой 93%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ 10,7 (b, 1H), 9,76 (b, 2H), 7,42-7,34 (m, 4H), 7,17-6,98 (m, 3H), 6,26 (s, 1H), 5,04 (s, 2H), 3,6 (b, 2H), 3,3 (b, 2H), 2,79 (b, 6H). Теоретические данные MC для C21H24ClF3N2O2: 428,88; M++1 экспериментальные: 393,1 (-HCl).
Синтез соединения В: К смеси соединения А (3 г, 1 экв.) борогидрида натрия (0,17 г, 0,5 экв) в толуоле (20 мл) добавляли по каплям метанол (2 мл) при комнатной температуре и перемешивали при этой температуре в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении давало 2,7 г целевого продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез соединения С: К смеси соединения В (3,5 г, 1 экв.) в толуоле (30 мл) добавляли по каплям тионилхлорид (1,78 г, 1,4 экв.) при 0°С и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в ледяную воду (25 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (30 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении (вакуумное упаривание) давало 3,4 г неочищенного продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез АХ-109: Смесь соединения С (0,4 г, 1 экв.), К2СО3 (0,5 г, 3 экв.) и N-метилпиперазина (0,15 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. Затем выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (5% метанола в дихлорметане) давала 170 мг целевого продукта с чистотой 94,5%, определенной посредством ВЭЖХ. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,10-7,09 (d, 4H), 6,82-6,79 (d, 1H), 6,68-6,65 (dd, 1H), 6,13 (d, 1H), 4,79 (s, 2H), 3,61 (s, 3H), 2,95 (s, 2H), 2,51-2,44 (b, 8H), 2,08 (s, 2H). Теоретические данные MC для C22H25FN2O2: 368,4; M++1 экспериментальные: 369,2
Синтез АХ-110: Смесь соединения С (0,4 г, 1 экв.), К2СO3 (0,5 г, 3 экв.) и Ν,Ν-диметилэтилендиамина (0,13 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта, полученного путем образования соли HCl с последующей нейтрализацией с применением насыщенного раствора бикарбоната натрия, давала 130 мг целевого продукта с чистотой 94%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,17-7,08 (m, 4H), 6,82-6,80 (d, 1H), 6,67-6,65 (dd, 1H), 6,15-6,14 (d, 1H), 4,82 (s, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,21 (s, 2H), 2,55-2,53 (t, 2H), 2,35-2,32 (t, 2H), 2,19 (s, 6H). Теоретические данные MC для C21H25FN2O2: 356,4; M++1 экспериментальные: 357,1
Синтез АХ-111: Смесь соединения С (0,4 г, 1 экв.), К2СО3 (0,5 г, 3 экв.) и морфолина (0,13 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта, полученного путем кристаллизации с применением диэтилового эфира, давала 160 мг целевого продукта с чистотой 96,5%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,12-7,10 (d, 4H), 6,82-6,80 (d, 1H), 6,68-6,65 (dd, 1H), 6,13 (d, 1H), 4,82 (s, 2H), 3,65-3,63 (m, 4H), 3,62 (s, 3H), 2,91 (s, 2H), 2,31 (b, 4H). Теоретические данные MC для C21H22FNO3: 355,4; M++1 экспериментальные: 356,1.
Синтез АХ-112: Смесь соединения С (0,4 г, 1 экв), К2СО3 (0,5 г, 3 экв), и этиламин НСl (0,12 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта с помощью колоночной хроматографии (6% метанола в дихлорметане) получали 120 мг целевого продукта с чистотой 95,0%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,26-7,09 (m, 4H), 6,82-6,80 (d, 1H), 6,68-6,65 (dd, 1H), 6,14 (d, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,25 (s, 2H), 2,58-2,53 (m, 2H), 1,05-1,01 (t, 3H). Теоретические данные MC для C19H20FNO2: 313,4; M++1 экспериментальные: 269,2 (-NHEt)
Синтез соединения В: К смеси соединения А (3,5 г, 1 экв.) в толуоле (30 мл) добавляли по каплям тионилхлорид (1,78 г, 1,4 экв) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в ледяную воду (25 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (30 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Упаривание органического слоя при пониженном давлении давало 2,4 г неочищенного продукта. Этот материал непосредственно применяли на следующем этапе без очистки и анализа.
Синтез AX-103.HCl: Смесь соединения В (0,2 г, 1 экв), К2СO3 (0,2 г, 3 экв.) и пирролидина (0,05 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Неочищенный продукт превращали в его соль HCl в масштабе 45 мг с чистотой 98,2%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,26-7,20 (m, 2H), 7,17-7,14 (m, 2H), 7,14-7,06 (d, 1H), 6,95-6,93 (d, 1H), 6,41-6,40 (d, 1H), 5,29 (s, 2H), 3,72-3,66 (m, 4H). Теоретические данные MC для C21H23ClF4N2O2: 429,84; M++1 экспериментальные: 394,1 (-HCl).
Синтез AX-126.HCl: Смесь соединения В (0,4 г, 1 экв.), К2СO3 (0,5 г, 3 экв.) и Ν,Ν-диметилэтилендиамина (0,13 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта, полученного путем образования соли HCl, давала 60 мг целевого продукта с чистотой 93,7%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ 10,8 (b, 1Н), 9,70 (b, 1Н), 7,93-7,92 (b, 2Н), 7,30-7,24 (m, 2Н), 7,19-7,11 (m, 2Н), 7,01-6,96 (m, 2Н), 6,87-6,85 (d, 1H), 6,3 (s, 1H), 5,0 (s, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,40 (b, 2H), 2,78 (b, 6H). Теоретические данные MC для C21H23ClF4N2O2: 446,87; M++1 экспериментальные: 411,1 (-HCl).
Синтез АХ-127: Смесь соединения В (0,4 г, 1 экв.), К2СO3 (0,5 г, 3 экв.) и морфолина (0,13 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Смесь упаривали при пониженном давлении (вакуумное упаривание) с получением 110 мг целевого продукта с чистотой 96%, определенной посредством ВЭЖХ.
1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,16-7,08 (m, 4H), 6,97-6,95 (d, 1H), 6,85-6,83 (d, 1H), 6,40-6,39 (b, 1H), 4,90 (s, 2H), 3,66-3,64 (t, 4H), 2,92 (s, 2H), 2,31 (b, 4H). Теоретические данные MC для C21H19F4NO3: 409,3; M++1 экспериментальные: 410,1.
Синтез AX-128.HCl: Смесь соединения В (0,4 г, 1 экв.), К2СО3 (0,5 г, 3 экв.) и этиламина. НСl (0,12 г, 1,2 экв.) в диизопропиловом эфире (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения смесь выливали в холодную воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Очистка неочищенного продукта, полученного путем образования соли HCl, давала 65 мг целевого продукта с чистотой 98,2%, определенной посредством ВЭЖХ. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,27-7,24 (m, 2H), 7,21-7,16 (m, 2H), 7,04-7,01 (m, 1H), 6,86-6,84 (d, 1H), 6,44-6,43 (b, 1H), 5,13 (s, 2H), 3,58-3,55 (t, 2H), 2,91-2,87 (m, 2H). Теоретические данные MC для C19H18ClF4NO2: 405,8; M++1 экспериментальные: 368,1 (HCl).
Пример 2: Ингибирование пролиферации Т-клеток, индуцированной стимуляцией TCR.
Влияние соединений АХ-101, АХ-103HCl; АХ-104, АХ-109, АХ-110, АХ-111, АХ-127, АХ-133, АХ-135 и АХ-136 на способность TCR индуцировать пролиферацию Т-лимфоцитов оценивали для первичных Т-лимфоцитов, полученных из крови здоровых доноров-людей (МКПК, мононуклеарные клетки периферической крови). МКПК добровольцев выделяли центрифугированием венозной крови в градиенте плотности фиколл-пак плюс. Очищенные клетки (НВТ, Т-клетки, очищенные через нейлоновую вату) культивировали в трех повторах в 96-луночных планшетах (0,5×105/лунка) в 200 мкл полной среды и стимулировали с помощью ОКТЗ (10 мкг/мл) или ОКТЗ (10 мкг/мл) плюс CD28 в присутствии или в отсутствие различных соединений в концентрациях от 1 до 10 мкМ. Культуры инкубировали в течение трех дней и анализировали после добавления 0,5 мкКи [3Н] тимидина (TdR)/лунка в течение последних 12 часов культивирования. Включенную в ДНК радиоактивность определяли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. При делении клеток радиоактивные метки вводились в дочерние клетки, что позволяло иметь представление о степени пролиферации клеток. Ингибирующая способность исследуемых соединений показана на фигуре 1.
Пример 3: Повышение биологической доступности соединения АХ-104 после перорального введения у грызунов
Фармакокинетические свойства соединения АХ-104 анализировали по отношению к свойствам, которые наблюдали для соединения ECRA-24 (описанного в WO 2012/042078). Для этого внутривенное введение соединения (болюсное) и пероральное введение через зонд раствора соединений проводили отдельно у крыс (среднее±стандартное отклонение; N=3). Как видно из данных, приведенных в таблицах 1 и 2, общая биодоступность соединения АХ-104 после перорального введения составляла 24% по сравнению с 2% у ECRA-24.
Пример 4: Испытание in vivo на модели ЭАЭ (экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит).
Модель хронического ЭАЭ индуцировали у 10 C57BL/6 самок мышей в группе лечения (6-8 недель, масса тела 20 г) путем подкожной инъекции в общей сложности 150 мкг пептида MOG (миелин-олигодендроглиоцитарный гликопротеин; MOG35-55, Espikem, Германия), эмульгированного в полном адъюванте Фрейнда (CFA, Sigma-Aldrich) и с добавлением 5 мг/мл микобактерий туберкулеза (штамм H37Ra, Difco) в области обоих бедер. Мышам сперва внутрибрюшинно вводили 150 нг коклюшного токсина (Sigma-Aldrich), а затем еще раз, через 48 часов после иммунизации. Указанное соединение (АХ-104) готовили в солевом буфере и вводили перорально в течение первых 10 дней, начиная в день иммунизации. Субъекты в группе плацебо получали эквивалентную пероральную дозу, содержащую только солевой буфер. Животных взвешивали и анализировали клинические признаки заболевания с помощью внешнего наблюдателя, находящегося вне процесса, посредством визуального анализа симптомов, основанного на следующей шкале: 0=нормальное состояние; 1=слабая вялость хвоста или легкое прихрамывание задних конечностей; 2=умеренная слабость задних конечностей или легкая атаксия; 3=умеренно сильная слабость задних конечностей; 4=сильная слабость задних конечностей или мягкая слабость передних конечностей, или умеренная атаксия; 5=параплегия с не более чем умеренной слабостью передних конечностей; и 6=параплегия при сильной слабости передних конечностей или тяжелая атаксия, состояние умирания или смерть. На фигуре 2 показано, как животные, получающие соединение АХ-104, имеют меньший балл по сравнению с группой плацебо.
Параллельно с этим массу животных также отслеживали как измерение показателя общего благополучия животных и развития заболевания. На фигуре 3 показано, что получавшие лечение животные теряли массу в значительно меньшей степени, чем животные в группе плацебо.
В конце исследования животных анестезировали и проводили интра-сердечную перфузию с 4% параформальдегида в 0,1 Μ фосфатном буфере (рН 7,6). Головной мозг и спинной мозг мышей препарировали и фиксировали.
Результаты в целом показывают, что соединение АХ-104 способно значительно уменьшить влияние симптомов, связанных с данной моделью.
Пример 5: Испытание in vitro на клетках крови.
Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) человека от здоровых взрослых доноров-добровольцев выделяли из венозной крови посредством центрифугирования в градиентах плотности фиколл-пак плюс. Очищенные Т-клетки (NWT-0,5×105/лунка) культивировали в трех повторах в 96-луночных планшетах в 200 мкл полной среды и стимулировали с помощью ОКТ3 (10 мкг/мл) или ОКТЗ (10 мкг/мл) и CD28 в присутствии или в отсутствие испытываемых соединений в требуемой концентрации. Культуры выращивали в течение трех дней и вводили импульс 0,5 мкКи [3Н] TdR/лунка в течение последних 12 часов культивирования. Включенную в ДНК радиоактивность определяли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРОИЗВОДНЫЕ ХРОМЕНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ TCR-NCK | 2014 |
|
RU2665709C2 |
| ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ, ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2800153C2 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ ФЕНИЛМОЧЕВИНЫ И ФЕНИЛАМИДЫ В КАЧЕСТВЕ ЛИГАНДОВ ВАНИЛЛОИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ | 2010 |
|
RU2553392C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ГАЛОГЕНАЛЛИЛАМИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2793850C2 |
| МОДУЛЯТОРЫ ПРОТЕОЛИЗА И СООТВЕТСТВУЮЩИЕ СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2805511C2 |
| МОДУЛЯТОРЫ ПРОТЕОЛИЗА ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ И СВЯЗАННЫЕ С НИМИ СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2797808C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИПЕРИДИНА В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТОВ РЕЦЕПТОРА ОРЕКСИНА | 2015 |
|
RU2669701C2 |
| Соединения, активные по отношению к бромодоменам | 2015 |
|
RU2743074C2 |
| ХИНОЛИНИЛ-СОДЕРЖАЩЕЕ СОЕДИНЕНИЕ И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2803116C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ 1-(4-ИЗОКСАЗОЛ-5-ИЛ)-1Н-ПИРАЗОЛ-1-ИЛ)-2-МЕТИЛПРОПАН-2-ОЛА И РОДСТВЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИРОРОВ ИЛ-17 И ИФН-ГАММА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ХРОНИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ | 2018 |
|
RU2785342C2 |
Изобретение относится к группе соединений формулы (I), содержащих хроменовое ядро, где R1 выбран из водорода и замещенного или незамещенного C1-С6 алкила; R2 и R3 независимо выбраны из водорода и замещенного или незамещенного C1-C6 алкила; или R2 и R3 вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют замещенный или незамещенный гетероцикл, где гетероцикл представляет собой стабильный моноциклический или бициклический радикал, содержащий от 3 до 15 членов, который является ненасыщенным, насыщенным или частично насыщенным и который состоит из атомов углерода и по меньшей мере одного гетероатома, выбранного из следующей группы: азот, кислород или сера; R4 представляет собой галоген; каждый C1-C6 алкил необязательно и независимо замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидроксила, карбоксила, карбонила, циано, нитро, меркапто, С3-С6 циклоалкила и NR'R'', где R' и R'' независимо выбраны из Н и незамещенного C1-C4 алкила; каждый С3-С6 циклоалкил и гетероцикл необязательно и независимо замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидроксила, карбоксила, карбонила, циано,амино, нитро, меркапто и незамещенного С1-С4 алкила; или их фармацевтически приемлемым солям, при условии, что соединение формулы (I) не представляет собой 1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин, и способу их получения. Соединения формулы I обладают способностью ингибировать пролиферацию лимфоцитов, опосредованную взаимодействием Nck с TCR, в связи с чем изобретение также относится к применению указанных соединений для лечения заболеваний или состояний, при которых указанное взаимодействие вызывает осложнения, такие как реакции отторжения трансплантата, иммунные или аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания или пролиферативные заболевания, а также изобретение относится к фармацевтическим композициям на основе соединений формулы I. 7 н. и 35 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 5 пр.
1. Соединение формулы (I)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где R1 выбран из водорода и замещенного или незамещенного C1-С6 алкила;
R2 и R3 независимо выбраны из водорода и замещенного или незамещенного C1-C6 алкила;
или R2 и R3 вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют замещенный или незамещенный гетероцикл, где гетероцикл представляет собой стабильный моноциклический или бициклический радикал, содержащий от 3 до 15 членов, который является ненасыщенным, насыщенным или частично насыщенным и который состоит из атомов углерода и по меньшей мере одного гетероатома, выбранного из следующей группы: азот, кислород или сера;
R4 представляет собой галоген;
каждый C1-C6 алкил необязательно и независимо замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидроксила, карбоксила, карбонила, циано, нитро, меркапто, С3-С6 циклоалкила и NR'R'', где R' и R'' независимо выбраны из Н и незамещенного C1-C4 алкила; и
каждый С3-С6 циклоалкил и гетероцикл необязательно и независимо замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидроксила, карбоксила, карбонила, циано, амино, нитро, меркапто и незамещенного С1-С4 алкила;
при условии, что соединение формулы (I) не представляет собой 1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин.
2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R1 представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил.
3. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что R1 представляет собой -СН3.
4. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что R1 представляет собой С1-С4 алкил, замещенный посредством С3-С6 циклоалкила.
5. Соединение по п. 4, отличающееся тем, что R1 представляет собой -СН2-циклопропильную группу.
6. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что R1 представляет собой С1-С4 алкил, замещенный посредством по меньшей мере фтора.
7. Соединение по п. 6, отличающееся тем, что R1 выбирают из групп -CHF2 или -CF3.
8. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R1 представляет собой водород.
9. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R2 представляет собой Н.
10. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R3 представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил.
11. Соединение по п. 10, отличающееся тем, что R3 представляет собой группу -СН2СН3.
12. Соединение по п. 10, отличающееся тем, что R3 представляет собой С1-С4 алкильную группу, замещенную посредством группы -NR'R'', причем R' и R'' независимо выбран из Н или С1-С4 алкила.
13. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что R3 представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил.
14. Соединение по п. 13, отличающееся тем, что R3 представляет собой группу -СН2СН3.
15. Соединение по п. 13, отличающееся тем, что R3 представляет собой С1-С4 алкильную группу, замещенную посредством группы NR'R'', причем R' и R'' независимо выбран из Н или С1-С4 алкила.
16. Соединение по п. 12 или 15, отличающееся тем, что R3 представляет собой группу -CH2-CH2-N(CH3)2.
17. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R2 и R3 вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют замещенный или незамещенный насыщенный 5-членный гетероцикл.
18. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R2 и R3 вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют необязательно замещенный насыщенный 6-членный гетероцикл.
19. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что насыщенный гетероцикл по меньшей мере в одном из его положений замещен посредством С1-С4 алкила.
20. Соединение по п. 18, отличающееся тем, что насыщенный гетероцикл по меньшей мере в одном из его положений замещен посредством С1-С4 алкила.
21. Соединение по п. 18, отличающееся тем, что 6-членный насыщенный гетероцикл содержит вставку из дополнительного атома N или О.
22. Соединение по п. 21, отличающееся тем, что N замещен посредством С1-С4 алкила.
23. Соединение по любому из пп. 1-8, 11-15 и 19-22, отличающееся тем, что R4 представляет собой фтор.
24. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что R4 представляет собой фтор.
25. Соединение по п. 10, отличающееся тем, что R4 представляет собой фтор.
26. Соединение по п. 16, отличающееся тем, что R4 представляет собой фтор.
27. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что R4 представляет собой фтор.
28. Соединение по п. 18, отличающееся тем, что R4 представляет собой фтор.
29. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что указанное соединение выбрано из следующего списка:
- 4-(4-фторфенил)-3-(пирролидин-1-илметил)-2Н-хромен-6-ол
- 1-((6-(дифторметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин
- 1-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин
- 1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)пирролидин
- 1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин
- N1-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин
- 4-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин
- N-((4-(4-фторфенил)-6-метокси-2Н-хромен-3-ил)метил)-этанамин
- 1-((6-(дифторметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин
- N1-((6-(дифторметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин
- N1-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин
- 4-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин
- N-((4-(4-фторфенил)-6-(трифторметокси)-2Н-хромен-3-ил)метил)этанамин
- 1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-4-метилпиперазин
- N1-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)-N2,N2-диметилэтан-1,2-диамин
- 4-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)морфолин
- N-((6-(циклопропилметокси)-4-(4-фторфенил)-2Н-хромен-3-ил)метил)этанамин.
30. Применение соединения формулы (I) по любому из пп. 1-29 для получения лекарственного средства для лечения отторжения трансплантата, иммунных, аутоиммунных и воспалительных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, гематологических заболеваний и пролиферативных заболеваний.
31. Применение соединения формулы (I) по любому из пп. 1-29 для получения лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства, опосредованного взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах.
32. Применение по п. 31, отличающееся тем, что заболевание или расстройство, опосредованное взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах, выбирают из отторжения трансплантата, иммунных, аутоиммунных и воспалительных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, гематологических заболеваний и пролиферативных заболеваний.
33. Применение по любому из пп. 30-32, отличающееся тем, что заболевание или расстройство выбирают из отторжения трансплантата, ревматоидного артрита, псориатического артрита, псориаза, диабета I типа, осложнений, связанных с диабетом, рассеянного склероза, системной красной волчанки, атопического дерматита, опосредованных тучными клетками аллергических реакций, лейкозов, лимфом и тромбоэмболических и аллергических осложнений, связанных с лейкозами и лимфомами.
34. Фармацевтическая композиция для лечения отторжения трансплантата, иммунных, аутоиммунных и воспалительных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, гематологических заболеваний и пролиферативных заболеваний, содержащая соединение формулы (I) по любому из пп. 1-29 и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.
35. Способ получения соединения формулы (I) по любому из пп. 1-29, включающий следующие этапы:
а) взаимодействие соединения формулы (II) с соединением формулы (IV)
где R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в п. 1.
36. Способ по п. 35, дополнительно включающий превращение альдегидной группы в формуле (II) в -СН2ОН перед взаимодействием с соединением формулы (IV).
37. Способ по п. 36, дополнительно включающий превращение -СН2ОН в -СН2-галоген перед взаимодействием с соединением формулы (IV).
38. Способ получения соединения формулы (I) по любому из пп. 1-29, включающий следующие этапы:
а) взаимодействие соединения формулы (V) с соединением формулы (III)
где R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в п. 1, и X представляет собой уходящую группу.
39. Способ по п. 38, отличающийся тем, что X представляет собой галоген.
40. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания или расстройства, опосредованного взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах, содержащая соединение формулы (I) по любому из пп. 1-29 и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.
41. Фармацевтическая композиция по п. 40, отличающаяся тем, что заболевание или расстройство, опосредованное взаимодействием TCR-Nck в Т-лимфоцитах, выбрано из отторжения трансплантата, иммунных, аутоиммунных и воспалительных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, гематологических заболеваний и пролиферативных заболеваний.
42. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 34, 40 и 41, отличающаяся тем, что заболевание или расстройство выбрано из отторжения трансплантата, ревматоидного артрита, псориатического артрита, псориаза, диабета I типа, осложнений, связанных с диабетом, рассеянного склероза, системной красной волчанки, атопического дерматита, опосредованных тучными клетками аллергических реакций, лейкозов, лимфом и тромбоэмболических и аллергических осложнений, связанных с лейкозами и лимфомами.
| WO 2012042078 A1, 05.04.2012 | |||
| КОМБИКОРМ-КОНЦЕНТРАТ ДЛЯ ДОЙНЫХ КОРОВ | 2006 |
|
RU2354134C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ХРОМАНА, ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ. | 1998 |
|
RU2223269C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ХРОМАНА И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | 1999 |
|
RU2233277C2 |
