Способ выделения биологически активных проантоцианидинов Российский патент 2018 года по МПК A61K31/352 A61K36/45 B01D11/02 

Описание патента на изобретение RU2664709C2

Изобретение относится к способам выделения биологически активных веществ из растительного сырья, конкретно для получения проантоцианидинов, обладающих различной биологической активностью, и может быть использовано в медицинской, косметической и пищевой промышленности.

Проантоцианидины, известные так же, как процианидины, олигомерные проантоцианидины, лейкоцианидины, лейкоантоцианидины и конденсированные танины принадлежат к семейству флавоноидов и представляют собой олигомеры флаван-3-олов и/или флаван-3,4-диолов. В порядке возрастания степени полимеризации проантоцианидины представляют собой мономеры (катехин, эпикатехин), а также их эфиры по положению 3, олигомеры со степенью полимеризации от двух до пяти и полимеры со степенью полимеризации более шести. Проантоцианидины могут содержать в среднем от двух до 30 флаваноидных мономеров, так называемых полигидроксифлаван-3-олов, которые включают катехин, эпикатехин, галлокатехин, эпигаллокатехин и им подобные, связанные интерфлаваноидными связями между C4 и C6 или между C4 и C8. Полимеры включают димеры, тримеры, тетрамеры, пентамеры, олигомеры и длинные полимеры из флавоноидных мономерных единиц до тех пор, пока эти полимеры проявляют указанную активность.

Известно большое количество растений, содержащих проантоцианидины, и любое из этих растений может быть использовано для их получения. Проантоцианидин-содержащие растения входят в класс Coniferiae, включая растения из разряда Coniferales из семейства Pinacea (включая сосны); члены семейства Filices (включая пальмы); однодольные растения, образующие класс Arecales, включая членов семейств Pandanales, Arales, Najadales, Restonales, Poales (включая зерновые, такие как сорго, ячмень и др.), Juncalaes, Cyperales (включая кипарис), Typhales, Zingiverales, Liliales (включая лилии); двудольные растения из отрядов Laurales (включая лавровый лист, корицу), Fagales (включая дуб), Casual-males, Dilleniales, Malviales (включая хлопок), Salicales, Ericales (включая клюкву, голубику, рододендрон), Ebenales, Resales (включая розы, боярышник, шиповник, черемуху, ежевику и другие аналогичные ягоды, яблоки, персики, сливы), Fabales (включая бобовые), Myrtales, Proteales, Rhamnales (включая виноград), Sapindales, Caprifoliaceae (включая калину, жимолость и другие аналогичные ягоды). В настоящее время в качестве растительного источника для получения проантоцианидинов используют, как правило, Caprifoliaceae, включающие виды Viburnum, Rosaceae и Vitaceae, которые включают виды Vitis и хвойные семейства Pinaceae, как содержащие наибольшее количество проантоцианидинов.

В основном олигомерные проантоцианидины применяют как природные антиоксиданты, обладающие широким спектром биологической активности. Они являются не только мощными антиоксидантами и ловушками свободных радикалов (US 4797421), но еще и обладают антибактериальной (US 6210681), противоопухолевой, антивоспалительной, антиаллергенной и сосудорасслабляющей активностью. Доказана противовирусная активность проантоцианидинов, выделенных из сабельника болотного Comarum palustre L. и туи западной Thuja occidentalis L. (Вестник ВГМУ 2015, т. 14, №2, с. 107-112). Проантоцианидины ингибируют процессы перекисного окисления липидов, агрегацию тромбоцитов, снижают хрупкость и проницаемость капилляров (US 6294190), а также влияют на активность ряда ферментных систем, способствуя предотвращению или уменьшению стресс-индуцированного повреждения желудка (US 6291517). Показано, что такими свойствами обладают как индивидуальные проантоцианидины, так и их смеси, а также экстракты их содержащие, при этом использование проантоцианидинов осуществляют в различной форме в виде фармацевтической композиции, пищевых добавок и пищевых продуктов, а также напитков.

Обычно получение проантоцианидинов основано на процессе их экстракции из растительного сырья, хотя возможно получение олигомерных проантоцианидинов и путем синтеза входящих в их состав органических соединений (RU 2281943). Экстракция проантоцианидинов из растительного материала проводится различными известными методами. Например, исходный растительный материал измельчается и экстрагируется растворителем, одним или несколькими. Гидрофильные или липофильные растворители могут быть использованы отдельно, последовательно или в комбинации. Предпочтительными из таких растворителей являются вода, спирты (этанол, метанол, изопропанол), кетоны (ацетон, метилэтилкетон) и эфиры (метилацетат и этилацетат). Температура экстракции в общем от 0 до 100°C, предпочтительнее от 10 до 55°C (СА 2302743, US 5912363, US 6440471, RU 2435579, RU 2375070).

Для выделения более узких фракций олигомерных проантоцианидинов используют метод флэш-хроматографии и ВЭЖХ (US 2006073220, JAgricFoodChem, 55(17), 2007, 6970) или, например, ультрафильтрацию через поры определенного размера (US 20150313267).

В работе Takeshita М. et al. (JBiolChem, 284(3.2), 2009, 21165-21176) на примере выделения проантоцианидинов из листьев голубики показано, что методом ВЭЖХ при трехкратной последовательной хроматографии можно добиться увеличения эффективности вытяжек проантоцианидинов.

Задачей данного изобретения является усовершенствование метода выделения определенных фракций проантоцианидинов, обладающих биологической активностью. Данная задача решена применением дополнительной экстракции спиртовой вытяжки помимо хлороформа так же этилацетатом и эфиром, и подбором элюента для хроматографировании на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм.

Пример 1.

В круглодонную колбу на 1 литр загружают 50 г сухих листьев голубики измельченных до размера частиц 1-3 мм, заливают 500 мл метанола и перемешивают при температуре 30-35°C в течение 3 часов. Отфильтровывают от осадка, маточник концентрируют на РВИ до объема 50 мл, и разбавляют 200 мл воды. Полученную суспензию экстрагируют последовательно 100 мл хлороформа, 50 мл этилового эфира и 50 мл этилацетата. Отделяют взвесь на центрифуге и маточник упаривают на РВИ. Получают 9.1 г коричневого осадка, который хроматографируют на колонке 300 г силикагеля с размером частиц 0,040-0,063 мм, например, выпускаемом фирмой Merck. Выбор данного сорбента объясняется как его высокими хроматографическими свойствами, так и экономичностью использования за счет возможности его эффективной регенерации. В качестве элюента используют смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1 (схема).

Получают 4,53 г фракции с Rf 0,29 (пластинки Merck TLC Silica gel 60 F254, элюент хлористый метилен-метанол 1:1).

Выделенная фракция идентична по Rf биологически активной фракции LC3, полученной по методике из работы Takeshita М. et al. (JBiolChem, 284(32), 2009, 21165-21176).

Подтверждением того, что выделены именно проантоцианидины, является характерная для них реакция образования антоцианидинов. Нагревание проантоцианидинов в кислых растворах (этиловый спирт, содержащий 4-7% соляной кислоты) приводит к образованию цианидина, продельфинидины соответственно образуют дельфинидин (М.Н. Запрометов. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях. Москва. «Наука», 1993. - 272 с.).

Таким образом, предложенный способ выделения проантоцианидинов позволяет получать определенную биологически активную фракцию проантоцианидинов.

Похожие патенты RU2664709C2

название год авторы номер документа
Способ производства алкогольного напитка на основе конопляного жмыха 2018
  • Ахлебинин Михаил Юрьевич
  • Огурцов Владимир Анатольевич
  • Абрамов Александр Андреевич
RU2710321C1
РЕГУЛЯТОР ОБМЕНА АЦЕТАЛЬДЕГИДА В ОРГАНИЗМЕ ПРИ ОКИСЛЕНИИ ЭТИЛОВОГО СПИРТА, СРЕДСТВО И НАПИТОК ЕГО СОДЕРЖАЩИЕ 2002
  • Спрыгин В.Г.
  • Кушнерова Н.Ф.
RU2203678C1
ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОР И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2007
  • Пономарев Гелий Васильевич
  • Каплан Михаил Александрович
  • Поспелов Вадим Игоревич
  • Круглов Игорь Юрьевич
  • Ахлебинин Михаил Юрьевич
RU2416614C2
Способ получения (2R,3R,4R,5S)-1-бутил-2-(гидроксиметил)пиперидин-3,4,5-триола 2020
  • Балабаньян Вадим Юрьевич
  • Фазылов Марат Феликсович
RU2762605C1
Способ получения производных индолсульфонамидо или их солей щелочных металлов 1987
  • Хорст Бесхаген
  • Ульрих Розентретер
  • Фолкер Либ
  • Германн Эдигер
  • Фридель Зейтер
  • Элизабет Перцборн
  • Фолкер-Бернд Фидлер
SU1438609A3
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ АНТОЦИАНОВ 2005
  • Птицын Андрей Владимирович
  • Мухтаров Эдгар Илалович
  • Каплун Александр Петрович
  • Мухтарова Светлана Эдгаровна
RU2302423C2
ЭКСТРАКТ ЛИСТЬЕВ АРОНИИ, ОБЛАДАЮЩИЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2000
  • Ипатова О.М.
  • Прозоровская Н.Н.
  • Прозоровский В.Н.
  • Княжев В.А.
  • Баранова В.С.
  • Груздева А.Е.
RU2171111C1
ПРОЛЕКАРСТВА 3-АЦИЛ-2-ОКСИНДОЛ-1-КАРБОКСАМИДОВ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ 1993
  • Вейн Е.Барт
  • Келвин Купер
  • Эдвард Ф.Клейнман
  • Лоуренс А.Рейтер
  • Ральф П.Робинсон
RU2124514C1
Циклический аналог брадикинина,обладающий пролонгированным гипотензивным действием 1980
  • Мутулис Ф.К.
  • Чипенс Г.И.
  • Мышлякова Н.В.
SU892871A1
ТИОМАРИНОЛ B И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) 1993
  • Судзи Такахаси[Jp]
  • Хидеюки Сиозава[Jp]
  • Такеси Кагасаки[Jp]
  • Канео Огава[Jp]
  • Кентаро Кодама[Jp]
  • Акира Исий[Jp]
  • Кацуми Фудзимото[Jp]
  • Юдзи Ивано[Jp]
  • Койти Хирай[Jp]
  • Акио Ториката[Jp]
  • Есихара Сакайда[Jp]
RU2101353C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 664 709 C2

Реферат патента 2018 года Способ выделения биологически активных проантоцианидинов

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики (Vaccinium uliginosum) экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 1/10 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29. Изобретение позволяет усовершенствовать метод выделения определенной фракции проантоцианидинов, обладающих биологической активностью. 1 ил., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 664 709 C2

Способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики (Vaccinium uliginosum) экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 1/10 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2018 года RU2664709C2

MASAHIKO TAKESHITA "Proanthocyanidin from blueberry leaves suppresses expression of subgenomic hepatitis C virus RNA", The Journal of biological chemistry, 2009, V.284, N.32, стр.21165-21176
ZHANG HUA "Extraction and purification of anthocyanins from the fruit residues of vaccinium uliginosum Linn", Journal Chromat
Separation Techniq.", 2013, V.4, Is.2, стр.1-5
Прибор, замыкающий сигнальную цепь при повышении температуры 1918
  • Давыдов Р.И.
SU99A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТОЦИАНОВОГО КРАСИТЕЛЯ ИЗ ЦВЕТОЧНОГО СЫРЬЯ 2002
  • Один А.П.
  • Хайрутдинова А.Д.
  • Болотов В.М.
RU2220172C1
ЭКСТРАКТЫ ИЗ ВИНОГРАДНЫХ КОСТОЧЕК, ПОЛУЧАЕМЫЕ ФРАКЦИОНИРОВАНИЕМ НА СМОЛЕ 2006
  • Джиори Андреа
  • Анелли Алессандро
RU2400246C2

RU 2 664 709 C2

Авторы

Ахлебинин Михаил Юрьевич

Огурцов Владимир Анатольевич

Абрамов Александр Андреевич

Даты

2018-08-21Публикация

2016-12-01Подача