[0001] В данной заявке заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/799513, поданной 31 января 2019 года, и предварительной заявке на патент США № 62/678878, поданной 31 мая 2018 года, раскрытие которых явным образом полностью включено в данный документ посредством ссылки.

[0002] В данном документе раскрыты Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR-T) с редактированным геномом и способы их использования для иммунотерапии. В частности, изобретение относится к Т-клеткам, которые могут быть генетически модифицированы для экспрессии одного или более химерных антигенных рецепторов (CAR), и к способам их использования для лечения рака.

[0003] Т-клетки, тип лимфоцитов, играют центральную роль в клеточно-опосредованном иммунитете. Т-клетки можно отличить от других лимфоцитов, таких как В-клетки и NK-клетки, по присутствию Т-клеточного рецептора (ТКР) на клеточной поверхности. Т-клетки хелперы (Т_H), также называемые CD4⁺ T или CD4 T-клетками, экспрессируют гликопротеин CD4 на своей поверхности. Т-клетки хелперы активируются при воздействии пептидных антигенов, представленных молекулами ГКГ (главный комплекс гистосовместимости) II класса После активации эти клетки быстро размножаются и секретируют цитокины, регулирующие иммунный ответ. Цитотоксические T-клетки (T_C), также известные как CD8⁺ T-клетки или CD8 T-клетки, экспрессируют гликопротеин CD8 на поверхности клетки. CD8⁺ T-клетки активируются при воздействии пептидных антигенов, представленных молекулами ГКГ I класса. Т-клетки памяти, подмножество Т-клеток, сохраняются в течение длительного времени и реагируют на свой распознанный антиген, тем самым обеспечивая иммунную систему «памятью» против прошлых инфекций и/или опухолевых клеток. Гамма-дельта (γδ) Т-клетки являются прототипом «нетрадиционных» Т-клеток и представляют собой относительно небольшое подмножество Т-клеток в периферической крови. Они определяются экспрессией гетеродимерных Т-клеточных рецепторов (TCR), состоящих из γ и δ цепей. Это отличает их от CD4⁺ Т-клеток хелперов и CD8⁺ цитотоксических Т-клеток. Вирусоспецифические цитотоксические Т-лимфоциты представляют собой Т-клетки, обладающие реактивностью против вирусных антигенов, в частности вируса Эпштейна-Барра (EBV) и цитомегаловируса (CMV).

[0004] Описанные в данном документе Т-клетки могут быть генетически модифицированы для экспрессии химерных антигенных рецепторов (CAR), которые представляют собой слитые белки, состоящие из фрагмента распознавания антигена и доменов активации Т-клеток. Т-клетки, экспрессирующие CAR, могут распознавать определенный белок, то есть антиген на опухолевых клетках. Эти Т-клетки, экспрессирующие CAR, могут быть размножены в лаборатории перед инфузией пациенту.

[0005] Клинические испытания показали высокую частоту ответа после инфузии анти-CD19 CAR у пациентов с В-клеточными злокачественными новообразованиями, включая диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВККЛ) и острый лимфобластный лейкоз предшественников B-клеток (ОЛЛ), что привело к появлению двух лекарственных средств, одобренных FDA Yescarta™ (axicabtagene ciiloleucel, Kite Pharma/Gilead) и Kymriah™ (tisagenlecleucel, Novartis). Несмотря на эти успехи, разработка CAR-T-клеточной терапии против Т-клеточных злокачественных новообразований оказалась проблематичной, отчасти из-за общей экспрессии целевых антигенов между злокачественными Т-клетками и эффекторными Т-клетками. Среди наиболее общих проблем: (1) антигенная мишень(и) для химерного антигенного рецептора(ов); (2) конструкция CAR, т.е. моно CAR, двойные CAR, тандемные CAR; и (3) неоднородность опухоли, в частности, вариация поверхностной экспрессии опухолевых антигенов. Следовательно, остается потребность в улучшенных иммунотерапевтических средствах на основе химерных антигенных рецепторов (CAR), которые используют редактирование генома и создание моно, двойных и тандемных CAR для более эффективного, безопасного и действенного нацеливания на рак, включая Т-клетки, сопутствующие злокачественные новообразования.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0006] На Фиг. 1 представлена схема двойной CAR T-клетки (dCAR T-клетки).

[0007] На Фиг. 2 представлена схема тандемной CAR T-клетки (tCAR T-клетки).

[0008] На Фиг. 3 представлена схема двойной и тандемной конструкций CAR.

[0009] На Фиг. 4 представлена схема тандемных нацеленных конструкций CAR.

[0010] На Фиг. 5 продемонстрирована чистота продукта CAR-T без механического истощения CAR-T клеток CD3+ или CD2+. Как показал анализ FACS, CAR T-клетки CD3^- и CD2^- обладают высокой чистотой без необходимости магнитного истощения CD3+ клеток. Типовые графики FACS демонстрируют окрашивание FITC CD3 (ось y) и CD2 (ось x). Показаны клоны 5 (вверху) и 6 (внизу).

[0011] На Фиг. 6 продемонстрирована чистота продукта CAR-T без механического истощения CAR-T клеток CD3+ или CD2+. Как показал анализ FACS, CAR T-клетки CD3- и CD2- обладают высокой чистотой без необходимости отбора CD3+ клеток с помощью магнитного истощения. Типовые графики FACS демонстрируют окрашивание FITC CD3 (ось y) и CD2 (ось x). Показаны клоны 7 (вверху) и 8 (внизу).

[0012] На Фиг. 7 продемонстрирована чистота продукта CAR-T без механического истощения CAR-T клеток CD3+ или CD2+. Как показал анализ FACS, CAR T-клетки CD3- и CD2- обладают высокой чистотой без необходимости отбора CD3+ клеток с помощью магнитного истощения. Типовые графики FACS демонстрируют окрашивание FITC CD3 (ось y) и CD2 (ось x). Показаны клоны 13 (вверху) и 14 (внизу).

[0013] На Фиг. 8 продемонстрирована чистота продукта CAR-T без механического истощения CAR-T клеток CD3+ или CD2+. Как показал анализ FACS, CAR T-клетки CD3- и CD2- обладают высокой чистотой без необходимости отбора CD3+ клеток с помощью магнитного истощения. Типовые графики FACS демонстрируют окрашивание FITC CD3 (ось y) и CD2 (ось x). Показаны клоны 15 (вверху) и 16 (внизу).

[0014] На Фиг. 9А продемонстрировано уничтожение опухолевых клеток тандемных CD2-CD3 CAR-T клонов 5 (вверху) и 6 (внизу); легенда демонстрирует соотношение эффекторных клеток к клеткам-мишеням (соотношение E:T).

[0015] На Фиг. 9В продемонстрировано уничтожение опухолевых клеток тандемных CD2-CD3 CAR-T клонов 7 (вверху) и 8 (внизу); легенда демонстрирует соотношение эффекторных клеток к клеткам-мишеням (соотношение E:T).

[0016] На Фиг. 9С продемонстрировано уничтожение опухолевых клеток тандемных CD2-CD3 CAR-T клонов 13 (вверху) и 14 (внизу); легенда демонстрирует соотношение эффекторных клеток к клеткам-мишеням (соотношение E:T).

[0017] На Фиг. 9D продемонстрировано уничтожение опухолевых клеток тандемных CD2-CD3 CAR-T клонов 15 (вверху) и 16 (внизу); легенда демонстрирует соотношение эффекторных клеток к клеткам-мишеням (соотношение E:T).

[0018] На Фиг. 10А продемонстрирована схема конструкции BCMA CAR, трансдуцируемой в Т-клетки, которые будут нацелены на BCMA.

[0019] На Фиг. 10B продемонстрировано уничтожение опухолевых клеток BCMA-CAR T-клеток в анализе высвобождения ⁵¹Cr. Эффективное уничтожение BCMA-CAR T-клеток наблюдали при множественных соотношениях эффектор к цели (E:T). Нетрансдуцированные активированные Т-клетки и CD19-CAR T-клетки использовали в качестве отрицательного контроля и не вызывали гибели клеток MM.1S-CG.

[0020] На Фиг. 10С продемонстрирована in vivo эффективность ВСМА CAR T-клеток. Все семь мышей, получавших BCMA CAR-T, прожили почти 150 дней или более по сравнению с контрольными мышами, которые умерли на около 50 день.

[0021] На Фиг. 10D продемонстрирована последовательная биолюминесцентная визуализация (BLI), измеренная в фотопотоке, выявившая устойчивое снижение сигнала до фоновых уровней, которые никогда не увеличивались на протяжении всего эксперимента у мышей, получавших лечение BCMA CAR T-клетками.

[0022] На Фиг. 11A продемонстрирована схема конструкции CS1-CAR, трансдуцируемой в Т-клетки, которые будут нацелены на CS1.

[0023] На Фиг. 11В продемонстрирована in vivo эффективность CS1-CAR T-клеток. Мышам прививали клетки MM.1S-CG и клетки MM.1S-CG, лишенные CS1 (с использованием технологии CAS9/CRISPR; MM.1S-CGΔCS1), в качестве способа проверки специфичности CS1-CAR T-клеток. Все мыши, получавшие CS1-CAR T-клетки (n=10), жили > 90 дней, в то время как средняя выживаемость мышей CD19-контроля (n=8) составляла 43 дня.

[0024] На Фиг. 11С продемонстрировано серийное биолюминесцентное изображение (BLI), показывающее, что у мышей, обработанных CS1-CAR T-клетками, наблюдалось трехлогарифмическое снижение потока фотонов и клиренса опухоли костного мозга (от эксперимента 1 до эксперимента 3).

[0025] На Фиг. 12А продемонстрирована схема моно (CD19, CS1) и тандемных (BCMA-CS1) конструкций.

[0026] На Фиг. 12В продемонстрирован FACS-анализ клеток Jurkat, экспрессирующих CD19 CAR, которые не связывались ни с белком BCMA, ни с CS1 (нижний левый квадрант каждого графика). Клетки Jurkat, экспрессирующие белок BCMA CAR, связанный с белком BCMA (верхний левый квадрант каждого графика). Клетки Jurkat, экспрессирующие белок CS1 CAR, связанный с белком CS1 (нижний правый квадрант каждого графика). Клетки Jurkat, экспрессирующие тандемный белок BCMA-CS1 CAR, связанный с обоими рекомбинантными белками (верхний правый квадрант каждого графика), что свидетельствует об экспрессии обоих scFv.

[0027] На Фиг. 12С продемонстрирована in vitro эффективность одиночных и тандемных CAR T-клеток с использованием стандартных четырехчасовых анализов высвобождения хрома (⁵¹Cr). BCMA-CS1 tCAR T-клетки убивали клетки MM.1S-CG с такой же эффективностью, как и отдельные BCMA, так и CS1 CAR T-клетки нацеленные на антиген.

[0028] На Фиг. 13 продемонстрирована тестирование эффективности CD2*CD3Δ-dCARTΔCD2ΔCD3ε на ксеногенной модели T-ОЛЛ.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0029] В нижеследующем описании будут подробно описаны варианты реализации, альтернативы и использование сконструированных клеток, а также использование sch-клеток, например, в иммунотерапии и адоптивном переносе клеток для лечения заболеваний. Соответственно, в данном документе представлены следующие варианты реализации.

[0030] Вариант реализации данного изобретения 1. CAR T-клетка, которая содержит один или более химерных антигенных рецепторов (CAR), нацеленных на один или более антигенов, при этом CAR T-клетка дефицитна по субъединице рецепторного комплекса T-клеток и/или дефицитна по меньшей мере по одному или более антигенам, с которыми специфически связывается один или более CAR.

[0031] Вариант реализации данного изобретения 2. CAR T-клетка, которая содержит один или более химерных антигенных рецепторов (CAR), нацеленных на один или более антигенов, при этом CAR T-клетка дефицитна по одному или более антигенам, с которыми специфически связывается один или более CAR.

[0032] Вариант реализации данного изобретения 3. CAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 1, в котором субъединица рецепторного комплекса Т-клеток выбрана из TCRα, TCRβ, TCRδ, TCRγ, CD3ε, CD3γ, CD3δ, и CD3ζ.

[0033] Вариант реализации данного изобретения 4. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-2, в котором химерный антигенный рецептор (CAR) специфически связывает один или более антигенов, экспрессируемых на поверхности злокачественной Т-клетки или клетке миеломы

[0034] Вариант реализации данного изобретения 5. CAR T-клетка, по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-4, в котором последовательность химерного антигенного рецептора (CAR) по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38 или SEQ ID NO:39.

[0035] Вариант реализации данного изобретения 6. CAR T-клетка, по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-4, в котором последовательность химерного антигенного рецептора (CAR) по меньшей мере на 98% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38 или SEQ ID NO:39.

[0036] Вариант реализации данного изобретения 7. CAR T-клетка, по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-4, в котором химерный антигенный рецептор (CAR) представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38 или SEQ ID NO:39.

[0037] Вариант реализации данного изобретения 8. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-4, в котором химерный антигенный рецептор специфически связывает один или более антигенов, выбранных из BCMA, CS1, CD38, CD138, CD19, CD33, CD123, CD371, CD117, CD135, Tim-3, CD5, CD7, CD2, CD4, CD3, CD79A, CD79B, APRIL, CD56 и CD1a.

[0038] Вариант реализации данного изобретения 9. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-5, в котором химерный антигенный рецептор(ы) специфически связывает по меньшей мере один антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной Т-клетки.

[0039] Вариант реализации данного изобретения 10. CAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 9, в котором антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной T-клетки, выбран из CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, TCRA и TCRβ.

[0040] Вариант реализации данного изобретения 11. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-5, в котором химерный антигенный рецептор специфически связывает по меньшей мере один антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной плазматической клетки.

[0041] Вариант реализации данного изобретения 12. CAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 11, в котором антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной плазматической клетки, выбран из BCMA, CS1, CD38, CD79A, CD79B, CD138 и CD19.

[0042] Вариант реализации данного изобретения 13. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-5, в котором химерный антигенный рецептор(ы) специфически связывает по меньшей мере один антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной В-клетки.

[0043] Вариант реализации данного изобретения 14. CAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 13, в котором антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной В-клетки, выбран из CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27, CD38 и CD45.

[0044] Вариант реализации данного изобретения 15. CAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 14, в котором антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной В-клетки, выбран из CD19 и CD20.

[0045] Вариант реализации данного изобретения 16. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-15, в котором CAR T-клетка дополнительно содержит «суицидный» ген.

[0046] Вариант реализации данного изобретения 17. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-16, в котором передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором, заблокирована в CAR-T-клетке.

[0047] Вариант реализации данного изобретения 18. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-17, в котором CAR T-клетки не индуцируют аллореактивность или реакцию «трансплантат против хозяина».

[0048] Вариант реализации данного изобретения 19. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-18, в котором CAR T-клетки не индуцируют взаимное уничтожение.

[0049] Вариант реализации данного изобретения 20. Двойная или тандемная CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-19.

[0050] Вариант реализации данного изобретения 21. CAR T-клетка по варианту реализации 20, в котором CAR специфически связывает (связывают) две разные мишени, выбранные из CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD3εxCD7, CD4xCD5, CD4xCD7, CD5xCD7, TRACxCD2, TRACxCD3ε, TRACxCD4, TRACxCD5, TRACxCD7, TCRβxCD2, TCRβxCD3ε, TCRβxCD4, TCRβxCD7, CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD3εxCD7, CD4xCD5, CD4xCD7, CD5xCD7, TRACxCD2, TRACxCD3ε, TRACxCD4, TRACxCD5, TRACxCD7, TCRβxCD2, TCRβxCD3ε, TCRβxCD4, TCRβxCD5, TCRβxCD7, BCMAxCS1, BCMAxCD19, BCMAxCD38, CS1xCD19, CD19xCD38, APRILxCS1, APRILxBCMA, APRILxCD19, APRILxCD38, CS1xCD38, CD79AxBCMA, CD79AxCS1, CD79AxCD19, CD79AxCD38, CD79AxCD38, CD79AxAPRIL, CD79AxCD79B, CD79BxBCMA, CD79BxCS1, CD79BxCD19, CD79BxCD38, CD79BxAPRIL, CD79BxCD79A, CD138xBCMA, CD138xCS1, CD138xCD19, CD138xCD38, CD138xAPRIL, CD138xCD79A, CD138xCD79B, CD138xBCMA и CD138xCS1.

[0051] Вариант реализации данного изобретения 22. CAR T-клетка по варианту реализации 21, в котором CAR специфически связывает (связывают) две разные мишени, выбранные из CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD3εxCD7, CD4xCD5, CD4xCD7, CD5xCD7, TRACxCD2, TRACxCD3ε, TRACxCD4, TRACxCD5, TRACxCD7, TCRβxCD2, TCRβxCD3ε, TCRβxCD4, TCRβxCD7, CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD3εxCD7, CD4xCD5, CD4xCD7, CD5xCD7, TRACxCD2, TRACxCD3ε, TRACxCD4, TRACxCD5, TRACxCD7, TCRβxCD2, TCRβxCD3ε, TCRβxCD4, TCRβxCD5 и TCRβxCD7.

[0052] Вариант реализации данного изобретения 23. CAR T-клетка по варианту реализации 21, в котором CAR специфически связывает (связывают) две разные мишени, выбранные из BCMAxCS1, BCMAxCD19, BCMAxCD38, CS1xCD19, CD19xCD38, APRILxCS1, APRILxBCMA, APRILxCD19, APRILxCD38, CS1xCD38, CD79AxBCMA, CD79AxCS1, CD79AxCD19, CD79AxCD38, CD79AxCD38, CD79AxAPRIL, CD79AxCD79B, CD79BxBCMA, CD79BxCS1, CD79BxCD19, CD79BxCD38, CD79BxAPRIL, CD79BxCD79A, CD138xBCMA, CD138xCS1, CD138xCD19, CD138xCD38, CD138xAPRIL, CD138xCD79A, CD138xCD79B, CD138xBCMA и CD138xCS1.

[0053] Вариант реализации данного изобретения 24. CAR T-клетка по варианту реализации 21, в котором CAR специфически связывает (связывают) две разные мишени, выбранные из CD123xCD371, CD123xCLEC12A, CD123xCD117, CD123xFLT3, CD123xCD7, CD123xTim3, CD371xCLEC12A, CD371xCD117, CD371xFLT3, CD371xCD7, CD371xTim3, CLEC12AxCD117, CLEC12AxFLT3, CLEC12AxCD7, CLEC12AxTim3, CD117xFLT3, CD117xCD7, CD117xTim3, FLT3xCD7, FLT3xTim3 и CD7xTim3.

[0054] Вариант реализации данного изобретения 25. Двойная CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 21-24.

[0055] Вариант реализации данного изобретения 26. Тандемная CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 21-34.

[0056] Вариант реализации данного изобретения 27. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-26, в котором CAR T-клетка дополнительно содержит «суицидный» ген.

[0057] Вариант реализации данного изобретения 28. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-26, в котором передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором, заблокирована в CAR-T-клетке.

[0058] Вариант реализации данного изобретения 29. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-26, в котором CAR T-клетки не индуцируют аллореактивность или реакцию «трансплантат против хозяина».

[0059] Вариант реализации данного изобретения 30. CAR T-клетка по любому из вариантов реализации 1-26, в котором CAR T-клетки не индуцируют взаимное уничтожение.

[0060] Вариант реализации данного изобретения 31. Двойной или тандемный химерный антигенный рецептор (dCAR или tCAR), нацеленный на два или более антигенов клеток плазмы.

[0061] Вариант реализации данного изобретения 32. CAR по варианту реализации 31, в котором антиген(ы) клеток плазмы выбран(ы) из BCMA, CS1, CD38, CD79A, CD79B, CD138 и CD19.

[0062] Вариант реализации данного изобретения 33. CAR по варианту реализации 32, в котором CAR специфически связывает (связывают) две разные мишени, выбранные из BCMAxCS1, BCMAxCD19, BCMAxCD38, CS1xCD19, CD19xCD38, APRILxCS1, APRILxBCMA, APRILxCD19, APRILxCD38, CS1xCD38, CD79AxBCMA, CD79AxCS1, CD79AxCD19, CD79AxCD38, CD79AxCD38, CD79AxAPRIL, CD79AxCD79B, CD79BxBCMA, CD79BxCS1, CD79BxCD19, CD79BxCD38, CD79BxAPRIL, CD79BxCD79A, CD138xBCMA, CD138xCS1, CD138xCD19, CD138xCD38, CD138xAPRIL, CD138xCD79A, CD138xCD79B, CD138xBCMA и CD138xCS1.

[0063] Вариант реализации данного изобретения 34. CAR по любому из вариантов реализации 31-33, в котором CAR представляет собой dCAR.

[0064] Вариант реализации данного изобретения 35. CAR по любому из вариантов реализации 31-33, в котором CAR представляет собой tCAR.

[0065] Вариант реализации данного изобретения 36. Двойной или тандемный химерный антигенный рецептор (dCAR или tCAR), нацеленный на два или более антигенов лейкозной клетки.

[0066] Вариант реализации данного изобретения 37. CAR по варианту реализации 36, в котором антиген(ы) клеток плазмы выбран(ы) из CD123, CLEC12A, CD117, FLT3, CD7 и Tim3.

[0067] Вариант реализации данного изобретения 38. CAR по варианту реализации 37, в котором CAR специфически связывает (связывают) две разные мишени, выбранные из CD123xCD371, CD123xCLEC12A, CD123xCD117, CD123xFLT3, CD123xCD7, CD123xTim3, CD371xCLEC12A, CD371xCD117, CD371xFLT3, CD371xCD7, CD371xTim3, CLEC12AxCD117, CLEC12AxFLT3, CLEC12AxCD7, CLEC12AxTim3, CD117xFLT3, CD117xCD7, CD117xTim3, FLT3xCD7, FLT3xTim3 и CD7xTim3.

[0068] Вариант реализации данного изобретения 39. CAR по любому из вариантов реализации 36-38, в котором CAR представляет собой dCAR.

[0069] Вариант реализации данного изобретения 40. CAR по любому из вариантов реализации 36-38, в котором CAR представляет собой tCAR.

[0070] Вариант реализации данного изобретения 41. Тандемный химерный антигенный рецептор (tCAR), нацеленный на два или более антигенов Т-клетки.

[0071] Вариант реализации данного изобретения 42. tCAR по варианту реализации 41, в котором Т-клеточные антигены выбраны из CD5, CD7, CD2, CD4 и CD3.

[0072] Вариант реализации данного изобретения 43. tCAR по варианту реализации 42, нацелен на пару (т.е. два) антигена.

[0073] Вариант реализации данного изобретения 44. tCAR по варианту реализации 43, в котором пара антигенов выбрана из CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD3εxCD7, CD4xCD5, CD4xCD7, CD5xCD7, TRACxCD2, TRACxCD3ε, TRACxCD4, TRACxCD5, TRACxCD7, TCRβxCD2, TCRβxCD4, TCRβxCD7, CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD4xCD5, CD4xCD7, CD5xCD7, TRACxCD2, TRACxCD3ε, TRACxCD4, TRACxCD5, TRACxCD7, TCRβxCD2, TCRβxCD3ε, TCRβxCD4, TCRβxCD5 и TCRβxCD7.

[0074] Вариант реализации данного изобретения 45. tCAR по варианту реализации 43, в котором пара антигенов выбрана из CD2xCD3ε, CD2xCD4, CD2xCD5, CD2xCD7, CD3εxCD4, CD3εxCD5, CD3εxCD7, CD4xCD5, CD4xCD7 и CD5xCD7.

[0075] Вариант реализации данного изобретения 46. tCAR по любому из вариантов реализации 35 и 40-45, в котором конструкция CAR представляет собой линейную конструкцию tCAR.

[0076] Вариант реализации данного изобретения 47. tCAR по варианту реализации данного изобретения 46, в котором линейная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H) и первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), обозначенные V_H1 и V_L1, соединенные (GGGGS)_2-6линкером ко второму вариабельному фрагменту легкой цепи (V_L) и первому вариабельному фрагменту тяжелой цепи (V_H), обозначенные как V_L2 и V_H2.

[0077] Вариант реализации данного изобретения 48. tCAR по варианту реализации данного изобретения 46, в котором линейная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H) и первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), обозначенные V_H2 и V_L2, соединенные (GGGGS)_2-6линкером ко второму вариабельному фрагменту легкой цепи (V_L) и первому вариабельному фрагменту тяжелой цепи (V_H), обозначенные как V_H1 и V_L1.

[0078] Вариант реализации данного изобретения 49. tCAR по варианту реализации данного изобретения 46, в котором линейная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L) и первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), обозначенные V_L1 и V_H1, соединенные (GGGGS)_2-6линкером ко второму вариабельному фрагменту тяжелой цепи (V_H) и первому вариабельному фрагменту легкой цепи (V_L), обозначенные как V_H2 и V_L2.

[0079] Вариант реализации данного изобретения 50. tCAR по варианту реализации данного изобретения 46, в котором линейная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L) и первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), обозначенные V_L2 и V_H2, соединенные (GGGGS)_2-6линкером ко второму вариабельному фрагменту тяжелой цепи (V_H) и первому вариабельному фрагменту легкой цепи (V_L), обозначенные как V_H1 и V_L1.

[0080] Вариант реализации данного изобретения 51. tCAR по варианту реализации 46, в котором линейная конструкция tCAR содержит структуру, выбранную из 7-I - 7-XXXII.

[0081] Вариант реализации данного изобретения 52. tCAR по любому из вариантов реализации 35 и 40-45, в котором конструкция CAR представляет собой шпилечную конструкцию tCAR.

[0082] Вариант реализации данного изобретения 53. tCAR по варианту реализации данного изобретения 52, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из первого scFv, и второй вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из второго scFv, обозначенные V_H1 и V_H2, соединенные линкером (GGGGS)_2-6с первым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из второго scFv, и вторым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из первого scFv, обозначенные как V_L2 и V₁2.

[0083] Вариант реализации данного изобретения 54. tCAR по варианту реализации данного изобретения 52, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит второй вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из второго scFv, и первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из первого scFv, обозначенные V_H2 и V_H1, соединенные линкером (GGGGS)_2-6с первым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из первого scFv, и вторым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из второго scFv, обозначенные как V_L1 и V_L2.

[0084] Вариант реализации данного изобретения 55. tCAR по варианту реализации данного изобретения 52, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из первого scFv, и второй вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из второго scFv, обозначенные V_L1 и V_L2, соединенные линкером (GGGGS)_2-6с первым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_H), полученным из первого scFv, и вторым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_L), полученным из второго scFv, обозначенные как V_H2 и V_H1.

[0085] Вариант реализации данного изобретения 56. tCAR по варианту реализации данного изобретения 52, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит второй вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из второго scFv, и первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из первого scFv, обозначенные V_L2 и V_L1, соединенные линкером (GGGGS)_2-6с первым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_H), полученным из первого scFv, и вторым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_H), полученным из второго scFv, обозначенные как V_H1 и V_H2.

[0086] Вариант реализации данного изобретения 57. tCAR по варианту реализации 52, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит структуру, выбранную из 9-I - 9-XXXII.

[0087] Вариант реализации данного изобретения 58. tCAR по любому из вариантов реализации 35 и 40-45, в котором конструкция CAR представляет собой шпилечную конструкцию tCAR DSB с (Cys=Cys) двухцепочечной связью (DSB) в линкере.

[0088] Вариант реализации данного изобретения 59. tCAR по варианту реализации данного изобретения 58, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из первого scFv, и второй вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из второго scFv, обозначенные V_H1 и V_H2, соединенные линкером (GGGGS)_0-1-(GGGGC)₁-(GGGGS)_1-2-(GGGGP)₁-(GGGGS)_2-3-(GGGGC)₁-(GGGGS)_0-1с первым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из второго scFv, и вторым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из первого scFv, обозначенные как V_L2 и V₁2.

[0089] Вариант реализации данного изобретения 60. tCAR по варианту реализации данного изобретения 58, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит второй вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из второго scFv, и первый вариабельный фрагмент тяжелой цепи (V_H), полученный из первого scFv, обозначенные V_H2 и V_H1, соединенные линкером (GGGGS)_0-1-(GGGGC)₁-(GGGGS)_1-2-(GGGGP)₁-(GGGGS)_2-3-(GGGGC)₁-(GGGGS)_0-1с первым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из первого scFv, и вторым вариабельным фрагментом легкой цепи (V_L), полученным из второго scFv, обозначенные как V_L1 и V_L2.

[0090] Вариант реализации данного изобретения 61. tCAR по варианту реализации данного изобретения 58, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из первого scFv, и второй вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из второго scFv, обозначенные V_L1 и V_L2, соединенные линкером (GGGGS)_0-1-(GGGGC)₁-(GGGGS)_1-2-(GGGGP)₁-(GGGGS)_2-3-(GGGGC)₁-(GGGGS)_0-1с первым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_H), полученным из первого scFv, и вторым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_L), полученным из второго scFv, обозначенные как V_H2 и V_H1.

[0091] Вариант реализации данного изобретения 62. tCAR по варианту реализации данного изобретения 58, в котором шпилечная конструкция tCAR содержит второй вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из второго scFv, и первый вариабельный фрагмент легкой цепи (V_L), полученный из первого scFv, обозначенные V_L2 и V_L1, соединенные линкером (GGGGS)_0-1-(GGGGC)₁-(GGGGS)_1-2-(GGGGP)₁-(GGGGS)_2-3-(GGGGC)₁-(GGGGS)_0-1с первым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_H), полученным из первого scFv, и вторым вариабельным фрагментом тяжелой цепи (V_H), полученным из второго scFv, обозначенные как V_H1 и V_H2.

[0092] Вариант реализации данного изобретения 63. tCAR по варианту реализации 58, в котором шпилечная конструкция DSB tCAR содержит структуру, выбранную из 11-I - 11-XXXII.

[0093] Вариант реализации данного изобретения 64. tCAR по любому из вариантов реализации 41-63, в котором каждая из цепей V_H и V_L полученная из scFv, который распознает другой антиген, выбранный из CD5, CD7, CD2, CD4 и CD3.

[0094] Вариант реализации данного изобретения 65. tCAR по варианту реализации данного изобретения 64, в котором каждая из цепей V_H и V_L отличается и по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из от SEQ ID NO:12 - SEQ ID NO:31.

[0095] Вариант реализации данного изобретения 66. tCAR по варианту реализации данного изобретения 64, в котором каждая из цепей V_H и V_L отличается и по меньшей мере на 98% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из от SEQ ID NO:12 - SEQ ID NO:31.

[0096] Вариант реализации данного изобретения 67. tCAR по варианту реализации данного изобретения 64, в котором каждая из цепей V_H и V_L отличается и представляет собой последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12 - SEQ ID NO:31.

[0097] Вариант реализации данного изобретения 68. tCAR по любому из вариантов реализации 35, 39 и 41-67 содержит по меньшей мере один костимулирующий домен, выбранный из CD28 и 4-1BB.

[0098] Вариант реализации данного изобретения 69. tCAR по варианту реализации данного изобретения 68, в котором костимулирующий домен представляет собой CD28.

[0099] Вариант реализации данного изобретения 70. tCAR по любому из вариантов реализации данного изобретения 35 и 40-69, содержащий сигнальный домен CD3_ζ.

[00100] Вариант реализации данного изобретения 71. tCAR по любому из вариантов реализации данного изобретения 41-63 и 68-70, в котором каждая из цепей V_H и V_L, происходит от scFv, распознающего CD2 или scFv, распознающего CD3.

[00101] Вариант реализации данного изобретения 72. tCAR по варианту реализации данного изобретения 64, в котором конструкция tCAR выбрана из Клона 5, Клона 6, Клона 7, Клона 8, Клона 13, Клона 14, Клона 15 и Клона 16.

[00102] Вариант реализации данного изобретения 73. tCAR по варианту реализации данного изобретения 64, в котором конструкция tCAR имеет последовательность по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:41 - SEQ ID NO:46.

[00103] Вариант реализации данного изобретения 74. Тандемная Т-клетка химерного антигенного рецептора (CAR) (tCAR T-клетка), которая содержит tCAR, нацеленную на два или более Т-клеточных антигена по любому из вариантов реализации 35 и 40-73.

[00104] Вариант реализации данного изобретения 75. tCAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 74, в котором клетка дефицитна по одному или более антигенам, с которыми специфически связывается один или более CAR.

[00105] Вариант реализации данного изобретения 76. tCAR T-клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 74 и 75, в котором tCAR T-клетка дефицитна по субъединице рецепторного комплекса T-клеток.

[00106] Вариант реализации данного изобретения 77. tCAR T-клетка по варианту реализации данного изобретения 76, в котором субъединица рецепторного комплекса Т-клетки выбрана из TCRα(TRAC), TCRβ, TCRδ, TCRγ, CD3ε, CD3γ, CD3δ, и CD3ζ.

[00107] Вариант реализации данного изобретения 78. tCAR-T по варианту реализации данного изобретения 77, в котором субъединица рецепторного комплекса Т-клетки выбрана из TCRα(TRAC) и CD3ε.

[00108] Вариант реализации данного изобретения 79. tCAR-T по варианту реализации данного изобретения 78, в котором субъединица рецепторного комплекса Т-клетки представляет собой TRAC.

[00109] Вариант реализации данного изобретения 80. tCAR T-клетка по любому из вариантов реализации 35 и 40-79, в котором CAR T-клетка дополнительно содержит «суицидный» ген.

[00110] Вариант реализации данного изобретения 81. tCAR T-клетка по любому из вариантов реализации 35 и 40-80, в котором передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором, заблокирована в CAR-T-клетке.

[00111] Вариант реализации данного изобретения 82. tCAR T-клетка по любому из вариантов реализации 35 и 40-81, в котором CAR T-клетки не индуцируют аллореактивность или реакцию «трансплантат против хозяина».

[00112] Вариант реализации данного изобретения 83. tCAR T-клетка по любому из вариантов реализации 35 и 40-82, в котором CAR T-клетки не индуцируют взаимное уничтожение.

[00113] Вариант реализации данного изобретения 84. Тандемная CAR T-клетка, имеющая CAR, нацеленную на CD2 и CD3, при этом CAR T-клетка дефицитна по субъединице рецепторного комплекса Т-клеток и дефицитна по CD2.

[00114] Вариант реализации данного изобретения 85. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 85, в котором CAR имеет последовательность по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:41 - SEQ ID NO:44.

[00115] Вариант реализации данного изобретения 86. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 85, в котором CAR имеет последовательность по меньшей мере на 98% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:41 - SEQ ID NO:44.

[00116] Вариант реализации данного изобретения 87. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 85, в котором CAR представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:41 - SEQ ID NO:44.

[00117] Вариант реализации данного изобретения 88. Тандемная CAR T-клетка, имеющая CAR, нацеленную на CD2 и CD7, при этом CAR T-клетка дефицитна по субъединице рецепторного комплекса T-клетки и дефицитна по CD2 и CD7.

[00118] Вариант реализации данного изобретения 89. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 88, в котором CAR имеет последовательность по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:45 - SEQ ID NO:46.

[00119] Вариант реализации данного изобретения 90. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 88, в котором CAR имеет последовательность по меньшей мере на 98% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:45 - SEQ ID NO:46.

[00120] Вариант реализации данного изобретения 91. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 88, в котором CAR представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:45 - SEQ ID NO:46.

[00121] Вариант реализации данного изобретения 92. CAR T-клетка, которая содержит химерный антигенный рецептор (CAR), нацеленный на CD7, где CAR T-клетка дефицитна по TRAC и дефицитна по CD7, и содержит костимулирующий домен CD28 и сигнальный домен CD3ζ.

[00122] Вариант реализации данного изобретения 93. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 92, в котором CAR имеет последовательность по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:32 - SEQ ID NO:39.

[00123] Вариант реализации данного изобретения 94. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 92, в котором CAR имеет последовательность по меньшей мере на 98% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:32 - SEQ ID NO:39.

[00124] Вариант реализации данного изобретения 95. CAR-T по варианту реализации данного изобретения 92, в котором CAR представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:32 - SEQ ID NO:39.

[00125] Терапевтическая композиция, содержащая популяцию CAR T-клеток по любому из вариантов реализации 1-30 и 74-95, или содержащую популяцию CAR T-клеток, содержащих CAR по любому из вариантов реализации 31-73, и по меньшей мере один терапевтически приемлемый носитель и/или адъювант.

[00126] Вариант реализации данного изобретения 96. Способ лечения рака у пациента, включающий введение отредактированного геномом CAR T-клетки, популяции отредактированных геномом CAR T-клеток, двойных CAR T-клеток или тандемного CAR-T по любому из вариантов реализации 1- 30 и 74-95, или содержащих популяцию CAR T-клеток, содержащих CAR (ы) по любому из вариантов реализации 31-73, пациенту, нуждающемуся в этом.

[00127] Вариант реализации данного изобретения 97. Способ по варианту реализации 97, в котором рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование.

[00128] Вариант реализации данного изобретения 98. Способ по варианту реализации 98, в котором гематологическое злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование Т-клеток.

[00129] Вариант реализации данного изобретения 99. Способ по варианту реализации 99, в котором Т-клеточная злокачественная опухоль представляет собой Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (Т-ОЛЛ).

[00130] Вариант реализации данного изобретения 100. Способ по варианту реализации 99, в котором злокачественная опухоль Т-клеток представляет собой неходжкинскую лимфому.

[00131] Вариант реализации данного изобретения 101. Способ по варианту реализации 99, в котором Т-клеточная злокачественная опухоль представляет собой Т-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (Т-ХЛЛ).

[00132] Вариант реализации данного изобретения 102. Способ по варианту реализации 98, в котором гематологическое злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому.

[00133] Вариант реализации данного изобретения 103. Способ по варианту реализации 98, в котором гематологическое злокачественное новообразование представляет собой острый миелоидный лейкоз (ОМЛ).

[00134] Вариант реализации данного изобретения 104. Способ получения CAR T-клетки по любому из варианту реализации выше или данного документа, с использованием Cas9-CRISPR и гРНК, выбранной из тех, что раскрыты в данном документе.

[00135] Вариант реализации данного изобретения 105. Способ получения CAR T-клетки по любому из варианту реализации выше или данного документа, с использованием Cas9-CRISPR и гРНК, выбранной из тех, что раскрыты в Таблице 12 и Таблицах 15-47.

[00136] Вариант реализации данного изобретения 106. Способ получения CAR T-клетки по любому из варианту реализации выше или данного документа, с использованием Cas9-CRISPR и гРНК, выбранной из тех, что раскрыты в Таблице 12 и тех, которые выделены жирным шрифтом в Таблицах 15-47.

[00137] Вариант реализации данного изобретения 107. Способ получения CAR T-клетки по любому из варианту реализации выше или данного документа, с использованием Cas9-CRISPR и гРНК, выбранной из тех, что раскрыты в Таблице 12.

[00138] M

[00139] В данном документе описывается редактированная геномом CAR T-клетка, полученная из хелперной Т-клетки, цитотоксической Т-клетки, вирусоспецифической цитотоксической Т-клетки, Т-клетки памяти или гамма-дельта (γδ) Т-клетки, которые включают один или более химерных антигенных рецепторов (CAR), нацеленных на один или более антигенам, при этом CAR T-клетка дефицитна по одному или более антигенам, с которыми специфически связывается один или более CAR.

[00140] Также предлагается редактированная геномом CAR T-клетка, полученная из хелперной Т-клетки, цитотоксической Т-клетки, вирусоспецифической цитотоксической Т-клетки, Т-клетки памяти или гамма-дельта (γδ) Т-клетки, которые включают один или более химерных антигенных рецепторов (CAR), нацеленных на один или более антигенов, при этом CAR T-клетка дефицитна по субъединице рецепторного комплекса Т-клеток и одному, или более антигенам, с которыми специфически связывается один или более CAR.

[00141] Также предлагается CAR T-клетка, полученная из хелперной Т-клетки, цитотоксической Т-клетки, вирусоспецифической цитотоксической Т-клетки, Т-клетки памяти или гамма-дельта (γδ) Т-клетки, в которой недостаточная субъединица рецепторного комплекса Т-клеток выбрана из TCRα, TCRβ, TCRδ, TCRγ, CD3ε, CD3γ, CD3δ, и CD3ζ.

[00142] В некоторых вариантах реализации, химерный антигенный рецептор специфически связывает по меньшей мере один антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной Т-клетки.

[00143] В некоторых вариантах реализации, один или более антигенов выбраны из BCMA, CS1, CD38, CD138, CD19, CD33, CD123, CD371, CD117, CD135, Tim-3, CD5, CD7, CD2, CD4, CD3, CD79A, CD79B, APRIL, CD56 и CD1a.

[00144] В некоторых вариантах реализации, CAR T-клетка дополнительно содержит систему суицидальной генной терапии.

[00145] В некоторых вариантах реализации, передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором, блокируется в CAR-T-клетке.

[00146] В некоторых вариантах реализации, CAR T-клетка не индуцирует аллореактивность или реакцию «трансплантат против хозяина».

[00147] В некоторых вариантах реализации, CAR T-клетки не индуцируют взаимное уничтожение.

[00148] Также предлагается двойная или тандемная CAR T-клетка.

[00149] Также предлагается фармацевтическая композиция, содержащая популяцию CAR T-клеток, как описано в данном документе, и по меньшей мере один терапевтически приемлемый носитель и/или адъювант.

[00150] Также предлагаются способы лечения гематологических злокачественных новообразований, включающие введение редактируемой геномом CAR T-клетки, популяции редактируемых геномом CAR T-клеток, при этом популяция редактируемых геномом CAR T-клеток представляет собой моно CAR T-клетки, двойные CAR T-клетки или тандемные CAR T-клетки, как описано в данном документе, или фармацевтические композиции, содержащие их, как описано в данном документе, пациенту, нуждающемуся в этом.

[00151] В некоторых вариантах реализации, гематологическое злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование Т-клеток.

[00152] В некоторых вариантах реализации, Т-клеточная злокачественная опухоль представляет собой Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (T-ОЛЛ).

[00153] В некоторых вариантах реализации, Т-клеточная злокачественная опухоль представляет собой неходжкинскую лимфому.

[00154] В некоторых вариантах реализации, Т-клеточная злокачественная опухоль представляет собой Т-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (T-ХЛЛ).

[00155] В некоторых вариантах реализации изобретения гематологическое злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому.

[00156] В некоторых вариантах реализации изобретения гематологическое злокачественное новообразование представляет собой острый миелоидный лейкоз (ОМЛ).

CAR T-клетки

[00157] В данном изобретении предлагаются Т-клетки, несущие химерный антигенный рецептор (CAR T-клетки), фармацевтические композиции, содержащие их, и способы иммунотерапии для лечения рака, в частности гематологических злокачественных новообразований.

[00158] CAR T-клетка представляет собой T-клетку, которая экспрессирует химерный антигенный рецептор. Т-клетка, экспрессирующая молекулу CAR, может быть хелперной Т-клеткой, цитотоксической Т-клеткой, вирусоспецифичной цитотоксической Т-клеткой, Т-клеткой памяти или гамма-дельта (γδ) Т-клеткой.

[00159] Химерный антигенный рецептор (CAR) представляет собой рекомбинантный слитый белок, содержащий: 1) внеклеточный лиганд-связывающий домен, т.е. антигенраспознающий домен, 2) трансмембранный домен и 3) сигнальный трансдуцирующий домен.

[00160] Внеклеточный лиганд-связывающий домен представляет собой олиго- или полипептид, способный связывать лиганд. Предпочтительно внеклеточный лиганд-связывающий домен будет способен взаимодействовать с молекулой клеточной поверхности, которая может быть антигеном, рецептором, пептидным лигандом, белковым лигандом мишени или полипептидом мишени. Внеклеточный лиганд-связывающий домен может специфически связываться с антигеном с константой аффинности или аффинностью взаимодействия (K_D) от около 0,1 пМ до около 10 пМ, от около 0,1 пМ до около 1 пМ, или более предпочтительно от около 0,1 пМ до около 100 нМ. Способы определения константы аффинности или аффинности взаимодействия (K_D) хорошо известны в данной области техники. В некоторых случаях внеклеточный лиганд-связывающий домен выбирается для распознавания лиганда, который действует как маркер клеточной поверхности на клетках-мишенях, связанных с определенными болезненными состояниями.

[00161] В одном варианте реализации, внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит фрагмент одноцепочечного антитела (scFv), содержащий вариабельные фрагменты легкой (V_L) и тяжелой (V_H) цепи, соединенные линкером (например, GGGGS_(2-6)), и придает специфичность либо для Т-клеточного антигена, либо для антигена, не специфичного к Т-клетке. В одном варианте реализации, химерный антигенный рецептор CAR T-клетки может связываться с Т-клеточно-специфическим антигеном, экспрессируемым или сверхэкспрессируемым на поверхности злокачественной Т-клетки, для которой CAR T-клетка является дефицитной по антигену (например, геном-отредактированная CAR T-клетка).

[00162] Неограничивающие примеры CAR-нацеленных антигенов, экспрессируемых на поверхностях злокачественных Т-клеток, включают CD5, CD7, CD2, CD4 и CD3. В одном варианте реализации, CAR T-клетка согласно данному изобретению содержит химерный антигенный рецептор с внеклеточным лиганд-связывающим доменом, который специфически связывается с CD5.

[00163] В другом варианте реализации, CAR T-клетка согласно данному изобретению содержит химерный антигенный рецептор с внеклеточным лиганд-связывающим доменом, который специфически связывается с CD7. Другими словами, CAR, который специфически связывает CD7, включает внеклеточный лиганд-связывающий домен, содержащий полипептидную последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 21, и связаны вместе гибким линкером, содержащим последовательность (GGGGS)_3-4.

[00164] В другом варианте реализации, CAR T-клетка согласно данному изобретению содержит химерный антигенный рецептор с внеклеточным лиганд-связывающим доменом, который специфически связывается с CD2. Другими словами, CAR, который специфически связывает CD2, включает внеклеточный лиганд-связывающий домен, содержащий полипептидную последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13, или SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15, и связаны вместе гибким линкером, содержащим последовательность (GGGGS)_3-4.

[00165] В еще одном варианте реализации, CAR T-клетка согласно данному изобретению содержит химерный антигенный рецептор с внеклеточным лиганд-связывающим доменом, который специфически связывается с CD4.

[00166] В еще одном варианте реализации, CAR T-клетка согласно данному изобретению содержит внеклеточный лиганд-связывающий домен химерного антигенного рецептора, который специфически связывается с CD3. Другими словами, CAR, который специфически связывает CD3, включает внеклеточный лиганд-связывающий домен, содержащий полипептидную последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17, или SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19, и связаны вместе гибким линкером, содержащим последовательность (GGGGS)_3-4.

[00167] Неограничивающие примеры антигенов, нацеленных на CAR, экспрессируемых на поверхности лейкозных клеток (например, аномальных миелобластов, красных кровяных телец или тромбоцитов), включают CD123 (IL3RA), CD371 (CLL-1; CLEC12A), CD117 (c-kit) и CD135 (FLT3), CD7 и Tim3. CAR может быть сконструирован с внеклеточным лиганд-связывающим доменом для нацеливания на эти антигены для лечения лейкоза, то есть острого миелоидного лейкоза (ОМЛ).

[00168] Неограничивающие примеры антигенов, нацеленных на CAR, экспрессируемых на поверхности клетки множественной миеломы (например, злокачественной плазматической клетки), включают BCMA, CS1, CD38, CD79A, CD79B, CD138 и CD19. CAR может быть сконструирован с внеклеточным лиганд-связывающим доменом для нацеливания на эти антигены для лечения множественной миеломы. В другом варианте реализации, CAR может быть сконструирован с частью белка APRIL, нацеленным на лиганд для антигена созревания B-клеток (BCMA) и трансмембранного активатора, и партнера CAML (TACI), эффективно нацеливая как BCMA, так и TACI на лечение множественной миеломы. Сигнальный пептид направляет транспорт секретируемого или трансмембранного белка к клеточной мембране и/или поверхности клетки, чтобы обеспечить правильную локализацию полипептида. В частности, сигнальный пептид согласно данному изобретению направляет присоединенный полипептид, то есть рецептор CAR, к клеточной мембране, где внеклеточный лиганд-связывающий домен присоединенного полипептида отображается на поверхности клетки, трансмембранный домен присоединенного полипептида охватывает клеточная мембрана, и сигнальный трансдуцирующий домен присоединенного полипептида находится в цитоплазматической части клетки. В одном варианте реализации, сигнальный пептид представляет собой сигнальный пептид CD8α человека (SEQ ID NO:1). В одном варианте реализации, сигнальный пептид представляет собой функциональный фрагмент сигнального пептида CD8α Функциональный фрагмент определяется как фрагмент из по меньшей мере 10 аминокислот сигнального пептида CD8α, который направляет присоединенный полипептид к клеточной мембране и/или поверхности клетки. Примеры функциональных фрагментов сигнального пептида CD8α человека включают аминокислотные последовательности MALPVTALLLPLALLLHAA, MALPVTALLLP, PVTALLLPLALL и LLLPLALLLHAARP.

[00169] Обычно внеклеточный лиганд-связывающий домен связан с сигнальным трансдуцирующим доменом химерного антигенного рецептора (CAR) посредством трансмембранного домена (Tm). Трансмембранный домен пересекает клеточную мембрану, прикрепляет CAR к поверхности Т-клеток и соединяет внеклеточный лиганд-связывающий домен с доменом, передающим сигнал, что влияет на экспрессию CAR на поверхности Т-клеток.

[00170] Отличительной особенностью трансмембранного домена в данном описании является способность экспрессироваться на поверхности иммунной клетки, чтобы направлять ответ иммунной клетки против заранее определенной клетки-мишени. Трансмембранный домен можно получить либо из природного, либо из синтетического источника. Альтернативно, трансмембранный домен согласно данному изобретению может происходить из любого мембраносвязанного или трансмембранного белка.

[00171] Неограничивающие примеры трансмембранных полипептидов согласно данному изобретению представляют собой альфа, бета или дзета-цепь Т-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CDS, CDS, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CDS0, CD86, CD134, CD137 и CD154. Альтернативно, трансмембранный домен может быть синтетическим и содержать преимущественно гидрофобные аминокислотные остатки (например, лейцин и валин). В одном варианте реализации, трансмембранный домен происходит из предшественника изоформы 1 альфа-цепи гликопротеина CD8 поверхности Т-клетки (NP_001139345.1) (SEQ ID NO: 4), и более предпочтительно CD28 (SEQ ID NO: 3). Трансмембранный домен может дополнительно включать шарнирную область между внеклеточным лиганд-связывающим доменом и указанным трансмембранным доменом. Термин «шарнирная область» обычно означает любой олиго- или полипептид, который функционирует, чтобы связывать трансмембранный домен с внеклеточным лиганд-связывающим доменом. В частности, шарнирная область используется для обеспечения большей гибкости и доступности для внеклеточного лиганд-связывающего домена. Шарнирная область может содержать до 300 аминокислот, предпочтительно от 10 до 100 аминокислот и наиболее предпочтительно от 25 до 50 аминокислот. Шарнирная область может происходить из всех или частей встречающихся в природе молекул, таких как CD28, 4-1BB (CD137), OX-40 (CD134), CD3ζ, рецептор Т-клетки α или β-цепи, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, ICOS, CD154 или из всей или части константной области антитела. В качестве альтернативы, шарнирная область может быть синтетической последовательностью, которая соответствует встречающейся в природе шарнирной последовательности, или шарнирная область может быть полностью синтетической шарнирной последовательностью. В одном варианте реализации, шарнирный домен содержит часть CD8 α (SEQ ID NO:2) человека, рецептор FcγRIIIα или IgG1 и по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичную к ней последовательность.

[00172] Химерный антигенный рецептор (CAR) согласно данному изобретению содержит трансдукционный сигнальный домен или внутриклеточный сигнальный домен CAR, который отвечает за внутриклеточную передачу сигналов после связывания внеклеточного лиганд-связывающего домена с мишенью, что приводит к активации иммунной клетки и иммунной реакции. Внутриклеточный сигнальный домен отвечает за активацию по меньшей мере одной из нормальных эффекторных функций иммунной эффекторной клетки, экспрессирующей CAR. Эффекторной функцией Т-клетки, например, может быть цитолитическая активность или хелперная активность, включая секрецию цитокинов. Таким образом, термин "цитоплазматическая сигнальная область" относится к части белка, которая трансдуцирует сигнал эффекторной функции и направляет клетку для выполнения специализированной функции.

[00173] Примерами доменов сигнальной трансдукции для использования в CAR могут быть цитоплазматическими последовательностями Т-клеточного рецептора и корецепторов, которые действуют совместно, инициируя сигнальную трансдукцию после взаимодействия антигенного рецептора, а также любые производные или варианты этих последовательностей и любой синтетической последовательности, имеющей такие же функциональные возможности. Домен сигнальной трансдукции включает два разных класса цитоплазматических сигнальных последовательностей: те, которые инициируют антиген-зависимую первичную активацию, и те, которые действуют антиген-независимым образом, обеспечивая вторичный или костимулирующий сигнал. Первичная цитоплазматическая сигнальная последовательность может содержать сигнальные мотивы, которые известны как иммунорецепторные тирозиновые активирующие мотивы ITAM. ITAM представляют собой четко определенные сигнальные мотивы, обнаруженные в внутрицитоплазматическом хвосте множества рецепторов, которые служат сайтами связывания для тирозинкиназ класса syk/zap70. Неограничивающие примеры ITAM, которые могут быть использованы в данном изобретении, могут включать те, которые получены из TCRζ, FcRγ, FcRβ, FcRε, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CDS, CD22, CD79a, CD79b и CD66d. В одном варианте реализации сигнальный трансдуцирующий домен CAR может включать сигнальный домен CD3ζ с аминокислотной последовательностью по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичной к ней последовательности.

[00174] Кроме того, CAR T-клетки по данному изобретению могут дополнительно содержать одну или более систем суицидальной генной терапии. Подходящие системы суицидальной генной терапии, известные в данной области техники, включают, но не ограничиваются ими, несколько тимидинкиназ вируса простого герпеса (HSVtk)/ганцикловир (GCV) или индуцибельные белки каспазы 9. В одном варианте реализации, суицидный ген представляет собой химерную CD34/тимидинкиназу.

[00175] Описанные в данном документе Т-клетки могут быть дефицитными по антигену, с которым химерный антигенный рецептор специфически связывается, и поэтому устойчивы к взаимному уничтожению. В некоторых вариантах реализации, антиген Т-клетки модифицирован таким образом, что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированный антиген. Например, эпитоп антигена, распознаваемый химерным антигенным рецептором, может быть модифицирован с помощью одной или более изменениями аминокислоты (например, заменами или делециями), или эпитоп может быть удален из антигена. В других вариантах реализации, экспрессия антигена снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более. Способы снижения экспрессии белка известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, модификацию или замену промотора, функционально связанного с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей белок. В других вариантах реализации, Т-клетка модифицируется таким образом, что антиген не экспрессируется, например, путем делеции или разрушения гена, кодирующего антиген. В каждом из вышеупомянутых вариантов реализации, Т-клетка может быть дефицитной по одному или предпочтительно по всем антигенам, с которыми специфически связывается химерный антигенный рецептор. Способы генетической модификации Т-клетки, чтобы она была дефицитной по антигену хорошо известны в данной области техники, и выше приведены неограничивающие примеры. В типовом варианте реализации редактирование гена CRISPR/cas9 может быть использовано для модификации Т-клетки, чтобы она была дефицитной по антигену, например, как описано ниже. В качестве альтернативы для редактирования генов могут быть использованы TALEN.

[00176] В варианте вышеописанного способа конструкция, кодирующая один или более блокаторов экспрессии белка (PEBL), может быть трансдуцирована в клетку либо на этапе редактирования, либо как часть этапа редактирования, либо как часть трансдукции CAR. Например, может быть трансдуцирована конструкция, кодирующая одноцепочечный вариабельный фрагмент, полученный из антитела, специфичный для CD3ε, например, лентивирусным вектором. После экспрессии PEBL внутриклеточно колокализуется с CD3ε, блокируя поверхностную экспрессию CD3 и TCRαβ. Соответственно, PEBL-блокада поверхностной экспрессии CD3/TCRαβ является альтернативным способом получения аллогенных CAR T-клеток. Кроме того, экспрессию PEBL и CAR можно комбинировать в одной конструкции. Любой из этих способов может быть реализован с использованием способов, раскрытых в данном документе, и PEBL могут быть получены для блокирования любой из целей супрессии гена, раскрытых в данном документе.

[00177] Описанные выше способы можно адаптировать для вставки CAR в локус гена, кодирующего антиген, белок клеточной поверхности или секретируемый белок, такой как цитокин. Таким образом, редактирование генома осуществляется путем трансфекции CAR. После этого клетки можно активировать, как описано в данном документе, исключая отдельный этап редактирования генома в некоторых вариантах реализации. В идеале такой шаг следует выполнять, пока клетки активно делятся. Ожидается, что такие способы также приведут к устойчивому увеличению количества сконструированных клеток.

[00178] В определенных обстоятельствах Т-клетка может быть выбрана из-за дефицита антигена, с которым специфически связывается химерный антигенный рецептор. Определенные Т-клетки будут производить и отображать меньше данного поверхностного белка; вместо этого при делеции или нефункционализации антигена, который будет мишенью T-CAR, T-клетка может быть выбрана из-за дефицита антигена, и популяция антиген-дефицитных клеток увеличится для трансдукции CAR. Такая клетка также будет устойчивой к взаимному уничтожению.

[00179] Таблица 1. Аминокислотные последовательности различных компонентов CAR.

Функциональные домены SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность Сигнальный пептид CD8α SEQ ID NO:1 MALPVTALLLPLALLLHAARP CD8α шарнирый SEQ ID NO:2 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD CD28 Трансмембранный (T_m) домен SEQ ID NO:3 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV Предшественник изоформы 1 альфа-цепи поверхности гликопротеина CD8 (NP_001139345.1) SEQ ID NO:4 MALPVTALLLPLALLLHAARPSQFRVSPLDRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGAAASPTFLLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLSDFRRENEGYYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVKSGDKPSLSARYV Костимулирующий домен 4-1BB SEQ ID NO:5 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL Костимулирующий домен CD28 SEQ ID NO:6 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD3 дзета (ζ) SEQ ID NO:7 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR Пептид P2A SEQ ID NO:8 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP Линкер (GGGGS)₄ SEQ ID NO:9 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS hCD34 SEQ ID NO:10 MPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI Вирус простого герпеса-1 человека (ВПГ) - тимидинкиназа (TK) SEQ ID NO:11 MPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPTGEGGGGGDLGGVKLPHLFGKRLVEARMASYPCHQHASAFDQAARSRGHSNRRTALRPRRQQEATEVRLEQKMPTLLRVYIDGPHGMGKTTTTQLLVALGSRDDIVYVPEPMTYWQVLGASETIANIYTTQHRLDQGEISAGDAAVVMTSAQITMGMPYAVTDAVLAPHVGGEAGSSHAPPPALTLLLDRHPIAVMLCYPAARYLMGSMTPQAVLAFVALIPPTLPGTNIVLGALPEDRHIDRLAKRQRPGERLDLAMLAAIRRVYGLLANTVRYLQGGGSWWEDWGQLSGTAVPPQGAEPQSNAGPRPHIGDTLFTLFRAPELLAPNGDLYNVFAWALDVLAKRLRPMHVFILDYDQSPAGCRDALLQLTSGMVQTHVTTPGSIPTICDLARTFAREMGEAN

[00180] Таблица 2. Аминокислотные последовательности вариабельной тяжелой (V_H) и вариабельной легкой (V_L) цепей scFv.

Последовательности ScFv SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность Вариабельная область тяжелой цепи CD2 (35,1 ATCC^®HB-222^™) SEQ ID NO:12 EVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSS Вариабельная область легкой цепи CD2 (35,1 ATCC^®HB-222^™) SEQ ID NO:13 DIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKR Вариабельная область тяжелой цепи CD2 (OKT 11 ATCC^®CRL-8027^™) SEQ ID NO:14 EVQLEESGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWIKQRPEQGLEWIGRIDPYDSETHYNEKFKDKAILSVDKSSSTAYIQLSSLTSDDSAVYYCSRRDAKYDGYALDYWGQGTSVTVSS Вариабельная область легкой цепи CD2 (OKT 11 ATCC^®CRL-8027^™) SEQ ID NO:15 DJVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKTLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQVLIYRMSNLASGVPNRFSGSGSETTFTLRISRVEAEDVGIYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIER Вариабельная область тяжелой цепи CD3 (VH) (OKT 3) SEQ ID NO:16 GSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS Вариабельная область легкой цепи CD3 (OKT 3) SEQ ID NO:17 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR Вариабельная область тяжелой цепи CD3 (UCHT1) SEQ ID NO:18 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKCLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSS Вариабельная область тяжелой цепи CD3 (UCHT1) SEQ ID NO:19 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGCGTKVEIK Вариабельная область тяжелой цепи CD7 SEQ ID NO:20 EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVS Вариабельная область легкой цепи CD7 SEQ ID NO:21 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKR Вариабельная область тяжелой цепи FTL3 (EB10) SEQ ID NO:22 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVGAHDAFDIWGQGTTVTVSS Вариабельная область легкой цепи FTL3 (EB10) SEQ ID NO:23 DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSDTDFTLQISRVEAEDVGVYYCMQGTHPAISFGQGTRLEIK Вариабельная область тяжелой цепи FTL3 (NC7) SEQ ID NO:24 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCATFALFGFREQAFDIWGQGTTVTVSS Вариабельная область легкой цепи FTL3 (NC7) SEQ ID NO:25 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDLATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIK Вариабельная область тяжелой цепи FTL3 (D3-D4) SEQ ID NO:26 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARVVAAAVADYWGQGTLVTVSS Вариабельная область легкой цепи FTL3 (D3-D4) SEQ ID NO:27 DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSLQTPFTFGPGTKVDIK Вариабельная область тяжелой цепи SEQ ID NO:28 QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYSFTTYWMNWVKQRPGQGLEWIGMIHPSDSETRL NQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCARSTMIATRAMDYWGQGTSVTVSS Вариабельная область легкой цепи SEQ ID NO:29 DIVMTQSQKSMSTSVGDRVSITCKASQDVITGVAWYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTGVPD RFTGSGSGTDFTFTISNVQAEDLAVYYCQQHYSTPLTFGAGTKLELK Вариабельная область тяжелой цепи SEQ ID NO:30 QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFQGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGQGTTVTVSSSG Вариабельная область легкой цепи SEQ ID NO:31 GSEIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPRLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAIYYCHQYLSSRTFGQGTKLEIKR

Моно CAR T-клетки (mCAR-T)

[00181] CAR T-клетки, охватываемые данным описанием, имеют дефицит по одному или более антигенам, с которыми химерный антигенный рецептор специфически связывается, и поэтому устойчивы к взаимному уничтожению. В некоторых вариантах реализации один или более антигенов Т-клетки модифицированы таким образом, что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически один или более модифицированных антигенов. Например, эпитоп одного или более антигенов, распознаваемый химерным антигенным рецептором, может быть модифицирован с помощью одной или более изменениями аминокислоты (например, заменами или делециями), или эпитоп может быть удален из антигена. В других вариантах реализации, экспрессия одного или более антигенов снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более. Способы снижения экспрессии белка известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, модификацию или замену промотора, функционально связанного с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей белок. В других вариантах реализации, Т-клетка модифицируется таким образом, что один или более антигенов не экспрессируется, например, путем делеции или разрушения гена, кодирующего один или более антигенов. В каждом из вышеупомянутых вариантов реализации, CAR T-клетка может быть дефицитной по одному или предпочтительно по всем антигенам, с которыми специфически связывается химерный антигенный рецептор. Способы генетической модификации Т-клетки, чтобы она была дефицитной по одному или более антигенам хорошо известны в данной области техники и в данном документе приведены неограничивающие примеры. В вариантах реализации, описанных в Примерах 1-6, система CRISPR-Cas9 используется для модификации Т-клетки таким образом, чтобы она была дефицитной по одному или более антигенам.

[00182] CAR T-клетки, охватываемые данным раскрытием, могут, кроме того, быть дефицитными по передаче сигналов эндогенного Т-клеточного рецептора (TCR) в результате удаления части рецепторного комплекса T-клеток (TCR)-CD3. В различных вариантах реализации может быть желательно устранить или подавить эндогенную передачу сигналов, опосредованную эндогенным TCR в CAR T-клетках, описанных в данном документе. Например, уменьшение или устранение передачи сигналов, опосредованной эндогенным TCR в CAR T-клетках может предотвратить или уменьшить реакцию трансплантат против хозяина (GvHD), когда аллогенные Т-клетки используются для продуцирования CAR T-клеток. Способы устранения или подавления передачи сигналов, опосредованной эндогенным TCR известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются этим, удаление части рецепторного комплекса TCR-CD3, например, альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), бета-цепи рецептора TCR (TCRβ), TCRδ, TCRγ, CD3ε, CD3γ и/или CD3δ. Удаление части рецепторного комплекса TCR может блокировать передачу сигналов, опосредованную TCR, и, таким образом, может позволить безопасное использование аллогенных Т-клеток в качестве источника CAR T-клеток, не вызывая опасную для жизни реакцию ТПХ.

[00183] Кроме того, CAR T-клетки, охватываемые данным изобретением могут дополнительно содержать одну или более суицидных генов, описанных в данном документе.

[00184] В одном варианте реализации данное изобретение предлагает Т-клетку, содержащую химерный антигенный рецептор, который специфически связывает CD5, при этом Т-клетка дефицитна по CD5, например, CD5ΔCART5 клетке В неограничивающих примерах дефицит в CD5 вызван (а) модификацией CD5, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD5, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия антигена снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD5 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген и/или модификацию таким образом, что передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором (TCR), заблокирована в Т-клетке. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD5ΔCART5 клетках.

[00185] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает Т-клетку, содержащую химерный антигенный рецептор, который специфически связывает CD7, при этом Т-клетка дефицитна по CD7, например, CD7ΔCART7 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 вызван (а) модификацией CD7, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD7, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия антигена снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD7 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген и/или модификацию таким образом, что передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором (TCR), заблокирована в Т-клетке. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD7ΔCART7 клетках.

[00186] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает Т-клетку, содержащую химерный антигенный рецептор, который специфически связывает CD2, при этом Т-клетка дефицитна по CD2, например, CD2ΔCART2 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD2 вызван (а) модификацией CD2, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD2, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия антигена снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD2 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген и/или модификацию таким образом, что передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором (TCR), заблокирована в Т-клетке. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD2ΔCART2 клетках.

[00187] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает Т-клетку, содержащую химерный антигенный рецептор, который специфически связывает CD4, при этом Т-клетка дефицитна по CD4, например, CD4ΔCART4 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD4 вызван (а) модификацией CD4, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия антигена снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD4 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген и/или модификацию таким образом, что передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором (TCR), заблокирована в Т-клетке. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD4ΔCART4 клетках.

[00188] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает Т-клетку, содержащую химерный антигенный рецептор, который специфически связывает CD3, при этом Т-клетка дефицитна по CD3ε, например, CD3ΔCART3e клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD3 вызван (а) модификацией CD3, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD3, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия антигена снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD3 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD3ε). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген и/или модификацию таким образом, что передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором (TCR), заблокирована в Т-клетке. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD3ΔCART3ε клетках.

[00189] Раскрыты варианты реализации аминокислотных последовательностей CAR, которые могут экспрессироваться на поверхности редактируемой геномом CAR T-клетки, полученной из цитотоксической Т-клетки, Т-клетки памяти или гамма-дельта (γδ) T-клетки.

[00190] Таблица 3. Аминокислотные последовательности монохимерных антигенных рецепторов (CAR).

Конструкции моно CAR SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность CD7-CAR-4-1BB_CD34 SEQ ID NO:32 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD7-CAR-4-1BB_CD34_TK SEQ ID NO:33 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPTGEGGGGGDLGGVKLPHLFGKRLVEARMASYPCHQHASAFDQAARSRGHSNRRTALRPRRQQEATEVRLEQKMPTLLRVYIDGPHGMGKTTTTQLLVALGSRDDIVYVPEPMTYWQVLGASETIANIYTTQHRLDQGEISAGDAAVVMTSAQITMGMPYAVTDAVLAPHVGGEAGSSHAPPPALTLLLDRHPIAVMLCYPAARYLMGSMTPQAVLAFVALIPPTLPGTNIVLGALPEDRHIDRLAKRQRPGERLDLAMLAAIRRVYGLLANTVRYLQGGGSWWEDWGQLSGTAVPPQGAEPQSNAGPRPHIGDTLFTLFRAPELLAPNGDLYNVFAWALDVLAKRLRPMHVFILDYDQSPAGCRDALLQLTSGMVQTHVTTPGSIPTICDLARTFAREMGEAN CD7-CAR-CD28_CD34 SEQ ID NO:34 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD7-CAR-CD28_CD34_TK SEQ ID NO:35 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPTGEGGGGGDLGGVKLPHLFGKRLVEARMASYPCHQHASAFDQAARSRGHSNRRTALRPRRQQEATEVRLEQKMPTLLRVYIDGPHGMGKTTTTQLLVALGSRDDIVYVPEPMTYWQVLGASETIANIYTTQHRLDQGEISAGDAAVVMTSAQITMGMPYAVTDAVLAPHVGGEAGSSHAPPPALTLLLDRHPIAVMLCYPAARYLMGSMTPQAVLAFVALIPPTLPGTNIVLGALPEDRHIDRLAKRQRPGERLDLAMLAAIRRVYGLLANTVRYLQGGGSWWEDWGQLSGTAVPPQGAEPQSNAGPRPHIGDTLFTLFRAPELLAPNGDLYNVFAWALDVLAKRLRPMHVFILDYDQSPAGCRDALLQLTSGMVQTHVTTPGSIPTICDLARTFAREMGEAN CD79B-CAR-CD28_CD34 SEQ ID NO:36 MALPVTALLLPLALLLHAARPGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPLTFGQGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPGKGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPTGEGGGGGFKRDLGGVKLPHLFGKRLVEARMASYPCHQHASAFDQAARSRGHSNRRTALRPRRQQEATEVRLEQKMPTLLRVYIDGPHGMGKTTTTQLLVALGSRDDIVYVPEPMTYWQVLGASETIANIYTTQHRLDQGEISAGDAAVVMTSAQITMGMPYAVTDAVLAPHVGGEAGSSHAPPPALTLLLDRHPIAVMLCYPAARYLMGSMTPQAVLAFVALIPPTLPGTNIVLGALPEDRHIDRLAKRQRPGERLDLAMLAAIRRVYGLLANTVRYLQGGGSWWEDWGQLSGTAVPPQGAEPQSNAGPRPHIGDTLFTLFRAPELLAPNGDLYNVFAWALDVLAKRLRPMHVFILDYDQSPAGCRDALLQLTSGMVQTHVTTPGSIPTICDLARTFAREMGEAN CD2-CAR-CD28_CD34 SEQ ID NO:37 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKTLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQVLIYRMSNLASGVPNRFSGSGSETTFTLRISRVEAEDVGIYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIERGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLEESGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWIKQRPEQGLEWIGRIDPYDSETHYNEKFKDKAILSVDKSSSTAYIQLSSLTSDDSAVYYCSRRDAKYDGYALDYWGQGTSVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD2-CAR-4-1BB_CD34 SEQ ID NO:38 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKTLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQVLIYRMSNLASGVPNRFSGSGSETTFTLRISRVEAEDVGIYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIERGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLEESGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWIKQRPEQGLEWIGRIDPYDSETHYNEKFKDKAILSVDKSSSTAYIQLSSLTSDDSAVYYCSRRDAKYDGYALDYWGQGTSVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD3-CD28-CD34 SEQ ID NO:39 MALPVTALLLPLALLLHAARPGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI

[00191] Аналогичным образом могут быть сконструированы другие моно-CAR-T клетки, которые приведены ниже в Таблице 4.

[00192] Таблица 4. Моно-CAR и CAR-T.

Примеры Антиген-мишень CAR T-клеток Делеция/
подавление антигена M1 APRIL - M2 APRIL APRIL M3 APRIL APRIL+TRAC M4 APRIL APRIL+CD3ε M5 APRIL CD3ε M6 ВСМА - M7 CD117 - M8 CD117 CD117 M9 CD123 - M10 CD123 CD123 M11 CD135 - M12 CD135 CD135 M13 CD138 - M14 CD19 - M15 CD1a - M16 CD1a CD3ε M17 CD1a TRAC M18 CD1a CD1a+TRAC M19 CD1a CD1a+CD3ε M20 CD2 - M21 CD2 CD2 M22 CD2 CD2+TRAC M23 CD2 CD2+CD3ε M24 CD20 M25 CD21 M26 CD22 M27 CD23 M28 CD3 - M29 CD3 CD3ε M30 CD3 CD3ε+TRAC M31 CD33 - M32 CD33 CD33 M33 CD371 - M34 CD371 CD371 M35 CD38 - M36 CD38 CD38 M37 CD4 - M38 CD4 CD4 M39 CD4 CD4+TRAC M40 CD4 CD4+CD3ε M41 CD5 - M42 CD5 CD5 M43 CD5 CD5+TRAC M44 CD5 CD5+CD3ε M45 CD56 - M46 CD56 CD56 M47 CD56 CD56+TRAC M48 CD56 CD56+CD3ε M49 CD56 CD3ε M50 CD56 TRAC M51 CD7 - M52 CD7 CD7 M53 CD7 CD7+TRAC M54 CD7 CD7+CD3ε M55 CD79A - M56 CD79B - M57 CS1 - M58 CS1 CS1 M59 Tim-3 - M60 Tim-3 Tim-3 M61 Tim-3 Tim-3+TRAC M62 Tim-3 TRAC M63 Tim-3 CD3ε M64 Tim-3 Tim-3+CD3ε

Двойные CAR T-клетки (dCAR-T)

[00193] Двойная CAR T-клетка (dCAR-T) может быть получена путем клонирования последовательности, кодирующей белок первого внеклеточного лиганд-связывающего домена, в лентивирусный вектор, содержащий один или более костимулирующих доменов и домен передачи сигнала, и клонирование второй последовательности, кодирующей белок второго внеклеточного лиганд-связывающего домена в один и тот же лентивирусный вектор, содержащий дополнительный один или более костимулирующих доменов и сигнальный трансдуцирующий домен, в результате чего получается плазмида, из которой две конструкции CAR экспрессируются из одного и того же вектора.

[00194] В одном варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая двойной Химерный Aнтигенный Рецептор (dCAR), т.е. последовательность, кодирующую белок двух CAR, экспрессируемых из одной лентивирусной конструкции, которая специфически связывает альфа-цепь рецептора CD5 и TCR (TRAC ), где Т-клетка дефицитна по CD5 и TRAC (например, CD5*TRAC-dCARTΔCD5ΔTRAC клетка). В неограничивающих примерах дефицит по CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что рецептор химерного антигена больше не связывается специфически модифицированный CD5 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке как минимум на 50%, как минимум на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD5 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD5*TRAC-CARTΔCD5ΔTRAC клетках.

[00195] Во втором варианте реализации в описании представлена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD7 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), при этом Т-клетка дефицитна по CD7 и TRAC, например, CD7*TRAC-dCARTΔCD7ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что рецептор химерного антигена больше не связывается специфически модифицированный CD7 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке как минимум на 50%, как минимум на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD7 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*TRAC-dCARTΔCD7Δ клетках.

[00196] В третьем варианте реализации в описании представлена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD2 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), при этом Т-клетка дефицитна по CD2 и TRAC, например, CD2*TRAC-dCARTΔCD2ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD2 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD2 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что рецептор химерного антигена больше не связывается специфически модифицированный CD2 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке как минимум на 50%, как минимум на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD2 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*TRAC-dCARTΔCD2ΔTRAC клетках.

[00197] В другом варианте реализации в описании представлена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD4 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), при этом Т-клетка дефицитна по CD4 и TRAC, например, CD4*TRAC-dCARTΔCD4ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD4 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD4 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что рецептор химерного антигена больше не связывается специфически модифицированный CD4 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке как минимум на 50%, как минимум на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD4 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD4*TRAC-dCARTΔCD4ΔTRAC клетках.

[00198] В другом варианте реализации в описании представлена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD3 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), при этом Т-клетка дефицитна по CD3 и TRAC, например, CD3*TRAC-dCARTΔCD3TRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD3 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD3 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что рецептор химерного антигена больше не связывается специфически модифицированный CD3 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD3 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке как минимум на 50%, как минимум на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD3 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD3 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD3*TRAC-dCARTΔCD3ΔTRAC клетках.

[00199] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает сконструированную Т-клетку, содержащую dCAR, которая специфически связывает CD2 и CD3-эпсилон (ε) цепь, где Т-клетка дефицитна по CD2 и CD3-эпсилон, например, CD2*CD3ε-dCARTΔCD2ΔCD3ε клетка. В неограничивающих примерах дефицит по CD2 и CD3-эпсилон (ε) цепь является результатом (а) модификации CD2 и CD3-эпсилон, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD2 и CD3-эпсилон, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD2- и CD3-эпсилон снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD2 и CD3-эпсилон не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или CD3-эпсилон. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*CD3ε-dCARTΔCD2ΔCD3εклетках.

[00200] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает сконструированную Т-клетку, содержащую dCAR, которая специфически связывает CD4 и CD3-эпсилон (ε) цепь, где Т-клетка дефицитна по CD2 и CD3ε, например, CD4*CD3ε-dCARTΔCD4ΔCD3ε клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD4 и CD3ε цепи является результатом (а) модификации CD4 и CD3 эпсилон, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD4 и CD3ε, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD4 и CD3ε снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD4 и CD3ε не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4 и/или CD3ε. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD4*CD3ε-dCARTΔCD4ΔCD3εклетках.

[00201] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD5 и TCR бета (β) цепь, при этом Т-клетка дефицитна по CD5 и TCRβ, например, CD5*TCRβ-dCARTΔCD5ΔTCRβ клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD5 и TCRβ цепь является результатом (а) модификации CD5 и TCRβ, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD5 и TCRβ, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD5 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD5 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD5*TCRβ-dCARTΔCD5ΔTCRβ клетках.

[00202] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD7 и TCR бета(β) цепь, при этом Т-клетка дефицитна по CD5 и TCR beta, например, CD7*TCRβ-dCARTΔCD7ΔTCRβ клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD7 и TCRβ цепь является результатом (а) модификации CD7 и TCRβ, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD7 и TCRβ, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD7 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD7 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека экспрессируется в CD7*TCRβ-dCARTΔCD7ΔTCRβ клетках.

[00203] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD2 и TCR бета (β) цепь, при этом Т-клетка дефицитна по CD2 и TCRβ, например, CD2*TCRβ-dCARTΔCD7ΔTCRβ клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD2 и TCRβ цепь является результатом (а) модификации CD2 и TCRβ, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD2 и TCRβ, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD2 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD2 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*TCRβ-dCARTΔCD2ΔTCRβ клетках.

[00204] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD4 и TCR бета (β) цепь, при этом Т-клетка дефицитна по CD2 и TCRβ, например, CD4*TCRβ-dCARTΔCD4ΔTCRβ клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD4 и TCRβ цепь является результатом (а) модификации CD4 и TCRβ, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD4 и TCRβ, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD4 и TCRΒснижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD4 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD4*TCRβ-dCARTΔCD4ΔTCRβ клетках.

[00205] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD7 и CD2, при этом Т-клетка дефицитна по CD7 и CD2, например, CD7*CD2-dCARTΔCD7ΔCD2 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и CD2 вызван (а) модификацией CD7 и CD2, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD7 и CD2, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и CD2 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD7 и CD2 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или CD2. В дополнительных вариантах реализации Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*CD2-dCARTΔCD7ΔCD2 клетках.

[00206] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD7 и CD5, при этом Т-клетка дефицитна по CD7 и CD5, например, CD7*CD5-dCARTΔCD7ΔCD5 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и CD5 вызван (а) модификацией CD7 и CD5, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD7 и CD5, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и CD5 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD7 и CD5 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или CD5. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*CD5-dCARTΔCD7ΔCD5 клетках.

[00207] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD7 и CD4, при этом Т-клетка дефицитна по CD7 и CD4, например, CD7*CD4-dCARTΔCD7ΔCD4 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и CD4 вызван (а) модификацией CD7 и CD4, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD7 и CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и CD4 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD7 и CD4 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или CD4. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах суицидный ген, экспрессируемый в клетках CD7*CD4-dCARTΔCD7ΔCD4, кодирует модифицированный ген 1-тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса человека, слитый внутри рамки считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*CD4-dCARTΔCD7ΔCD4 клетках.

[00208] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает сконструированную Т-клетку, содержащую dCAR, которая специфически связывает CD2 и CD5, при этом Т-клетка дефицитна по CD2, CD5 и TRAC, например, CD2*CD5-dCARTΔCD2ΔCD5ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD2 и CD5 вызван (а) модификацией CD2 и CD5, экспрессируемой Т-клеткой таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD2 и CD5, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD2 и CD5 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификацией Т-клетки таким образом, что CD2 и CD5 не экспрессируется (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или CD5. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*CD5-dCARTΔCD2ΔCD5 клетках.

[00209] В другом варианте реализации данное изобретение предлагает сконструированную Т-клетку, содержащую dCAR, которая специфически связывает CD2 и CD4, при этом Т-клетка дефицитна по CD2, CD4 и TRAC, например, CD2*CD4-dCARTΔCD2ΔCD4ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD2 и CD4 в вызван (а) модификацией CD2 и CD4 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD2 и CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD2 и CD4 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD2 и CD4 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или CD4. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*CD4-dCARTΔCD2ΔCD4 клетках.

[00210] В другом варианте реализации в описании предложена сконструированная Т-клетка, содержащая dCAR, которая специфически связывает CD5 и CD4, при этом Т-клетка дефицитна по CD5 и CD4, например, CD5*CD4-dCARTΔCD5ΔCD4 клетке. В неограничивающих примерах дефицит в CD5 и CD4 в вызван (а) модификацией CD5 и CD4 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD5 и CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD5 и CD4 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD5 и CD4 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5 и/или CD4. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD5*CD4-dCARTΔCD5ΔCD4 клетках.

[00211] В одном варианте реализации двойная CAR T-клетка содержит (i) первый полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), содержащий первый сигнальный пептид, первый внеклеточный лиганд-связывающий домен, первую шарнирную область, первый трансмембранный домен, один или больше костимулирующих доменов и первый сигнальный трансдуцирующий домен; и (ii) второй полипептид химерного антигенного рецептора, содержащий второй сигнальный пептид, второй внеклеточный лиганд-связывающий домен, вторую шарнирную область, второй трансмембранный домен, один или более костимулирующих доменов и второй сигнальный трансдуцирующий домен; где первый внеклеточный лиганд-связывающий домен и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен обладают аффинностью к различным молекулам клеточной поверхности; и где двойная CAR T-клетка обладает одним или более генетическими нарушениями, приводящими к снижению экспрессии молекулы клеточной поверхности в двойной CAR-T-клетке.

[00212] Во втором варианте реализации первый сигнальный пептид представляет собой сигнальную последовательность CD8α.

[00213] В третьем варианте реализации первый внеклеточный лиганд-связывающий домен представляет собой гибридный белок вариабельных областей тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, обозначенный V_H1 и V_L1, и связанный коротким линкерным пептидом из 5 аминокислот (GGGGS). В некоторых вариантах реализации этот линкерный пептид повторяется 3 или 4 раза. В некоторых вариантах реализации первый домен распознавания антигена может быть выбран из V_H1 - (GGGGS)_3-4 - V_L1 или V_L1 - (GGGGS)_3-4- V_H1.

[00214] В другом варианте реализации первая шарнирная область содержит CD8α.

[00215] В другом варианте реализации первый трансмембранный домен представляет собой CD8 или CD28.

[00216] В некоторых вариантах реализации первый костимулирующий домен содержит 4-1BB, CD28 или их комбинацию в любом порядке, то есть 4-1BB-CD28 или CD28-4-1BB.

[00217] В некоторых вариантах реализации первый сигнальный домен представляет собой би-пептид CD3ζ или CD3ζ, то есть CD3ζ - CD3ζ..

[00218] Во втором варианте реализации первый сигнальный пептид представляет собой сигнальную последовательность CD8α SEQ NO:1.

[00219] В некотором варианте реализации второй внеклеточный лиганд-связывающий домен представляет собой слитый белок вариабельных областей тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, обозначенный V_H2 и V_L2, и связанный коротким линкерным пептидом из 5 аминокислот (GGGGS). В некоторых вариантах реализации этот линкерный пептид повторяется 3 или 4 раза. В некоторых вариантах реализации второй домен распознавания антигена может быть выбран из V_H2 - (GGGGS)_3-4 - V_L2 или V_L2 - (GGGGS)_3-4- V_H2.

[00220] В другом варианте реализации вторая шарнирная область содержит CD8α.

[00221] В другом варианте реализации второй трансмембранный домен представляет собой CD8 или CD28.

[00222] В некоторых вариантах реализации второй костимулирующий домен содержит 4-1BB, CD28 или их комбинацию в любом порядке, то есть 4-1BB-CD28 или CD28-4-1BB.

[00223] В некоторых вариантах реализации второй сигнальный домен представляет собой би-пептид CD3ζ или CD3ζ, то есть CD3ζ - CD3ζ..

[00224] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H1 -(GGGGS)_3-4 - V_L1 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H2 - (GGGGS)_3-4 - V_L2.

[00225] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L1 - (GGGGS)_3-4 - V_H1 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L2 - (GGGGS)_3-4 - V_H2.

[00226] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H2 -(GGGGS)_3-4 - V_L2 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H1 - (GGGGS)_3-4 - V_L1.

[00227] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L2 -(GGGGS)_3-4 - V_H2 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L1 - (GGGGS)_3-4 - V_H1.

[00228] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H1 - (GGGGS)_3-4 - V_L1 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L2 - (GGGGS)_3-4- V_H2.

[00229] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L1 - (GGGGS)_3-4 - V_H1 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_Н2 - (GGGGS)_3-4 - V_L2.

[00230] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H2 -(GGGGS)_3-4 - V_L2 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L1 - (GGGGS)_3-4 - V_Н1.

[00231] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит первый слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_L2 - (GGGGS)_3-4- V_H2 и второй слитый белок внеклеточного лиганд-связывающего домена V_H1 - (GGGGS)_3-4 - V_L1.

[00232] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит по меньшей мере один сайт высокоэффективного расщепления, причем сайт высокоэффективного расщепления выбран из P2A, T2A, E2A и F2A.

[00233] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит суицидный ген.

[00234] В некоторых вариантах реализации полипептид CAR содержит мутантный рецептор к цитокинам.

[00235] В некоторых вариантах реализации, двойная CAR T-клетка нацелена на два антигена, выбранных из CD5, CD7, CD2, CD4, CD3, CD33, CD123 (IL3RA), CD371 (CLL-1; CLEC12A), CD117 (c-kit), CD135 (FLT3), BCMA, CS1, CD38, CD79A, CD79B, CD138, и CD19, APRIL, и TACI.

[00236] Дополнительные примеры двойных CAR приведены ниже в Таблице 5.

[00237] Таблица 5. Двойные CAR и dCAR-T

Примеры Антиген-мишени CAR в клетке dCAR-T Удаление/подавление антигена D1 APRILxBCMA - D2 APRILxCD19 - D3 APRILxCD38 - D4 APRILxCD38 CD38 D5 APRILxCS1 - D6 APRILxCS1 CS1 D7 BCMAxCD19 - D8 BCMAxCD38 - D9 BCMAxCD38 CD38 D10 BCMAxCS1 - D11 BCMAxCS1 CS1 D12 CD138xAPRIL D13 CD138xBCMA D14 CD138xCD19 D15 CD138xCD38 D16 CD138xCD38 CD38 D17 CD138xCD79A D18 CD138xCD79B D19 CD138xCS1 D20 CD138xCS1 CS1 D21 CD19xCD38 - D22 CD19xCD38 CD38 D23 CD2xCD3ε - D24 CD2xCD3ε CD2 D25 CD2xCD3ε CD3ε D26 CD2xCD3ε CD2 и CD3ε D27 CD2xCD4 - D28 CD2xCD4 CD2 D29 CD2xCD4 CD4 D30 CD2xCD4 CD2 и CD4 D31 CD2xCD4 CD2 и TRAC D32 CD2xCD4 CD4 и TRAC D33 CD2xCD4 CD2 и CD4 и TRAC D34 CD2xCD5 - D35 CD2xCD5 CD2 D36 CD2xCD5 CD5 D37 CD2xCD5 CD2 и CD5 D38 CD2xCD5 CD2 и TRAC D39 CD2xCD5 CD5 и TRAC D40 CD2xCD5 CD2 и CD5 и TRAC D41 CD2xCD7 - D42 CD2xCD7 CD2 D43 CD2xCD7 CD7 D44 CD2xCD7 CD2 и CD7 D45 CD2xCD7 CD2 и TRAC D46 CD2xCD7 CD7 и TRAC D47 CD2xCD7 CD2 и CD7 и TRAC D48 CD3εxCD4 - D49 CD3εxCD4 CD3ε D50 CD3εxCD4 CD4 D51 CD3εxCD4 CD3ε и CD4 D52 CD3εxCD5 - D53 CD3εxCD5 CD3ε D54 CD3εxCD5 CD5 D55 CD3εxCD5 CD3ε и CD5 D56 CD3εxCD7 - D57 CD3εxCD7 CD3ε D58 CD3εxCD7 CD7 D59 CD3εxCD7 CD3ε и CD7 D60 CD4xCD5 - D61 CD4xCD5 CD4 D62 CD4xCD5 CD5 D63 CD4xCD5 CD4 и CD5 D64 CD4xCD5 CD4 и TRAC D65 CD4xCD5 CD5 и TRAC D66 CD4xCD5 CD4 и CD5 и TRAC D67 CD4xCD7 - D68 CD4xCD7 CD4 D69 CD4xCD7 CD7 D70 CD4xCD7 CD4 и CD7 D71 CD4xCD7 CD4 и TRAC D72 CD4xCD7 CD7 и TRAC D73 CD4xCD7 CD4 и CD7 и TRAC D74 CD5xCD7 - D75 CD5xCD7 CD5 D76 CD5xCD7 CD7 D77 CD5xCD7 CD5 и CD7 D78 CD5xCD7 CD5 и TRAC D79 CD5xCD7 CD7 и TRAC D80 CD5xCD7 CD5 и CD7 и TRAC D81 CD79AxAPRIL D82 CD79AxBCMA D83 CD79AxCD19 D84 CD79AxCD38 D85 CD79AxCD38 CD38 D86 CD79AxCD79B D87 CD79AxCS1 D88 CD79AxCS1 CS1 D89 CD79BxAPRIL D90 CD79BxBCMA D91 CD79BxCD19 D92 CD79BxCD38 D93 CD79BxCD38 CD38 D94 CD79BxCD79A D95 CD79BxCS1 D96 CD79BxCS1 CS1 D97 CS1xCD19 - D98 CS1xCD19 CS1 D99 CS1xCD38 - D100 CS1xCD38 CS1 D101 CS1xCD38 CD38 D102 CS1xCD38 CS1 и CD38 D103 TCRβxCD2 - D104 TCRβxCD2 TCRβ D105 TCRβxCD2 CD2 D106 TCRβxCD2 TCRβ и CD2 D107 TCRβxCD3ε - D108 TCRβxCD3ε TCRβ D109 TCRβxCD3ε CD3ε D110 TCRβxCD3ε TCRβ и CD3ε D111 TCRβxCD4 - D112 TCRβxCD4 TCRβ D113 TCRβxCD4 CD4 D114 TCRβxCD4 TCRβ и CD4 D115 TCRβxCD5 - D116 TCRβxCD5 TCRβ D117 TCRβxCD5 CD5 D118 TCRβxCD5 TCRβ и CD5 D119 TCRβxCD7 - D120 TCRβxCD7 TCRβ D121 TCRβxCD7 CD7 D122 TCRβxCD7 TCRβ и CD7 D123 TRACxCD2 - D124 TRACxCD2 TRAC D125 TRACxCD2 CD2 D126 TRACxCD2 TRAC и CD2 D127 TRACxCD3ε - D128 TRACxCD3ε TRAC D129 TRACxCD3ε CD3ε D130 TRACxCD3ε TRAC и CD3ε D131 TRACxCD4 - D132 TRACxCD4 TRAC D133 TRACxCD4 CD4 D134 TRACxCD4 TRAC и CD4 D135 TRACxCD5 - D136 TRACxCD5 TRAC D137 TRACxCD5 CD5 D138 TRACxCD5 TRAC и CD5 D139 TRACxCD7 - D140 TRACxCD7 TRAC D141 TRACxCD7 CD7 D142 TRACxCD7 TRAC и CD7

Тандемные клетки CAR-T (tCAR-T)

[00238] Тандемная CAR T-клетка (tCAR-T) представляет собой T-клетку с одним химерным антигенным полипептидом, содержащим два отдельных внеклеточных лиганд-связывающих домена, способных взаимодействовать с двумя разными молекулами клеточной поверхности, при этом внеклеточные лиганд-связывающие домены связаны вместе посредством гибкого линкера и совместно используют один или более костимулирующих доменов, причем связывание первого или второго внеклеточного лиганд-связывающего домена будет передавать сигнал через один или более костимулирующих доменов и сигнальный трансдуцирующий домен.

[00239] В одном из вариантов реализации сконструированная Т-клетка содержит в свою очередь Тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), где один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD5, а второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), где Т-клетка дефицитна по CD5 и TRAC, например, CD5*TRAC-tCARTΔCD5ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что tCAR больше не связывает специфически модифицированный CD5 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD5 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD5 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD5*TRAC-tCARTΔCD5ΔTRAC клетках.

[00240] Во втором варианте реализации сконструированная Т-клетка содержит в свою очередь тандемный Химерный Aнтигенный Рецептор (tCAR), где один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD7, а второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), где Т-клетка дефицитна по CD7 и TRAC, например, CD7*TRAC-tCARTΔCD7ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что tCAR больше не связывает специфически модифицированный CD7 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD7 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD7 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*TRAC-tCARTΔCD7ΔTRAC клетках.

[00241] Во втором варианте реализации сконструированная Т-клетка содержит в свою очередь тандемный Химерный Aнтигенный Рецептор (tCAR), где один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD2, а второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), где Т-клетка дефицитна по CD2 и TRAC, например, CD2*TRAC-tCARTΔCD2ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD2 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD2 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что tCAR больше не связывает специфически модифицированный CD2 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD2 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD2 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*TRAC-tCARTΔCD2ΔTRAC клетках.

[00242] В другом варианте реализации сконструированная Т-клетка содержит в свою очередь тандемный Химерный Aнтигенный Рецептор (tCAR), где один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD4, а второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), где Т-клетка дефицитна по CD4 и TRAC, например, CD4*TRAC-tCARTΔCD4ΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD4 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD4 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что tCAR больше не связывает специфически модифицированный CD4 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD4 и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD4 и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4 и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD4*TRAC-tCARTΔCD4ΔTRAC клетках.

[00243] В другом варианте реализации сконструированная Т-клетка содержит в свою очередь тандемный Химерный Aнтигенный Рецептор (tCAR), где один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает) цепь CD3 эпсилон (ε), а второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), где Т-клетка дефицитна по CD3ε и TRAC, например, CD3ε*TRAC-tCARTΔCD3εΔTRAC клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD3ε и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) возник в результате (а) модификации CD3ε и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC), экспрессируемой Т-клеткой, так что tCAR больше не связывает специфически модифицированный CD3ε и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC), (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD3ε и альфа-цепи рецептора TCR (TRAC) снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более, или (c) модификации Т-клетки, так что CD3ε и альфа-цепь рецептора TCR (TRAC) не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD3ε и/или альфа-цепь рецептора TCR (TRAC). В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD3ε*TRAC-tCARTΔCD3εΔTRAC клетках.

[00244] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Aнтигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD2 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD3 эпсилон (ε)цепь, при этом Т-клетки имеют дефицит по CD2 и CD3ε, например, CD2*CD3ε-tCARTΔCD2ΔCD3ε клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD2 и CD3εявляется результатом (а) модификации CD2 и CD3ε, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD2 и CD3ε, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD2 и CD3ε снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD2 и CD3ε не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или CD3ε. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*CD3ε-tCARTΔCD2ΔCD3ε клетках.

[00245] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка содержит тандемный Химерный Aнтигенный Рецептор (tCAR), где один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD4, а второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает (ε) цепь CD3 эпсилон, при этом Т-клетка дефицитна по CD4 и CD3ε, например, CD4*CD3ε-tCARTΔCD4ΔCD3ε клетке. В неограничивающих примерах дефицит по CD4 и CD3εявляется результатом (а) модификации CD4 и CD3ε, экспрессируемой Т-клеткой, так что химерный антигенный рецептор больше не связывает специфически модифицированные CD4 и CD3ε, (b) модификации Т-клетки таким образом, что экспрессия CD4 и CD3ε снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или больше, или (c) модификации Т-клетки, так что CD4 и CD3ε не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4 и/или CD3ε. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах кодирующая белок последовательность модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD4*CD3ε-tCARTΔCD4ΔCD3ε клетках.

[00246] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD5 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает цепь TCRβ , в котором Т- клетка дефицитная по цепи CD5 и TCRβ , например, CD5*TCRβ-tCARTΔCD5ΔTCRβ клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD5 и цепи TCRβ в вызван (а) модификацией CD5 и TCRβ экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD5 и TCRβ, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD5 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD5 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD5*TCRβ-tCARTΔCD5ΔTCRβ клетках.

[00247] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD7 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает цепь TCRβ , в котором Т- клетка дефицитная по цепи CD7 и TCRβ , например, CD7*TCRβ-tCARTΔCD7ΔTCRβ клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и цепи TCRβ в вызван (а) модификацией CD7 и TCRβ экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD7 и TCRβ, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD7 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*TCRβ-tCARTΔCD7ΔTCRβ клетках.

[00248] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD2 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает цепь TCRβ , в котором Т- клетка дефицитная по цепи CD2 и TCRβ , например, CD2*TCRβ-tCARTΔCD7ΔTCRβ клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD2 и цепи TCRβ в вызван (а) модификацией CD2 и TCRβ экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD2 и TCRβ, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD2 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD2 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*TCRβ-tCARTΔCD2ΔTCRβ клетках.

[00249] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD4 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает цепь TCRβ , в котором Т- клетка дефицитная по цепи CD4 и TCRβ , например, CD4*TCRβ-tCARTΔCD4ΔTCRβ клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD4 и цепи TCRβ в вызван (а) модификацией CD4 и TCRβ экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD4 и TCRβ, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD4 и TCRβ снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD4 и TCRβ не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD4 и/или TCRβ. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD4*TCRβ-tCARTΔCD4ΔTCRβ клетках.

[00250] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD7 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD2, в котором Т- клетка дефицитная по CD7 и CD2, например, CD7*CD2-tCARTΔCD7ΔCD2 клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и CD2 в вызван (а) модификацией CD7 и CD2 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD7 и CD2, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и CD2 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD7 и CD2 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или CD2. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*CD2-tCARTΔCD7ΔCD2 клетках.

[00251] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD7 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD5, в котором Т- клетка дефицитная по CD7 и CD5, например, CD7*CD5-tCARTΔCD7ΔCD5 клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и CD5 в вызван (а) модификацией CD7 и CD5 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD7 и CD5, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и CD5 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD7 и CD5 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или CD5. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*CD5-tCARTΔCD7ΔCD5 клетках.

[00252] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD7 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD4, в котором Т- клетка дефицитная по CD7 и CD4, например, CD7*CD4-tCARTΔCD7ΔCD4 клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD7 и CD4 в вызван (а) модификацией CD7 и CD4 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD7 и CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD7 и CD4 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD7 и CD4 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD7 и/или CD4. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD7*CD4-tCARTΔCD7ΔCD4 клетках.

[00253] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD2 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD5, в котором Т- клетка дефицитная по CD2 и CD5, например, CD2*CD5-tCARTΔCD2ΔCD5 клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD2 и CD5 в вызван (а) модификацией CD2 и CD5 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD2 и CD5, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD2 и CD5 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD2 и CD5 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или CD5. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*CD5-tCARTΔCD2ΔCD5 клетках.

[00254] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD2 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD4, в котором Т- клетка дефицитная по CD2 и CD4, например, CD2*CD4-tCARTΔCD2ΔCD4 клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD2 и CD4 в вызван (а) модификацией CD2 и CD4 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что tCAR больше специфично не связывает модифицированный CD2 и CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD2 и CD4 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD2 и CD4 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD2 и/или CD4. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD2*CD4-tCARTΔCD2ΔCD4 клетках.

[00255] В другом варианте реализации, сконструированная Т-клетка включает в себя тандемный Химерный Антигенный Рецептор (tCAR), в котором один внеклеточный лиганд-связывающий домен специфически связывает CD5 и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен связывает CD4, в котором Т- клетка дефицитная по CD5 и CD4, например, CD5*CD4-tCARTΔCD5ΔCD4 клетка. В неограничивающих примерах дефицит в CD5 и CD4 в вызван (а) модификацией CD5 и CD4 экспрессирующих Т-клеток таким образом, что химерный антигенный рецептор больше специфично не связывает модифицированный CD5 и CD4, (b) модификацией Т-клетки, при которой экспрессия CD5 и CD4 снижается в Т-клетке по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере , 90% или более, или (с) модификацией Т-клеток таким образом, что CD5 и CD4 не экспрессируются (например, путем удаления или разрушения гена, кодирующего CD5 и/или CD4. В дополнительных вариантах реализации, Т-клетка содержит суицидный ген. В неограничивающих примерах, последовательность, кодирующая белок модифицированного гена тимидинкиназы (TK) вируса простого герпеса-1 человека, слита в рамке считывания с внеклеточными и трансмембранными доменами кДНК CD34 человека и экспрессируется в CD5*CD4-tCARTΔCD5ΔCD4 клетках.

[00256] В другом варианте реализации, линейная тандемная CAR T-клетка содержит полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), содержащий первый сигнальный пептид, первый внеклеточный лиганд-связывающий домен, второй внеклеточный лиганд-связывающий домен, шарнирную область, трансмембранный домен, один или более костимулирующих доменов и сигнальный трансдуцирующий домен, в которых первый внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена и второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена обладают сродством к различным молекулам клеточной поверхности, то есть антигенам на раковой клетке, например, злокачественной Т-клетке, злокачественной В-клетке или злокачественная плазматической клетке; и в котором линейная тандемная CAR T-клетка обладает одной или более генетическими модификациями, делециями или нарушениями, приводящими к снижению экспрессии молекул клеточной поверхности в линейной тандемной CAR T-клетке.

[00257] В другом варианте реализации, сигнальный пептид представляет собой сигнальный пептид из CD8α человека (SEQ ID NO:1).

[00258] В третьем варианте реализации, первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий легкий (V_L) и тяжелый (V_H) вариабельные фрагменты, обозначенные V_H1 и V_L1 и соединенные линкером (например, GGGGS). В некоторых вариантах реализации, этот пептидный линкер повторяется 2, 3, 4, 5 или 6 раз . В некоторых вариантах реализации, первый домен распознавания антигена может быть выбран из: 1) V_H1 - (GGGGS)_3-4 - V_L1 или 2) V_L1 - (GGGGS)_3-4-V_H1_.

[00259] В некоторых вариантах реализации, второй внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий легкий (V_L) и тяжелый (V_H) вариабельные фрагменты, обозначенные V_H2 и V_L2 и соединенные линкером (например, GGGGS). В некоторых вариантах реализации, этот пептидный линкер повторяется 2, 3, 4, 5 или 6 раз. В некоторых вариантах реализации, первый домен распознавания антигена может быть выбран из: 1) V_H2 - (GGGGS)_3-4 - V_L2 или 2) V_L2 - (GGGGS)_3-4-V_H2.

[00260] В дополнительных вариантах реализации, первый домен распознавания антигена и второй домен распознавания антигена соединены коротким линкерным пептидом из 5 аминокислот (GGGGS). В некоторых вариантах реализации, этот пептидный линкер повторяется 2, 3, 4, 5 или 6 раз.

Конструкции линейных тандемных CAR

[00261] В одном варианте реализации, линейной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий тяжелый (V_H) и легкий (V_L) вариабельные фрагменты, обозначенные V_H1 и V_L1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий легкий (V_L) и тяжелый (V_H) вариабельные фрагменты, обозначенные V_L2 и V_H2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00262] В втором варианте реализации, линейной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий тяжелый (V_H) и легкий (V_L) вариабельные фрагменты, обозначенные V_H2 и V_L2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий легкий (V_L) и тяжелый (V_H) вариабельные фрагменты, обозначенные V_L1 и V_H1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00263] В третьем варианте реализации, линейной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий тяжелый (VL) и легкий (VH) вариабельные фрагменты, обозначенные V_L1 и V_H1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий легкий (V_H) и тяжелый (V_L) вариабельные фрагменты, обозначенные V_H2 и V_L2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00264] В четвертом варианте реализации, линейной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий тяжелый (V_L) и легкий (V_H) вариабельные фрагменты, обозначенные V_L2 и V_H2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий легкий (V_H) и тяжелый (V_L) вариабельные фрагменты, обозначенные V_H1 и V_L1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00265] Для каждого из вариантов реализации, линейной тандемной конструкции CAR первый и второй внеклеточные лиганд-связывающие домены нацелены на поверхностную молекулу, т.е. антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной Т-клетки, выбран, но не ограничиваясь ими, из BCMA, CS1, CD38, CD138, CD19, CD33, CD123, CD371, CD117, CD135, Tim-3, CD5, CD7, CD2, CD4, CD3, CD79A, CD79B, APRIL, CD56 и CD1a.

[00266] Дополнительные примеры линейных тандемных CAR приведены ниже в Таблице 6.

Таблица 6. Тандемные CAR и CAR-Т (линейные или шпилечные).

Примеры Антиген-мишень CAR T-клетка Делеция/подавление антигена T1 APRILxBCMA - T2 APRILxCD19 - T3 APRILxCD38 - T4 APRILxCD38 CD38 T5 APRILxCS1 - T6 APRILxCS1 CS1 T7 BCMAxCD19 - T8 BCMAxCD38 - T9 BCMAxCD38 CD38 T10 BCMAxCS1 - T11 BCMAxCS1 CS1 T12 CD138xAPRIL T13 CD138xBCMA T14 CD138xCD19 T15 CD138xCD38 T16 CD138xCD38 CD38 T17 CD138xCD79A T18 CD138xCD79B T19 CD138xCS1 T20 CD138xCS1 CS1 T21 CD19xCD38 - T22 CD19xCD38 CD38 T23 CD2xCD3ε - T24 CD2xCD3ε CD2 T25 CD2xCD3ε CD3ε T26 CD2xCD3ε CD2 и CD3ε T27 CD2xCD4 - T28 CD2xCD4 CD2 T29 CD2xCD4 CD4 T30 CD2xCD4 CD2 и CD4 T31 CD2xCD4 CD2 и TRAC T32 CD2xCD4 CD4 и TRAC T33 CD2xCD4 CD2 и CD4 и TRAC T34 CD2xCD5 - T35 CD2xCD5 CD2 T36 CD2xCD5 CD5 T37 CD2xCD5 CD2 и CD5 T38 CD2xCD5 CD2 и TRAC T39 CD2xCD5 CD5 и TRAC T40 CD2xCD5 CD2 и CD5 и TRAC T41 CD2xCD7 - T42 CD2xCD7 CD2 T43 CD2xCD7 CD7 T44 CD2xCD7 CD2 и CD7 T45 CD2xCD7 CD2 и TRAC T46 CD2xCD7 CD7 и TRAC T47 CD2xCD7 CD2 и CD7 и TRAC T48 CD3εxCD4 - T49 CD3εxCD4 CD3ε T50 CD3εxCD4 CD4 T51 CD3εxCD4 CD3ε и CD4 T52 CD3εxCD5 - T53 CD3εxCD5 CD3ε T54 CD3εxCD5 CD5 T55 CD3εxCD5 CD3ε и CD5 T56 CD3εxCD7 - T57 CD3εxCD7 CD3ε T58 CD3εxCD7 CD7 T59 CD3εxCD7 CD3ε и CD7 T60 CD4xCD5 - T61 CD4xCD5 CD4 T62 CD4xCD5 CD5 T63 CD4xCD5 CD4 и CD5 T64 CD4xCD5 CD4 и TRAC T65 CD4xCD5 CD5 и TRAC T66 CD4xCD5 CD4 и CD5 и TRAC T67 CD4xCD7 - T68 CD4xCD7 CD4 T69 CD4xCD7 CD7 T70 CD4xCD7 CD4 и CD7 T71 CD4xCD7 CD4 и TRAC T72 CD4xCD7 CD4 и TRAC T73 CD4xCD7 CD4 и CD7 и TRAC T74 CD5xCD7 - T75 CD5xCD7 CD5 T76 CD5xCD7 CD7 T77 CD5xCD7 CD5 и CD7 T78 CD5xCD7 CD5 и TRAC T79 CD5xCD7 CD7 и TRAC T80 CD5xCD7 CD5 и CD7 и TRAC T81 CD79AxAPRIL T82 CD79AxBCMA T83 CD79AxCD19 T84 CD79AxCD38 T85 CD79AxCD38 CD38 T86 CD79AxCD79B T87 CD79AxCS1 T88 CD79AxCS1 CS1 T89 CD79BxAPRIL T90 CD79BxBCMA T91 CD79BxCD19 T92 CD79BxCD38 T93 CD79BxCD38 CD38 T94 CD79BxCD79A T95 CD79BxCS1 T96 CD79BxCS1 CS1 T97 CS1xCD19 - T98 CS1xCD19 CS1 T99 CS1xCD38 - T100 CS1xCD38 CS1 T101 CS1xCD38 CD38 T102 CS1xCD38 CS1 и CD38 T103 TCRβxCD2 - T104 TCRβxCD2 TCRβ T105 TCRβxCD2 CD2 T106 TCRβxCD2 TCRβ и CD2 T107 TCRβxCD3ε - T108 TCRβxCD3ε TCRβ T109 TCRβxCD3ε CD3ε T110 TCRβxCD3ε TCRβ и CD3ε T111 TCRβxCD4 - T112 TCRβxCD4 TCRβ T113 TCRβxCD4 CD4 T114 TCRβxCD4 TCRβ и CD4 T115 TCRβxCD5 - T116 TCRβxCD5 TCRβ T117 TCRβxCD5 CD5 T118 TCRβxCD5 TCRβ и CD5 T119 TCRβxCD7 - T120 TCRβxCD7 TCRβ T121 TCRβxCD7 CD7 T122 TCRβxCD7 TCRβ и CD7 T123 TRACxCD2 - T124 TRACxCD2 TRAC T125 TRACxCD2 CD2 T126 TRACxCD2 TRAC и CD2 T127 TRACxCD3ε - T128 TRACxCD3ε TRAC T129 TRACxCD3ε CD3ε T130 TRACxCD3ε TRAC и CD3ε T131 TRACxCD4 - T132 TRACxCD4 TRAC T133 TRACxCD4 CD4 T134 TRACxCD4 TRAC и CD4 T135 TRACxCD5 - T136 TRACxCD5 TRAC T137 TRACxCD5 CD5 T138 TRACxCD5 TRAC и CD5 T139 TRACxCD7 - T140 TRACxCD7 TRAC T141 TRACxCD7 CD7 T142 TRACxCD7 TRAC и CD7

[00267] Например, в настоящем документе представлены линейные тандемные конструкции CAR, которые могут включать домены V_H и V_L scFv, нацеленных на любую из пар антигенов, представленных в Таблице 6 выше.

Таблица 7. Конструкции линейных тандемных CAR.

7-I 7-II 7-III 7-IV 7-V 7-VI 7-VII 7-VIII CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 7-IX 7-X 7-XI 7-XII 7-XIII 7-XIV 7-XV 7-XVI CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 7-XVII 7-XVIII 7-XIX 7-XX 7-XXI 7-XXII 7-XXIII 7-XIV CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 7-XXV 7-XXVI 7-XXVII 7-XXVIII 7-XIX 7-XXX 7-XXXI 7-XXXII CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2)

Конструкции шпилечных тандемных CAR

[00268] В одном варианте реализации, шпилечной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента тяжелой цепи, обозначенные V_H1 и V_H2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента легкой цепи, обозначенные V_L2 и V_L1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00269] Во втором варианте реализации, шпилечной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента тяжелой цепи, обозначенные V_H2 и V_H1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента легкой цепи, обозначенные V_L1 и V_L2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00270] В третьем варианте реализации, шпилечной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента легкой цепи, обозначенные V_L1 и V_L2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента тяжелой цепи, обозначенные V_H2 и V_H1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00271] В четвертом варианте реализации, шпилечной тандемной конструкции CAR первый внеклеточный лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента легкой цепи, обозначенные V_L2 и V_L1 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6. Второй внеклеточный лиганд-связывающий домен распознавания антигена содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий два вариабельных фрагмента тяжелой цепи, обозначенные V_H1 и V_H2 и соединенные линкером (например, GGGGS)_2-6.

[00272] Для каждого из вариантов реализации, шпилечной тандемной конструкции CAR первый и второй внеклеточные лиганд-связывающие домены нацелены на поверхностную молекулу, т.е. антиген, экспрессируемый на поверхности злокачественной Т-клетки, выбран, но не ограничиваясь ими, из BCMA, CS1, CD38, CD138, CD19, CD33, CD123, CD371, CD117, CD135, Tim-3, CD5, CD7, CD2, CD4, CD3, CD79A, CD79B, APRIL, CD56 и CD1a.

[00273] Дополнительные примеры тандемных шпилечных CAR приведены выше в Таблице 6.

[00274] Кроме того, в данном документе представлены конструкции CAR и CAR T-клетки, которые могут включать домены V_H и V_L scFv, нацеленные на (1) CD2 и CD3; и (2) CD2 и CD7, которые представлены ниже в Таблице 8.

Таблица 8. Аминокислотные последовательности шпилечных тандемных химерных антигенных рецепторов (CAR).

Конструкции шпилечных тандемных CAR Обозначение в примерах SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность OKT3 V_L -CD2 V_L - CD2 V_H - OKT3 V_H WC5 SEQ ID NO:41 MALPVTALLLPLALLLHAARPQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD3 V_L - CD2 V_L - CD2 - V_H - CD3 V_H WC7 SEQ ID NO:42 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKCLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD2 V_L - CD3 V_L - CD3 V_H - CD2 - V_H WC15 SEQ ID NO:43 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKCLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD2 V_L - OKT3 V_L - OKT3 V_H - CD2 V_H WC13 SEQ ID NO:44 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD7 V_L - CD2 V_L - CD2 V_H - CD7 V_H SEQ ID NO:45 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI CD2 V_L - CD7 V_L - CD7 V_H - CD2 V_H SEQ ID NO:46 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIKNITQSPSSMYVSLGERVTITCKASQDINSFLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMEIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEMKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVKLEESGAELVKPGASVKLSCRTSGFNlKDTIHWVKQRPEQGLKWIGRIDPANGNTKYDPKFQDKATVTADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVTYAYDGNWYFDVWGAGTAVTVSSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRTDGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSEAMPRGWTALCLLSLLPSGFMSLDNNGTATPELPTQGTFSNVSTNVSYQETTTPSTLGSTSLHPVSQHGNEATTNITETTVKFTSTSVITSVYGNTNSSVQSQTSVISTVFTTPANVSTPETTLKPSLSPGNVSDLSTTSTSLATSPTKPYTSSSPILSDIKAEIKCSGIREVKLTQGICLEQNKTSSCAEFKKDRGEGLARVLCGEEQADADAGAQVCSLLLAQSEVRPQCLLLVLANRTEISSKLQLMKKHQSDLKKLGILDFTEQDVASHQSYSQKTLIALVTSGALLAVLGITGYFLMNRRSWSPI

[00275] Кроме того, в настоящем документе представлены шпилечные тандемные конструкции CAR, которые могут включать домены V_H и V_L scFv, нацеленных на любую из пар антигенов, представленных в Таблице 6.

Таблица 9. Конструкции шпилечных тандемных CAR

9-I 9-II 9-III 9-IV 9-V 9-VI 9-VII 9-VIII CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 9-IX 9-X 9-XI 9-XII 9-XIII 9-XIV 9-XV 9-XVI CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 9-XVII 9-XVIII 9-XIX 9-XX 9-XXI 9-XXII 9-XXIII 9-XIV CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 9-XXV 9-XXVI 9-XXVII 9-XXVIII 9-XIX 9-XXX 9-XXXI 9-XXXII CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2)

[00276] Например, в Таблице 10 представлены тандемные шпилечные конструкции CAR, которые включают домены V_H и V_L scFv CD2 и CD3.

[00277] Таблица 10. Шпилечные тандемные конструкции CAR нацеленные на CD2 и CD3.

Клон 5 Клон 6 Клон 7 Клон 8 Клон 13 Клон 14 Клон 15 Клон 16 CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD3-V_L CD3-V_L CD3-V_L CD3-V_L CD2-V_L CD2-V_L CD3-V_L CD3-V_L GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ CD2-V_L CD2-V_L CD2-V_L CD2-V_L CD3-V_L CD3-V_L CD2-V_L CD2-V_L (GGGGS)₁₀ (GGGGS)₄GGGGP(GGGGS)₄ (GGGGS)₁₀ (GGGGS)₄GGGGP(GGGGS)₄ (GGGGS)₁₀ (GGGGS)₄GGGGP(GGGGS)₄ (GGGGS)₁₀ (GGGGS)₄GGGGP(GGGGS)₄ CD2-V_H CD2-V_H CD2-V_H CD2-V_H CD3-V_H CD3-V_H CD2-V_H CD2-V_H GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ GGGGS₄ CD3-V_H CD3-V_H CD3-V_H CD3-V_H CD2-V_H CD2-V_H CD3-V_H CD3-V_H CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 CD28 CD28 CD28 CD28 CD28 CD28 CD28 CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) P2A P2A P2A P2A P2A P2A P2A P2A CD34 CD34 CD34 CD34 CD34 CD34 CD34 CD34

[00278] В Таблице 11 также представлены шпилечные тандемные конструкции CAR с (Cys=Cys) двухцепочечной связью (DSB), которые могут включать домены V_H и V_L scFv, нацеленные на любую из пар антигенов, представленных в Таблице 6.

Таблица 11. Шпилечные тандемные конструкции DSB CAR с (Cys=Cys) двухцепочечной связью (DSB).

11-I 11-II 11-III 11-IV 11-V 11-VI 11-VII 11-VIII CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) 11-IX 11-X 11-XI 11-XII 11-XIII 11-XIV 11-XV 11-XVI CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) 11-XVII 11-XVIII 11-XIX 11-XX 11-XXI 11-XXII 11-XXIII 11-XXIV CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2) CD3ζ_(1-2)) 11-XXV 11-XXVI 11-XXVII 11-XXVIII 11-XXIX 11-XXX 11-XXXI 11-XXXII CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a CD8a V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 V_L2 GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) GGGGS_(2-6) V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 V_L1 GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) GGGGS_(0-1)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(1-2)GGGGP ₍₁₎GGGGS_(2-3)GGGGC ₍₁₎GGGGS_(0-1) V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 V_H1 GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) GGGGS_(3-4) V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 V_H2 CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD8 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm CD28 Tm 41BB CD28 41BB - CD28 CD28 -41BB 41BB CD28 41BB -CD28 CD28 -41BB CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2) CD3z_(1-2)

Способы конструирования CAR в двойной или тандемной конструкции с использованием редактирования генов

[00279] В дополнительном аспекте может быть создан контроль CAR T-клеток. Например, контрольная CAR T-клетка может включать внеклеточный домен, который связывается с антигеном, не экспрессирующимся на злокачественной T-клетке. Например, если терапевтическая CAR T-клетка нацелена на Т-клеточный антиген, такой как CD7, или множественные Т-клеточные антигены, такие как CD2 и CD3, антигеном, с которым связывается контрольная CAR T-клетка, может быть CD19. CD19 представляет собой антиген, экспрессируемый на В-клетках, но не на Т-клетках, поэтому CAR T-клетка с внеклеточным доменом, адаптированным для связывания с CD19, не будет связываться с Т-клетками. Эти CAR T-клетки можно использовать в качестве контроля для анализа эффективности связывания и неспецифического связывания CAR T-клеток, нацеленных на представляющий интерес рак и/или распознающих интересующий антиген.

[00280] CAR могут быть дополнительно сконструированы, как описано в WO2018027036A1, необязательно с использованием вариаций, которые будут известны специалистам в данной области техники. Могут быть получены лентивирусные векторы и клеточные линии, а также разработаны, проверены и синтезированы направляющие РНК, как раскрыто в вышеуказанном документе, а также с помощью способов, известных в данной области техники и из коммерческих источников.

[00281] Сконструированные CAR могут быть введены в Т-клетки с использованием ретровирусов, которые эффективно и стабильно интегрируют последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный антигенный рецептор, в геном клетки-мишени. Другие способы, известные в данной области техники, включают, но не ограничиваются ими, лентивирусную трансдукцию, системы на основе транспозонов, прямую трансфекцию РНК и системы CRISPR/Cas (например, системы типа I, типа II или типа III с использованием подходящего белка Cas, такого как Cas3, Cas4, Cas5, Cas5e (или CasD), Cas6, Cas6e, Cas6f, Cas7, Cas8a1 , Cas8a2, Cas8b, Cas8c, Cas9, Cas10, Casl Od, CasF, CasG, CasH, Csy1 , Csy2, Csy3, Cse1 (или CasA), Cse2 (или CasB), Cse3 (или CasE), Cse4 (или CasC), Csc1 , Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1 , Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1 , Csb2, Csb3,Csx17, Csx14, Csx1 0, Csx16, CsaX, Csx3, Csz1 , Csx15, Csf1 , Csf2, Csf3, Csf4 и Cu1966, и т.п.). Также могут быть использованы цинк-пальцевые нуклеазы (ZFN) и аналогичные активатору транскрипции эффекторные нуклеазы (TALEN). См., например, Shearer RF and Saunders DN, “Experimental design for stable genetic manipulation in mammalian cell lines: lentivirus and alternatives,” Genes Cells 2015 Jan; 20(1):1-10.

[00282] Манипуляции с передачей сигналов PI3K можно использовать для предотвращения дифференциирования измененных CAR T-клеток из-за конститутивной самосигнализации CAR и стимулирования развития Т-клеток долгоживущей памяти. фармакологическая блокада PI3K во время производства CAR-T и экспансии ex vivo может отменить предпочтительное развитие эффекторных Т-клеток и восстановить соотношение эффектор/память CAR-T, наблюдаемое в пустых векторных трансдуцированных Т-клетках, что может улучшить устойчивость и терапевтическую активность Т-клеток in vivo. Ингибирование p110δ PI3K может повысить эффективность и память в опухолеспецифических терапевтических CD8 T-клетках, в то время как ингибирование p110α PI3K может увеличить выработку цитокинов и противоопухолевый ответ.

Предполагается, что это связано с тем, что присутствие CAR на поверхности Т-клетки может изменять ее активацию и дифференциирование даже в отсутствие лиганда. Конститутивная самосигнализация через CAR, связанная как с каркасом scFv, так и с сигнальными доменами, может приводить к аберрантному поведению Т-клеток, включая измененное дифференциирование и снижение выживаемости. Это важно, поскольку эффективность CAR T-клеток у пациентов напрямую связана с их продолжительностью жизни in vivo. Присутствие костимулирующего домена CD28 увеличивало истощение CAR T-клеток, вызванное постоянной передачей самосигналов CAR; костимулирующий домен 4-1BB имел меньший эффект. Кроме того, CD3-zeta значительно усиливает конститутивную активацию PI3K, AKT, mTOR и путей гликолиза и способствует образованию короткоживущих эффекторных клеток по сравнению с центральными/стволовыми клетками памяти. См., например, Zhang W. et al., "Modulation of PI3K signaling to improve CAR T cell function," Oncotarget, 2018 Nov 9; 9(88): 35807-35808.

Удаление или подавление гена цитокинов

[00283] В дополнение к редактированию генов TCR и белков и антигенов клеточной поверхности, можно редактировать гены секретируемых белков, таких как цитокины и хемокины. Такое редактирование может быть выполнено, например, для уменьшения или предотвращения развития или поддержания синдрома высвобождения цитокинов (CRS). CRS вызывается большим и быстрым высвобождением цитокинов из иммунных клеток в ответ на иммунотерапию (или другой иммунологический стимул). Модификация, разрушение или удаление одного или более генов цитокинов или хемокинов может быть выполнено с использованием способов, известных в данной области техники, таких как генетическая абляция (подавление гена), при которой экспрессия генов отменяется посредством изменения или удаления информации о генетической последовательности. Это может быть достигнуто с использованием известных в данной области техники инструментов генной инженерии, таких как аналогичные активатору транскрипции эффекторные нуклеазы (TALEN), цинк-пальцевые нуклеазы (ZFN), CRISPR, путем трансдукции малых шпилечных РНК (shРНК) путем направленной трансдукции CAR в последовательность гена цитокина и т.п.

[00284] Цитокины или хемокины, которые могут быть удалены из иммунных эффекторных клеток, как описано в данном документе, например, с использованием Cas9-CRISPR или путем направленной трансдукции CAR в последовательность гена цитокина, включают, без ограничения, следующее: XCL1, XCL2, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CX3CL1, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-18, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-13, IL-15, IL-3, IL-5, GM-CSF, IL-6, IL-11, G-CSF, IL-12, LIF, OSM, IL-10, IL-20, IL-14, IL-16, IL-17, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, CD154, LT-β, TNF-α,TNF-β, 4-1BBL, APRIL, CD70, CD153, CD178, GITRL, LIGHT, OX40L, TALL-1, TRAIL, TWEAK, TRANCE, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, Epo, Tpo, Flt-3L, SCF, M-CSF, MSP, A2M, ACKR1, ACKR2, ACKR3, ACVR1, ACVR2B, ACVRL1, ADIPOQ, AGER, AGRN, AIMP1, AREG, BMP1, BMP10, BMP15, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8A, BMP8B, BMPR2, C10orf99, C1QTNF4, C5, CCL28, CCR1, CCR2, CCR3, CCR5, CCR6, CCR7, CD109, CD36, CD4, CD40LG, CD74, CER1, CHRD, CKLF, CLCF1, CMTM1, CMTM2, CMTM3, CMTM4, CMTM5, CMTM6, CMTM7, CMTM8, CNTF, CNTFR, COPS5, CRLF1, CSF1, CSF1R, CSF2, CSF3, CSF3R, CTF1, CX3CR1, CXCL16, CXCL17, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR6, EBI3, EDN1, ELANE, ENG, FAM3B, FAM3C, FAM3D, FAS, FASLG, FGF2, FLT3LG, FZD4, GBP1, GDF1, GDF10, GDF11, GDF15, GDF2, GDF3, GDF5, GDF6, GDF7, GDF9, GPI, GREM1, GREM2, GRN, HAX1, HFE2, HMGB1, HYAL2, IFNA10, IFNA14, IFNA16, IFNA2, IFNA5, IFNA6, IFNA8, IFNAR1, IFNAR2, IFNB1, IFNE, IFNG, IFNGR1, IFNK, IFNL1, IFNL3, IFNW1, IL10RA, IL11RA, IL12A, IL12B, IL12RB1, IL17A, IL17B, IL17C, IL17D, IL17F, IL18BP, IL-19, IL1F10, IL1R1, IL1R2, IL1RAPL1, IL1RL1, IL1RN, IL20RA, IL20RB, IL21, IL22, IL22RA1, IL22RA2, IL23A, IL23R, IL24, IL25, IL26, IL27, IL2RA, IL2RB, IL2RG, IL31, IL31RA, IL32, IL33, IL34, IL36A, IL36B, IL36G, IL36RN, IL37, IL6R, IL6ST, INHA, INHBA, INHBB, INHBC, INHBE, ITGA4, ITGAV, ITGB1, ITGB3, KIT, KITLG, KLHL20, LEFTY1, LEFTY2, LIFR, LTA, LTB, LTBP1, LTBP3, LTBP4, MIF, MINOS1-, MSTN, NAMPT, NBL1, NDP, NLRP7, NODAL, NOG, NRG1, NRP1, NRP2, OSMR, PARK7, PDPN, PF4, PF4V1, PGLYRP1, PLP2, PPBP, PXDN, SCG2, SCGB3A1, SECTM1, SLURP1, SOSTDC1, SP100, SPP1, TCAP, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, THBS1, THNSL2, THPO, TIMP1, TNF, TNFRSF11, TNFRSF1A, TNFRSF9, TNFRSF10, TNFSF11, TNFSF12, TNFSF12-, TNFSF13, TNFSF13B, TNFSF14, TNFSF15, TNFSF18, TNFSF4, TNFSF8, TNFSF9, TRIM16, TSLP, TWSG1, TXLNA, VASN, VEGFA, VSTM1, WFIKKN1, WFIKKN2, WNT1, WNT2, WNT5A, WNT7A и ZFP36.

[00285] Последовательности этих генов известны и доступны в данной области техники.

Показания и стандарты лечения при терапии ACT (CAR-T)

[00286] В некоторых вариантах реализации, иммунные эффекторные клетки с редактированием генома, раскрытые в данном документе и/или созданные с использованием способов, раскрытых в данном документе, экспрессируют один или более химерных антигенных рецепторов (CAR) и могут использоваться в качестве лекарственного средства, т.е. для лечения заболевания. В некоторых вариантах осуществления клетки представляют собой клетки СНО.

[00287] Клетки, раскрытые в данном документе и/или полученные с использованием раскрытых в данном документе способов, могут использоваться в иммунотерапии и переносе адоптивных клеток, для лечения или производства лекарственного средства для лечения рака, аутоиммунных заболеваний, инфекционных заболеваний и других состояний.

[00288] Рак может быть гематологической злокачественным новообразованием или солидной опухолью. Гематологические злокачественные новообразования включают лейкозы, лимфомы, множественную миелому и их подтипы. Лимфомы можно классифицировать по-разному, часто на основе основного типа злокачественных клеток, включая лимфому Ходжкина (часто виды рака клеток Рида-Штернберга, но также иногда происходящие из В-клеток; все другие лимфомы относятся к неходжкинским лимфомам), В-клеточные лимфомы, Т-клеточные лимфомы, лимфомы из мантийных клеток, лимфому Беркитта, фолликулярную лимфому и другие, как они определены в данном документе и известны в данной области техники.

[00289] В-клеточные лимфомы включают, но не ограничиваются ими, диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому (ДКВКЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ)/малую лимфоцитарную лимфому (МЛЛ) и другие, как определено в данном документе и известно в данной области техники.

[00290] Т-клеточные лимфомы включают Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз/лимфому (Т-ОЛЛ), Т-клеточную периферическую лимфому (Т-ПЛ), Т-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (Т-ХЛЛ), синдром Сезари и другие, как определено в данном документе и известно в данной области техники.

[00291] Лейкозы включают острый миелоидный (или миелогенный) лейкоз (ОМЛ), хронический миелоидный (или миелогенный) лейкоз (ХМЛ), острый лимфоцитарный (или лимфобластный) лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ) волосатоклеточный лейкоз (иногда классифицируется как лимфома) и другие, как определено в данном документе и известно в данной области техники.

[00292] Злокачественные новообразования клеток плазмы включают лимфоплазмоцитарную лимфому, плазмоцитому и множественную миелому.

[00293] В некоторых вариантах реализации, лекарственное средство можно использовать для лечения рака у пациента, в частности, для лечения солидных опухолей, таких как меланомы, нейробластомы, глиомы или карциномы, такие как опухоли мозга, головы и шеи, груди, легких (например, не-мелкоклеточный рак легкого, НМРЛ), репродуктивного тракта (например, яичника), верхних отделов пищеварительного тракта, поджелудочной железы, печени, почечной системы (например, почек), мочевого пузыря, простаты и толстой кишки.

[00294] В другом варианте реализации, лекарственное средство можно использовать для лечения рака у пациента, в частности, для лечения гематологических злокачественных новообразований, выбранных из множественной миеломы и острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), и злокачественных опухолей Т-клеток, выбранных из Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза, неходжкинской лимфомы и Т-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза (T-ХЛЛ).

[00295] В некоторых вариантах реализации, клетки можно использовать для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как волчанка, аутоиммунный (ревматоидный) артрит, рассеянный склероз, отторжение трансплантата, болезнь Крона, язвенный колит, дерматит и т.п. В некоторых вариантах реализации, клетки представляют собой Т-клетки с химерным рецептором аутоантител или CAR-T, отображающие антигены или их фрагменты вместо фрагментов антител; в этой версии адаптивного переноса клеток В-клетки, вызывающие аутоиммунные заболевания, будут пытаться атаковать сконструированные Т-клетки, которые ответят, убивая их.

[00296] В некоторых вариантах реализации, клетки можно использовать для лечения инфекционных заболеваний, таких как ВИЧ и туберкулез.

[00297] В другом варианте реализации, CAR T-клетки по данному изобретению могут подвергаться устойчивой экспансии Т-клеток in vivo и могут сохраняться в течение продолжительного времени.

[00298] В некоторых вариантах реализации, лечение пациента CAR T-клетками согласно настоящему раскрытию может быть улучшающим, лечебным или профилактическим. Это может быть либо частью аутологичной иммунотерапии, либо частью лечения аллогенной иммунотерапией. Под аутологичными подразумевается, что клетки, линия клеток или популяция клеток, используемые для лечения пациентов, происходят от указанного пациента или от донора, совместимого с лейкоцитарным антигеном человека (HLA). Термин «аллогенный» означает, что клетки или популяция клеток, используемые для лечения пациентов, происходят не от пациента, а от донора.

[00299] Лечение рака CAR T-клетками по настоящему раскрытию может осуществляться в сочетании с одним или более видами лечения, выбранными из терапии антителами, химиотерапии, цитокинотерапии, терапии дендритными клетками, генной терапии, гормональной терапии, лучевой терапии, лазерной светотерапии и облучения.

[00300] Введение CAR T-клеток или популяции CAR T-клеток в соответствии с настоящим раскрытием может осуществляться путем аэрозольной ингаляции, инъекции, приема внутрь, переливания, имплантации или трансплантации. Композиции можно вводить пациенту трансартериально, подкожно, внутрикожно, внутриопухолево, интранодально, интрамедуллярно, внутримышечно, внутривенно или внутрибрюшинно. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения композиции вводят путем внутривенной инъекции.

[00301] Введение CAR T-клеток или популяции CAR T-клеток может состоять из введения 10⁴ -10⁹ клеток на кг массы тела, предпочтительно от 10⁵ до 10⁶ клеток/кг массы тела, включая все целые значения количества клеток. в пределах этих диапазонов. CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток можно вводить в одной или более дозах. В другом варианте реализации, эффективное количество CAR T-клеток или популяции CAR T-клеток вводят в виде разовой дозы. В другом варианте эффективное количество клеток вводят в виде более чем одной дозы в течение определенного периода времени. Время введения определяется на усмотрение врача и зависит от клинического состояния пациента. CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток могут быть получены из любого источника, такого как банк крови или донор. Хотя потребности пациентов меняются, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств данной популяции (популяций) клеток CAR-T для конкретного заболевания или состояния находится в пределах компетенции специалистов в данной области техники. Эффективное количество означает количество, которое обеспечивает терапевтический или профилактический эффект. Вводимая доза будет зависеть от возраста, состояния здоровья и массы тела пациента-реципиента, типа сопутствующего лечения, если таковое имеется, частоты лечения и характера желаемого эффекта.

[00302] В другом варианте реализации, эффективное количество CAR T-клеток или популяции CAR T-клеток или композиции, содержащей эти CAR T-клетки, вводят парентерально. Введение может быть внутривенным. Введение CAR T-клеток или популяции CAR T-клеток или композиции, содержащей эти CAR T-клетки, можно осуществлять непосредственно путем инъекции в опухоль.

[00303] В одном варианте реализации, настоящего раскрытия CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток вводятся пациенту в сочетании, например, до, одновременно или после, любого количества подходящих способов лечения, включая, но не ограничиваясь, лечением цитокинами или экспрессией цитокинов внутри CAR-T, которые усиливают пролиферацию и устойчивость Т-клеток, и включают, но не ограничиваются ими, IL-2, IL-7 и IL-15 или их аналоги.

[00304] В некоторых вариантах реализации, CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток по настоящему раскрытию могут использоваться в комбинации с агентами, которые ингибируют иммуносупрессивные пути, включая, помимо прочего, ингибиторы TGFβ, интерлейкин 10 (IL-10), аденозин, VEGF, индоламин-2,3-диоксигеназу 1 (IDO1), индоламин-2,3-диоксигеназу 2 (IDO2), триптофан-2-3-диоксигеназу (TDO), лактат, гипоксию, аргиназу и простагландин E2.

[00305] В другом варианте реализации, CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток по настоящему раскрытию могут быть использованы в комбинации с ингибиторами контрольных точек T-клеток, включая, но не ограничиваясь ими, анти-CTLA4 (ипилимумаб) анти-PD1 (пембролизумаб), ниволумаб, цемиплимаб, анти-PDL1 (атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб), анти-PDL2, анти-BTLA, анти-LAG3, анти-TIM3, анти-VISTA, анти-TIGIT и анти-KIR.

[00306] В другом варианте реализации, CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток по настоящему раскрытию могут использоваться в комбинации с агонистами Т-клеток, включая, но не ограничиваясь ими, антитела, которые стимулируют CD28, ICOS, OX-40, CD27, 4-1BB, CD137, GITR и HVEM.

[00307] В другом варианте реализации, CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток по настоящему раскрытию могут использоваться в сочетании с терапевтическими онколитическими вирусами, включая, но не ограничиваясь ими, ретровирусы, пикорнавирусы, рабдовирусы, парамиксовирусы, реовирусы, парвовирусы, аденовирусы, герпесвирусы и поксвирусы.

[00308] В другом варианте реализации, CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток по настоящему раскрытию могут использоваться в комбинации с иммуностимулирующими терапиями, такими как агонисты толл-подобных рецепторов, включая, но не ограничиваясь ими, TLR3, TLR4, TLR7 и агонисты TLR9.

[00309] В другом варианте реализации, CAR T-клетки или популяция CAR T-клеток по настоящему раскрытию могут использоваться в комбинации со стимулятором агонистов гена интерферона (STING), такими как циклическая ГМФ-AМФ-синтаза (cGAS).

[00310] Аплазия иммунных эффекторных клеток, в частности аплазия Т-клеток, также вызывает беспокойство после терапии адоптивным переносом клеток. Когда излечиваемая злокачественная опухоль является Т-клеточной злокачественной опухолью, а CAR T-клетки нацелены на Т-клеточный антиген, нормальные Т-клетки и их предшественники, экспрессирующие антиген, истощаются, и иммунная система оказывается под угрозой. Соответственно, способы лечения этих побочных эффектов сопровождаются терапией. Такие способы включают отбор и сохранение незлокачественных Т-клеток или предшественников, аутологичных или аллогенных (необязательно сконструированных так, чтобы не вызывать отторжения или отторжения), для последующего размножения и повторной инфузии пациенту после истощения или деактивации CAR T-клеток. Альтернативно, CAR T-клетки, которые распознают и убивают подмножества TCR-несущих клеток, таких как нормальные и злокачественные TRBC1⁺, но не TRBC2⁺ клетки, или, альтернативно, TRBC2⁺, но не TRBC1⁺ клетки, могут быть использованы для искоренения T-клеточной злокачественной опухоли при сохранении достаточного количества нормальных Т-клеток для поддержания нормальной функции иммунной системы.

Определения

[00311] Если в данном документе не указано иное, все используемые технические и научные термины имеют то же значение, которое обычно понимается квалифицированным специалистом в области генной терапии, биохимии, генетики и молекулярной биологии. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в данном документе, которые могут быть использованы в практике или испытании данного изобретения, подходящие способы и материалы описаны ниже.

[00312] Используемые в данном документе термины имеют указанные значения. Когда раскрываются диапазоны значений и используются обозначения «от n₁ … до n₂ » или «между n₁ … и n₂ », где n₁ и n₂ представляют собой числа, тогда, если не указано иное, это обозначение предназначены для включения самих чисел и диапазона между ними. Этот диапазон может быть целым или непрерывным между конечными значениями включительно. В качестве примера предполагается, что диапазон «от 2 до 6 атомов углерода» включает два, три, четыре, пять и шесть атомов углерода, поскольку атомы углерода представлены в целых единицах. Сравните, в качестве примера, диапазон «от 1 до 3 мкМ (микромолярный)», который предназначен для включения 1 мкМ, 3 мкМ и всего, что находится между ними, с любым количеством значащих цифр (например, 1,255 мкМ, 2,1 мкМ, 2,9999 мкМ и т.п.).

[00313] Используемый в данном документе термин «около» предназначен для определения числовых значений, которые он модифицирует, обозначая такое значение как переменную в пределах погрешности. Когда не указывается конкретная погрешность, такая как стандартное отклонение от среднего значения, указанного в диаграмме или таблице данных, термин «около» следует понимать как обозначающий диапазон, который будет охватывать указанное значение, и диапазон, который будет включен путем округления в большую или меньшую сторону до этой цифры с учетом значащих цифр.

[00314] Термин «активация» (и другие его варианты) применительно к клеткам обычно понимается как синоним «стимуляции» и, как он используется в данном документе, относится к лечению клеток, которое приводит к увеличению популяций клеток. В Т-клетках активация часто достигается воздействием агонистов CD2 и CD28 (а иногда также CD2), обычно антител, необязательно нанесенных на магнитные шарики или конъюгированных с коллоидным полимерным матриксом.

[00315] Используемый в данном документе термин «антиген» означает белок клеточной поверхности, распознаваемый (т.е. являющийся мишенью) рецептором Т-клеток или химерным антигенным рецептором. В классическом смысле антигены представляют собой вещества, обычно белки, которые распознаются антителами, но определения частично совпадают, поскольку CAR включает производные от доменов антител, таких как легкая (V_L) и тяжелая (V_H) цепи, распознающие один или более антигенов.

[00316] Термин «рак» относится к злокачественному новообразованию или аномальному росту клеток в организме. Многие различные виды рака можно охарактеризовать или идентифицировать с помощью определенных белков или молекул клеточной поверхности. Таким образом, в общих чертах, рак в соответствии с настоящим раскрытием может относиться к любому злокачественному новообразованию, которое можно лечить с помощью иммунной эффекторной клетки, такой как CAR T-клетка, как описано в данном документе, при этом иммунная эффекторная клетка распознает и связывается с белком клеточной поверхности на раковой клетке. В контексте настоящего описания «рак» может относиться к гематологическому злокачественному новообразованию, такому как множественная миелома, Т-клеточное злокачественное образование или В-клеточное злокачественное образование. Т-клеточные злокачественные новообразования могут включать, помимо прочего, Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (Т-ОЛЛ) или неходжкинскую лимфому. Рак может также относиться к солидной опухоли, такой как, но не ограничиваясь этим, рак шейки матки, рак поджелудочной железы, рак яичников, мезотелиома и рак легких.

[00317] Используемый в данном документе «белок клеточной поверхности» представляет собой белок (или белковый комплекс), экспрессируемый клеткой, по меньшей мере, частично на поверхности клетки. Примеры белков клеточной поверхности включают TCR (и его субъединицы) и CD7.

[00318] «Химерный антигенный рецептор» или «CAR», как используется в данном документе и обычно используется в данной области, относится к рекомбинантному слитому белку, который имеет внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и сигнальный трансдуцирующий домен, который заставляет клетку выполнять специализированную функцию при связывании внеклеточного лиганд-связывающего домена с компонентом, присутствующим на клетке-мишени. Например, CAR может обладать специфичностью на основе антител к желаемому антигену (например, опухолевому антигену) с внутриклеточным доменом, активирующим Т-клеточный рецептор, для генерации химерного белка, который проявляет специфическую клеточную иммунную активность по отношению к мишени. CAR первого поколения включают внеклеточный лиганд-связывающий домен и сигнальный трансдуцирующий домен, обычно CD3ζ или FcεRIγ. CAR второго поколения построены на основе конструкций CAR первого поколения путем включения внутриклеточного костимулирующего домена, обычно 4-1BB или CD28. Эти костимулирующие домены помогают повысить цитотоксичность и пролиферацию CAR T-клеток по сравнению с CAR первого поколения. CAR третьего поколения включают в себя несколько костимулирующих доменов, в первую очередь для увеличения пролиферации и персистенции CAR T-клеток. Химерные антигенные рецепторы отличаются от других антигенсвязывающих агентов своей способностью как связывать ГКГ-независимые антигены, так и передавать сигналы активации через свой внутриклеточный домен.

[00319] «Несущая CAR иммунная эффекторная клетка» представляет собой иммунную эффекторную клетку, трансдуцированную по меньшей мере одним CAR. «CAR T-клетка» представляет собой T-клетку, трансдуцированную по меньшей мере одним CAR; CAR T-клетки могут быть моно, двойными или тандемными CAR T-клетками. CAR T-клетки могут быть аутологичными, что означает, что они созданы из собственных клеток субъекта, или аллогенными, что означает, что клетки получены от здорового донора и, во многих случаях, сконструированы таким образом, чтобы не спровоцировать реакцию "хозяин против трансплантата» или реакцию "трансплантат против хозяина". Донорские клетки также могут быть получены из пуповинной крови или получены из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток.

[00320] Двойная CAR T-клетка (dCAR-T) может быть определена как T-клетка с двумя различными полипептидами химерного антигенного рецептора, имеющими сродство к разным антигенам-мишеням, экспрессируемым в одной и той же эффекторной клетке, где каждый CAR функционирует независимо. CAR может быть экспрессирован из одной или более полинуклеотидных последовательностей.

[00321] Тандемная CAR T-клетка (tCAR-T) может быть определена как T-клетка с одним химерным антигенным полипептидом, содержащим два различных внеклеточных лигандсвязывающих домена со сродством к различным мишеням, где внеклеточный лиганд-связывающие домены связаны через пептидный линкер и имеют один или более общих костимулирующих доменов, где связывание любого внеклеточного лиганд-связывающего домена будет сигнализировать через один или более общих костимулирующих доменов и передающий сигнал домен.

[00322] Термин «комбинированная терапия» означает введение двух или более терапевтических агентов для лечения терапевтического состояния или расстройства, описанного в настоящем раскрытии. Такое введение включает совместное введение этих терапевтических агентов практически одновременно, например, в одной капсуле с фиксированным соотношением активных ингредиентов или в нескольких отдельных капсулах для каждого активного ингредиента. Кроме того, такое введение также включает последовательное применение каждого типа терапевтического агента. В любом случае схема лечения будет обеспечивать благоприятные эффекты комбинации лекарственных средств при лечении состояний или расстройств, описанных в данном документе.

[00323] Используемый в данном документе термин «композиция» относится к комбинации популяций иммунотерапевтических клеток с одним или более терапевтически приемлемыми носителями.

[00324] Термин «заболевание», используемый в данном документе, в целом является синонимом и используется взаимозаменяемо с терминами «расстройство», «синдром» и «состояние» (как медицинское состояние), поскольку все они отражают ненормальное состояние тела человека или животного или одной из его частей, которая нарушает нормальное функционирование, и обычно проявляется в виде отличительных признаков и симптомов и приводит к сокращению продолжительности или качества жизни человека или животного.

[00325] Используемый в данном документе термин «взаимное уничтожение» означает процесс, который происходит, когда CAR T-клетка становится мишенью для другой CAR T-клетки, содержащей тот же химерный антигенный рецептор, что и мишень для CAR T-клетки, и уничтожается ею, поскольку клетка-мишень экспрессирует антиген, специфически распознаваемый химерным антигенным рецептором на обеих клетках. CAR T-клетка, содержащая химерный антигенный рецептор, дефицитная по антигену, с которым специфически связывается рецептор химерный антигенный рецептор, будет «устойчивой к взаимному уничтожению».

[00326] Термин «редактированный геномом» в контексте данного документа означает добавление, удаление или изменение гена, чтобы он не функционировал. Таким образом, в некоторых вариантах реализации, «CAR T-клетка с редактированным геномом» представляет собой CAR T-клетку, которая имеет такой ген, как CAR, распознающий по меньшей мере один добавленный антиген; и/или имеет ген, такой как ген(ы) антигена(ов), которые распознаются с помощью делеции CAR; и/или имеет такой ген, как TCR, или его субъединицу (например, α- или β-цепь), удаленную или модифицированную, чтобы быть нефункциональной, или субъединица связанного комплекса передачи сигнала CD3, или его субъединица (например, цепи γ, δ, ε или ζ) удалены или изменены, чтобы быть нефункциональными.

[00327] Используемый в данном документе термин «суицидный ген» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, введенной в CAR T-клетку стандартными способами, известными в данной области, которые при активации приводят к гибели CAR T-клетки. При необходимости суицидные гены могут способствовать отслеживанию и удалению, то есть уничтожению CAR T-клеток in vivo. Облегченное уничтожение CAR T-клеток путем активации суицидного гена может быть выполнено стандартными способами, известными в данной области техники. Системы суицидных генов, известные в данной области техники, включают, но не ограничиваются ими, включают (а) вирус простого герпеса (HSV)-tk, который превращает нетоксичное пролекарство ганцикловир (GCV) в GCV-трифосфат, что приводит к гибели клеток за счет остановки репликации ДНК, (b) iCasp9 может связываться с небольшой молекулой AP1903 и приводить к димеризации, которая активирует внутренний путь апоптоза, и (c) целевой поверхностный антиген, экспрессируемый в трансдуцированных Т-клетках (например, CD20 и усеченный EGFR), позволяя удалить модифицированные клетки эффективно путем дополнения/антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (CDC/ADCC) после введения ассоциированного моноклонального антитела.

[00328] «Раковая клетка», например, представляет собой злокачественную Т-клетку, злокачественную В-клетку или злокачественную плазматическую клетку.

[00329] «Злокачественная В-клетка» представляет собой В-клетку, полученную из В-клеточного злокачественного образования. В-клеточные злокачественные новообразования включают, без ограничения, (ДКВКЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ)/малую лимфоцитарную лимфому (МЛЛ) и острый лимфобластный лейкоз предшественников B-клеток (ОЛЛ).

[00330] «Злокачественная Т-клетка» представляет собой Т-клетку, полученную из Т-клеточного злокачественного образования.

[00331] Термин «Т-клеточное злокачественное образование» относится к широкой, весьма гетерогенной группе злокачественных новообразований, происходящих от предшественников Т-клеток, зрелых Т-клеток или естественных клеток-киллеров. Неограничивающие примеры Т-клеточных злокачественных новообразований включают Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз/лимфому (T-ОЛЛ), Т-клеточный вирусный лейкоз человека, положительный тип 1 (HTLV-1 +), Т-клеточный лейкоз/лимфому взрослых (ТЛВ), Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз (T-ПЛЛ), Т-клеточная лимфома/лейкоз взрослых (ассоциированный с HTLV-1), агрессивный лейкоз NK-клеток, анапластическую крупноклеточную лимфому (ALCL), ALK-положительную, анапластическую крупноклеточную лимфому (ALCL), ALK-отрицательную, ангиоиммунобластную Т-клеточная лимфому (AITL), анапластическую крупноклеточную лимфому, связанную с грудным имплантатом, хроническое лимфопролиферативное заболевание NK-клеток, экстраузловую NK/T-клеточную лимфому, носовой тип, энтеропатический тип T- клеточной лимфомы, фолликулярную Т-клеточную лимфому, гепатоспленическую Т-клеточную лимфому, индолентное Т-клеточное лимфопролиферативное заболевание желудочно-кишечного тракта, мономорфную эпителиотрофную кишечную Т-клеточную лимфому, грибовидный микоз, узловую периферическую Т-клеточную лимфому с TFH фенотипом, периферическую Т-клеточную лимфому (PTCL), NOS, первичную кожную γδ Т-клеточную лимфому, первичную поверхностную акральную CD8+ агрессивную эпидермотропую цитотоксическую Т-клеточную лимфому, первичную поверхностную акральную CD8+ T-клеточную лимфому, первичные поверхностные CD4+ малые/средние Т-клеточные лимфопролиферативные нарушения [первичная поверхностная анапластическая крупноклеточная лимфома (C-ALCL), лимфоидный папулезный синдром], синдром Сезари, подкожную, панникулитоподобную Т-клеточную лимфому, системную EBV+ Т-клеточную лимфому детского возраста и Т-клеточный крупногранулярный лимфоцитарный лейкоз (LGL).

[00332] «Здоровый донор», как используется в данном документе, представляет собой таковой, у кого нет гематологического злокачественного новообразования (например, злокачественного новообразования Т-клеток).

[00333] В данном контексте термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к таким солям, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями субъекта без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и/или тому подобного, и имеют разумное соотношение польза/риск.

[00334] Термин «терапевтически эффективный» предназначен для определения количества активных ингредиентов, используемых при лечении заболевания или нарушения, или для воздействия на клиническую конечную точку.

[00335] Используемый в данном документе термин «секретируемый белок» означает белок, секретируемый клеткой, который оказывает влияние на другие клетки. В качестве примера секретируемые белки включают цитокины, хемокины и факторы транскрипции.

[00336] Термин «донорская матрица» относится к эталонному геномному материалу, который клетка использует в качестве матрицы для восстановления двухцепочечного разрыва через путь репарации ДНК, направленный на гомологию (HDR). Донорская матрица содержит фрагмент ДНК, который необходимо вставить в геном (содержащий ген, который должен быть экспрессирован, CAR или маркер), с двумя плечами гомологии, фланкирующими участок двухцепочечного разрыва. В некоторых вариантах реализации, донорская матрица может быть аденоассоциированным вирусом, одноцепочечной ДНК или двухцепочечной ДНК.

[00337] Термин «воздействие», используемый в данном документе, в контексте приведения композиций вещества (например, антител) в тесный контакт с другими композициями вещества (такими как клетки), означает синоним «инкубировать с» и использование одного термина вместо другого не предполагает более продолжительного периода контакта.

[00338] Термин «пациент» обычно является синонимом термина «субъект» и включает всех млекопитающих, включая человека.

[00339] Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.

ПРИМЕРЫ

Пример 1 - Способ получения и тестирования клеток CAR-T с редактированным геномом путем вставки CAR в локусы CD3e

[00340] Следующие шаги могут быть предприняты для получения CAR T-клетки с редактированным геномом, в которой car экспрессируется из локусов, редактируемого гена (CAR-T), описанных в данном документе. Этот пример описывает создание CD7CART ΔCD7 ΔCD3ε клетки. Специалисты в данной области техники поймут, что некоторые из стадий могут выполняться последовательно или в порядке, не указанном ниже, хотя, возможно, это приведет к различной эффективности.

РНК; (ps) обозначают фосфоротиоат. Подчеркнутые основания обозначают целевую последовательность.

Стадия 1 - Активация Т-клеток (День 0).

[00341] Очистите Т-клетки из камеры лейкафереза, используя набор для выделения Miltenyi human PanT. Ресуспендируйте в среде. Подсчитывали клетки ММ. Определите количество бусин CD3/CD28, активирующих Т-клетки человека, необходимое для получения соотношения бусы: клетки 3: 1. Промойте бусы 2 раза средой для Т-клеток. Разбавьте клетки до 1256 клеток/мл в среде hXcyte. Добавьте бусы CD3/CD28 активации человеческих Т-клеток. Аликвотируйте 4 мл/лунку раствора 1256 клеток/мл в 6-луночный планшет. Инкубируйте клетки при 37 °C.

Стадия 2 - CRISPR (День 2).

[00342] Целевой ген генетически удален, а CAR вставлен в редактируемые локусы гена. Двухцепочечный разрыв ДНК может быть восстановлен с помощью гомологически направленного восстановления с использованием донорной матрицы для восстановления разрыва и вставки желаемой последовательности в редактируемые локусы. Делеция мишени может быть достигнута путем электропорации мРНК и гРНК Cas9 против мишени(ей). Донорная матрица может быть ДНК-плазмидой или двухцепочечной линейной ДНК, содержащей гомологию с ДНК, окружающей двухцепочечные разрывы, подвергнутые электропорированию с Cas9/гРНК. Кроме того, вирусный вектор, такой как ААВ, может использоваться в качестве источника донорской матрицы. Однако другие способы могут быть использованы для индукции двухцепочечных разрывов ДНК. К ним относятся другие способы редактирования генома, такие как TALEN и мегануклеазы.

Таблица 13. CRISPR протокол

№ образца гРНК №1 гРНК №2 Cas9 Буфер Nuecleofection P3 UCART7 20 мкг gCD7 20 мкг gCD3ε 15 мкг мРНК Cas9 100 мкл

[00343] Протокол - Nucleofection с использованием нуклеофектора 4D - 4×10⁶ клеток на реакцию. Программа EO-115 - объем трансфекции 100 мкл. Вся добавка должна быть добавлена в раствор Nucleofector™ P3. Подготовьте планшеты для культивирования клеток, заполнив соответствующее количество лунок желаемым объемом рекомендуемой питательной среды (2 мл в 6-луночном планшете) и предварительно инкубируйте/уравновешивайте планшеты в увлажненном инкубаторе при 37 °C/5% CO₂. Магнитно удалите бусы (сделайте это дважды, чтобы полностью удалить). Подсчитайте клетки и определите плотность клеток. Центрифугируйте необходимое количество клеток при 90xg в течение 10 минут при комнатной температуре. Полностью удалите супернатант. Ресуспендируйте в ФСБ (1 мл), перенесите в пробирку для микроцентрифуги и центрифугируйте необходимое количество клеток при 90xg в течение 10 минут при комнатной температуре. Полностью удалите супернатант. Осторожно ресуспендируйте клеточный осадок в полном растворе 4DNucleofector™ P3 при комнатной температуре (4×10⁶ на 100 мкл). Добавьте 20мкг каждой гРНК (gCD7 и gCD3ε) в каждую пробирку 15 мкг cas9. Добавьте 100 мкл клеток в каждую пробирку с Cas9/гРНК, осторожно перемешайте и перенесите все в Nucleocuvette™. Осторожно постучите, чтобы удалить пузырьки. Электропорируйте с помощью программы (Human T-cell stim EO-115). После завершения цикла осторожно извлеките сосуд Nucleocuvette™ из фиксатора с помощью специального приспособления. Ресуспендируйте клетки с предварительно нагретой средой. Отберите среду из лунки назначения, добавьте в кювету и осторожно пипетируйте вверх и вниз два-три раза. Перенесите в лунку. Повторите то же самое со средой из той же лунки. Инкубируйте при 37 ^oC.

Стадия 3 - Трансдукция Т-клеток вектором ААВ, содержащим репарационную конструкцию HDR.

[00344] Рекомбинантный донорный вектор ААВ6 добавляли к культуре клеток через 2-4 часа после электропорации с MOI между 1e4 и 1e6.

Стадия 4 - Оценка активности CRISPR и эффективности Td (10 День).

[00345] Возьмите 5×10⁵ клеток из каждого образца и проанализируйте с помощью проточной цитометрии. Промойте образцы RB. Добавьте 3 мкл антитела к CD34 PE (это обнаруживает CAR, поскольку наша конструкция содержит усеченный CD34 человека). Добавьте 5 мкл CD3 APC и 2 мкл CD2 BV421. Промойте. Выполните проточную цитометрию. Клетки должны быть CD3ε отрицательными, CD7 отрицательными. Соберите Т-клетки (11 день) .

[00346] Очистите CAR T-клетки. CD34+ (CAR+) и TCR-отрицательные клетки могут быть очищены в одну стадию с использованием положительного отбора клеток CD34+ на Miltenyi Automacs. Это обогащает клетки CAR+ и удаляет клетки TCR+ (поскольку вставка CAR нарушает передачу сигналов TCR)

Стадия 5 - Оценка активности CAR-T in vivo

[00347] Введите опухоль в мышей NSG (5e5 MOLT3 или HH: содержащие люциферазу) при выполнении эксперимента визуализации in vivo. День 7:

[00348] Определите опухолевую нагрузку у мышей с помощью биолюминесцентной визуализации. Введите 2×10⁶ CD34+CAR-T на мышь с помощью в./в. через хвостовую вену или проведите 4-часовой анализ высвобождения хрома для клеток-мишеней (MOLT3 или HH) (11 день) . Специалисты в данной области техники поймут, что возможна некоторая гибкость во временных рамках, указанных в Примере 1.

Пример 2 - Способ получения тандемных tCAR T-клеток с редактированным геномом

[00349] В варианте протокола из Примера 1 может быть получена тандемная CAR T-клетка, распознающая два антигена. На Стадии 2 два антигена могут быть удалены с поверхности клетки или подавлены, как описано выше, путем электропорации с гРНК для каждой из двух мишеней и мРНК Cas9. На Стадии 3 эта CAR T-клетка затем трансдуцируется с помощью CAR, который распознает две мишени. Варианты тандемной CAR T-клетки, представлены на схеме на Фиг. 2. Дополнительные примеры tCAR T-клеток представлены в Таблице 6.

Пример 3 - Двойные CAR T-клетки с редактированным геномом или тандемные CAR T-клетки с редактированным геномом

[00350] Несколько типов двойных или тандемных CAR T-клеток с редактированным геномом можно получить с использованием описанных выше способов. Фиг. 1 и Фиг. 2 иллюстрируют примеры тандемных и двойных CAR T-клеток. Цифры указывают на антигены-мишени, и не указывают порядок экспрессии scFv в тандемной конструкции CAR. Дополнительные примеры представлены ниже в Таблицах 6-11.

[00351] В настоящем документе представлены дополнительные примеры тандемных и двойных CAR T-клеток с делецией, без делеции или подавлением одного или более поверхностных белков, которые являются антигенами-мишенями CAR и экспрессируются на CAR T-клетках. В целом, примеры с делецией или подавлением более чем одного антигена с большей вероятностью будут иметь преимущество большей устойчивости к взаимному уничтожению для этих CAR T-клеток. Следует также отметить, что порядок, в котором scFv, ориентированы в тандемных CAR приведены в Таблицах 6-11, и не является ограничивающим. Например, CD2*CD3ε охватывает tCAR с ориентацией CD2*CD3ε или ориентацией CD3ε*CD2.

[00352] Дополнительные примеры моно-, тандемных и двойных CAR T-клеток, нацеленных на экспрессию антигенов на множественных миеломных клетках, представлены в данном документе без делеции, с делецией или подавлением одного или более поверхностных белков, которые являются антигенами-мишенями для CAR и экспрессируются на CAR Т-клетках. В целом, примеры с делецией или подавлением более чем одного антигена с большей вероятностью будут иметь преимущество большей устойчивости к взаимному уничтожению для этих CAR T-клеток.

Пример 4 - Лечение пациента(ов) двойными или тандемными CAR T-клетками, с редактированным геномом

[00353] Пациентов можно лечить с использованием клеток, полученных указанными выше способами, как представлено на Фиг. 1 и Фиг. 2. Например, пациенту можно вливать увеличенную популяцию двойных или тандемных CAR T-клеток.

[00354] Двойные или тандемные клетки CAR-T нацелены на раковые клетки, не вызывая аллореактивности. Например, CD2*CD3ε-dCARTΔCD2ΔCD3ε клетки будут нацелены на раковые клетки (и другие не-раковые клетки), несущие поверхностные антигены CD2 и CDε.

Пример 5- Тестирование эффективности CD2*CD3Δ-dCARTΔCD2ΔCD3ε на ксеногенной модели T-ОЛЛ

[00355] Тестирование эффективности CD2*CD3Δ-dCARTΔCD2ΔCD3ε на ксеногенной модели T-ОЛЛ: 5×10⁵ клеток Jurkat (T-ОЛЛ-99% CD2+, 99%% CD3% по данным FACS) меченных красной люциферазой щелкунчика (CBR), вводили внутривенно реципиентам NSG перед инфузией CD2*CD3ε-dCARTΔCD2ΔCD3ε (WC5 или WC13), CD3CARTΔCD2ΔCD3ε (UCART3), CD2CARTΔCD2ΔCD3ε (UCART2) или нецелевых CD19-CARΔCD2ΔCD3ε (UCART19) контрольных клеток в./в. на +4 день. В отличие от мышей, получавших CD19-CARΔCD2ΔCD3ε, или мышей, которым инъецировали только опухоль, мыши, получавшие CD2*CD3ε-dCARTΔCD2ΔCD3ε, демонстрировали значительно более длительную выживаемость и снижение опухолевой нагрузки, как определено с помощью биолюминесцентного изображения, представленного на Фиг. 13. В будущих моделях CD2 * CD3ε-dCARTΔCD2ΔCD3ε будет обеспечивать преимущество в выживаемости по сравнению с CD3CARTΔCD2ΔCD3ε, CD2CARTΔCD2ΔCD3ε и уменьшать опухолевую нагрузку в версии этой модели, в которой в целевой клетке отсутствует либо CD2 (CD2CARTΔCD2ΔCD3ε), либо CD3 (CD3CARTΔCD2ΔCD3ε).

Пример 6 - Моно CAR T-клетки с редактированным геномом

[00356] Примеры моно CAR T-клеток с редактированным геномом, нацеленных на антигены, экспрессируемые на гематологических злокачественных новообразованиях, представлены ниже без делеции, с делецией или подавлением одного или более поверхностных белков, которые являются антигенами-мишенями CAR и экспрессируются на CAR T-клетках. В целом, примеры с делецией или подавлением более чем одного антигена с большей вероятностью будут иметь преимущество большей устойчивости к взаимному уничтожению для этих CAR T-клеток.

Пример 7 - Клетки UCART2/3, с редактированным геномом, созданные путем редактирования перед активацией

[00357] В 0 день клетки оттаивали в оттаивающем буфере. После этого клетки ресуспендировали в среде и давали отдохнуть в течение двух часов. Клетки собирали и подсчитывали. Необходимое количество клеток центрифугировали при 100×g в течение 10 минут при комнатной температуре. Супернатант полностью удаляли, клетки ресуспендировали в ФСБ (1 мл) и переносили в микроцентрифужную пробирку и центрифугировали при 100×g в течение 10 минут при комнатной температуре. Супернатант удаляли полностью, а затем клетки ресуспендировали в буфере P3, подсчитывали и доводили количество до 5×10⁷ на мл. Объем пула клеток 100 мкл добавляли в пробирку, содержащую Cas9/гРНК, осторожно перемешивали и все переносили в Nucleocuvette™, по которой осторожно постукивали для удаления пузырьков. После этого начинали электропорацию с использованием программы (Human T cell stim EO-115). После этой процедуры активированные клетки переносили в предварительно нагретую среду и распределяли аликвотами по 2 мл в 12-луночном планшете. Аликвотные образцы выдерживали в течение 24 часов.

[00358] В день 1 клетки были активированы T Cell TransAct™, как показано в Таблице 14.

[00359] Таблица 14. Активация T Cell TransAct™.

Название Среда Стимуляция Cas9 p гРНК Вирус 1 ДТ TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) - - 2 WC5 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC5 3 WC6 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC6 4 WC7 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC7 5 WC8 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC8 6 WC13 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC13 7 WC14 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC14 8 WC15 TexMacs Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC15 9 WC16 TexMACS Т-клетки TransAct™ (50 мкл) 2 мкл 20 мкг iDT CD2+CD3ε WC16

[00360] На 2 день добавляли 1 мкл полибрена на каждый мл среды (8 мг/мл исходного раствора). Требуемое количество вируса было добавлено для получения требуемой M.O.I (множественности заражения). Клетки и вирус были смешаны и помещены обратно в инкубатор при 37 °C.

[00361] На 3 день активированные клетки промывали для снятия стимуляции.

[00362] На 12 день анализ FACS показал высокую чистоту клеток CD3^-CD2^-/CAR-T; см. Фиг. 5 (клон 5 и клон 6), Фиг. 6 (клон 7 и клон 8), Фиг. 7 (клон 13 и клон 14) и Фиг. 8 (клон 15 и клон 16). Стандартные анализы четырехчасового высвобождения хрома (⁵¹Cr) были выполнены с использованием (⁵¹Cr) меченных геном-редактированных клеток Jurkat (ΔCD2, ΔCD3 и ΔCD2ΔCD3. Эти эксперименты показали, что функциональные реакции уничтожения опухоли с мишенями CD2 и CD3 независимы друг от друга (см. Фиг. 9A, Фиг. 9B, Фиг. 9C и Фиг. 9D).

Пример 8 - Уничтожение опухолевых клеток клетками BCMA-CAR-T

[00363] BCMA CAR-T были сначала протестированы in vitro на эффективность с использованием стандартных четырехчасовых анализов по высвобождению хрома (51Cr) с использованием меченных 51Cr клеток-мишеней MM.1S. Чтобы обеспечить отслеживание in vivo, клеточная линия миеломы человека (BCMA +/CD19-) была модифицирована для экспрессии красной люциферазы щелкунчика, слитой с GFP (MM.1S-CG). CAR T-клетки инкубировали с 51Cr-меченными клетками MM.1S-CG в течение четырех часов при различных соотношениях эффекторного (CAR-T) и целевого (MM.1S-CG) и высвобожденный 51Cr измеряли как маркер гибели клеток MM.1S-CG (Фиг. 10В). Эффективное уничтожение наблюдали при множественных соотношениях эффектор к цели (E:T). Нетрансдуцированные активированные Т-клетки и CD19-CAR-T использовали в качестве отрицательного контроля и не вызывали гибели клеток MM.1S-CG. Затем эффективность in vivo тестировали путем приживления мышам NSG 500000 клеток миеломы человека MM.1S-CG (в./в.). Двадцать восемь дней спустя, когда опухолевая нагрузка была высокой, мышей оставляли без лечения или лечили 2 × 106 CD19-CAR-T или BCMA CAR-T. Все семь мышей, получавших BCMA CAR-T, прожили почти 150 дней или более по сравнению с контрольными мышами, которые умерли на около 50 день (Фиг. 10С). Причина смерти одной мыши, которая умерла в когорте BCMA CAR-T, неизвестна. Анализ проточной цитометрии не выявил опухолевых клеток GFP+ у этой мыши. Последовательная биолюминесцентная визуализация (BLI) выявила устойчивое снижение сигнала до фоновых уровней, которые никогда не повышались на протяжении всего эксперимента (Фиг. 10D).

Пример 9 - Уничтожение опухолевых клеток клетками CS1-CAR-T

[00364] Эффективность клеток CS1-CAR-T in vivo путем инъекции 5 × 10⁵ MM.1S-CG мышам NSG и 28 дней спустя, когда опухолевая нагрузка была высокой (поток фотонов BLI 1010), инъецировали 2 × 10⁶ клеток CS1-CAR-T или отрицательные контрольные клетки CD19-CAR-T. Мышам также прививали клетки MM.1S-CG без CS1 (с использованием технологии CAS9/CRISPR; MM.1S-CGΔCS1) в качестве способа проверки специфичности клеток CS1-CAR-T. Все мыши, получавшие CS1-CAR T-клетки (n=10), жили > 90 дней (Фиг. 11B), в то время как средняя выживаемость мышей CD19-контроля (n=8) составляла 43 дня. Мы лечили мышей с привитыми MM.1S-CGΔCS1 с помощью CS1-CAR-T или CD19 CAR-T, как указано выше. Выживаемость этих мышей была аналогична таковой у контрольных мышей (49 дней), демонстрируя специфичность in vivo. Последовательная биолюминесцентная визуализация (BLI) показала, что у мышей, обработанных CS1-CAR-T, наблюдалось трехлогарифмическое снижение потока фотонов и клиренса опухоли костного мозга (Фиг. 11С). У подгруппы мышей CS1-CAR-T развились экстрамедуллярные опухоли, которые сохранили экспрессию CS1, что позволяет предположить, что ускользания антигена не произошло.

Пример 10 - Эффективность и уничтожение клеток тандемом (tCAR), нацеленным на BCMA и CS1

[00365] Двунаправленный CAR-T, который экспрессирует два scFv в тандеме (tCAR), нацеленный на BCMA и CS1, был разработан в попытке повысить эффективность и уничтожить миеломные клетки CAR-T. В качестве контроля тандемный CAR тестировался бок о бок с однонаправленными клетками BCMA-CAR-T и однонаправленными клетками CS1-CAR-T. Клетки CD19-CAR-T использовали в качестве отрицательного контроля. Во-первых, было подтверждено, что каждый scFv экспрессируется в tCAR. Для этого клетки Jurkat инфицировали лентивирусом, экспрессирующим каждую конструкцию CAR, как представлено на Фиг. 12А. Клетки CAR-T инкубировали с рекомбинантными белками BCMA и CS1 человека, каждый из которых был помечен отдельными флуоресцентными флуофорами. Отрицательные контрольные CAR T-клетки гейтировали (синий цвет), а экспериментальные CAR T-клетки накладывали друг на друга (красный цвет). Как и ожидалось, клетки Jurkat, экспрессирующие CD19-CAR, не связывались ни с белком BCMA, ни с CS1 (нижний левый квадрант, Фиг. 12В). Клетки Jurkat, экспрессирующие белок BCMA CAR, связанный с белком BCMA (верхний левый квадрант, Фиг. 12В). Клетки Jurkat, экспрессирующие белок CS1 CAR, связанный с белком CS1 (нижний правый квадрант, Фиг. 12В). Клетки Jurkat, экспрессирующие тандемный белок BCMA-CS1 CAR, связанный с обоими рекомбинантными белками (верхний правый квадрант, Фиг. 12B), предполагает экспрессию обоих scFv.

[00366] Одиночные и тандемные CAR T-клетки тестировали на эффективность in vitro с помощью стандартных четырехчасовых анализов высвобождения хрома (⁵¹Cr). Для этих экспериментов CAR T-клетки инкубировали с рядом эффекторных клеток-мишеней (соотношение E:T). BCMA-CS1 tCAR T-клетки убивали клетки MM.1S-CG с такой же эффективностью, как и отдельные клетки-мишени CAR-T. Дополнительные эксперименты позволят оптимизировать двунаправленные клетки BCMA-CS1 CAR-T для обеспечения эффективности in vivo .

Пример 11 - Анализ отклонения от цели для отбора гРНК

[00367] Направляющие РНК были разработаны и проверены на предмет активности Washington University Genome Engineering & iPSC. Направляющие РНК были разработаны и проверены на предмет активности Washington University Genome Engineering & iPSC. Последовательности, комплементарные данной гРНК, могут существовать по всему геному, включая, но не ограничиваясь этим, целевой локус. Короткая последовательность с большей вероятностью гибридизуется вне мишени. Точно так же некоторые длинные последовательности внутри гРНК могут иметь точные совпадения (long_0) или близкие совпадения (long_1, long_2, представляющие, соответственно, одно- или двухнуклеотидное различие) по всему геному. Они также могут гибридизоваться не по назначению, что приводит к редактированию неправильного гена и снижению эффективности редактирования.

[00368] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК выполняли для 2 экзонов hCD2 (CF58 и CF59), чтобы определить количество сайтов в геноме человека, которые точно совпадают или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты приведены в Таблице 15 для экзона CF58 и в Таблице 16 для экзона CF59.

Таблица 15. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCD2 (экзон CF58)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 ОНП CF58.CD2.g1 CAAAGAGATTACGAATGCCTNGG (SEQ ID NO:57) 1 1 1 3 н/д CF58.CD2.g23 CAAGGCATTCGTAATCTCTTNGG (SEQ ID NO:58) 1 1 1 5 н/д CF58.CD2.g18 CTTGTAGATATCCTGATCATNGG (SEQ ID NO:59) 1 1 1 13 н/д CF58.CD2.g8 CTTGGGTCAGGACATCAACTNGG (SEQ ID NO:60) 1 1 1 14 н/д CF58.CD2.g14 CGATGATCAGGATATCTACANGG (SEQ ID NO:61) 1 1 1 17 н/д CF58.CD2.g2 TTACGAATGCCTTGGAAACCNGG (SEQ ID NO:62) 1 1 1 27 н/д CF58.CD2.g3 TACGAATGCCTTGGAAACCTNGG (SEQ ID NO:63) 1 1 1 34 н/д CF58.CD2.g4 ACGAATGCCTTGGAAACCTGNGG (SEQ ID NO:64) 1 1 1 40 н/д CF58.CD2.g10 TGATATTGACGATATAAAATNGG (SEQ ID NO:65) 1 1 2 3 н/д CF58.CD2.g9 ATGATATTGACGATATAAAANGG (SEQ ID NO:66) 1 1 2 4 н/д CF58.CD2.g13 GCATCTGAAGACCGATGATCNGG (SEQ ID NO:67) 1 1 2 4 н/д CF58.CD2.g7 AACCTGGGGTGCCTTGGGTCNGG (SEQ ID NO:68) 1 1 2 22 н/д CF58.CD2.g6 TTGGAAACCTGGGGTGCCTTNGG (SEQ ID NO:69) 1 1 2 33 н/д CF58.CD2.g15 GTATCAATATATGATACAAANGG (SEQ ID NO:70) 1 1 2 35 н/д CF58.CD2.g22 CAAGGCACCCCAGGTTTCCANGG (SEQ ID NO:71) 1 1 2 45 н/д CF58.CD2.g5 CTTGGAAACCTGGGGTGCCTNGG (SEQ ID NO:72) 1 1 2 62 н/д CF58.CD2.g19 TCATCACTCATTTGAAAACTNGG (SEQ ID NO:73) 1 1 3 56 н/д CF58.CD2.g20 CAAGTTGATGTCCTGACCCANGG (SEQ ID NO:74) 1 1 4 27 н/д CF58.CD2.g21 GTCCTGACCCAAGGCACCCCNGG (SEQ ID NO:75) 1 1 4 33 н/д CF58.CD2.g17 ATATTTGATTTGAAGATTCANGG (SEQ ID NO:76) 1 1 6 35 н/д CF58.CD2.g16 TACAAAAGGAAAAAATGTGTNGG (SEQ ID NO:77) 1 1 7 64 н/д CF58.CD2.g12 ACATATAAGCTATTTAAAAANGG (SEQ ID NO:78) 1 1 8 58 н/д CF58.CD2.g11 AAAAGAGAAAGAGACTTTCANGG (SEQ ID NO:79) 1 1 15 42 н/д

Таблица 16. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCD2 (CF59)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP CF59.CD2.g20 CTTGATACAGGTTTAATTCGNGG (SEQ ID NO:80) 1 1 1 2 н/д CF59.CD2.g13 ACAGCTGACAGGCTCGACACNGG (SEQ ID NO:81) 1 1 1 4 н/д CF59.CD2.g17 GATGTTTCCCATCTTGATACNGG (SEQ ID NO:82) 1 1 1 8 н/д CF59.CD2.g12 GTCGAGCCTGTCAGCTGTCCNGG (SEQ ID NO:83) 1 1 1 24 н/д CF59.CD2.g10 CAAAATTCAAGTGCACAGCANGG (SEQ ID NO:84) 1 1 1 33 н/д CF59.CD2.g16 GAATTTTGCACTCAGGCTGGNGG (SEQ ID NO:85) 1 1 1 245 н/д CF59.CD2.g4 GAATTAAACCTGTATCAAGANGG (SEQ ID NO:86) 1 1 2 7 н/д CF59.CD2.g5 AATTAAACCTGTATCAAGATNGG (SEQ ID NO:87) 1 1 2 7 н/д CF59.CD2.g21 AGTTCCATTCATTACCTCACNGG (SEQ ID NO:88) 1 1 2 14 н/д CF59.CD2.g8 AGAGGGTCATCACACACAAGNGG (SEQ ID NO:89) 1 1 2 20 н/д CF59.CD2.g25 ATACAAGTCCAGGAGATCTTNGG (SEQ ID NO:90) 1 1 2 21 н/д CF59.CD2.g19 TCTTGATACAGGTTTAATTCNGG (SEQ ID NO:91) 1 1 2 25 н/д CF59.CD2.g3 CTGACCTGTGAGGTAATGAANGG (SEQ ID NO:92) 1 1 2 29 н/д CF59.CD2.g7 ACATCTAAAACTTTCTCAGANGG (SEQ ID NO:93) 1 1 2 41 н/д CF59.CD2.g9 GCAAAATTCAAGTGCACAGCNGG (SEQ ID NO:94) 1 1 2 46 н/д CF59.CD2.g24 GGTTGTGTTGATACAAGTCCNGG (SEQ ID NO:95) 1 1 3 8 н/д CF59.CD2.g18 ATCTTGATACAGGTTTAATTNGG (SEQ ID NO:96) 1 1 3 24 н/д CF59.CD2.g23 ATTCATTACCTCACAGGTCANGG (SEQ ID NO:97) 1 1 3 35 н/д CF59.CD2.g6 AACATCTAAAACTTTCTCAGNGG (SEQ ID NO:98) 1 1 3 43 н/д CF59.CD2.g11 AGCAGGGAACAAAGTCAGCANGG (SEQ ID NO:99) 1 1 3 45 н/д CF59.CD2.g2 CAACACAACCCTGACCTGTGNGG (SEQ ID NO:100) 1 1 3 47 н/д CF59.CD2.g15 CTTGAATTTTGCACTCAGGCNGG (SEQ ID NO:101) 1 1 4 21 н/д CF59.CD2.g22 CATTCATTACCTCACAGGTCNGG (SEQ ID NO:102) 1 1 10 29 н/д CF59.CD2.g14 TGCACTTGAATTTTGCACTCNGG (SEQ ID NO:103) 1 2 3 26 н/д CF59.CD2.g1 TCTCAAAACCAAAGATCTCCNGG (SEQ ID NO:104) 1 2 5 19 н/д

[00369] Последовательности гРНК в Таблице 15 и Таблице 16 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: CF58.CD2.g1 (41,2%), CF58.CD2.g23 (13,2%), CF59.CD2.g20 (26,6%), CF59.CD2.g13 (66,2%), CF59.CD2.g17 (17,5%). Гидовая РНК (гRNA) с нормализованными частотами NHEJ, равными или превышающими 15%, является хорошим кандидатом для проектов создания линий клеток и моделей животных.

[00370] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК был выполнен для hCD3E для определения количества сайтов в геноме человека, которые являются точным совпадением или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты представлены в Таблице 17 hCD3E.

Таблица 17. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCD3E

Название гРНК long_0 long_1 long_2 long_3 short_0 SNP MS1044.CD3E.sp2 TTGACATGCCCTCAGTATCCNGG (SEQ ID NO:105) 1 1 1 21 73 н/д MS1044.CD3E.sp17 CTGGATTACCTCTTGCCCTCNGG (SEQ ID NO:106) 1 1 1 24 114 н/д MS1044.CD3E.sp28 GAGATGGAGACTTTATATGCNGG (SEQ ID NO:107) 1 1 1 30 44 н/д MS1044.CD3E.sp29 AGATGGAGACTTTATATGCTNGG (SEQ ID NO:108) 1 1 1 33 55 н/д MS1044.CD3E.sp26 AGGGCATGTCAATATTACTGNGG (SEQ ID NO:109) 1 1 1 23 60 н/д MS1044.CD3E.sp30 GATGGAGACTTTATATGCTGNGG (SEQ ID NO:110) 1 1 2 26 64 н/д MS1044.CD3E.sp12 TATTATGTCTGCTACCCCAGNGG (SEQ ID NO:111) 1 1 2 20 61 н/д MS1044.CD3E.sp23 TGCCATAGTATTTCAGATCCNGG (SEQ ID NO:112) 1 1 2 21 55 н/д MS1044.CD3E.sp18 AGATAAAAGTTCGCATCTTCNGG (SEQ ID NO:113) 1 1 2 33 6 н/д MS1044.CD3E.sp22 CTGAAAATTCCTTCAGTGACNGG (SEQ ID NO:114) 1 1 2 44 60 н/д MS1044.CD3E.sp16 CTGAGGGCAAGAGGTAATCCNGG (SEQ ID NO:115) 1 1 3 30 41 н/д MS1044.CD3E.sp25 TTTCAGATCCAGGATACTGANGG (SEQ ID NO:116) 1 1 3 38 63 н/д MS1044.CD3E.sp15 TATCTCTACCTGAGGGCAAGNGG (SEQ ID NO:117) 1 1 3 22 134 н/д MS1044.CD3E.sp9 TGAGGATCACCTGTCACTGANGG (SEQ ID NO:118) 1 1 3 44 54 н/д

[00371] Последовательности гРНК в Таблице 17 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: MS1044.CD3E.sp28 (> 15%) и MS1044.CD3E.sp12 (> 15%). Гидовая РНК (гРНК) с нормализованными частотами NHEJ, равными или превышающими 15%, является хорошим кандидатом для проектов создания линий клеток и моделей животных.

[00372] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК выполняли для 3 экзонов hCD5 (Экзон 3, Экзон 4, и Экзон 5), чтобы определить количество сайтов в геноме человека, которые точно совпадают или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты приведены в Таблице 18 для Экзона 3, в Таблице 19 для Экзона 4 и в Таблице 20 для Экзона 5.

Таблица 18. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCD5 (Экзон 3)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP597.CD5.g22 AATCATCTGCTACGGACAACNGG (SEQ ID NO:119) 1 1 1 1 н/д SP597.CD5.g39 GCAGACTTTTGACGCTTGACNGG (SEQ ID NO:120) 1 1 1 1 н/д SP597.CD5.g1 CCGTTCCAACTCGAAGTGCCNGG (SEQ ID NO:121) 1 1 1 2 н/д SP597.CD5.g2 CGTTCCAACTCGAAGTGCCANGG (SEQ ID NO:122) 1 1 1 2 н/д SP597.CD5.g50 CTGGCACTTCGAGTTGGAACNGG (SEQ ID NO:123) 1 1 1 2 н/д SP597.CD5.g17 GTCTGCCAGCGGCTGAACTGNGG (SEQ ID NO:124) 1 1 1 3 н/д SP597.CD5.g23 ATCATCTGCTACGGACAACTNGG (SEQ ID NO:125) 1 1 1 3 н/д SP597.CD5.g41 AGACTTTTGACGCTTGACTGNGG (SEQ ID NO:126) 1 1 1 3 н/д SP597.CD5.g40 CAGACTTTTGACGCTTGACTNGG (SEQ ID NO:127) 1 1 1 5 н/д SP597.CD5.g49 CCTGGCACTTCGAGTTGGAANGG (SEQ ID NO:128) 1 1 1 5 н/д SP597.CD5.g38 GCACCCCACAGTTCAGCCGCNGG (SEQ ID NO:129) 1 1 1 8 н/д SP597.CD5.g46 CCTTGAGGTAGACCTCCAGCNGG (SEQ ID NO:130) 1 1 1 9 н/д SP597.CD5.g7 AGGTCTACCTCAAGGACGGANGG (SEQ ID NO:131) 1 1 1 11 н/д SP597.CD5.g51 TGGAACGGGTGAGCCTTGCCNGG (SEQ ID NO:132) 1 1 1 13 н/д SP597.CD5.g20 TGTGGGGTGCCCTTAAGCCTNGG (SEQ ID NO:133) 1 1 1 19 н/д SP597.CD5.g16 AAGCGTCAAAAGTCTGCCAGNGG (SEQ ID NO:134) 1 1 1 20 н/д SP597.CD5.g29 TAGCAGATGATTGAGCTCTGNGG (SEQ ID NO:135) 1 1 1 25 н/д SP597.CD5.g30 GATTGAGCTCTGAGGTGTGTNGG (SEQ ID NO:136) 1 1 1 33 н/д SP597.CD5.g13 GGGGCCGGAGCTCCAAGCAGNGG (SEQ ID NO:137) 1 1 1 42 н/д SP597.CD5.g33 GGTGTGTAGGTGACAAGGAANGG (SEQ ID NO:138) 1 1 1 48 н/д SP597.CD5.g15 CCGGAGCTCCAAGCAGTGGGNGG (SEQ ID NO:139) 1 1 1 58 н/д SP597.CD5.g47 GGTAGACCTCCAGCTGGCCCNGG (SEQ ID NO:140) 1 1 1 78 н/д SP597.CD5.g3 CTCGAAGTGCCAGGGCCAGCNGG (SEQ ID NO:141) 1 1 1 121 н/д SP597.CD5.g48 CTGGCCCTGGCACTTCGAGTNGG (SEQ ID NO:142) 1 1 2 1 н/д SP597.CD5.g18 TCTGCCAGCGGCTGAACTGTNGG (SEQ ID NO:143) 1 1 2 5 н/д SP597.CD5.g45 CCATGTGCCATCCGTCCTTGNGG (SEQ ID NO:144) 1 1 2 5 н/д SP597.CD5.g5 CCAGCTGGAGGTCTACCTCANGG (SEQ ID NO:145) 1 1 2 14 н/д SP597.CD5.g31 TCTGAGGTGTGTAGGTGACANGG (SEQ ID NO:146) 1 1 2 18 н/д SP597.CD5.g37 AGGAAGGGGCCAAGGCTTAANGG (SEQ ID NO:147) 1 1 2 18 н/д SP597.CD5.g21 CAGAGCTCAATCATCTGCTANGG (SEQ ID NO:148) 1 1 2 19 н/д SP597.CD5.g14 GGGCCGGAGCTCCAAGCAGTNGG (SEQ ID NO:149) 1 1 2 23 н/д SP597.CD5.g43 CCTCCCACTGCTTGGAGCTCNGG (SEQ ID NO:150) 1 1 2 30 н/д SP597.CD5.g44 TGGAGCTCCGGCCCCAGCTCNGG (SEQ ID NO:151) 1 1 2 38 н/д SP597.CD5.g34 GTGTGTAGGTGACAAGGAAGNGG (SEQ ID NO:152) 1 1 2 48 н/д SP597.CD5.g11 ATGGTTTGCAGCCAGAGCTGNGG (SEQ ID NO:153) 1 1 2 108 н/д SP597.CD5.g6 CTGGAGGTCTACCTCAAGGANGG (SEQ ID NO:154) 1 1 3 16 н/д SP597.CD5.g19 CTGCCAGCGGCTGAACTGTGNGG (SEQ ID NO:155) 1 1 3 25 н/д SP597.CD5.g25 AATGACATGTGTCACTCTCTNGG (SEQ ID NO:156) 1 1 3 25 н/д SP597.CD5.g9 ACATGGTTTGCAGCCAGAGCNGG (SEQ ID NO:157) 1 1 3 30 н/д SP597.CD5.g10 CATGGTTTGCAGCCAGAGCTNGG (SEQ ID NO:158) 1 1 3 52 н/д SP597.CD5.g26 GACACATGTCATTTCTGCTGNGG (SEQ ID NO:159) 1 1 3 53 н/д SP597.CD5.g42 ACTGGGGTCCTCCCACTGCTNGG (SEQ ID NO:160) 1 1 3 91 н/д SP597.CD5.g8 CCTCAAGGACGGATGGCACANGG (SEQ ID NO:161) 1 1 4 5 н/д SP597.CD5.g32 AGGTGTGTAGGTGACAAGGANGG (SEQ ID NO:162) 1 1 4 49 н/д SP597.CD5.g36 AAGGAAGGGGCCAAGGCTTANGG (SEQ ID NO:163) 1 1 5 16 н/д SP597.CD5.g4 GAAGTGCCAGGGCCAGCTGGNGG (SEQ ID NO:164) 1 1 5 93 н/д SP597.CD5.g12 TTTGCAGCCAGAGCTGGGGCNGG (SEQ ID NO:165) 1 1 8 257 н/д SP597.CD5.g24 AAATGACATGTGTCACTCTCNGG (SEQ ID NO:166) 1 1 10 33 н/д SP597.CD5.g35 AGGTGACAAGGAAGGGGCCANGG (SEQ ID NO:167) 1 1 10 202 н/д SP597.CD5.g27 ATTTCTGCTGTGGCTGCAGTNGG (SEQ ID NO:168) 1 2 4 70 н/д SP597.CD5.g28 GCTGTGGCTGCAGTTGGAGANGG (SEQ ID NO:169) 1 2 19 49 н/д

Таблица 19. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCD5 (Экзон 4)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP598.CD5.g10 GGCGGGGGCCTTGTCGTTGGNGG (SEQ ID NO:170) 1 1 1 1 н/д SP598.CD5.g7 CTCTGGAGTTGTGGTGGGCGNGG (SEQ ID NO:171) 1 1 1 16 н/д SP598.CD5.g8 TCTGGAGTTGTGGTGGGCGGNGG (SEQ ID NO:172) 1 1 1 40 н/д SP598.CD5.g12 CGTTGGAGGTGTTGTCTTCTNGG (SEQ ID NO:173) 1 1 1 46 н/д SP598.CD5.g1 AGACAACACCTCCAACGACANGG (SEQ ID NO:174) 1 1 2 2 н/д SP598.CD5.g9 GTGGGCGGGGGCCTTGTCGTNGG (SEQ ID NO:175) 1 1 2 5 н/д SP598.CD5.g11 TCGTTGGAGGTGTTGTCTTCNGG (SEQ ID NO:176) 1 1 2 13 н/д SP598.CD5.g2 ACCACAACTCCAGAGCCCACNGG (SEQ ID NO:177) 1 1 2 60 н/д SP598.CD5.g6 GCTCTGGAGTTGTGGTGGGCNGG (SEQ ID NO:178) 1 1 4 74 н/д SP598.CD5.g4 GTGGGCTCTGGAGTTGTGGTNGG (SEQ ID NO:179) 1 1 6 35 н/д SP598.CD5.g3 TGTGGGCTCTGGAGTTGTGGNGG (SEQ ID NO:180) 1 1 8 54 н/д SP598.CD5.g13 GTTGGAGGTGTTGTCTTCTGNGG (SEQ ID NO:181) 1 2 2 48 н/д SP598.CD5.g5 GGCTCTGGAGTTGTGGTGGGNGG (SEQ ID NO:182) 1 3 9 51 н/д

Таблица 20. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCD5 (Экзон 5)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP599.CD5.g58 CATAGCTGATGGTACCCCCCNGG (SEQ ID NO:183) 1 1 1 1 н/д SP599.CD5.g5 CGGCCAGCACTGTGCCGGCGNGG (SEQ ID NO:184) 1 1 1 2 н/д SP599.CD5.g30 CAAGAACTCGGCCACTTTTCNGG (SEQ ID NO:185) 1 1 1 6 н/д SP599.CD5.g44 GGTGTTCCCGTGGCTCCCCTNGG (SEQ ID NO:186) 1 1 1 11 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g6 CCAGCACTGTGCCGGCGTGGNGG (SEQ ID NO:187) 1 1 1 13 н/д SP599.CD5.g42 GGCAAGGGCTGGTGTTCCCGNGG (SEQ ID NO:188) 1 1 1 13 н/д SP599.CD5.g7 GGCGTGGTGGAGTTCTACAGNGG (SEQ ID NO:189) 1 1 1 14 н/д SP599.CD5.g60 CCACCACGCCGGCACAGTGCNGG (SEQ ID NO:190) 1 1 1 15 н/д SP599.CD5.g8 GGAGTTCTACAGCGGCAGCCNGG (SEQ ID NO:191) 1 1 1 17 н/д SP599.CD5.g11 GTTCTACAGCGGCAGCCTGGNGG (SEQ ID NO:192) 1 1 1 18 н/д SP599.CD5.g25 ACCAGCCCTTGCCAATCCAANGG (SEQ ID NO:193) 1 1 1 20 н/д SP599.CD5.g10 AGTTCTACAGCGGCAGCCTGNGG (SEQ ID NO:194) 1 1 1 24 н/д SP599.CD5.g55 CCAGGTCCTGGGTCTTGTCCNGG (SEQ ID NO:195) 1 1 1 25 н/д SP599.CD5.g43 TGGTGTTCCCGTGGCTCCCCNGG (SEQ ID NO:196) 1 1 1 25 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g9 GAGTTCTACAGCGGCAGCCTNGG (SEQ ID NO:197) 1 1 1 26 н/д SP599.CD5.g26 GAACTCAAGCTGTACCTCCCNGG (SEQ ID NO:198) 1 1 1 29 н/д SP599.CD5.g31 AAGAACTCGGCCACTTTTCTNGG (SEQ ID NO:199) 1 1 1 29 н/д SP599.CD5.g41 TCCATTGGATTGGCAAGGGCNGG (SEQ ID NO:200) 1 1 1 32 н/д SP599.CD5.g12 TTCTACAGCGGCAGCCTGGGNGG (SEQ ID NO:201) 1 1 1 33 н/д SP599.CD5.g32 AGAACTCGGCCACTTTTCTGNGG (SEQ ID NO:202) 1 1 1 37 н/д SP599.CD5.g49 GCTTCAAGAAGGAGCCACACNGG (SEQ ID NO:203) 1 1 1 48 н/д SP599.CD5.g39 GATCTTCCATTGGATTGGCANGG (SEQ ID NO:204) 1 1 2 7 н/д SP599.CD5.g59 GCTGTAGAACTCCACCACGCNGG (SEQ ID NO:205) 1 1 2 11 н/д SP599.CD5.g57 GTCCTGGGCCTCATAGCTGANGG (SEQ ID NO:206) 1 1 2 13 н/д SP599.CD5.g14 TACCATCAGCTATGAGGCCCNGG (SEQ ID NO:207) 1 1 2 14 н/д SP599.CD5.g13 GGGGGGTACCATCAGCTATGNGG (SEQ ID NO:208) 1 1 2 16 н/д SP599.CD5.g35 CCTGAAGCAATGCTCCAGGGNGG (SEQ ID NO:209) 1 1 2 18 н/д SP599.CD5.g33 TTTTCCTGAAGCAATGCTCCNGG (SEQ ID NO:210) 1 1 2 24 н/д SP599.CD5.g48 CTCTGGCAGATGCTTCAAGANGG (SEQ ID NO:211) 1 1 2 25 н/д SP599.CD5.g53 AGAGGAAGTTCTCCAGGTCCNGG (SEQ ID NO:212) 1 1 2 53 н/д SP599.CD5.g4 TCTGGCGGCCAGCACTGTGCNGG (SEQ ID NO:213) 1 1 2 166 н/д SP599.CD5.g37 TTGAGTTCTGGATCTTCCATNGG (SEQ ID NO:214) 1 1 3 9 н/д SP599.CD5.g38 TTCTGGATCTTCCATTGGATNGG (SEQ ID NO:215) 1 1 3 13 н/д SP599.CD5.g40 ATCTTCCATTGGATTGGCAANGG (SEQ ID NO:216) 1 1 3 18 н/д SP599.CD5.g50 TCAAGAAGGAGCCACACTGGNGG (SEQ ID NO:217) 1 1 3 31 н/д SP599.CD5.g36 GGGAGGTACAGCTTGAGTTCNGG (SEQ ID NO:218) 1 1 3 37 н/д SP599.CD5.g45 CCCGTGGCTCCCCTGGGTCTNGG (SEQ ID NO:219) 1 1 3 43 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g16 CCAGGACAAGACCCAGGACCNGG (SEQ ID NO:220) 1 1 3 57 н/д SP599.CD5.g17 CTCTGCAACAACCTCCAGTGNGG (SEQ ID NO:221) 1 1 3 67 н/д SP599.CD5.g52 TGTTGCAGAGGAAGTTCTCCNGG (SEQ ID NO:222) 1 1 3 236 н/д SP599.CD5.g56 CAGGTCCTGGGTCTTGTCCTNGG (SEQ ID NO:223) 1 1 4 24 н/д SP599.CD5.g15 TGAGGCCCAGGACAAGACCCNGG (SEQ ID NO:224) 1 1 4 30 н/д SP599.CD5.g61 CTGTGCCACCAGCTGCAGCCNGG (SEQ ID NO:225) 1 1 4 133 н/д SP599.CD5.g62 TGTGCCACCAGCTGCAGCCTNGG (SEQ ID NO:226) 1 1 4 139 н/д SP599.CD5.g19 CATCTGCCAGAGACTGAGGCNGG (SEQ ID NO:227) 1 1 4 1253 н/д SP599.CD5.g2 CTGCAGCTGGTGGCACAGTCNGG (SEQ ID NO:228) 1 1 5 17 н/д SP599.CD5.g51 CACACTGGAGGTTGTTGCAGNGG (SEQ ID NO:229) 1 1 5 28 н/д SP599.CD5.g3 CAGCTGGTGGCACAGTCTGGNGG (SEQ ID NO:230) 1 1 5 31 н/д SP599.CD5.g29 AGCAAAGGAGGGCAAGAACTNGG (SEQ ID NO:231) 1 1 6 53 н/д SP599.CD5.g54 GAGGAAGTTCTCCAGGTCCTNGG (SEQ ID NO:232) 1 1 6 53 н/д SP599.CD5.g63 GCCACCAGCTGCAGCCTGGGNGG (SEQ ID NO:233) 1 1 6 287 н/д SP599.CD5.g20 GCAGGCAGAGCCCAAGACCCNGG (SEQ ID NO:234) 1 1 7 40 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g21 CAGGCAGAGCCCAAGACCCANGG (SEQ ID NO:235) 1 1 8 45 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g1 TCCTCCCAGGCTGCAGCTGGNGG (SEQ ID NO:236) 1 1 8 140 н/д SP599.CD5.g47 GCTCTGCCTGCCTCAGTCTCNGG (SEQ ID NO:237) 1 1 26 412 н/д SP599.CD5.g27 CCTCCCTGGAGCATTGCTTCNGG (SEQ ID NO:238) 1 2 3 22 н/д SP599.CD5.g34 TTTCCTGAAGCAATGCTCCANGG (SEQ ID NO:239) 1 2 4 32 н/д SP599.CD5.g46 CCGTGGCTCCCCTGGGTCTTNGG (SEQ ID NO:240) 1 2 5 37 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g28 AAAATCAAGCCCCAGAAAAGNGG (SEQ ID NO:241) 1 2 5 60 н/д SP599.CD5.g18 GAAGCATCTGCCAGAGACTGNGG (SEQ ID NO:242) 1 2 7 98 н/д SP599.CD5.g24 CCAAGACCCAGGGGAGCCACNGG (SEQ ID NO:243) 1 2 8 56 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g22 AGGCAGAGCCCAAGACCCAGNGG (SEQ ID NO:244) 1 2 10 41 rs2241002:0.158 SP599.CD5.g23 CCCAAGACCCAGGGGAGCCANGG (SEQ ID NO:245) 1 2 10 99 rs2241002:0.158

[00373] Последовательности гРНК в Таблице 18, Таблице 19 и Таблице 20 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: Экзон 3: SP597.hCD5.g2 (76,5%), SP597.hCD5.g22 (36,3%), SP597.hCD5.g39 (16,0%), SP597.hCD5.g46. Экзон4: SP598.hCD5.g7, SP598.hCD5.g10 (58,5%). Экзон5: SP599.hCD5.g5 (51,0%), SP599.hCD5.g30, SP599.hCD5.g42, SP599.hCD5.g58 (41,0%)

[00374] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК был выполнен для hCSF2 для определения количества сайтов в геноме человека, которые являются точным совпадением или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты представлены в Таблице 21 для hCSF2.

Таблица 21. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCSF2

Название гРНК long_0 long_1 long_2 long_3 short_0 SNP MS1086.CSF2.sp8 TACTCAGGTTCAGGAGACGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 10 11 н/д MS1086.CSF2.sp10 TCAGGAGACGCCGGGCCTCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 20 38 н/д MS1086.CSF2.sp9 ACTCAGGTTCAGGAGACGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 20 16 н/д MS1086.CSF2.sp7 CAGTGTCTCTACTCAGGTTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 22 29 н/д MS1086.CSF2.sp14 ATGCTCCCAGGGCTGCGTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 42 34 rs2069622 MS1086.CSF2.sp11 GAGACGCCGGGCCTCCTGGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 26 146 н/д MS1086.CSF2.sp6 CAGCAGCAGTGTCTCTACTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 39 24 н/д MS1086.CSF2.sp12 GATGGCATTCACATGCTCCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 28 59 н/д MS1086.CSF2.sp2 GGAGCATGTGAATGCCATCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 26 48 н/д MS1086.CSF2.sp5 TAGAGACACTGCTGCTGAGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 56 168 н/д MS1086.CSF2.sp3 GCATGTGAATGCCATCCAGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 41 56 н/д MS1086.CSF2.sp13 ATGGCATTCACATGCTCCCANGG (SEQ ID NO :) 1 1 4 30 80 н/д MS1086.CSF2.sp4 TGAATGCCATCCAGGAGGCCNGG (SEQ ID NO :) 1 1 5 65 180 н/д MS1086.CSF2.sp15 TGCTCCCAGGGCTGCGTGCTNGG (SEQ ID NO :) 1 1 6 57 29 rs2069622 MS1086.CSF2.sp1 CAGCCCCAGCACGCAGCCCTNGG (SEQ ID NO :) 1 1 15 146 41 rs2069622 MS1086.CSF2.sp16 GCTCCCAGGGCTGCGTGCTGNGG (SEQ ID NO :) 1 2 9 85 37 rs2069622

[00375] Последовательности гРНК в Таблице 21 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: MS1086.CSF2.sp8 (> 15%) и MS1086.CSF2.sp10 (> 15%).

[00376] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК выполняли для 2 экзонов hCTLA4 (Экзон 1 и Экзон 2), чтобы определить количество сайтов в геноме человека, которые точно совпадают или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты приведены в Таблице 22 для Экзона 1, в Таблице 23 для Экзона 2 для hCTLA4.

Таблица 22. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCTLA4 (Экзон 1)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP621.CTLA4.g2 CCTTGGATTTCAGCGGCACANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д SP621.CTLA4.g12 CCTTGTGCCGCTGAAATCCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д SP621.CTLA4.g5 TGAACCTGGCTACCAGGACCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 11 rs231775:0.452 SP621.CTLA4.g11 AGGGCCAGGTCCTGGTAGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 16 rs231775:0.452 SP621.CTLA4.g4 CTCAGCTGAACCTGGCTACCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 17 rs231775:0.452 SP621.CTLA4.g8 AGAAAAAACAGGAGAGTGCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 39 н/д SP621.CTLA4.g3 GCACAAGGCTCAGCTGAACCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 29 н/д SP621.CTLA4.g1 TGGCTTGCCTTGGATTTCAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 6 33 н/д SP621.CTLA4.g9 AAACAGGAGAGTGCAGGGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 6 69 н/д SP621.CTLA4.g10 GAGAGTGCAGGGCCAGGTCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 7 50 н/д SP621.CTLA4.g6 GGATGAAGAGAAGAAAAAACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 8 173 н/д SP621.CTLA4.g7 AAGAAAAAACAGGAGAGTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 2 8 33 н/д

Таблица 23. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hCTLA4 (Экзон 2)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP622.CTLA4.g9 CCGGGTGACAGTGCTTCGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 2 н/д SP622.CTLA4.g33 ACACAAAGCTGGCGATGCCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 4 н/д SP622.CTLA4.g21 CCCTCAGTCCTTGGATAGTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д SP622.CTLA4.g14 GTGCGGCAACCTACATGATGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 9 н/д SP622.CTLA4.g12 CTGTGCGGCAACCTACATGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 13 н/д SP622.CTLA4.g2 GGCCCAGCCTGCTGTGGTACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 17 н/д SP622.CTLA4.g23 GTTCACTTGATTTCCACTGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 17 н/д SP622.CTLA4.g27 CAACTCATTCCCCATCATGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 18 н/д SP622.CTLA4.g28 CCGCACAGACTTCAGTCACCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 20 н/д SP622.CTLA4.g13 TGTGCGGCAACCTACATGATNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 30 н/д SP622.CTLA4.g20 CCTCACTATCCAAGGACTGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 30 н/д SP622.CTLA4.g31 CGGACCTCAGTGGCTTTGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 34 н/д SP622.CTLA4.g22 GAGGTTCACTTGATTTCCACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 40 н/д SP622.CTLA4.g11 CCAGGTGACTGAAGTCTGTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 45 н/д SP622.CTLA4.g24 ACTGGAGGTGCCCGTGCAGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 15 н/д SP622.CTLA4.g18 CAAGTGAACCTCACTATCCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 16 н/д SP622.CTLA4.g3 GTGGTACTGGCCAGCAGCCGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 29 н/д SP622.CTLA4.g8 AGGTCCGGGTGACAGTGCTTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 29 н/д SP622.CTLA4.g17 ATCTGCACGGGCACCTCCAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 29 н/д SP622.CTLA4.g25 CCGTGCAGATGGAATCATCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 36 н/д SP622.CTLA4.g16 CTAGATGATTCCATCTGCACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 39 н/д SP622.CTLA4.g19 ACCTCACTATCCAAGGACTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 40 н/д SP622.CTLA4.g29 CCTGCCGAAGCACTGTCACCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 47 н/д SP622.CTLA4.g36 TGGCCAGTACCACAGCAGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 74 н/д SP622.CTLA4.g5 ATCTCCAGGCAAAGCCACTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 80 н/д SP622.CTLA4.g1 GCACGTGGCCCAGCCTGCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 121 н/д SP622.CTLA4.g4 GTGTGTGAGTATGCATCTCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 8 н/д SP622.CTLA4.g30 CACTGTCACCCGGACCTCAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 9 н/д SP622.CTLA4.g34 GCTGGCGATGCCTCGGCTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 17 н/д SP622.CTLA4.g35 CTGCTGGCCAGTACCACAGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 22 н/д SP622.CTLA4.g7 AGGCAAAGCCACTGAGGTCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 40 н/д SP622.CTLA4.g26 GCAGATGGAATCATCTAGGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 20 н/д SP622.CTLA4.g15 CCTAGATGATTCCATCTGCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 40 н/д SP622.CTLA4.g37 GGCCAGTACCACAGCAGGCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 65 н/д SP622.CTLA4.g32 TGCATACTCACACACAAAGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 7 71 н/д SP622.CTLA4.g10 GCTTCGGCAGGCTGACAGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 8 58 н/д SP622.CTLA4.g6 CAGGCAAAGCCACTGAGGTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 11 30 н/д

[00377] Последовательности гРНК в Таблице 22 и Таблице 23 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: Экзон 1: SP621.hCTLA4.g2 (> 15%) и SP621.hCTLA4.g12 (> 15%). Экзон 2: SP622.hCTLA4.g2 (> 15%), SP622.hCTLA4.g9 (> 15%) и SP622.hCTLA4.g33 (> 15%).

[00378] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК выполняли для 2 экзонов hPDCD1 (CF60 и CF61), чтобы определить количество сайтов в геноме человека, которые точно совпадают или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты приведены в Таблице 24 для Экзона CF60 и в Таблице 25 для Экзона CF61.

Таблица 24. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hPDCD1 (Экзон CF60)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP CF60.PDCD1.g12 TGTAGCACCGCCCAGACGACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 1 н/д CF60.PDCD1.g3 GGCGCCCTGGCCAGTCGTCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 3 н/д CF60.PDCD1.g5 CGTCTGGGCGGTGCTACAACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 3 н/д CF60.PDCD1.g2 AGGCGCCCTGGCCAGTCGTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д CF60.PDCD1.g13 CACCGCCCAGACGACTGGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д CF60.PDCD1.g14 ACCGCCCAGACGACTGGCCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д CF60.PDCD1.g7 GGGCGGTGCTACAACTGGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 7 н/д CF60.PDCD1.g6 GTCTGGGCGGTGCTACAACTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 9 н/д CF60.PDCD1.g16 CGACTGGCCAGGGCGCCTGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 15 н/д CF60.PDCD1.g8 CGGTGCTACAACTGGGCTGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 33 н/д CF60.PDCD1.g11 TGGCGGCCAGGATGGTTCTTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 33 н/д CF60.PDCD1.g15 ACGACTGGCCAGGGCGCCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 45 н/д CF60.PDCD1.g9 CTACAACTGGGCTGGCGGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 57 н/д CF60.PDCD1.g4 GCCCTGGCCAGTCGTCTGGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 2 н/д CF60.PDCD1.g1 TGCAGATCCCACAGGCGCCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 23 н/д CF60.PDCD1.g10 AACTGGGCTGGCGGCCAGGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 17 н/д

Таблица 25. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hPDCD1 (CF61)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP CF61.PDCD1.g6 CGGAGAGCTTCGTGCTAAACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 1 н/д CF61.PDCD1.g14 GCGTGACTTCCACATGAGCGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 2 н/д CF61.PDCD1.g17 ATGTGGAAGTCACGCCCGTTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 2 н/д CF61.PDCD1.g2 GCCCTGCTCGTGGTGACCGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 3 н/д CF61.PDCD1.g35 CACGAAGCTCTCCGATGTGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 3 н/д CF61.PDCD1.g4 CCTGCTCGTGGTGACCGAAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 4 н/д CF61.PDCD1.g20 TGACACGGAAGCGGCAGTCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д CF61.PDCD1.g40 CCCCTTCGGTCACCACGAGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 5 н/д CF61.PDCD1.g8 CAGCAACCAGACGGACAAGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 6 н/д CF61.PDCD1.g19 GCAGTTGTGTGACACGGAAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 6 н/д CF61.PDCD1.g41 CCCTTCGGTCACCACGAGCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 6 н/д CF61.PDCD1.g26 CCGGGCTGGCTGCGGTCCTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д CF61.PDCD1.g30 AGGCGGCCAGCTTGTCCGTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д CF61.PDCD1.g31 CAGCTTGTCCGTCTGGTTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д CF61.PDCD1.g43 CGGTCACCACGAGCAGGGCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 10 н/д CF61.PDCD1.g13 GTGTCACACAACTGCCCAACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 13 н/д CF61.PDCD1.g5 CTGCAGCTTCTCCAACACATNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 23 н/д CF61.PDCD1.g9 CAAGCTGGCCGCCTTCCCCGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 23 н/д CF61.PDCD1.g12 CGTGTCACACAACTGCCCAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 28 н/д CF61.PDCD1.g18 CGTTGGGCAGTTGTGTGACANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 32 н/д CF61.PDCD1.g33 GCTTGTCCGTCTGGTTGCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 41 н/д CF61.PDCD1.g22 CGGAAGCGGCAGTCCTGGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 61 н/д CF61.PDCD1.g36 CGATGTGTTGGAGAAGCTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 135 н/д CF61.PDCD1.g16 CATGTGGAAGTCACGCCCGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 2 н/д CF61.PDCD1.g3 CCCTGCTCGTGGTGACCGAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 3 н/д CF61.PDCD1.g27 CGGGCTGGCTGCGGTCCTCGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 3 н/д CF61.PDCD1.g32 AGCTTGTCCGTCTGGTTGCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 4 н/д CF61.PDCD1.g39 GAAGGTGGCGTTGTCCCCTTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 4 н/д CF61.PDCD1.g15 ACTTCCACATGAGCGTGGTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 6 н/д CF61.PDCD1.g25 GCCGGGCTGGCTGCGGTCCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 17 н/д CF61.PDCD1.g42 TCGGTCACCACGAGCAGGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 23 н/д CF61.PDCD1.g34 TCTGGTTGCTGGGGCTCATGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 31 н/д CF61.PDCD1.g21 ACGGAAGCGGCAGTCCTGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 41 н/д CF61.PDCD1.g10 CCCGAGGACCGCAGCCAGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 46 н/д CF61.PDCD1.g28 CTGGCTGCGGTCCTCGGGGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 16 н/д CF61.PDCD1.g7 CATGAGCCCCAGCAACCAGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 33 н/д CF61.PDCD1.g24 AGTCCTGGCCGGGCTGGCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 42 н/д CF61.PDCD1.g55 GGGGGTTCCAGGGCCTGTCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 126 н/д CF61.PDCD1.g44 GGTCACCACGAGCAGGGCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 26 н/д CF61.PDCD1.g29 GCTGCGGTCCTCGGGGAAGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 35 н/д CF61.PDCD1.g11 GGACCGCAGCCAGCCCGGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 47 н/д CF61.PDCD1.g53 GAGAAGGTGGGGGGGTTCCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 5 8 н/д CF61.PDCD1.g52 GGAGAAGGTGGGGGGGTTCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 5 15 н/д CF61.PDCD1.g23 AGCGGCAGTCCTGGCCGGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 5 39 н/д CF61.PDCD1.g56 GGGGTTCCAGGGCCTGTCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 5 97 н/д CF61.PDCD1.g1 CTTCTCCCCAGCCCTGCTCGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 6 22 н/д CF61.PDCD1.g37 GTTGGAGAAGCTGCAGGTGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 6 88 н/д CF61.PDCD1.g54 GGGGGGTTCCAGGGCCTGTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 6 1286 н/д CF61.PDCD1.g38 GGAGAAGCTGCAGGTGAAGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 9 66 н/д CF61.PDCD1.g45 CACGAGCAGGGCTGGGGAGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 10 448 н/д CF61.PDCD1.g48 GCAGGGCTGGGGAGAAGGTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 21 125 н/д CF61.PDCD1.g49 CAGGGCTGGGGAGAAGGTGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 29 214 н/д CF61.PDCD1.g46 GAGCAGGGCTGGGGAGAAGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 30 202 н/д CF61.PDCD1.g47 AGCAGGGCTGGGGAGAAGGTNGG (SEQ ID NO:) 1 2 11 136 н/д CF61.PDCD1.g50 AGGGCTGGGGAGAAGGTGGGNGG (SEQ ID NO:) 1 2 31 179 н/д CF61.PDCD1.g51 GGGCTGGGGAGAAGGTGGGGNGG (SEQ ID NO:) 1 2 49 130 н/д

[00379] Последовательности гРНК в Таблице 24 и Таблице 25 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: CF60.PDCD1.g12 (65,6%), CF60.PDCD1.g3 (69,2%), CF61.PDCD1.g6, CF61.PDCD1.g2 (72,7%) и CF61.PDCD1.g35 (24,0%).

[00380] Анализ отклонения от цели выбранной гРНК выполняли для 2 экзонов hTIM3 (Экзон 2 и Экзон 3), чтобы определить количество сайтов в геноме человека, которые точно совпадают или содержат до 1 или 2 несовпадений, которые могут включать целевой сайт. Результаты приведены в Таблице 26 для Экзона 2, в Таблице 27 для Экзона 3.

Таблица 26. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hTIM3 (Экзон 2)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP619.TIM3.g2 AGAAGTGGAATACAGAGCGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 2 н/д SP619.TIM3.g12 AATGTGGCAACGTGGTGCTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 3 н/д SP619.TIM3.g20 CTAAATGGGGATTTCCGCAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 4 н/д SP619.TIM3.g18 CATCCAGATACTGGCTAAATNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д SP619.TIM3.g41 CAGACGGGCACGAGGTTCCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д SP619.TIM3.g49 GCGGCTGGGGTGTAGAAGCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д SP619.TIM3.g7 GAACCTCGTGCCCGTCTGCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 10 н/д SP619.TIM3.g43 GACGGGCACGAGGTTCCCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 10 н/д SP619.TIM3.g35 ATCCCCATTTAGCCAGTATCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 11 н/д SP619.TIM3.g3 GTGGAATACAGAGCGGAGGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 12 н/д SP619.TIM3.g42 AGACGGGCACGAGGTTCCCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 12 н/д SP619.TIM3.g6 GGAACCTCGTGCCCGTCTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 13 н/д SP619.TIM3.g32 GAGTCACATTCTCTATGGTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 14 н/д SP619.TIM3.g22 ATGTGACTCTAGCAGACAGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 16 н/д SP619.TIM3.g27 TTTTCATCATTCATTATGCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 16 н/д SP619.TIM3.g21 AATGTGACTCTAGCAGACAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 17 н/д SP619.TIM3.g19 ATCCAGATACTGGCTAAATGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 18 н/д SP619.TIM3.g24 TGCTGCCGGATCCAAATCCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 22 н/д SP619.TIM3.g5 TCTACACCCCAGCCGCCCCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 30 н/д SP619.TIM3.g30 TTATGCCTGGGATTTGGATCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 35 н/д SP619.TIM3.g51 CGCTCTGTATTCCACTTCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 83 н/д SP619.TIM3.g47 GAGGTTCCCTGGGGCGGCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 85 н/д SP619.TIM3.g40 TGCCCCAGCAGACGGGCACGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 5 н/д SP619.TIM3.g23 ACAGTGGGATCTACTGCTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 8 н/д SP619.TIM3.g11 TGTGTTTGAATGTGGCAACGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 9 н/д SP619.TIM3.g25 TGAAAAATTTAACCTGAAGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 16 н/д SP619.TIM3.g17 ACATCCAGATACTGGCTAAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 19 н/д SP619.TIM3.g15 ATGAAAGGGATGTGAATTATNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 22 н/д SP619.TIM3.g13 TGGTGCTCAGGACTGATGAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 25 н/д SP619.TIM3.g50 GGTGTAGAAGCAGGGCAGATNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 36 н/д SP619.TIM3.g36 ACGTTGCCACATTCAAACACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 37 н/д SP619.TIM3.g45 ACGAGGTTCCCTGGGGCGGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 40 н/д SP619.TIM3.g10 GCCTGTCCTGTGTTTGAATGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 47 н/д SP619.TIM3.g9 GTGCCCGTCTGCTGGGGCAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 58 н/д SP619.TIM3.g8 AACCTCGTGCCCGTCTGCTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 15 н/д SP619.TIM3.g48 GGCGGCTGGGGTGTAGAAGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 15 н/д SP619.TIM3.g33 AGTCACATTCTCTATGGTCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 19 н/д SP619.TIM3.g26 CTGGTTTGATGACCAACTTCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 21 н/д SP619.TIM3.g29 CATTCATTATGCCTGGGATTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 24 н/д SP619.TIM3.g31 TGCTAGAGTCACATTCTCTANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 49 н/д SP619.TIM3.g44 GGGCACGAGGTTCCCTGGGGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 53 н/д SP619.TIM3.g38 GGCTCCTTTGCCCCAGCAGANGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 58 н/д SP619.TIM3.g16 ATTATTGGACATCCAGATACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 3 106 н/д SP619.TIM3.g28 TTTCATCATTCATTATGCCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 23 н/д SP619.TIM3.g4 TTCTACACCCCAGCCGCCCCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 29 н/д SP619.TIM3.g34 TCAGGGACACATCTCCTTTGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 41 н/д SP619.TIM3.g39 GCTCCTTTGCCCCAGCAGACNGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 42 н/д SP619.TIM3.g1 CTCAGAAGTGGAATACAGAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 5 35 н/д SP619.TIM3.g46 CGAGGTTCCCTGGGGCGGCTNGG (SEQ ID NO:) 1 2 2 18 н/д SP619.TIM3.g37 GCCACATTCAAACACAGGACNGG (SEQ ID NO:) 1 2 2 25 н/д SP619.TIM3.g14 GGTGCTCAGGACTGATGAAANGG (SEQ ID NO:) 1 2 3 28 н/д

Таблица 27. Анализ отклонения от цели гидовой РНК (гРНК) для hTIM3 (Экзон 3)

Название гРНК long_0 long_1 long_2 short_0 SNP SP620.TIM3.g1 AGGTCACCCCTGCACCGACTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 4 rs1036199:0.13 SP620.TIM3.g11 CTCTCTGCCGAGTCGGTGCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 4 rs1036199:0.13 SP620.TIM3.g10 TCTCTCTGCCGAGTCGGTGCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 6 rs1036199:0.13 SP620.TIM3.g5 CCAAGGATGCTTACCACCAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 8 н/д SP620.TIM3.g12 TCTCTGCCGAGTCGGTGCAGNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 9 rs1036199:0.13 SP620.TIM3.g7 CCCCTGGTGGTAAGCATCCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 10 н/д SP620.TIM3.g4 TCCAAGGATGCTTACCACCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 16 н/д SP620.TIM3.g8 GGTGGTAAGCATCCTTGGAANGG (SEQ ID NO:) 1 1 1 20 н/д SP620.TIM3.g9 GTGAAGTCTCTCTGCCGAGTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 6 rs1036199:0.13 SP620.TIM3.g6 ATGCTTACCACCAGGGGACANGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 34 н/д SP620.TIM3.g3 TTCCAAGGATGCTTACCACCNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 36 н/д SP620.TIM3.g13 AGTCGGTGCAGGGGTGACCTNGG (SEQ ID NO:) 1 1 2 45 н/д SP620.TIM3.g2 ACTTCACTGCAGCCTTTCCANGG (SEQ ID NO:) 1 1 4 38 н/д

[00381] Последовательности гРНК в Таблице 26 и Таблице 27 были нормализованы (% нормализации к NHEJ) на активность гРНК посредством секвенирования следующего поколения (NGS). GFP использовали в качестве контроля. После анализа секвенирования были рекомендованы следующие гРНК на основе профиля отклонения от цели: Экзон 2: SP619.hTIM3.g12 (45,0%), SP619.hTIM3.g20 (60,9%) и SP619.hTIM3.g49 (45,4%). Экзон 3: SP620.hTIM3.g5 (58,0%) и SP620.hTIM3.g7 (2,9%).

[00382] Описанные выше способы могут быть соответствующим образом изменены специалистами в данной области техники для получения и подтверждения активности других моно, двойных и тандемных CAR T-клеток, описанных в данном документе.

[00383] Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на конкретные детали некоторых вариантов его реализации, в приведенных выше примерах, следует понимать, что модификации и изменения охватываются духом и объемом изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ВАШИНГТОН ЮНИВЕРСИТИ

<120> Т-КЛЕТКИ С ХИМЕРНЫМИ АНТИГЕННЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ (CAR-T) ДЛЯ

ЛЕЧЕНИЯ РАКА

<130> WGN0001-401-PC

<140> PCT/US19/035010

<141> 2019-05-31

<150> 62/678,878

<151> 2018-05-31

<150> 62/799,513

<151> 2019-01-31

<160> 452

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 1

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 2

<211> 45

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 2

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 3

<211> 27

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 3

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 4

<211> 235

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 4

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr

20 25 30

Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser

35 40 45

Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala

50 55 60

Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala

65 70 75 80

Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp

85 90 95

Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr

100 105 110

Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe

115 120 125

Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

130 135 140

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

145 150 155 160

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

165 170 175

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

180 185 190

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His

195 200 205

Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser

210 215 220

Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val

225 230 235

<210> 5

<211> 42

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 5

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 6

<211> 41

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 6

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 7

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 7

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 8

<211> 22

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 8

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 9

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 9

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 10

<211> 308

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 10

Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser

1 5 10 15

Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro

20 25 30

Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu

35 40 45

Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser

50 55 60

Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys

65 70 75 80

Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser

85 90 95

Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro

100 105 110

Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro

115 120 125

Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser

130 135 140

Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys

145 150 155 160

Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly

165 170 175

Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys

180 185 190

Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala

195 200 205

Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser

210 215 220

Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu

225 230 235 240

Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys

245 250 255

Lys Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln

260 265 270

Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu

275 280 285

Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser

290 295 300

Trp Ser Pro Ile

305

<210> 11

<211> 710

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 11

Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser

1 5 10 15

Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro

20 25 30

Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu

35 40 45

Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser

50 55 60

Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys

65 70 75 80

Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser

85 90 95

Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro

100 105 110

Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro

115 120 125

Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser

130 135 140

Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys

145 150 155 160

Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly

165 170 175

Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys

180 185 190

Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala

195 200 205

Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser

210 215 220

Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu

225 230 235 240

Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys

245 250 255

Lys Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln

260 265 270

Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu

275 280 285

Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser

290 295 300

Trp Ser Pro Thr Gly Glu Gly Gly Gly Gly Gly Asp Leu Gly Gly Val

305 310 315 320

Lys Leu Pro His Leu Phe Gly Lys Arg Leu Val Glu Ala Arg Met Ala

325 330 335

Ser Tyr Pro Cys His Gln His Ala Ser Ala Phe Asp Gln Ala Ala Arg

340 345 350

Ser Arg Gly His Ser Asn Arg Arg Thr Ala Leu Arg Pro Arg Arg Gln

355 360 365

Gln Glu Ala Thr Glu Val Arg Leu Glu Gln Lys Met Pro Thr Leu Leu

370 375 380

Arg Val Tyr Ile Asp Gly Pro His Gly Met Gly Lys Thr Thr Thr Thr

385 390 395 400

Gln Leu Leu Val Ala Leu Gly Ser Arg Asp Asp Ile Val Tyr Val Pro

405 410 415

Glu Pro Met Thr Tyr Trp Gln Val Leu Gly Ala Ser Glu Thr Ile Ala

420 425 430

Asn Ile Tyr Thr Thr Gln His Arg Leu Asp Gln Gly Glu Ile Ser Ala

435 440 445

Gly Asp Ala Ala Val Val Met Thr Ser Ala Gln Ile Thr Met Gly Met

450 455 460

Pro Tyr Ala Val Thr Asp Ala Val Leu Ala Pro His Val Gly Gly Glu

465 470 475 480

Ala Gly Ser Ser His Ala Pro Pro Pro Ala Leu Thr Leu Leu Leu Asp

485 490 495

Arg His Pro Ile Ala Val Met Leu Cys Tyr Pro Ala Ala Arg Tyr Leu

500 505 510

Met Gly Ser Met Thr Pro Gln Ala Val Leu Ala Phe Val Ala Leu Ile

515 520 525

Pro Pro Thr Leu Pro Gly Thr Asn Ile Val Leu Gly Ala Leu Pro Glu

530 535 540

Asp Arg His Ile Asp Arg Leu Ala Lys Arg Gln Arg Pro Gly Glu Arg

545 550 555 560

Leu Asp Leu Ala Met Leu Ala Ala Ile Arg Arg Val Tyr Gly Leu Leu

565 570 575

Ala Asn Thr Val Arg Tyr Leu Gln Gly Gly Gly Ser Trp Trp Glu Asp

580 585 590

Trp Gly Gln Leu Ser Gly Thr Ala Val Pro Pro Gln Gly Ala Glu Pro

595 600 605

Gln Ser Asn Ala Gly Pro Arg Pro His Ile Gly Asp Thr Leu Phe Thr

610 615 620

Leu Phe Arg Ala Pro Glu Leu Leu Ala Pro Asn Gly Asp Leu Tyr Asn

625 630 635 640

Val Phe Ala Trp Ala Leu Asp Val Leu Ala Lys Arg Leu Arg Pro Met

645 650 655

His Val Phe Ile Leu Asp Tyr Asp Gln Ser Pro Ala Gly Cys Arg Asp

660 665 670

Ala Leu Leu Gln Leu Thr Ser Gly Met Val Gln Thr His Val Thr Thr

675 680 685

Pro Gly Ser Ile Pro Thr Ile Cys Asp Leu Ala Arg Thr Phe Ala Arg

690 695 700

Glu Met Gly Glu Ala Asn

705 710

<210> 12

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 12

Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn Leu Lys Asp Thr

20 25 30

Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Lys Trp Ile Gly

35 40 45

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

50 55 60

Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Thr Tyr Ala Tyr Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly

100 105 110

Thr Ala Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 109

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 13

Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Val Ser Leu

1 5 10 15

Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser

20 25 30

Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg

100 105

<210> 14

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 14

Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Ile Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Arg Asp Ala Lys Tyr Asp Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 15

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 15

Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Thr Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Val Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Thr Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln His

85 90 95

Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu

100 105 110

Arg

<210> 16

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 16

Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro

1 5 10 15

Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln

50 55 60

Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr

65 70 75 80

Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 17

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 17

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg

100 105

<210> 18

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 18

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 19

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 19

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 20

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser

115

<210> 21

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 21

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 22

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Gly Ala His Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 23

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 23

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Asp Phe Thr Leu Gln Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Thr His Pro Ala Ile Ser Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 24

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Phe Ala Leu Phe Gly Phe Arg Glu Gln Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 25

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Val Ala Ala Ala Val Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 27

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 27

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 28

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 28

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Ile Ala Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 29

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Ser Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Gly

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Asn Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 30

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 30

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ser Gly

115 120

<210> 31

<211> 115

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 31

Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser

1 5 10 15

Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe

20 25 30

Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro

35 40 45

Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

50 55 60

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

65 70 75 80

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

100 105 110

Ile Lys Arg

115

<210> 32

<211> 832

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 32

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln

35 40 45

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

145 150 155 160

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu

165 170 175

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys

180 185 190

Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr

195 200 205

Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg

210 215 220

Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

225 230 235 240

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp

245 250 255

Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val

305 310 315 320

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

325 330 335

Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

340 345 350

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

355 360 365

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

370 375 380

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln

385 390 395 400

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

405 410 415

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

420 425 430

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

435 440 445

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

450 455 460

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

465 470 475 480

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg

485 490 495

Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly

500 505 510

Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly

515 520 525

Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser

530 535 540

Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr

545 550 555 560

Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro

565 570 575

Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn

580 585 590

Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr

595 600 605

Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser

610 615 620

Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser

625 630 635 640

Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser

645 650 655

Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro

660 665 670

Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys

675 680 685

Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu

690 695 700

Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu

705 710 715 720

Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala

725 730 735

Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro

740 745 750

Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys

755 760 765

Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile

770 775 780

Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln

785 790 795 800

Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu

805 810 815

Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Ile

820 825 830

<210> 33

<211> 1234

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 33

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln

35 40 45

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

145 150 155 160

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu

165 170 175

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys

180 185 190

Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr

195 200 205

Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg

210 215 220

Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

225 230 235 240

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp

245 250 255

Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val

305 310 315 320

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

325 330 335

Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

340 345 350

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

355 360 365

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

370 375 380

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln

385 390 395 400

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

405 410 415

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

420 425 430

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

435 440 445

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

450 455 460

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

465 470 475 480

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg

485 490 495

Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly

500 505 510

Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly

515 520 525

Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser

530 535 540

Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr

545 550 555 560

Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro

565 570 575

Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn

580 585 590

Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr

595 600 605

Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser

610 615 620

Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser

625 630 635 640

Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser

645 650 655

Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro

660 665 670

Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys

675 680 685

Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu

690 695 700

Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu

705 710 715 720

Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala

725 730 735

Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro

740 745 750

Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys

755 760 765

Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile

770 775 780

Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln

785 790 795 800

Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu

805 810 815

Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Thr

820 825 830

Gly Glu Gly Gly Gly Gly Gly Asp Leu Gly Gly Val Lys Leu Pro His

835 840 845

Leu Phe Gly Lys Arg Leu Val Glu Ala Arg Met Ala Ser Tyr Pro Cys

850 855 860

His Gln His Ala Ser Ala Phe Asp Gln Ala Ala Arg Ser Arg Gly His

865 870 875 880

Ser Asn Arg Arg Thr Ala Leu Arg Pro Arg Arg Gln Gln Glu Ala Thr

885 890 895

Glu Val Arg Leu Glu Gln Lys Met Pro Thr Leu Leu Arg Val Tyr Ile

900 905 910

Asp Gly Pro His Gly Met Gly Lys Thr Thr Thr Thr Gln Leu Leu Val

915 920 925

Ala Leu Gly Ser Arg Asp Asp Ile Val Tyr Val Pro Glu Pro Met Thr

930 935 940

Tyr Trp Gln Val Leu Gly Ala Ser Glu Thr Ile Ala Asn Ile Tyr Thr

945 950 955 960

Thr Gln His Arg Leu Asp Gln Gly Glu Ile Ser Ala Gly Asp Ala Ala

965 970 975

Val Val Met Thr Ser Ala Gln Ile Thr Met Gly Met Pro Tyr Ala Val

980 985 990

Thr Asp Ala Val Leu Ala Pro His Val Gly Gly Glu Ala Gly Ser Ser

995 1000 1005

His Ala Pro Pro Pro Ala Leu Thr Leu Leu Leu Asp Arg His Pro

1010 1015 1020

Ile Ala Val Met Leu Cys Tyr Pro Ala Ala Arg Tyr Leu Met Gly

1025 1030 1035

Ser Met Thr Pro Gln Ala Val Leu Ala Phe Val Ala Leu Ile Pro

1040 1045 1050

Pro Thr Leu Pro Gly Thr Asn Ile Val Leu Gly Ala Leu Pro Glu

1055 1060 1065

Asp Arg His Ile Asp Arg Leu Ala Lys Arg Gln Arg Pro Gly Glu

1070 1075 1080

Arg Leu Asp Leu Ala Met Leu Ala Ala Ile Arg Arg Val Tyr Gly

1085 1090 1095

Leu Leu Ala Asn Thr Val Arg Tyr Leu Gln Gly Gly Gly Ser Trp

1100 1105 1110

Trp Glu Asp Trp Gly Gln Leu Ser Gly Thr Ala Val Pro Pro Gln

1115 1120 1125

Gly Ala Glu Pro Gln Ser Asn Ala Gly Pro Arg Pro His Ile Gly

1130 1135 1140

Asp Thr Leu Phe Thr Leu Phe Arg Ala Pro Glu Leu Leu Ala Pro

1145 1150 1155

Asn Gly Asp Leu Tyr Asn Val Phe Ala Trp Ala Leu Asp Val Leu

1160 1165 1170

Ala Lys Arg Leu Arg Pro Met His Val Phe Ile Leu Asp Tyr Asp

1175 1180 1185

Gln Ser Pro Ala Gly Cys Arg Asp Ala Leu Leu Gln Leu Thr Ser

1190 1195 1200

Gly Met Val Gln Thr His Val Thr Thr Pro Gly Ser Ile Pro Thr

1205 1210 1215

Ile Cys Asp Leu Ala Arg Thr Phe Ala Arg Glu Met Gly Glu Ala

1220 1225 1230

Asn

<210> 34

<211> 831

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 34

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln

35 40 45

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

145 150 155 160

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu

165 170 175

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys

180 185 190

Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr

195 200 205

Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg

210 215 220

Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

225 230 235 240

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp

245 250 255

Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val

305 310 315 320

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

325 330 335

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

340 345 350

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

355 360 365

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

370 375 380

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

385 390 395 400

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

405 410 415

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

420 425 430

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

435 440 445

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

450 455 460

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

465 470 475 480

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr

485 490 495

Asp Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp

500 505 510

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp

515 520 525

Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu

530 535 540

Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe

545 550 555 560

Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser

565 570 575

Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu

580 585 590

Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser

595 600 605

Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln

610 615 620

Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr

625 630 635 640

Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp

645 650 655

Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr

660 665 670

Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys

675 680 685

Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln

690 695 700

Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly

705 710 715 720

Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly

725 730 735

Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln

740 745 750

Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu

755 760 765

Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu

770 775 780

Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys

785 790 795 800

Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu Gly

805 810 815

Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Ile

820 825 830

<210> 35

<211> 1233

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 35

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln

35 40 45

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

145 150 155 160

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu

165 170 175

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys

180 185 190

Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr

195 200 205

Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg

210 215 220

Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

225 230 235 240

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp

245 250 255

Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val

305 310 315 320

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

325 330 335

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

340 345 350

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

355 360 365

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

370 375 380

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

385 390 395 400

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

405 410 415

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

420 425 430

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

435 440 445

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

450 455 460

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

465 470 475 480

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr

485 490 495

Asp Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp

500 505 510

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp

515 520 525

Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu

530 535 540

Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe

545 550 555 560

Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser

565 570 575

Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu

580 585 590

Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser

595 600 605

Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln

610 615 620

Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr

625 630 635 640

Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp

645 650 655

Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr

660 665 670

Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys

675 680 685

Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln

690 695 700

Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly

705 710 715 720

Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly

725 730 735

Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln

740 745 750

Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu

755 760 765

Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu

770 775 780

Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys

785 790 795 800

Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu Gly

805 810 815

Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Thr Gly

820 825 830

Glu Gly Gly Gly Gly Gly Asp Leu Gly Gly Val Lys Leu Pro His Leu

835 840 845

Phe Gly Lys Arg Leu Val Glu Ala Arg Met Ala Ser Tyr Pro Cys His

850 855 860

Gln His Ala Ser Ala Phe Asp Gln Ala Ala Arg Ser Arg Gly His Ser

865 870 875 880

Asn Arg Arg Thr Ala Leu Arg Pro Arg Arg Gln Gln Glu Ala Thr Glu

885 890 895

Val Arg Leu Glu Gln Lys Met Pro Thr Leu Leu Arg Val Tyr Ile Asp

900 905 910

Gly Pro His Gly Met Gly Lys Thr Thr Thr Thr Gln Leu Leu Val Ala

915 920 925

Leu Gly Ser Arg Asp Asp Ile Val Tyr Val Pro Glu Pro Met Thr Tyr

930 935 940

Trp Gln Val Leu Gly Ala Ser Glu Thr Ile Ala Asn Ile Tyr Thr Thr

945 950 955 960

Gln His Arg Leu Asp Gln Gly Glu Ile Ser Ala Gly Asp Ala Ala Val

965 970 975

Val Met Thr Ser Ala Gln Ile Thr Met Gly Met Pro Tyr Ala Val Thr

980 985 990

Asp Ala Val Leu Ala Pro His Val Gly Gly Glu Ala Gly Ser Ser His

995 1000 1005

Ala Pro Pro Pro Ala Leu Thr Leu Leu Leu Asp Arg His Pro Ile

1010 1015 1020

Ala Val Met Leu Cys Tyr Pro Ala Ala Arg Tyr Leu Met Gly Ser

1025 1030 1035

Met Thr Pro Gln Ala Val Leu Ala Phe Val Ala Leu Ile Pro Pro

1040 1045 1050

Thr Leu Pro Gly Thr Asn Ile Val Leu Gly Ala Leu Pro Glu Asp

1055 1060 1065

Arg His Ile Asp Arg Leu Ala Lys Arg Gln Arg Pro Gly Glu Arg

1070 1075 1080

Leu Asp Leu Ala Met Leu Ala Ala Ile Arg Arg Val Tyr Gly Leu

1085 1090 1095

Leu Ala Asn Thr Val Arg Tyr Leu Gln Gly Gly Gly Ser Trp Trp

1100 1105 1110

Glu Asp Trp Gly Gln Leu Ser Gly Thr Ala Val Pro Pro Gln Gly

1115 1120 1125

Ala Glu Pro Gln Ser Asn Ala Gly Pro Arg Pro His Ile Gly Asp

1130 1135 1140

Thr Leu Phe Thr Leu Phe Arg Ala Pro Glu Leu Leu Ala Pro Asn

1145 1150 1155

Gly Asp Leu Tyr Asn Val Phe Ala Trp Ala Leu Asp Val Leu Ala

1160 1165 1170

Lys Arg Leu Arg Pro Met His Val Phe Ile Leu Asp Tyr Asp Gln

1175 1180 1185

Ser Pro Ala Gly Cys Arg Asp Ala Leu Leu Gln Leu Thr Ser Gly

1190 1195 1200

Met Val Gln Thr His Val Thr Thr Pro Gly Ser Ile Pro Thr Ile

1205 1210 1215

Cys Asp Leu Ala Arg Thr Phe Ala Arg Glu Met Gly Glu Ala Asn

1220 1225 1230

<210> 36

<211> 1248

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 36

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser

20 25 30

Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala

35 40 45

Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln

50 55 60

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn

65 70 75 80

Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

85 90 95

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr

100 105 110

Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly

115 120 125

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

165 170 175

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

180 185 190

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

195 200 205

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe

210 215 220

Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

225 230 235 240

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

245 250 255

Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

260 265 270

Val Thr Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

275 280 285

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

290 295 300

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

305 310 315 320

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

325 330 335

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

340 345 350

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

355 360 365

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

370 375 380

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

385 390 395 400

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

405 410 415

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

420 425 430

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

435 440 445

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

450 455 460

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

465 470 475 480

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

485 490 495

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly

500 505 510

Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn

515 520 525

Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys

530 535 540

Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly

545 550 555 560

Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser

565 570 575

Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser

580 585 590

Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn

595 600 605

Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser

610 615 620

Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile

625 630 635 640

Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr

645 650 655

Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr

660 665 670

Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser

675 680 685

Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg

690 695 700

Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser

705 710 715 720

Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val

725 730 735

Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys

740 745 750

Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu

755 760 765

Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys

770 775 780

Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu

785 790 795 800

Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala

805 810 815

Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr

820 825 830

Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Thr Gly Glu Gly Gly Gly

835 840 845

Gly Gly Phe Lys Arg Asp Leu Gly Gly Val Lys Leu Pro His Leu Phe

850 855 860

Gly Lys Arg Leu Val Glu Ala Arg Met Ala Ser Tyr Pro Cys His Gln

865 870 875 880

His Ala Ser Ala Phe Asp Gln Ala Ala Arg Ser Arg Gly His Ser Asn

885 890 895

Arg Arg Thr Ala Leu Arg Pro Arg Arg Gln Gln Glu Ala Thr Glu Val

900 905 910

Arg Leu Glu Gln Lys Met Pro Thr Leu Leu Arg Val Tyr Ile Asp Gly

915 920 925

Pro His Gly Met Gly Lys Thr Thr Thr Thr Gln Leu Leu Val Ala Leu

930 935 940

Gly Ser Arg Asp Asp Ile Val Tyr Val Pro Glu Pro Met Thr Tyr Trp

945 950 955 960

Gln Val Leu Gly Ala Ser Glu Thr Ile Ala Asn Ile Tyr Thr Thr Gln

965 970 975

His Arg Leu Asp Gln Gly Glu Ile Ser Ala Gly Asp Ala Ala Val Val

980 985 990

Met Thr Ser Ala Gln Ile Thr Met Gly Met Pro Tyr Ala Val Thr Asp

995 1000 1005

Ala Val Leu Ala Pro His Val Gly Gly Glu Ala Gly Ser Ser His

1010 1015 1020

Ala Pro Pro Pro Ala Leu Thr Leu Leu Leu Asp Arg His Pro Ile

1025 1030 1035

Ala Val Met Leu Cys Tyr Pro Ala Ala Arg Tyr Leu Met Gly Ser

1040 1045 1050

Met Thr Pro Gln Ala Val Leu Ala Phe Val Ala Leu Ile Pro Pro

1055 1060 1065

Thr Leu Pro Gly Thr Asn Ile Val Leu Gly Ala Leu Pro Glu Asp

1070 1075 1080

Arg His Ile Asp Arg Leu Ala Lys Arg Gln Arg Pro Gly Glu Arg

1085 1090 1095

Leu Asp Leu Ala Met Leu Ala Ala Ile Arg Arg Val Tyr Gly Leu

1100 1105 1110

Leu Ala Asn Thr Val Arg Tyr Leu Gln Gly Gly Gly Ser Trp Trp

1115 1120 1125

Glu Asp Trp Gly Gln Leu Ser Gly Thr Ala Val Pro Pro Gln Gly

1130 1135 1140

Ala Glu Pro Gln Ser Asn Ala Gly Pro Arg Pro His Ile Gly Asp

1145 1150 1155

Thr Leu Phe Thr Leu Phe Arg Ala Pro Glu Leu Leu Ala Pro Asn

1160 1165 1170

Gly Asp Leu Tyr Asn Val Phe Ala Trp Ala Leu Asp Val Leu Ala

1175 1180 1185

Lys Arg Leu Arg Pro Met His Val Phe Ile Leu Asp Tyr Asp Gln

1190 1195 1200

Ser Pro Ala Gly Cys Arg Asp Ala Leu Leu Gln Leu Thr Ser Gly

1205 1210 1215

Met Val Gln Thr His Val Thr Thr Pro Gly Ser Ile Pro Thr Ile

1220 1225 1230

Cys Asp Leu Ala Arg Thr Phe Ala Arg Glu Met Gly Glu Ala Asn

1235 1240 1245

<210> 37

<211> 841

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 37

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val

20 25 30

Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys

35 40 45

Thr Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln

50 55 60

Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Val Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu

65 70 75 80

Ala Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Thr

85 90 95

Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr

100 105 110

Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr

115 120 125

Lys Leu Glu Ile Glu Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Glu Glu

145 150 155 160

Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys

165 170 175

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Ile Lys

180 185 190

Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Tyr

195 200 205

Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Lys Ala Ile Leu

210 215 220

Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Ile Gln Leu Ser Ser Leu

225 230 235 240

Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Arg Asp Ala Lys

245 250 255

Tyr Asp Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr

260 265 270

Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

275 280 285

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

290 295 300

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

305 310 315 320

Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala

325 330 335

Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg

340 345 350

Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro

355 360 365

Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro

370 375 380

Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

385 390 395 400

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

420 425 430

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

435 440 445

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

450 455 460

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

465 470 475 480

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

485 490 495

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr

500 505 510

Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly

515 520 525

Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu

530 535 540

Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala

545 550 555 560

Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn

565 570 575

Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser

580 585 590

Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr

595 600 605

Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr

610 615 620

Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr

625 630 635 640

Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys

645 650 655

Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr

660 665 670

Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile

675 680 685

Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val

690 695 700

Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys

705 710 715 720

Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys

725 730 735

Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu

740 745 750

Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu

755 760 765

Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His

770 775 780

Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp

785 790 795 800

Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val

805 810 815

Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu

820 825 830

Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Ile

835 840

<210> 38

<211> 842

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 38

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val

20 25 30

Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys

35 40 45

Thr Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln

50 55 60

Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Val Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu

65 70 75 80

Ala Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Thr

85 90 95

Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr

100 105 110

Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr

115 120 125

Lys Leu Glu Ile Glu Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Glu Glu

145 150 155 160

Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys

165 170 175

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Ile Lys

180 185 190

Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Tyr

195 200 205

Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Lys Ala Ile Leu

210 215 220

Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Ile Gln Leu Ser Ser Leu

225 230 235 240

Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Arg Asp Ala Lys

245 250 255

Tyr Asp Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr

260 265 270

Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

275 280 285

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

290 295 300

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

305 310 315 320

Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala

325 330 335

Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys

340 345 350

Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg

355 360 365

Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro

370 375 380

Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

385 390 395 400

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

405 410 415

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

420 425 430

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

435 440 445

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

450 455 460

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

465 470 475 480

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

485 490 495

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly Ala

500 505 510

Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro

515 520 525

Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu

530 535 540

Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr

545 550 555 560

Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr

565 570 575

Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr

580 585 590

Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile

595 600 605

Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val

610 615 620

Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser

625 630 635 640

Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu

645 650 655

Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser

660 665 670

Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro

675 680 685

Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu

690 695 700

Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser

705 710 715 720

Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu

725 730 735

Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys Ser

740 745 750

Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val

755 760 765

Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys

770 775 780

His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln

785 790 795 800

Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu

805 810 815

Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe

820 825 830

Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro Ile

835 840

<210> 39

<211> 835

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 39

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala

20 25 30

Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser

35 40 45

Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro

50 55 60

Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr

65 70 75 80

Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp

85 90 95

Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu

100 105 110

Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys

115 120 125

Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser

165 170 175

Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser

180 185 190

Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp

195 200 205

Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu

225 230 235 240

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro

245 250 255

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Pro Arg Ala

260 265 270

Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

275 280 285

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

290 295 300

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp

305 310 315 320

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

325 330 335

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

340 345 350

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

355 360 365

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

370 375 380

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

385 390 395 400

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

405 410 415

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

420 425 430

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

435 440 445

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

450 455 460

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

465 470 475 480

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

485 490 495

Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys

500 505 510

Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met

515 520 525

Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly

530 535 540

Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr

545 550 555 560

Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr

565 570 575

Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln

580 585 590

His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe

595 600 605

Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser

610 615 620

Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala

625 630 635 640

Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly

645 650 655

Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro

660 665 670

Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala

675 680 685

Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile

690 695 700

Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp

705 710 715 720

Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp

725 730 735

Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu

740 745 750

Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile

755 760 765

Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys

770 775 780

Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser

785 790 795 800

Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu

805 810 815

Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp

820 825 830

Ser Pro Ile

835

<210> 40

<211> 835

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 40

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala

20 25 30

Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser

35 40 45

Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro

50 55 60

Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr

65 70 75 80

Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp

85 90 95

Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu

100 105 110

Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys

115 120 125

Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser

165 170 175

Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser

180 185 190

Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp

195 200 205

Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu

225 230 235 240

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro

245 250 255

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Pro Arg Ala

260 265 270

Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

275 280 285

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

290 295 300

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp

305 310 315 320

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

325 330 335

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

340 345 350

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

355 360 365

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

370 375 380

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

385 390 395 400

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

405 410 415

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

420 425 430

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

435 440 445

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

450 455 460

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

465 470 475 480

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

485 490 495

Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys

500 505 510

Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met

515 520 525

Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly

530 535 540

Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr

545 550 555 560

Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr

565 570 575

Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln

580 585 590

His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe

595 600 605

Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser

610 615 620

Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala

625 630 635 640

Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly

645 650 655

Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro

660 665 670

Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala

675 680 685

Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile

690 695 700

Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp

705 710 715 720

Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp

725 730 735

Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu

740 745 750

Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile

755 760 765

Ser Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys

770 775 780

Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser

785 790 795 800

Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu

805 810 815

Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp

820 825 830

Ser Pro Ile

835

<210> 41

<211> 1133

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 41

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met

20 25 30

Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser

35 40 45

Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro

50 55 60

Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala

65 70 75 80

His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser

100 105 110

Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met

145 150 155 160

Tyr Val Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln

165 170 175

Asp Ile Asn Ser Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser

180 185 190

Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro

195 200 205

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

210 215 220

Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr

225 230 235 240

Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

245 250 255

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

260 265 270

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

290 295 300

Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

305 310 315 320

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn Leu

325 330 335

Lys Asp Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Lys

340 345 350

Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro

355 360 365

Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr

370 375 380

Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr

385 390 395 400

Tyr Cys Val Thr Tyr Ala Tyr Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp

405 410 415

Gly Ala Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

420 425 430

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser

435 440 445

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

450 455 460

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

465 470 475 480

Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

485 490 495

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

500 505 510

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

515 520 525

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

530 535 540

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

545 550 555 560

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala

565 570 575

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

580 585 590

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

595 600 605

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

610 615 620

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

625 630 635 640

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

645 650 655

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

660 665 670

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

675 680 685

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu

690 695 700

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

705 710 715 720

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

725 730 735

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

740 745 750

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

755 760 765

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

770 775 780

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly

785 790 795 800

Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu

805 810 815

Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala

820 825 830

Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn

835 840 845

Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn

850 855 860

Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu

865 870 875 880

Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr

885 890 895

Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile

900 905 910

Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser

915 920 925

Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu

930 935 940

Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser

945 950 955 960

Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser

965 970 975

Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly

980 985 990

Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys

995 1000 1005

Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu

1010 1015 1020

Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly

1025 1030 1035

Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro

1040 1045 1050

Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser

1055 1060 1065

Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu

1070 1075 1080

Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser

1085 1090 1095

Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu

1100 1105 1110

Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg

1115 1120 1125

Ser Trp Ser Pro Ile

1130

<210> 42

<211> 1134

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 42

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

50 55 60

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly

100 105 110

Asn Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met

145 150 155 160

Tyr Val Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln

165 170 175

Asp Ile Asn Ser Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser

180 185 190

Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro

195 200 205

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

210 215 220

Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr

225 230 235 240

Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

245 250 255

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

260 265 270

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

290 295 300

Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

305 310 315 320

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn Leu

325 330 335

Lys Asp Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Lys

340 345 350

Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro

355 360 365

Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr

370 375 380

Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr

385 390 395 400

Tyr Cys Val Thr Tyr Ala Tyr Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp

405 410 415

Gly Ala Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

420 425 430

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val

435 440 445

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu

450 455 460

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met

465 470 475 480

Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ala Leu

485 490 495

Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp

500 505 510

Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln

515 520 525

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

530 535 540

Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln

545 550 555 560

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro

565 570 575

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

580 585 590

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

595 600 605

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val

610 615 620

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

625 630 635 640

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

645 650 655

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

660 665 670

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

675 680 685

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

690 695 700

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

705 710 715 720

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

725 730 735

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

740 745 750

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

755 760 765

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

770 775 780

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp

785 790 795 800

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

805 810 815

Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr

820 825 830

Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp

835 840 845

Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser

850 855 860

Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr

865 870 875 880

Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala

885 890 895

Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val

900 905 910

Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr

915 920 925

Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro

930 935 940

Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu

945 950 955 960

Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr

965 970 975

Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser

980 985 990

Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn

995 1000 1005

Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly

1010 1015 1020

Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala

1025 1030 1035

Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg

1040 1045 1050

Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser

1055 1060 1065

Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys

1070 1075 1080

Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln

1085 1090 1095

Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala

1100 1105 1110

Leu Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg

1115 1120 1125

Arg Ser Trp Ser Pro Ile

1130

<210> 43

<211> 1134

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 43

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Met Tyr Val Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser

35 40 45

Gln Asp Ile Asn Ser Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys

50 55 60

Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr

85 90 95

Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln

100 105 110

Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met

115 120 125

Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser

145 150 155 160

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

165 170 175

Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

180 185 190

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val

195 200 205

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr

210 215 220

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

225 230 235 240

Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile

245 250 255

Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

260 265 270

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

290 295 300

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

305 310 315 320

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe

325 330 335

Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu

340 345 350

Glu Trp Val Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn

355 360 365

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn

370 375 380

Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

385 390 395 400

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe

405 410 415

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

420 425 430

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

435 440 445

Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly

450 455 460

Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn Leu Lys Asp

465 470 475 480

Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Lys Trp Ile

485 490 495

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

500 505 510

Gln Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

515 520 525

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

530 535 540

Val Thr Tyr Ala Tyr Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala

545 550 555 560

Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro

565 570 575

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

580 585 590

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

595 600 605

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val

610 615 620

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

625 630 635 640

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

645 650 655

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

660 665 670

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

675 680 685

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

690 695 700

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

705 710 715 720

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

725 730 735

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

740 745 750

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

755 760 765

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

770 775 780

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp

785 790 795 800

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

805 810 815

Glu Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr

820 825 830

Ala Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp

835 840 845

Asn Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser

850 855 860

Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr

865 870 875 880

Leu Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala

885 890 895

Thr Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val

900 905 910

Ile Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr

915 920 925

Ser Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro

930 935 940

Glu Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu

945 950 955 960

Ser Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr

965 970 975

Ser Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser

980 985 990

Gly Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn

995 1000 1005

Lys Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly

1010 1015 1020

Leu Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala

1025 1030 1035

Gly Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg

1040 1045 1050

Pro Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser

1055 1060 1065

Ser Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys

1070 1075 1080

Leu Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln

1085 1090 1095

Ser Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala

1100 1105 1110

Leu Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg

1115 1120 1125

Arg Ser Trp Ser Pro Ile

1130

<210> 44

<211> 1133

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 44

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Met Tyr Val Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser

35 40 45

Gln Asp Ile Asn Ser Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys

50 55 60

Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr

85 90 95

Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln

100 105 110

Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met

115 120 125

Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile

145 150 155 160

Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser

165 170 175

Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser

180 185 190

Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro

195 200 205

Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile

210 215 220

Ser Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp

225 230 235 240

Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn

245 250 255

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

260 265 270

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

290 295 300

Gly Gly Ser Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu

305 310 315 320

Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

325 330 335

Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln

340 345 350

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn

355 360 365

Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser

370 375 380

Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser

385 390 395 400

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp

405 410 415

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

420 425 430

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

435 440 445

Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

450 455 460

Ser Val Lys Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn Leu Lys Asp Thr

465 470 475 480

Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Lys Trp Ile Gly

485 490 495

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

500 505 510

Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu

515 520 525

Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

530 535 540

Thr Tyr Ala Tyr Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly

545 550 555 560

Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala

565 570 575

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

580 585 590

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

595 600 605

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

610 615 620

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

625 630 635 640

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

645 650 655

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

660 665 670

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

675 680 685

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu

690 695 700

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

705 710 715 720

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

725 730 735

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

740 745 750

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

755 760 765

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

770 775 780

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly

785 790 795 800

Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu

805 810 815

Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala

820 825 830

Leu Cys Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn

835 840 845

Asn Gly Thr Ala Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn

850 855 860

Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu

865 870 875 880

Gly Ser Thr Ser Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr

885 890 895

Thr Asn Ile Thr Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile

900 905 910

Thr Ser Val Tyr Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser

915 920 925

Val Ile Ser Thr Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu

930 935 940

Thr Thr Leu Lys Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser

945 950 955 960

Thr Thr Ser Thr Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser

965 970 975

Ser Ser Pro Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly

980 985 990

Ile Arg Glu Val Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys

995 1000 1005

Thr Ser Ser Cys Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu

1010 1015 1020

Ala Arg Val Leu Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly

1025 1030 1035

Ala Gln Val Cys Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro

1040 1045 1050

Gln Cys Leu Leu Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser

1055 1060 1065

Lys Leu Gln Leu Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu

1070 1075 1080

Gly Ile Leu Asp Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser

1085 1090 1095

Tyr Ser Gln Lys Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu

1100 1105 1110

Leu Ala Val Leu Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg

1115 1120 1125

Ser Trp Ser Pro Ile

1130

<210> 45

<211> 1129

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 45

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln

35 40 45

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser

145 150 155 160

Met Tyr Val Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser

165 170 175

Gln Asp Ile Asn Ser Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys

180 185 190

Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val

195 200 205

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr

210 215 220

Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln

225 230 235 240

Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met

245 250 255

Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

260 265 270

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

275 280 285

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

290 295 300

Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val

305 310 315 320

Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn

325 330 335

Leu Lys Asp Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu

340 345 350

Lys Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp

355 360 365

Pro Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn

370 375 380

Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val

385 390 395 400

Tyr Tyr Cys Val Thr Tyr Ala Tyr Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val

405 410 415

Trp Gly Ala Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

420 425 430

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu

435 440 445

Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser

450 455 460

Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

465 470 475 480

Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala

485 490 495

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly

500 505 510

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln

515 520 525

Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

530 535 540

Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val

545 550 555 560

Thr Val Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

565 570 575

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

580 585 590

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

595 600 605

Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala

610 615 620

Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg

625 630 635 640

Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro

645 650 655

Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro

660 665 670

Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

675 680 685

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

690 695 700

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

705 710 715 720

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

725 730 735

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

740 745 750

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

755 760 765

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

770 775 780

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr

785 790 795 800

Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly

805 810 815

Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu

820 825 830

Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala

835 840 845

Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn

850 855 860

Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser

865 870 875 880

Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr

885 890 895

Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr

900 905 910

Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr

915 920 925

Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys

930 935 940

Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr

945 950 955 960

Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile

965 970 975

Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val

980 985 990

Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys

995 1000 1005

Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu

1010 1015 1020

Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys

1025 1030 1035

Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu

1040 1045 1050

Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu

1055 1060 1065

Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu Asp

1070 1075 1080

Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys

1085 1090 1095

Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu

1100 1105 1110

Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro

1115 1120 1125

Ile

<210> 46

<211> 1129

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 46

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Lys Asn Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Met Tyr Val Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser

35 40 45

Gln Asp Ile Asn Ser Phe Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys

50 55 60

Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr

85 90 95

Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Glu Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln

100 105 110

Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met

115 120 125

Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser

145 150 155 160

Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser

165 170 175

Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly

180 185 190

Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val

195 200 205

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr

210 215 220

Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

225 230 235 240

Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

245 250 255

Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

260 265 270

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

275 280 285

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

290 295 300

Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val

305 310 315 320

Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr

325 330 335

Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg

340 345 350

Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Pro

355 360 365

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn

370 375 380

Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met

385 390 395 400

Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Val Arg Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly

405 410 415

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

420 425 430

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu

435 440 445

Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu

450 455 460

Ser Cys Arg Thr Ser Gly Phe Asn Leu Lys Asp Thr Ile His Trp Val

465 470 475 480

Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Lys Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro

485 490 495

Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr

500 505 510

Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser

515 520 525

Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Tyr Ala Tyr

530 535 540

Asp Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Ala Val Thr

545 550 555 560

Val Ser Ser Pro Arg Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

565 570 575

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

580 585 590

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

595 600 605

Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala

610 615 620

Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg

625 630 635 640

Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro

645 650 655

Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro

660 665 670

Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

675 680 685

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

690 695 700

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

705 710 715 720

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

725 730 735

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

740 745 750

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

755 760 765

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

770 775 780

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Thr Asp Gly Ser Gly Ala Thr

785 790 795 800

Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly

805 810 815

Pro Val Ser Glu Ala Met Pro Arg Gly Trp Thr Ala Leu Cys Leu Leu

820 825 830

Ser Leu Leu Pro Ser Gly Phe Met Ser Leu Asp Asn Asn Gly Thr Ala

835 840 845

Thr Pro Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn

850 855 860

Val Ser Tyr Gln Glu Thr Thr Thr Pro Ser Thr Leu Gly Ser Thr Ser

865 870 875 880

Leu His Pro Val Ser Gln His Gly Asn Glu Ala Thr Thr Asn Ile Thr

885 890 895

Glu Thr Thr Val Lys Phe Thr Ser Thr Ser Val Ile Thr Ser Val Tyr

900 905 910

Gly Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser Thr

915 920 925

Val Phe Thr Thr Pro Ala Asn Val Ser Thr Pro Glu Thr Thr Leu Lys

930 935 940

Pro Ser Leu Ser Pro Gly Asn Val Ser Asp Leu Ser Thr Thr Ser Thr

945 950 955 960

Ser Leu Ala Thr Ser Pro Thr Lys Pro Tyr Thr Ser Ser Ser Pro Ile

965 970 975

Leu Ser Asp Ile Lys Ala Glu Ile Lys Cys Ser Gly Ile Arg Glu Val

980 985 990

Lys Leu Thr Gln Gly Ile Cys Leu Glu Gln Asn Lys Thr Ser Ser Cys

995 1000 1005

Ala Glu Phe Lys Lys Asp Arg Gly Glu Gly Leu Ala Arg Val Leu

1010 1015 1020

Cys Gly Glu Glu Gln Ala Asp Ala Asp Ala Gly Ala Gln Val Cys

1025 1030 1035

Ser Leu Leu Leu Ala Gln Ser Glu Val Arg Pro Gln Cys Leu Leu

1040 1045 1050

Leu Val Leu Ala Asn Arg Thr Glu Ile Ser Ser Lys Leu Gln Leu

1055 1060 1065

Met Lys Lys His Gln Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Ile Leu Asp

1070 1075 1080

Phe Thr Glu Gln Asp Val Ala Ser His Gln Ser Tyr Ser Gln Lys

1085 1090 1095

Thr Leu Ile Ala Leu Val Thr Ser Gly Ala Leu Leu Ala Val Leu

1100 1105 1110

Gly Ile Thr Gly Tyr Phe Leu Met Asn Arg Arg Ser Trp Ser Pro

1115 1120 1125

Ile

<210> 47

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 47

aucacggagg ucaaugucua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 48

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 48

guagacauug accuccguga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 49

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 49

aucacggagg ucaaugucua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 50

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 50

gagaaucaaa aucggugaau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 51

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 51

gaccaaucug acaugcugca guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 52

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 52

acagcugaca ggcucgacac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 53

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 53

gagaaucaaa aucggugaau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 54

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 54

agggcauguc aauauuacug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 55

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 55

cguuccaacu cgaagugcca guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 56

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 56

cguuccaacu cgaagugcca guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc

60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu

100

<210> 57

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 57

caaagagatt acgaatgcct ngg

23

<210> 58

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 58

caaggcattc gtaatctctt ngg

23

<210> 59

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 59

cttgtagata tcctgatcat ngg

23

<210> 60

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 60

cttgggtcag gacatcaact ngg

23

<210> 61

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 61

cgatgatcag gatatctaca ngg

23

<210> 62

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 62

ttacgaatgc cttggaaacc ngg

23

<210> 63

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 63

tacgaatgcc ttggaaacct ngg

23

<210> 64

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 64

acgaatgcct tggaaacctg ngg

23

<210> 65

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 65

tgatattgac gatataaaat ngg

23

<210> 66

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 66

atgatattga cgatataaaa ngg

23

<210> 67

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 67

gcatctgaag accgatgatc ngg

23

<210> 68

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 68

aacctggggt gccttgggtc ngg

23

<210> 69

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 69

ttggaaacct ggggtgcctt ngg

23

<210> 70

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 70

gtatcaatat atgatacaaa ngg

23

<210> 71

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 71

caaggcaccc caggtttcca ngg

23

<210> 72

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 72

cttggaaacc tggggtgcct ngg

23

<210> 73

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 73

tcatcactca tttgaaaact ngg

23

<210> 74

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 74

caagttgatg tcctgaccca ngg

23

<210> 75

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 75

gtcctgaccc aaggcacccc ngg

23

<210> 76

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 76

atatttgatt tgaagattca ngg

23

<210> 77

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 77

tacaaaagga aaaaatgtgt ngg

23

<210> 78

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 78

acatataagc tatttaaaaa ngg

23

<210> 79

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 79

aaaagagaaa gagactttca ngg

23

<210> 80

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 80

cttgatacag gtttaattcg ngg

23

<210> 81

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 81

acagctgaca ggctcgacac ngg

23

<210> 82

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 82

gatgtttccc atcttgatac ngg

23

<210> 83

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 83

gtcgagcctg tcagctgtcc ngg

23

<210> 84

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 84

caaaattcaa gtgcacagca ngg

23

<210> 85

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 85

gaattttgca ctcaggctgg ngg

23

<210> 86

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 86

gaattaaacc tgtatcaaga ngg

23

<210> 87

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 87

aattaaacct gtatcaagat ngg

23

<210> 88

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 88

agttccattc attacctcac ngg

23

<210> 89

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 89

agagggtcat cacacacaag ngg

23

<210> 90

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 90

atacaagtcc aggagatctt ngg

23

<210> 91

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 91

tcttgataca ggtttaattc ngg

23

<210> 92

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 92

ctgacctgtg aggtaatgaa ngg

23

<210> 93

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 93

acatctaaaa ctttctcaga ngg

23

<210> 94

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 94

gcaaaattca agtgcacagc ngg

23

<210> 95

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 95

ggttgtgttg atacaagtcc ngg

23

<210> 96

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 96

atcttgatac aggtttaatt ngg

23

<210> 97

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 97

attcattacc tcacaggtca ngg

23

<210> 98

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 98

aacatctaaa actttctcag ngg

23

<210> 99

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 99

agcagggaac aaagtcagca ngg

23

<210> 100

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 100

caacacaacc ctgacctgtg ngg

23

<210> 101

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 101

cttgaatttt gcactcaggc ngg

23

<210> 102

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 102

cattcattac ctcacaggtc ngg

23

<210> 103

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 103

tgcacttgaa ttttgcactc ngg

23

<210> 104

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 104

tctcaaaacc aaagatctcc ngg

23

<210> 105

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 105

ttgacatgcc ctcagtatcc ngg

23

<210> 106

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 106

ctggattacc tcttgccctc ngg

23

<210> 107

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 107

gagatggaga ctttatatgc ngg

23

<210> 108

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 108

agatggagac tttatatgct ngg

23

<210> 109

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 109

agggcatgtc aatattactg ngg

23

<210> 110

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 110

gatggagact ttatatgctg ngg

23

<210> 111

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 111

tattatgtct gctaccccag ngg

23

<210> 112

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 112

tgccatagta tttcagatcc ngg

23

<210> 113

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 113

agataaaagt tcgcatcttc ngg

23

<210> 114

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 114

ctgaaaattc cttcagtgac ngg

23

<210> 115

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 115

ctgagggcaa gaggtaatcc ngg

23

<210> 116

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 116

tttcagatcc aggatactga ngg

23

<210> 117

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 117

tatctctacc tgagggcaag ngg

23

<210> 118

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 118

tgaggatcac ctgtcactga ngg

23

<210> 119

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 119

aatcatctgc tacggacaac ngg

23

<210> 120

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 120

gcagactttt gacgcttgac ngg

23

<210> 121

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 121

ccgttccaac tcgaagtgcc ngg

23

<210> 122

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 122

cgttccaact cgaagtgcca ngg

23

<210> 123

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 123

ctggcacttc gagttggaac ngg

23

<210> 124

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 124

gtctgccagc ggctgaactg ngg

23

<210> 125

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 125

atcatctgct acggacaact ngg

23

<210> 126

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 126

agacttttga cgcttgactg ngg

23

<210> 127

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 127

cagacttttg acgcttgact ngg

23

<210> 128

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 128

cctggcactt cgagttggaa ngg

23

<210> 129

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 129

gcaccccaca gttcagccgc ngg

23

<210> 130

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 130

ccttgaggta gacctccagc ngg

23

<210> 131

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 131

aggtctacct caaggacgga ngg

23

<210> 132

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 132

tggaacgggt gagccttgcc ngg

23

<210> 133

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 133

tgtggggtgc ccttaagcct ngg

23

<210> 134

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 134

aagcgtcaaa agtctgccag ngg

23

<210> 135

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 135

tagcagatga ttgagctctg ngg

23

<210> 136

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 136

gattgagctc tgaggtgtgt ngg

23

<210> 137

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 137

ggggccggag ctccaagcag ngg

23

<210> 138

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 138

ggtgtgtagg tgacaaggaa ngg

23

<210> 139

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 139

ccggagctcc aagcagtggg ngg

23

<210> 140

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 140

ggtagacctc cagctggccc ngg

23

<210> 141

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 141

ctcgaagtgc cagggccagc ngg

23

<210> 142

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 142

ctggccctgg cacttcgagt ngg

23

<210> 143

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 143

tctgccagcg gctgaactgt ngg

23

<210> 144

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 144

ccatgtgcca tccgtccttg ngg

23

<210> 145

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 145

ccagctggag gtctacctca ngg

23

<210> 146

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 146

tctgaggtgt gtaggtgaca ngg

23

<210> 147

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 147

aggaaggggc caaggcttaa ngg

23

<210> 148

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 148

cagagctcaa tcatctgcta ngg

23

<210> 149

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 149

gggccggagc tccaagcagt ngg

23

<210> 150

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 150

cctcccactg cttggagctc ngg

23

<210> 151

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 151

tggagctccg gccccagctc ngg

23

<210> 152

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 152

gtgtgtaggt gacaaggaag ngg

23

<210> 153

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 153

atggtttgca gccagagctg ngg

23

<210> 154

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 154

ctggaggtct acctcaagga ngg

23

<210> 155

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 155

ctgccagcgg ctgaactgtg ngg

23

<210> 156

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 156

aatgacatgt gtcactctct ngg

23

<210> 157

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 157

acatggtttg cagccagagc ngg

23

<210> 158

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 158

catggtttgc agccagagct ngg

23

<210> 159

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 159

gacacatgtc atttctgctg ngg

23

<210> 160

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 160

actggggtcc tcccactgct ngg

23

<210> 161

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 161

cctcaaggac ggatggcaca ngg

23

<210> 162

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 162

aggtgtgtag gtgacaagga ngg

23

<210> 163

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 163

aaggaagggg ccaaggctta ngg

23

<210> 164

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 164

gaagtgccag ggccagctgg ngg

23

<210> 165

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 165

tttgcagcca gagctggggc ngg

23

<210> 166

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 166

aaatgacatg tgtcactctc ngg

23

<210> 167

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 167

aggtgacaag gaaggggcca ngg

23

<210> 168

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 168

atttctgctg tggctgcagt ngg

23

<210> 169

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 169

gctgtggctg cagttggaga ngg

23

<210> 170

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 170

ggcgggggcc ttgtcgttgg ngg

23

<210> 171

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 171

ctctggagtt gtggtgggcg ngg

23

<210> 172

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 172

tctggagttg tggtgggcgg ngg

23

<210> 173

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 173

cgttggaggt gttgtcttct ngg

23

<210> 174

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 174

agacaacacc tccaacgaca ngg

23

<210> 175

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 175

gtgggcgggg gccttgtcgt ngg

23

<210> 176

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 176

tcgttggagg tgttgtcttc ngg

23

<210> 177

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 177

accacaactc cagagcccac ngg

23

<210> 178

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 178

gctctggagt tgtggtgggc ngg

23

<210> 179

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 179

gtgggctctg gagttgtggt ngg

23

<210> 180

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 180

tgtgggctct ggagttgtgg ngg

23

<210> 181

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 181

gttggaggtg ttgtcttctg ngg

23

<210> 182

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 182

ggctctggag ttgtggtggg ngg

23

<210> 183

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 183

catagctgat ggtacccccc ngg

23

<210> 184

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 184

cggccagcac tgtgccggcg ngg

23

<210> 185

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 185

caagaactcg gccacttttc ngg

23

<210> 186

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 186

ggtgttcccg tggctcccct ngg

23

<210> 187

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 187

ccagcactgt gccggcgtgg ngg

23

<210> 188

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 188

ggcaagggct ggtgttcccg ngg

23

<210> 189

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 189

ggcgtggtgg agttctacag ngg

23

<210> 190

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 190

ccaccacgcc ggcacagtgc ngg

23

<210> 191

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 191

ggagttctac agcggcagcc ngg

23

<210> 192

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 192

gttctacagc ggcagcctgg ngg

23

<210> 193

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 193

accagccctt gccaatccaa ngg

23

<210> 194

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 194

agttctacag cggcagcctg ngg

23

<210> 195

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 195

ccaggtcctg ggtcttgtcc ngg

23

<210> 196

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 196

tggtgttccc gtggctcccc ngg

23

<210> 197

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 197

gagttctaca gcggcagcct ngg

23

<210> 198

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 198

gaactcaagc tgtacctccc ngg

23

<210> 199

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 199

aagaactcgg ccacttttct ngg

23

<210> 200

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 200

tccattggat tggcaagggc ngg

23

<210> 201

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 201

ttctacagcg gcagcctggg ngg

23

<210> 202

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 202

agaactcggc cacttttctg ngg

23

<210> 203

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 203

gcttcaagaa ggagccacac ngg

23

<210> 204

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 204

gatcttccat tggattggca ngg

23

<210> 205

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 205

gctgtagaac tccaccacgc ngg

23

<210> 206

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 206

gtcctgggcc tcatagctga ngg

23

<210> 207

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 207

taccatcagc tatgaggccc ngg

23

<210> 208

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 208

ggggggtacc atcagctatg ngg

23

<210> 209

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 209

cctgaagcaa tgctccaggg ngg

23

<210> 210

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 210

ttttcctgaa gcaatgctcc ngg

23

<210> 211

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 211

ctctggcaga tgcttcaaga ngg

23

<210> 212

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 212

agaggaagtt ctccaggtcc ngg

23

<210> 213

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 213

tctggcggcc agcactgtgc ngg

23

<210> 214

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 214

ttgagttctg gatcttccat ngg

23

<210> 215

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 215

ttctggatct tccattggat ngg

23

<210> 216

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 216

atcttccatt ggattggcaa ngg

23

<210> 217

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 217

tcaagaagga gccacactgg ngg

23

<210> 218

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 218

gggaggtaca gcttgagttc ngg

23

<210> 219

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 219

cccgtggctc ccctgggtct ngg

23

<210> 220

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 220

ccaggacaag acccaggacc ngg

23

<210> 221

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 221

ctctgcaaca acctccagtg ngg

23

<210> 222

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 222

tgttgcagag gaagttctcc ngg

23

<210> 223

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 223

caggtcctgg gtcttgtcct ngg

23

<210> 224

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 224

tgaggcccag gacaagaccc ngg

23

<210> 225

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 225

ctgtgccacc agctgcagcc ngg

23

<210> 226

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 226

tgtgccacca gctgcagcct ngg

23

<210> 227

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 227

catctgccag agactgaggc ngg

23

<210> 228

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 228

ctgcagctgg tggcacagtc ngg

23

<210> 229

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 229

cacactggag gttgttgcag ngg

23

<210> 230

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 230

cagctggtgg cacagtctgg ngg

23

<210> 231

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 231

agcaaaggag ggcaagaact ngg

23

<210> 232

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 232

gaggaagttc tccaggtcct ngg

23

<210> 233

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 233

gccaccagct gcagcctggg ngg

23

<210> 234

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 234

gcaggcagag cccaagaccc ngg

23

<210> 235

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 235

caggcagagc ccaagaccca ngg

23

<210> 236

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 236

tcctcccagg ctgcagctgg ngg

23

<210> 237

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 237

gctctgcctg cctcagtctc ngg

23

<210> 238

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 238

cctccctgga gcattgcttc ngg

23

<210> 239

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 239

tttcctgaag caatgctcca ngg

23

<210> 240

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 240

ccgtggctcc cctgggtctt ngg

23

<210> 241

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 241

aaaatcaagc cccagaaaag ngg

23

<210> 242

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 242

gaagcatctg ccagagactg ngg

23

<210> 243

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 243

gaagcatctg ccagagactg ngg

23

<210> 244

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 244

aggcagagcc caagacccag ngg

23

<210> 245

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 245

cccaagaccc aggggagcca ngg

23

<210> 246

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 246

tactcaggtt caggagacgc ngg

23

<210> 247

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 247

tcaggagacg ccgggcctcc ngg

23

<210> 248

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 248

actcaggttc aggagacgcc ngg

23

<210> 249

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 249

cagtgtctct actcaggttc ngg

23

<210> 250

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 250

atgctcccag ggctgcgtgc ngg

23

<210> 251

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 251

gagacgccgg gcctcctgga ngg

23

<210> 252

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 252

cagcagcagt gtctctactc ngg

23

<210> 253

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 253

gatggcattc acatgctccc ngg

23

<210> 254

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 254

ggagcatgtg aatgccatcc ngg

23

<210> 255

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 255

tagagacact gctgctgaga ngg

23

<210> 256

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 256

gcatgtgaat gccatccagg ngg

23

<210> 257

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 257

atggcattca catgctccca ngg

23

<210> 258

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 258

tgaatgccat ccaggaggcc ngg

23

<210> 259

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 259

tgctcccagg gctgcgtgct ngg

23

<210> 260

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 260

cagccccagc acgcagccct ngg

23

<210> 261

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 261

gctcccaggg ctgcgtgctg ngg

23

<210> 262

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 262

ccttggattt cagcggcaca ngg

23

<210> 263

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 263

ccttgtgccg ctgaaatcca ngg

23

<210> 264

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 264

tgaacctggc taccaggacc ngg

23

<210> 265

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 265

agggccaggt cctggtagcc ngg

23

<210> 266

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 266

ctcagctgaa cctggctacc ngg

23

<210> 267

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 267

agaaaaaaca ggagagtgca ngg

23

<210> 268

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 268

gcacaaggct cagctgaacc ngg

23

<210> 269

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 269

tggcttgcct tggatttcag ngg

23

<210> 270

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 270

aaacaggaga gtgcagggcc ngg

23

<210> 271

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 271

gagagtgcag ggccaggtcc ngg

23

<210> 272

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 272

ggatgaagag aagaaaaaac ngg

23

<210> 273

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 273

aagaaaaaac aggagagtgc ngg

23

<210> 274

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 274

ccgggtgaca gtgcttcggc ngg

23

<210> 275

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 275

acacaaagct ggcgatgcct ngg

23

<210> 276

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 276

ccctcagtcc ttggatagtg ngg

23

<210> 277

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 277

gtgcggcaac ctacatgatg ngg

23

<210> 278

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 278

ctgtgcggca acctacatga ngg

23

<210> 279

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 279

ggcccagcct gctgtggtac ngg

23

<210> 280

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 280

gttcacttga tttccactgg ngg

23

<210> 281

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 281

caactcattc cccatcatgt ngg

23

<210> 282

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 282

ccgcacagac ttcagtcacc ngg

23

<210> 283

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 283

tgtgcggcaa cctacatgat ngg

23

<210> 284

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 284

cctcactatc caaggactga ngg

23

<210> 285

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 285

cggacctcag tggctttgcc ngg

23

<210> 286

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 286

gaggttcact tgatttccac ngg

23

<210> 287

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 287

ccaggtgact gaagtctgtg ngg

23

<210> 288

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 288

actggaggtg cccgtgcaga ngg

23

<210> 289

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 289

caagtgaacc tcactatcca ngg

23

<210> 290

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 290

gtggtactgg ccagcagccg ngg

23

<210> 291

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 291

aggtccgggt gacagtgctt ngg

23

<210> 292

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 292

atctgcacgg gcacctccag ngg

23

<210> 293

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 293

ccgtgcagat ggaatcatct ngg

23

<210> 294

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 294

ctagatgatt ccatctgcac ngg

23

<210> 295

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 295

acctcactat ccaaggactg ngg

23

<210> 296

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 296

cctgccgaag cactgtcacc ngg

23

<210> 297

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 297

tggccagtac cacagcaggc ngg

23

<210> 298

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 298

atctccaggc aaagccactg ngg

23

<210> 299

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 299

gcacgtggcc cagcctgctg ngg

23

<210> 300

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 300

gtgtgtgagt atgcatctcc ngg

23

<210> 301

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 301

cactgtcacc cggacctcag ngg

23

<210> 302

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 302

gctggcgatg cctcggctgc ngg

23

<210> 303

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 303

ctgctggcca gtaccacagc ngg

23

<210> 304

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 304

aggcaaagcc actgaggtcc ngg

23

<210> 305

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 305

gcagatggaa tcatctagga ngg

23

<210> 306

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 306

cctagatgat tccatctgca ngg

23

<210> 307

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 307

ggccagtacc acagcaggct ngg

23

<210> 308

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 308

tgcatactca cacacaaagc ngg

23

<210> 309

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 309

gcttcggcag gctgacagcc ngg

23

<210> 310

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 310

caggcaaagc cactgaggtc ngg

23

<210> 311

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 311

tgtagcaccg cccagacgac ngg

23

<210> 312

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 312

ggcgccctgg ccagtcgtct ngg

23

<210> 313

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 313

cgtctgggcg gtgctacaac ngg

23

<210> 314

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 314

aggcgccctg gccagtcgtc ngg

23

<210> 315

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 315

caccgcccag acgactggcc ngg

23

<210> 316

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 316

accgcccaga cgactggcca ngg

23

<210> 317

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 317

gggcggtgct acaactgggc ngg

23

<210> 318

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 318

gtctgggcgg tgctacaact ngg

23

<210> 319

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 319

cgactggcca gggcgcctgt ngg

23

<210> 320

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 320

cggtgctaca actgggctgg ngg

23

<210> 321

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 321

tggcggccag gatggttctt ngg

23

<210> 322

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 322

acgactggcc agggcgcctg ngg

23

<210> 323

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 323

ctacaactgg gctggcggcc ngg

23

<210> 324

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 324

gccctggcca gtcgtctggg ngg

23

<210> 325

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 325

tgcagatccc acaggcgccc ngg

23

<210> 326

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 326

aactgggctg gcggccagga ngg

23

<210> 327

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 327

cggagagctt cgtgctaaac ngg

23

<210> 328

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 328

gcgtgacttc cacatgagcg ngg

23

<210> 329

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 329

atgtggaagt cacgcccgtt ngg

23

<210> 330

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 330

gccctgctcg tggtgaccga ngg

23

<210> 331

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 331

cacgaagctc tccgatgtgt ngg

23

<210> 332

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 332

cctgctcgtg gtgaccgaag ngg

23

<210> 333

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 333

tgacacggaa gcggcagtcc ngg

23

<210> 334

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 334

ccccttcggt caccacgagc ngg

23

<210> 335

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 335

cagcaaccag acggacaagc ngg

23

<210> 336

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 336

gcagttgtgt gacacggaag ngg

23

<210> 337

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 337

cccttcggtc accacgagca ngg

23

<210> 338

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 338

ccgggctggc tgcggtcctc ngg

23

<210> 339

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 339

aggcggccag cttgtccgtc ngg

23

<210> 340

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 340

cagcttgtcc gtctggttgc ngg

23

<210> 341

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 341

cggtcaccac gagcagggct ngg

23

<210> 342

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 342

gtgtcacaca actgcccaac ngg

23

<210> 343

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 343

ctgcagcttc tccaacacat ngg

23

<210> 344

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 344

caagctggcc gccttccccg ngg

23

<210> 345

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 345

cgtgtcacac aactgcccaa ngg

23

<210> 346

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 346

cgttgggcag ttgtgtgaca ngg

23

<210> 347

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 347

gcttgtccgt ctggttgctg ngg

23

<210> 348

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 348

cggaagcggc agtcctggcc ngg

23

<210> 349

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 349

cgatgtgttg gagaagctgc ngg

23

<210> 350

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 350

catgtggaag tcacgcccgt ngg

23

<210> 351

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 351

ccctgctcgt ggtgaccgaa ngg

23

<210> 352

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 352

cgggctggct gcggtcctcg ngg

23

<210> 353

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 353

agcttgtccg tctggttgct ngg

23

<210> 354

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 354

gaaggtggcg ttgtcccctt ngg

23

<210> 355

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 355

acttccacat gagcgtggtc ngg

23

<210> 356

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 356

gccgggctgg ctgcggtcct ngg

23

<210> 357

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 357

tcggtcacca cgagcagggc ngg

23

<210> 358

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 358

tctggttgct ggggctcatg ngg

23

<210> 359

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 359

acggaagcgg cagtcctggc ngg

23

<210> 360

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 360

cccgaggacc gcagccagcc ngg

23

<210> 361

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 361

ctggctgcgg tcctcgggga ngg

23

<210> 362

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 362

catgagcccc agcaaccaga ngg

23

<210> 363

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 363

agtcctggcc gggctggctg ngg

23

<210> 364

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 364

gggggttcca gggcctgtct ngg

23

<210> 365

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 365

ggtcaccacg agcagggctg ngg

23

<210> 366

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 366

gctgcggtcc tcggggaagg ngg

23

<210> 367

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 367

ggaccgcagc cagcccggcc ngg

23

<210> 368

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 368

gagaaggtgg gggggttcca ngg

23

<210> 369

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 369

ggagaaggtg ggggggttcc ngg

23

<210> 370

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 370

agcggcagtc ctggccgggc ngg

23

<210> 371

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 371

ggggttccag ggcctgtctg ngg

23

<210> 372

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 372

cttctcccca gccctgctcg ngg

23

<210> 373

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 373

gttggagaag ctgcaggtga ngg

23

<210> 374

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 374

ggggggttcc agggcctgtc ngg

23

<210> 375

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 375

ggagaagctg caggtgaagg ngg

23

<210> 376

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 376

cacgagcagg gctggggaga ngg

23

<210> 377

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 377

gcagggctgg ggagaaggtg ngg

23

<210> 378

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 378

cagggctggg gagaaggtgg ngg

23

<210> 379

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 379

gagcagggct ggggagaagg ngg

23

<210> 380

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 380

agcagggctg gggagaaggt ngg

23

<210> 381

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 381

agggctgggg agaaggtggg ngg

23

<210> 382

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 382

gggctgggga gaaggtgggg ngg

23

<210> 383

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 383

agaagtggaa tacagagcgg ngg

23

<210> 384

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 384

aatgtggcaa cgtggtgctc ngg

23

<210> 385

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 385

ctaaatgggg atttccgcaa ngg

23

<210> 386

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 386

catccagata ctggctaaat ngg

23

<210> 387

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 387

cagacgggca cgaggttccc ngg

23

<210> 388

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 388

gcggctgggg tgtagaagca ngg

23

<210> 389

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 389

gaacctcgtg cccgtctgct ngg

23

<210> 390

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 390

gacgggcacg aggttccctg ngg

23

<210> 391

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 391

atccccattt agccagtatc ngg

23

<210> 392

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 392

gtggaataca gagcggaggt ngg

23

<210> 393

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 393

agacgggcac gaggttccct ngg

23

<210> 394

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 394

ggaacctcgt gcccgtctgc ngg

23

<210> 395

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 395

gagtcacatt ctctatggtc ngg

23

<210> 396

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 396

atgtgactct agcagacagt ngg

23

<210> 397

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 397

ttttcatcat tcattatgcc ngg

23

<210> 398

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 398

aatgtgactc tagcagacag ngg

23

<210> 399

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 399

atccagatac tggctaaatg ngg

23

<210> 400

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 400

tgctgccgga tccaaatccc ngg

23

<210> 401

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 401

tctacacccc agccgcccca ngg

23

<210> 402

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 402

ttatgcctgg gatttggatc ngg

23

<210> 403

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 403

cgctctgtat tccacttctg ngg

23

<210> 404

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 404

gaggttccct ggggcggctg ngg

23

<210> 405

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 405

tgccccagca gacgggcacg ngg

23

<210> 406

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 406

acagtgggat ctactgctgc ngg

23

<210> 407

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 407

tgtgtttgaa tgtggcaacg ngg

23

<210> 408

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 408

tgaaaaattt aacctgaagt ngg

23

<210> 409

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 409

acatccagat actggctaaa ngg

23

<210> 410

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 410

atgaaaggga tgtgaattat ngg

23

<210> 411

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 411

tggtgctcag gactgatgaa ngg

23

<210> 412

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 412

ggtgtagaag cagggcagat ngg

23

<210> 413

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 413

acgttgccac attcaaacac ngg

23

<210> 414

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 414

acgaggttcc ctggggcggc ngg

23

<210> 415

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 415

gcctgtcctg tgtttgaatg ngg

23

<210> 416

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 416

gtgcccgtct gctggggcaa ngg

23

<210> 417

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 417

aacctcgtgc ccgtctgctg ngg

23

<210> 418

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 418

ggcggctggg gtgtagaagc ngg

23

<210> 419

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 419

agtcacattc tctatggtca ngg

23

<210> 420

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 420

ctggtttgat gaccaacttc ngg

23

<210> 421

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 421

cattcattat gcctgggatt ngg

23

<210> 422

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 422

tgctagagtc acattctcta ngg

23

<210> 423

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 423

gggcacgagg ttccctgggg ngg

23

<210> 424

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 424

ggctcctttg ccccagcaga ngg

23

<210> 425

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 425

attattggac atccagatac ngg

23

<210> 426

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 426

tttcatcatt cattatgcct ngg

23

<210> 427

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 427

ttctacaccc cagccgcccc ngg

23

<210> 428

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 428

tcagggacac atctcctttg ngg

23

<210> 429

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 429

gctcctttgc cccagcagac ngg

23

<210> 430

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 430

ctcagaagtg gaatacagag ngg

23

<210> 431

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 431

cgaggttccc tggggcggct ngg

23

<210> 432

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 432

gccacattca aacacaggac ngg

23

<210> 433

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 433

ggtgctcagg actgatgaaa ngg

23

<210> 434

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 434

aggtcacccc tgcaccgact ngg

23

<210> 435

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 435

ctctctgccg agtcggtgca ngg

23

<210> 436

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 436

tctctctgcc gagtcggtgc ngg

23

<210> 437

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 437

ccaaggatgc ttaccaccag ngg

23

<210> 438

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 438

tctctgccga gtcggtgcag ngg

23

<210> 439

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 439

cccctggtgg taagcatcct ngg

23

<210> 440

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 440

tccaaggatg cttaccacca ngg

23

<210> 441

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 441

ggtggtaagc atccttggaa ngg

23

<210> 442

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 442

gtgaagtctc tctgccgagt ngg

23

<210> 443

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 443

atgcttacca ccaggggaca ngg

23

<210> 444

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 444

ttccaaggat gcttaccacc ngg

23

<210> 445

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 445

agtcggtgca ggggtgacct ngg

23

<210> 446

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 446

acttcactgc agcctttcca ngg

23

<210> 447

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Эта последовательность может охватывать 2-6 "Gly Gly Gly Gly

Ser" повторяющихся единиц

<400> 447

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25 30

<210> 448

<211> 50

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Эта последовательность может охватывать 1-3 "Gly Gly Gly Gly

Ser" повторяющихся единиц, 1 "Gly Gly Gly Gly Pro" повторяющуюся

единицу и 1 "Gly Gly Gly Gly Cys" повторяющуюся единицу.

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Эта последовательность может охватывать 1-3 "Gly Gly Gly Gly

Ser" повторяющихся единиц, 1 "Gly Gly Gly Gly Pro" единицу и 1 "Gly

Gly Gly Gly Cys" единицу.

<400> 448

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly

35 40 45

Gly Ser

50

<210> 449

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Эта последовательность может охватывать 3-4 "Gly Gly Gly Gly

Ser" повторяющихся единиц

<400> 449

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 450

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 450

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 451

<211> 50

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 451

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

35 40 45

Gly Ser

50

<210> 452

<211> 45

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 452

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

35 40 45

<---

Изобретение относится к области биохимии, клеточной биологии и иммунотерапии. Предложены Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR-T) с редактированным геномом, которые могут быть получены из цитотоксических Т-клеток, вирусоспецифичной цитотоксической Т-клетки, Т-клеток памяти или гамма-дельта (γδ) Т-клеток и содержат один или более химерных антигенных рецепторов (CAR), нацеленных на один или более антигенов, при этом CAR T-клетка дефицитна по одному или более антигенам, с которыми специфически связывается один или более CAR. В частности, данное изобретение относится к сконструированным Т-клеткам (CAR-T), несущим моно, двойные и тандемные химерные антигенные рецепторы (CAR), и способам иммунотерапии для лечения рака. Изобретение обеспечивает CAR Т-клетки для более эффективного, безопасного и действенного нацеливания на рак. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 13 ил., 27 табл., 11 пр.

1. CAR T-клетка для лечения гематологического злокачественного новообразования, которая содержит один или более химерных антигенных рецепторов (CAR), которые специфически связывают CD7, при этом CAR T-клетка дефицитна по субъединице альфа цепи Т-клеточного рецептора рецепторного комплекса T-клеток (TRAC) и дефицитна по CD7, где CAR содержит:

сигнальный пептид CD8α, содержащий SEQ ID NO: 1;

вариабельную область легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 21;

пептидный линкер, содержащий SEQ ID NO: 9;

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID NO: 20;

шарнирную область CD8α, содержащую SEQ ID NO: 2;

костимулирующий домен, выбранный из 4-1BB, содержащего SEQ ID NO: 5; и

сигнальный домен CD3 дзета, содержащий SEQ ID NO: 7.

2. CAR T-клетка по п. 1, отличающаяся тем, что CAR содержит:

MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTVTVSPRASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR.

3. CAR T-клетка по п. 1, отличающаяся тем, что последовательность химерного антигенного рецептора (CAR) по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 39.

4. CAR T-клетка по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что CAR Т-клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 39.

5. CAR T-клетка по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что передача сигналов, опосредованная эндогенным Т-клеточным рецептором, заблокирована в CAR T-клетке.

6. CAR T-клетка по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что CAR T-клетки не индуцируют аллореактивность или реакцию «трансплантат против хозяина».

7. CAR T-клетка по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что CAR T-клетки не индуцируют взаимное уничтожение.

8. Терапевтическая композиция для лечения гематологического злокачественного новообразования, содержащая популяцию CAR T-клеток по любому из пп. 1-7 и по меньшей мере один терапевтически приемлемый носитель и/или адъювант.

9. Способ лечения гематологического злокачественного новообразования у пациента, включающий введение CAR T-клетки по любому из пп. 1-7 или терапевтической композиции по п. 8 пациенту, нуждающемуся в этом.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что гематологическое злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование Т-клеток.

11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что злокачественное новообразование Т-клеток представляет собой Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (Т-ОЛЛ).

12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что злокачественное новообразование Т-клеток представляет собой неходжкинскую лимфому.

13. Способ по п. 10, отличающийся тем, что злокачественное новообразование Т-клеток представляет собой Т-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (Т-ХЛЛ).

14. Способ по п. 9, отличающийся тем, что гематологическое злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому.

15. Способ по п. 9, отличающийся тем, что гематологическое злокачественное новообразование представляет собой острый миелоидный лейкоз (ОМЛ).

16. CAR T-клетка по п. 1, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую SEQ ID NO: 32.

название	год	авторы	номер документа
Т-КЛЕТКИ С КОСТИМУЛИРУЮЩИМ ХИМЕРНЫМ АНТИГЕННЫМ РЕЦЕПТОРОМ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА IL13Rα2	2015	Браун Кристин Е. Формэн Стивен Дж.	RU2749922C2
ПОЛНОСТЬЮ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К МЕЗОТЕЛИНУ И ИММУННЫЕ ЭФФЕКТОРНЫЕ КЛЕТКИ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА МЕЗОТЕЛИН	2016	Ван Хуамао Сун Бо Ван Пен	RU2748281C2
Химерные антигенные рецепторы, нацеливающиеся на CD70	2019	Сриватса Сринивасан, Сурабхи Нагараджан, Ниранджана Адити Пановски, Силер Парк, Йоон Сай, Тао Сасу, Барбра Джонсон Ван Бларком, Томас Джон Дюссо, Матильде Бруннхильде Галетто, Роман Ариэль	RU2801824C2
ХИМЕРНЫЙ АНТИГЕННЫЙ РЕЦЕПТОР (CAR) С АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИМИ ДОМЕНАМИ К КОНСТАНТНОЙ ОБЛАСТИ β Т-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА	2015	Пюле Мартен Масиосия Пол	RU2744046C2
АНТИ-HLA-A2 АНТИТЕЛА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2018	Левингс, Меган Орбан, Пол Досан, Николас Ламарш, Каролин Бергквист, Жан Питер	RU2782276C2
Т-КЛЕТКИ, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ХИМЕРНЫМ РЕЦЕПТОРОМ АНТИГЕНА, НАЦЕЛЕННЫМ НА CS1	2015	Формэн Стивен Дж. Ван Сюли	RU2727451C2
ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА АНТИГЕН СОЗРЕВАНИЯ В-КЛЕТОК, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2019	Чан, Дэвид Балакумаран, Арун Конто, Кирил Алкис	RU2829097C2
АНТИТЕЛО ПРОТИВ ГЛИПИКАНА-3 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ	2016	Ван Хуамао Сун Бо	RU2744245C2
ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА	2017	Браннетти, Барбара Брогдон, Дженнифер Энгельс, Борис Гранда, Брайан Хуан, Лу Лэй, Мин Ли, На Чжан, Цзиминь Гимарэс, Карла Джилл, Саар Руэлла, Марко Янг, Регина М.	RU2826270C2
ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГУМАНИЗИРОВАННОГО ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРА ПРОТИВ ВСМА	2015	Брогдон Дженнифер Чой Юджин Эберсбах Хилмар Гласс Дэвид Хют Хитер Джун Карл Х. Манник Джоан Майлон Майкл С. Мерфи Леон Плиса Габриэла Ричардсон Селеста Руелла Марко Сингх Решма Ван Юнцян У Цилун	RU2751660C2

	0		SU254141A1
GOMES-SILVA D
et al., CD7-edited T cells expressing a CD7-specific CAR for the therapy of T-cell malignancies, Blood, 2017, vol
Реверсивный дисковый культиватор для тросовой тяги	1923	Куниц С.С.	SU130A1
Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п.	1921	Богач Б.И.	SU3A1
ПЕРЕДВИЖНАЯ ДИАГРАММА ДЛЯ СРАВНЕНИЯ ЦЕННОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ПРОДУКТОВ ПО ИХ КАЛОРИЙНОСТИ	1919	Бечин М.И.	SU285A1
RAPPL G
et al., The CD3-zeta chimeric antigen receptor overcomes TCR Hypo-responsiveness of human terminal late-stage T cells, PLoS One, 2012, vol
Способ восстановления хромовой кислоты, в частности для получения хромовых квасцов	1921	Ланговой С.П. Рейзнек А.Р.	SU7A1
Печь для непрерывного получения сернистого натрия	1921	Настюков А.М. Настюков К.И.	SU1A1

Т-КЛЕТКИ С ХИМЕРНЫМИ АНТИГЕННЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ (CAR-T) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА Российский патент 2024 года по МПК C12N5/783 C07K14/705 A61K35/17

Описание патента на изобретение RU2811466C2

Похожие патенты RU2811466C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 811 466 C2

Реферат патента 2024 года Т-КЛЕТКИ С ХИМЕРНЫМИ АНТИГЕННЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ (CAR-T) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА

Формула изобретения RU 2 811 466 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2024 года RU2811466C2

RU 2 811 466 C2