КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ГЕПАТИТА В И D Российский патент 2024 года по МПК A61K39/12 A61K39/29 A61P31/14 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США №62/966970, поданной 28 января 2020 г., содержание которой настоящим явно полностью включено в данную заявку посредством ссылки.

ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Настоящая заявка подана вместе с Перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей представлен в виде файла с названием SVF005SeqListing.TXT, который был создан и последний раз изменен 26 января 2021 г., размер которого составляет 141377 байт. Информация, представленная в электронном Перечне последовательностей, настоящим полностью включена в данную заявку посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0003] В аспектах настоящего изобретения в общем предложены иммуногенные композиции или комбинации продуктов сконструированных нуклеиновых кислот, генов, пептидов или белков гепатита В (HBV) и гепатита D (HDV), которые можно применять, чтобы вызвать иммунный ответ против инфекции HBV и/или HDV. Этот иммунный ответ включает, состоит по существу из или состоит из активированных иммунных клеток, которые продуцируют нейтрализующие антитела, и активированных иммунных клеток, таких как Т-клетки и В-клетки, против HBV и/или HDV. В соответствии с настоящим изобретением также в общем предложены способы применения указанных иммуногенных композиций или комбинаций продуктов у субъектов, чтобы индуцировать иммунные ответы против HBV и/или HDV путем введения указанных композиций или комбинаций с применением подхода, включающего примирование (прайм) гомологичной или гетерологичной нуклеиновой кислотой и/или полипептидом и стимулирование (буст) нуклеиновой кислотой и/или полипептидом.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0004] Гепатит представляет собой заболевание, приводящее к отечности и воспалению печени. Это расстройство обычно вызывается вирусами, пять типов которых известно на сегодняшний день (вирусы гепатита А, В, С, D и Е). Инфицирование вирусом гепатита В может быть либо острым, либо хроническим, причем тяжелые хронические инфекции вызывают хроническое воспаление, фиброз, цирроз и гепатоцеллюлярную карциному. Вирус гепатита В имеет геном из частично двухцепочечной кольцевой ДНК, который проникает в ядро хозяина и транскрибируется РНК-полимеразой хозяина с образованием четырех молекул вирусной мРНК. Они используются для трансляции вирусных белков, таких как белки капсида и поверхностные антигены, а также для продукции большего количества ДНК-геномов с применением обратной транскриптазы. Гепатит D представляет собой вирусоид, для репликации которого требуется коинфекция или суперинфекция гепатитом В. Кольцевая одноцепочечная РНК гепатита D амплифицируется, используя РНК-полимеразы хозяев, но также содержит отдельный ген антигена гепатита D (HDAg). Во время коинфекции или суперинфекции вирусами гепатита В и D, интактные вирусы гепатита D пакуются в оболочку, содержащую поверхностные антигены гепатита В, окружающие РНК-геном, покрытый белком HDAg. Включение поверхностных антигенов гепатита В необходимо для инфекционности вируса гепатита D, так как вирус гепатита D не кодирует собственные белки связывания с рецептором. Коинфекция или суперинфекция вирусом гепатита D вызывает более тяжелые осложнения, с повышенным риском печеночной недостаточности, цирроза и рака печени. Существует потребность в эффективных иммуногенных композициях и вакцинах для создания профилактического иммунитета против обеих инфекций вирусами гепатита В и D.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0005] В настоящем изобретении в общем предложено применение рекомбинантных нуклеиновых кислот, ДНК, РНК, белков, полипептидов или пептидов, содержащих антигены HBV и/или HDV, чтобы вызвать иммунные ответы, продукцию антител, иммунную защиту или иммунитет против инфекций HBV или HDV. В некоторых вариантах реализации рекомбинантные нуклеиновые кислоты, ДНК, РНК, белки, полипептиды или пептиды, содержащие антигены HBV и/или HDV, применяют в подходе, включающем композицию для примирования ДНК/стимулирования белком. В некоторых вариантах реализации такой подход с композицией для примирования ДНК/стимулирования белком приводит к большему иммунному ответу, продукции антител, иммунной защите или иммунитету против инфекций HBV или HDV по сравнению с иммуногенными композициями на основе только ДНК, только белка или организма.

[0006] Хронические инфекции вирусами гепатита В и D (HBV/HDV) могут вызывать рак. Современная терапия HBV с применением аналогов нуклеозидов (NA) пожизненная и снижает, но не устраняет риск рака. Отличительной особенностью хронического гепатита В является нарушенный ответ специфичных к HBV Т-клеток. В некоторых вариантах реализации предложена иммунотерапия, запускаемая непримированными здоровыми Т-клетками, специфичными к антигену HDV (HDAg), чтобы обойти потребность в специфичных к HBV Т-клетках для примирования специфичных к PreS1 Т-клеток и продукции антител против PreS1, блокирующих проникновение HBV. В некоторых вариантах реализации оценивали индукцию антител против PreS1 и специфичных к HBV и HDV Т-клеток комбинациями последовательностей PreS1 и/или HDAg in vitro и in vivo. В некоторых вариантах реализации нейтрализацию HBV специфичными к PreS1 антителами мыши и кролика оценивали в культуре клеток, и исследовали нейтрализацию HBV антителами кролика против PreS1 у мышей, которых репопулировали гепатоцитами человека. В некоторых вариантах реализации адоптивный перенос антител против PreS1 предотвращал или модулировал инфекцию HBV после последующей провокации у гуманизированных мышей.

[0007] В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов содержат последовательности, гены или полипептиды HBV, HDV, PreS1 или HDAg. В некоторых вариантах реализации PreS1 представляет собой PreS1 А или PreS1 В. В некоторых вариантах реализации HDAg представляет собой HDAg генотипа 1 штамма А (1A), HDAg генотипа 1 штамма В (1В), HDAg генотипа 2 штамма А (2А) или HDAg генотипа 2 штамма В (2В). В некоторых вариантах реализации композиции также содержат сайт аутокаталитического расщепления пептида. В некоторых вариантах реализации сайт аутокаталитического расщепления пептида представляет собой сайт аутокаталитического расщепления пептида Р2А. В некоторых вариантах реализации компоненты PreS1 и HDAg сгруппированы друг с другом в композициях. В некоторых вариантах реализации PreS1 находится по ходу транскрипции или непосредственно по ходу транскрипции от последовательности HDAg. В некоторых вариантах реализации группы PreS1 и HDAg разделены сайтом аутокаталитического расщепления пептида. В некоторых вариантах реализации группы PreS1 и HDAg разделены сайтом аутокаталитического расщепления пептида Р2А.

[0008] В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот представляют собой плазмиду, вирус, бактериофаг, космиду, фосмиду, фагмиду, бактериальную искусственную хромосому (ВАС), дрожжевую искусственную хромосому (YAC) или искусственную хромосому человека (НАС). В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот являются кольцевыми или линейными. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот получены в биологической системе, включая, но не ограничиваясь клетками млекопитающих, клетками человека, клетками бактерий, Е. coli, дрожжей, S. cerevisiae или другими подходящими биологическими системами. В некоторых вариантах реализации нуклеиновые кислоты или гены HBV и/или HDV находятся в кассете, которая содержит элементы, необходимые для транскрипции и трансляции нуклеиновых кислот или генов в биологической системе.

[0009] В некоторых вариантах реализации композиции полипептидов правильно свернуты (уложены) или денатурированы. В некоторых вариантах реализации композиции полипептидов получены в биологической системе, включая, но не ограничиваясь рекомбинантными системами экспрессии в млекопитающих, бактериях, дрожжах, насекомых или в бесклеточной системе. В некоторых вариантах реализации композиции полипептидов получают в клетках млекопитающего, человека, первичных, иммортализованных клетках, клетках рака, стволовых клетках, фибробластах, клетках эмбриональной почки человека (HEK) 293, клетках яичника китайского хомячка (СНО), бактериальных клетках, Escherichia coli, клетках дрожжей, Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, клетках насекомого, Spodoptera frugiperda Sf9 или S. frugiperda Sf21, или в бесклеточной системе. В некоторых вариантах реализации композиции полипептидов очищают, применяя методики, известные в данной области техники, включая, но не ограничиваясь перечисленным, экстрагирование, замораживание/размораживание, гомогенизацию, пермеабилизацию, центрифугирование, центрифугирование в градиенте плотности, ультрацентрифугирование, преципитацию, электрофорез в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях (ПААГ/ДСН), нативный ЭФ в ПААГ, эксклюзионную хроматографию, жидкостную хроматографию, газовую хроматографию, хроматографию гидрофобных взаимодействий, ионообменную хроматографию, анионообменную хроматографию, катионообменную хроматографию, аффинную хроматографию, иммуноаффинную хроматографию, металл-аффинную хроматографию, хроматографию на никелевой колонке, очистку с помощью эпитопной метки или лиофилизацию.

[0010] В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов вводят животному, включая, но не ограничиваясь перечисленным, людей, мышей, крыс, кроликов, кошек, собак, лошадей, коров, свиней, овец, обезьян, приматов или кур. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов вводят с интервалами в 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней, или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 недель, или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или в любой момент времени в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше временных точек между каждой дозой. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот вводят перед введением композиций полипептидов. В некоторых вариантах реализации композиции полипептидов вводят перед введением композиций нуклеиновых кислот.

[0011] В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов вводят в количестве 1, 10, 100, 1000 нг, или 1, 10, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 мкг, или 1, 10, 100 или 1000 мг или в любом количестве в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше количеств. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов вводят со вспомогательными веществами. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов вводят с адъювантами. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот вводят путем электропорации in vivo.

[0012] В некоторых вариантах реализации иммуногенность композиций нуклеиновых кислот или полипептидов оценивают путем измерения продуцирующих интерферон гамма (IFNγ) иммунных клеток, применяя методики, известные в данной области, включая метод иммуноферментных пятен (ELISpot), измерение титра антитела IgG, специфичного к HBV, HDV, белков HBV, нуклеиновых кислот HBV, белков HDV, нуклеиновых кислот HDV, PreS1 или HDAg, или измерение нейтрализующей активности сывороток или очищенных антител из иммунизированных животных в анализе in vitro или in vivo.

[0013] В некоторых вариантах реализации введение композиций нуклеиновых кислот или полипептидов обеспечивает временную, продолжительную или постоянную защиту против инфекции HBV или HDV. В некоторых вариантах реализации временная, продолжительная или постоянная защита против инфекции HBV или HDV превосходит таковую у других иммуногенных композиций. В некоторых вариантах реализации введение композиций нуклеиновых кислот или полипептидов осуществляют в сочетании с противовирусной терапией. В некоторых вариантах реализации введение композиций нуклеиновых кислот или полипептидов для обеспечения временной, продолжительной или постоянной защиты против инфекции HBV или HDV эффективно у людей. В некоторых вариантах реализации композиции нуклеиновых кислот или полипептидов применяют в качестве вакцин против HBV или HDV.

[0014] Предпочтительные аспекты настоящего изобретения имеют отношение к следующим пронумерованным альтернативам:

[0015] 1. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов, содержащие:

(a) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и

(b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1.

[0016] 2. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 1, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая HDAg, содержит SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, или любую их комбинацию.

[0017] 3. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 1 или 2, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая PreS1, содержит SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или обе.

[0018] 4. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-3, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота сконструирована таким образом, что каждая последовательность нуклеиновой кислоты HDAg сгруппирована с последовательностью нуклеиновой кислоты PreS1, и тем, что последовательность нуклеиновой кислоты PreS1 расположена непосредственно по ходу транскрипции от последовательности нуклеиновой кислоты HDAg.

[0019] 5. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 4, дополнительно содержащая по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт аутокаталитического расщепления пептида, причем сгруппированные последовательности нуклеиновых кислот HDAg и PreS1 разделены по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сайт аутокаталитического расщепления пептида.

[0020] 6. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 5, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновых кислот 2А тешовируса свиней-1 (Р2А), 2А вируса ящура (F2A), 2А вируса ринита лошадей A (ERAV) (Е2А) и 2А вируса Thosea asigna (Т2А), и тем, что каждый кодируемый сайт аутокаталитического расщепления пептида необязательно может содержать мотив GSG (глицин-серин-глицин) на своем N-конце.

[0021] 7. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 5 или 6, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит SEQ ID NO: 13.

[0022] 8. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-7, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота кодон-оптимизирована для экспрессии у человека.

[0023] 9. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-8, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 15-24 или 35-36.

[0024] 10. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-9, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 35-36.

[0025] 11. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-10, отличающиеся тем, что по меньшей мере один полипептид HDAg содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или любую их комбинацию.

[0026] 12. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-11, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 содержит SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12, или обе.

[0027] 13. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-12, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 расположена по ходу транскрипции от по меньшей мере одной последовательности полипептида HDAg.

[0028] 14. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-13, отличающиеся тем, что полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 25-34 или 37.

[0029] 15. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-14, отличающиеся тем, что полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 29, 31, 32 или 37.

[0030] 16. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-15, отличающиеся тем, что полипептид экспрессирован рекомбинантным способом.

[0031] 17. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 16, отличающиеся тем, что полипептид экспрессирован рекомбинантным способом в системе млекопитающего, бактерии, дрожжей, насекомого или в бесклеточной системе.

[0032] 18. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-17, дополнительно содержащие адъювант.

[0033] 19. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно альтернативе 18, отличающиеся тем, что адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию.

[0034] 20. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-19, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота включает ДНК.

[0035] 21. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов согласно любой из альтернатив 1-20, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота предоставлена в рекомбинантном векторе.

[0036] 22. Способ индуцирования иммунного ответа у субъекта с применением иммуногенной композиции или комбинации продуктов, представленных в любой из альтернатив 1-21, включающий:

введение указанному субъекту по меньшей мере одной примирующей дозы, содержащей нуклеиновую кислоту; и

введение указанному субъекту по меньшей мере одной стимулирующей дозы, содержащей полипептид.

[0037] 23. Способ согласно альтернативе 22, отличающийся тем, что по меньшей мере одна стимулирующая доза дополнительно содержит адъювант.

[0038] 24. Способ согласно альтернативе 23, отличающийся тем, что адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию.

[0039] 25. Способ согласно любой из альтернатив 22-24, отличающийся тем, что по меньшей мере одну стимулирующую дозу вводят по меньшей мере через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель после введения по меньшей мере одной примирующей дозы или в пределах диапазона времени, заданного любыми двумя из указанных выше моментов времени, например, в пределах 1-48 дней или 1-48 недель.

[0040] 26. Способ согласно любой из альтернатив 22-25, отличающийся тем, что введение осуществляют энтерально, перорально, интраназально, парентерально, подкожно, внутримышечно, внутрикожно или внутривенно, или любой комбинацией перечисленных путей.

[0041] 27. Способ согласно любой из альтернатив 22-26, отличающийся тем, что введение осуществляют в сочетании с противовирусной терапией.

100421 28. Способ согласно альтернативе 27, отличающийся тем, что противовирусная терапия включает введение энтекавира, тенофовира, ламивудина, адефовира, телбивудина, эмтрицитабина, интерферона-а, пегилированного интерферона-а или интерферона альфа-2b, или любой их комбинации.

10043] 29. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D, содержащая:

[0044] (а) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и

[0045] (b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1.

[0046] 30. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 29, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая HDAg, содержит SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, или любую их комбинацию.

[0047] 31. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 29 или 30, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая PreS1, содержит SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или обе.

[0048] 32. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-31, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота сконструирована таким образом, что каждая последовательность нуклеиновой кислоты HDAg сгруппирована с последовательностью нуклеиновой кислоты PreS1, и тем, что последовательность нуклеиновой кислоты PreS1 расположена непосредственно по ходу транскрипции от последовательности нуклеиновой кислоты HDAg.

10049] 33. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 32, дополнительно содержащие по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт аутокаталитического расщепления пептида, причем сгруппированные последовательности нуклеиновых кислот HDAg и PreS1 разделены по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сайт аутокаталитического расщепления пептида.

[0050] 34. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 33, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновых кислот 2А тешовируса свиней-1 (Р2А), 2А вируса ящура (F2A), 2А вируса ринита лошадей A (ERAV) (Е2А) и 2А вируса Thosea asigna (Т2А), и тем, что каждый кодируемый сайт аутокаталитического расщепления пептида необязательно может содержать мотив GSG (глицин-серин-глицин) на своем N-конце.

[0051] 35. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 33 или 34, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит SEQ IDNO: 13.

[0052] 36. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-35, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота кодон-оптимизирована для экспрессии у человека.

[0053] 37. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения или ингибирования гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-36, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 15-24 или 35-36.

[0054] 38. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-37, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота содержит SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 35-36.

[0055] 39. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-38, отличающиеся тем, что по меньшей мере один полипептид HDAg содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или любую их комбинацию.

[0056] 40. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-39, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 содержит SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12, или обе.

[0057] 41. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-40, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 расположена по ходу транскрипции от по меньшей мере одной последовательности полипептида HDAg.

[0058] 42. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения или ингибирования гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-41, отличающиеся тем, что полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 25-34 или 37.

[0059] 43. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-42, отличающиеся тем, что полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 29, 31, 32 или 37.

[0060] 44. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-43, отличающиеся тем, что полипептид экспрессирован рекомбинантным способом.

[0061] 45. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 44, отличающиеся тем, что полипептид экспрессирован рекомбинантным способом в системе млекопитающего, бактерии, дрожжей, насекомого или в бесклеточной системе.

[0062] 46. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-45, дополнительно содержащие адъювант.

[0063] 47. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно альтернативе 46, отличающиеся тем, что адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию.

[0064] 48. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-47, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота включает ДНК.

[0065] 49. Иммуногенная композиция или комбинация продуктов для применения для лечения гепатита В или гепатита D согласно любой из альтернатив 29-48, отличающиеся тем, что нуклеиновая кислота предоставлена в рекомбинантном векторе.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0066] Дополнительно к описанным выше признакам, дополнительные признаки и варианты будут однозначно следовать из приведенного далее описания чертежей и типичных вариантов реализации. Должно быть понятно, что на данных чертежах изображены типичные варианты реализации, и они не предназначены для ограничения объема изобретения.

[0067] На ФИГУРАХ 1A-В изображены конструкции нуклеиновых кислот или полипептидов, содержащие антигены HBV и/или HDV, используемые в данной заявке. Представлены десять конструкций: Дельта-1 (Δ-1, D1), Дельта-2 (Δ-2, D2), Дельта-3 (Δ-3, D3), Дельта-4 (Δ-4, D4), Дельта-5 (Δ-5, D5), Дельта-6 (Δ-6, D6), Дельта-7 (Δ-7, D7), Дельта-8 (Δ-8, D8), Дельта-9 (Δ-9, D9), и Дельта-10 (Δ-10, D10) (ФИГУРА 1А). Вестерн-блоттинг подтвердил, что указанные десять полипептидных конструкций правильно экспрессируются (ФИГУРА 1B). GFP использовали в качестве контроля для вестерн-блоттинга.

[0068] На ФИГУРЕ 2 изображены конструкции, используемые для подхода с композицией для примирования ДНК/стимулирования белком. Композиция ДНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты Δ-4, и белковая композиция содержит полипептидную последовательность либо Δ-7, либо Δ-8, либо слитых Δ-7 и Δ-8.

[0069] На ФИГУРАХ 3A-3Е изображен количественный анализ образующихся пятен интерферона гамма (IFNγ) на 10⁶ клеток в анализе ELISpot, которые соответствуют активации Т-лимфоцитов, очищенной популяции лейкоцитов из сывороток, происходящих из мышей, иммунизированных композициями ДНК HBV/HDV, в ответ на контакт с различными антигенами HBV или HDV. Антигены включают очищенные полипептиды, включая PreS1 A (SEQ ID NO: 11), PreS1 A (SEQ ID NO: 12), HDAg генотипа 1 A (SEQ ID NO: 5, «HDAg гтп 1A-пул 1» и «HDAg гтп 1A-пул 2»), HDAg генотипа 1 В (SEQ ID NO: 6, «HDAg гтп 1B-пул 3» и «HDAg гтп 1B-пул 4»), HDAg генотипа 2 A (SEQ ID NO: 7, «HDAg гтп 2С-пул 5» и «HDAg гтп 2С-пул 6») и HDAg генотипа 2 В (SEQ ID NO: 8, «HDAg гтп 20-пул 7» и «HDAg гтп 20-пул 8»). Мышей умерщвляли через 6 недель после первой иммунизации и объединенные в пулы спленоциты из каждой группы стимулировали в течение 48 часов пулами пептидов HDV 18, соответствующими генотипу 1 (пулы 1-4) и генотипу 2 (пулы 5-8). Пулы 1 и 2 генотипа 1 относятся к последовательности/изоляту А, тогда как пулы 3 и 4 соответствуют последовательности/изоляту В. Аналогично, пулы 5 и 6 генотипа 2 относятся к последовательности/изоляту С и пулы 7 и 8 генотипа 2 относятся к последовательности/изоляту D. Каждый пул содержал 20 или 221 (для пулов 1 и 5) 15-мерный пептид с перекрыванием 10 АК. Конканавалин А («КонА») использовали в качестве положительного контроля, и два пептида овальбумина («OVA Th» и «OVA CTL») и ростовую среду («среда») использовали в качестве отрицательных контролей. Для каждой стимулированной пептидом группы проводили запуск в трех повторах, и столбики показывают среднее количество образующих пятна IFNγ клеток (SFC) на 10⁶ клеток со стандартной ошибкой. Отсечка была установлена на 100 SFC/10⁶ спленоцитов. Концентрации антигенов представлены.

[0070] На ФИГУРАХ 4A-4С изображен количественный анализ титра антитела IgG против PreS1 в сыворотках, происходящих из мышей, иммунизированных композициями ДНК HBV/HDV. Конструкции Δ-1-Δ-10 исследовали на выработку антител IgG против консенсусных последовательностей PreS1 А и PreS1 В у мышей (по 5 мышей на группу). На ФИГУРАХ 4A-4В рассмотрена реактивность против аминокислот 2-48 PreS1. На ФИГУРЕ 4С рассмотрена перекрестная реактивность против (под-)генотипов HBV A1, А2, В, В2, С, D1, E1 hF.

[0071] На ФИГУРАХ 5A-5С изображен количественный анализ образующихся пятен интерферона гамма (IFNγ) на 10⁶ клеток в анализе ELISpot очищенной популяции лейкоцитов из сывороток, происходящих из мышей C57BL/6 или трансгенных по HLA-A2 мышей HHD, иммунизированных композицией ДНК Δ-4, или непримированных мышей C57BL/6, в ответ на контакт с различными антигенами или пептидами HBV или HDV. Антигены включают очищенные полипептиды, включая PreS1 A (SEQ ID NO: 11), PreS1 A (SEQ ID NO: 12), пул, содержащий генотипы HDAg 1 А и 1 В (SEQ ID NO: 5 и 6, «гтп 1-пул 1», «гтп 1-пул 2», «гтп 1-пул 3», «гтп 1-пул 4»), пул, содержащий генотипы HDAg 2 А и 2 В (SEQ ID NO: 7 и 8, «гтп 2-пул В1», «гтп 2-пул В2», «гтп 2-пул В3», «гтп 2-пул В4»), пулы фрагментов пептидов HDAg, содержащие пептиды KLEDDNPWL, KLEEENPWL и FPWDILFPA («пеп-3-пул»), и отдельные пептиды HDAg KLEDDNPWL, KLEEENPWL и FPWDILFPA. Конканавалин А («КонА») использовали в качестве положительного контроля, и два пептида овальбумина («OVA Th» и «OVA CTL») и ростовую среду («среда») использовали в качестве отрицательных контролей. Концентрации антигенов представлены.

[0072] На ФИГУРАХ 6A-6С изображен количественный анализ титра IgG против PreS1 у Новозеландских белых кроликов, иммунизированных композициями ДНК Δ-3 или Δ-4. Собирали сыворотки из кроликов и исследовали с помощью ELISA против консенсусных пептидов PreS1А и PreS1B (ФИГУРА 6В). Антисыворотку вакцинированных кроликов также исследовали на перекрестную реактивность с (под-)генотипами HBV A1, А2, В, В2, С, D1, Е1 и F (ФИГУРА 6С). Столбики диаграммы показывают средние конечные титры против PreS1 для каждой группы, определенные как конечное последнее разведение сыворотки, дающее ОП на 405 нм в три раза выше, чем ОП неиммунизированных сывороток при таком же разведении. Сыворотки серийно титровали шестикратными разведениями, начиная с 1:60.

[0073] На ФИГУРЕ 6D показан процент реактивности антисывороток вакцинированных D-4 кроликов против PreS1 различных (под-)генотипов HBV. Антисыворотки вакцинированных D-4 кроликов в возрасте шести недель исследовали на реактивность (ОП на 405 нм) против (под-)генотипов HBV D1, F, А1, С, А2, В, В2 и Е1 с помощью ELISA. Используя отдельные 20-мерные пептиды PreS1 с перекрыванием десяти АК, соответствующие каждому типу HBV из АК 2-21, 12-31, 22-41 и 32-48, нейтрализующие эпитопы преимущественно локализовали на участке АК 22-41 и 32-48 генотипа D1, о чем свидетельствует наиболее высокий процент реактивности, за которым следовали (под-)типы С, Е1 и А1 на том же участке АК.

[0074] На ФИГУРАХ 7A-7С изображен количественный анализ образующихся пятен интерферона гамма (IFNy) в анализе ELISpot на 10⁶ клеток очищенной популяции лейкоцитов из сывороток, полученных из мышей C57BL/6, иммунизированных только ДНК Д-4, только белком Δ-7 или примирующей/стимулирующей композицией ДНК Δ-4/белок Δ-8. Антигены включают очищенные полипептиды, включая PreS1 A (SEQ ID NO: 11), PreS1 A (SEQ ID NO: 12), пул, содержащий генотипы HDAg 1 А и 1 В (SEQ ID NO: 5 и 6, «гтп 1-пул 1», «гтп 1-пул 2», «гтп 1-пул 3», «гтп 1-пул 4»), и пул, содержащий генотипы HDAg 2 А и 2 В (SEQ ID NO: 7 и 8, «гтп 2-пул 5», «гтп 2-пул 6», «гтп 2-пул 7»_з «гтп 2-пул 8»). Конканавалин А («КонА») использовали в качестве положительного контроля, и два пептида овальбумина («OVA Th» и «OVA CTL»), ДМСО и ростовую среду («среда») использовали в качестве отрицательных контролей. Концентрации антигенов представлены.

[0075] На ФИГУРАХ 8A-8С изображен количественный анализ титра IgG против PreS1 у мышей C57BL/6, иммунизированных только ДНК, только белком или композициями для примирования ДНК/стимулирования белком HBV/HDV.

[0076] На ФИГУРЕ 9 изображен количественный анализ титра IgG против PreS1 у кроликов, иммунизированных только ДНК, только белком или композициями для примирования ДНК/стимулирования белком HBV/HDV.

[00771 На ФИГУРАХ 10A-10В изображено защитное действие против инфекции HBV через 1, 2, 3, 4, 6 и 8 недель после первой инокуляции, что определили на основании титров HBV в каждый момент времени. Каждая линия показывает одну отдельную мышь (ФИГУРА 10А). Две мыши отрицательного контроля (серые линии) получили IgG неиммунизированных кроликов и три мыши (красные линии) получили D4 PreS1 IgG. Одна мышь из группы, которой вводили PreS1-IgG, умерла на 4 неделе, следовательно, для этой мыши доступны только измерения на 1, 2 и 3 неделе. Не наблюдали значимых различий между группами в отношении уровней в сыворотке аланинтрансферазы, аспарагинтрансферазы, щелочной фосфатазы или билирубина (ФИГУРА 10В).

[0078] На ФИГУРАХ 11A-D изображена оценка смесей пептидов D-7 и D-8 (10 мкг каждого для введения мышам) с различными адъювантами. Исследовали адъюванты QS-21, MF59 и квасцы. Композиции ДНК D-4, которые вводили внутримышечно с помощью электропорации, использовали в качестве контроля. На ФИГУРЕ 11А показан график введения доз и примеры конечных титров с исследованными адъювантами. На ФИГУРЕ 11В показан % реактивности у отдельных мышей для каждого условия, который оценивали с помощью ELISA. Ось х («1, 3, 10, 30, 0») соответствует идентификационным номерам отдельных мышей. На ФИГУРЕ ПС показана активация IFNy спленоцитов консенсусными пептидами PreS1 HBV и антигенов HDV, что оценивали с помощью ELISpot. На ФИГУРЕ 11D показаны конечные титры антитела против PreS1 против пептидов PreS1А и PreS1B.

[0079] На ФИГУРАХ 12A-D изображено сравнение примирования/стимулирования только смесью пептидов D-7 и D-8, только слитым пептидом D-7+D-8 и примирования ДНК D-4 и стимулирования смесью пептидов D-7 и D-8 с примированием/стимулированием только ДНК D-4 и непримированными контролями. На ФИГУРЕ 12А показана активация IFNγ спленоцитов консенсусными пептидами PreS1 HBV и антигенов HDV, что оценивали с помощью ELISpot. На ФИГУРЕ 12 В показаны уровни антитела против PreS1А, которые оценивали через 2 недели после первого раунда введения. На ФИГУРЕ 12С показаны уровни антитела против PreS1А, которые оценивали через 2 недели после второго раунда введения. На ФИГУРЕ 12D показаны уровни антитела против PreS1B, которые оценивали через 2 недели после второго раунда введения. Подписи к ФИГУРАМ 12В-D соответствуют идентификационным номерам отдельных мышей.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0080] Несмотря на профилактические вакцины и противовирусные методы лечения, хроническая инфекция вирусом гепатита В (HBV) на сегодняшний день поражает более 250 миллионов людей по всему миру. Один миллион хронических носителей погибают каждый год вследствие связанных с печенью осложнений, вызванных HBV, таких как цирроз печени и, в конечном счете, гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК). Вирус гепатита D (HDV), РНК-сателлитный вирус для HBV, который «крадет» поверхностный антиген у HBV (HBsAg), коинфицирует 15-25 миллионов носителей HBV во всем мире и усугубляет прогрессирование заболевания. До сих пор не существует эффективного функционального лечения хронической инфекции HBV или HDV. Современное стандартное лечение HBV состоит из аналогов нуклеозидов (NA), которые ингибируют функцию обратной транскриптазы (ОТ) полимеразы HBV. Это предотвращает созревание вируса посредством блокирования синтеза частично дцДНК внутри капсида. Таким образом, NA только подавляют репликацию вируса во время терапии. Это является следствием того, что блокирование ОТ не влияет ни на продукцию и высвобождение белка (включая HBsAg), ни на синтез ковалентно замкнутой кольцевой ДНК, главной причины персистенции HBV. Пожизненный прием NA снижает, но не исключает риск ГКК. Режим, включающий по меньшей мере один год введения пегилированного интерферона (1Г>1)-альфа, на сегодняшний день является рекомендуемым лечением хронического HDV; тем не менее, стойкие ответы редки. Было показано, что комбинированное лечение пегилированным IFN-альфа и NA имеет ограниченную эффективность против HDV и HBV.

[0081] HBV использует несколько стратегий, чтобы ускользнуть от иммунного ответа хозяина. Хроническое присутствие белков HBV вызывает дисфункцию Т-клеток. Инфицированные HBV клетки продуцируют в повышенном количестве субвирусные частицы HBsAg, преимущественно содержащие малый HBsAg (SHBsAg), чтобы блокировать популяцию нейтрализующих антител, направленных против SHBsAg. Это гарантирует выживаемость вирусных частиц, на поверхности которых содержится больше средних белков HBsAg (MHBsAg; содержащих S и PreS2) и больших белков HBsAg (LHBsAg; содержащих S, PreS2 и PreS1). Важно отметить, что домен PreS1 отвечает за связывание с Иа⁺-таурохолат-котранспортирующим полипептидом (NTCP)-рецептором для HBV на гепатоцитах. Таким образом, явным способом нацеливания на инфекционные частицы HBV и предотвращения инфицирования новых гепатоцитов будет повышение уровня антител против домена PreS1 вируса.

[0082] В настоящей заявке описано, что для создания иммунотерапии, нацеленной на инфекцию как HBV, так и HDV, чтобы вызвать продукцию антител против PreS1 и Т-клеток, специфичных к HBV и HDV, получали химерные гены, содержащие PreS1 и большой антиген HDV в различных комбинациях (Фигура 1А). Преимущество соединения PreS1 с HDAg состоит в том, что HDAg будет действовать как гетерологичный носитель Т-клеточного эпитопа у пациентов, которые моноинфицированы HBV. Таким образом, эти специфичные к HDAg Т-клетки поддерживают длительную эндогенную продукцию антител против PreS1, которые блокируют проникновение вируса и позволяют обойти потребность в специфичных к HBV Т-клетках. В действительности, >90% носителей HBV моноинфицированы HBV, и у этих пациентов гетерологичный HDAg будет примировать здоровые непримированные Т-клетки, которые поддерживают примирование специфичных к HBV ответов. Кроме того, вероятно, что специфичные к HDAg Т-клетки и антитела против PreS1 предотвращают суперинфекцию HDV у этих пациентов. Для того чтобы индуцировать как нейтрализующие антитела, так и Т-клетки, применяли генетическую иммунизацию, так как показали, что эта стратегия активирует иммунный ответ на HBV. В целом, эта стратегия блокирования проникновения вируса дополняет ингибиторы созревания и ингибиторы сборки капсида, которые находятся в разработке на данный момент, чтобы добиться продолжительных ответов вне терапии против инфекции HBD и/или HDV.

[0083] Варианты реализации, предложенные в данной заявке, относятся к иммуногенным композициям или комбинациям продуктов сконструированных нуклеиновых кислот, генов, пептидов или белков гепатита В (HBV) и гепатита D (HDV), которые можно применять, чтобы вызвать иммунный ответ против инфекции HBV или HDV. Применение химерных генов и химерных белков, содержащих нуклеиновые кислоты, гены, пептиды или белки HBV и HDV, было описано, например, в WO 2017/132332, которая настоящим явно полностью включена в данную заявку посредством ссылки.

[0084] В следующем подробном описании есть ссылки на сопроводительные чертежи, которые являются его частью. На чертежах одинаковые символы обычно обозначают одинаковые компоненты, если контекстом не определено иное. Иллюстрирующие варианты реализации, описанные в подробном описании, чертежах и формуле изобретения, не подразумевают ограничения. Можно использовать другие варианты реализации, и можно осуществить другие изменения, не отклоняясь от сущности и объема объекта изобретения, представленного в данной заявке. Будет сразу понятно, что аспекты настоящего изобретения, описанные в общих чертах в данной заявке и проиллюстрированные на Фигурах, можно расположить, заменить, объединить, разделить и разработать в большом разнообразии различных конфигураций, все из которых явно предусмотрены в данной заявке.

[0085] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данной заявке, имеют те же значения, которые обычно понимает средний специалист в данной области техники. Все патенты, заявки на патент, опубликованные заявки на патент и другие публикации, на которые ссылаются в данной заявке, явно полностью включены в данную заявку посредством ссылки, если не указано иное. В случае, когда существует множество определений термина в данной заявке, определения, приведенные в данном разделе, имеют преимущественную силу, если не указано иное.

[0086] Формы единственного числа используют в данной заявке по отношению к одному или более чем одному (например, по меньшей мере одному) из грамматических объектов. В качестве примера, «элемент» означает один элемент или более чем один элемент.

[0087] Термины «приблизительно» или «около» в данной заявке относятся к количеству, уровню, значению, числу, частоте, проценту, измерению, размеру, величине, массе или длине, которые варьируются на целые 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1% относительно указанного количества, уровня, значения, числа, частоты, процента, измерения, размера, величины, массы или длины.

[0088] По всему тексту настоящего описания, если по контексту не требуется иное, термины «содержат», «содержит» и «содержащий» следует понимать как подразумевающие включение указанного этапа или элемента или группы этапов или элементов, но не исключение любого другого этапа или элемента или группы этапов или элементов.

[0089] Под формулировкой «состоящий из» подразумевают включающий, и она ограничена тем, что следует за формулировкой «состоящий из». Таким образом, формулировка «состоящий из» указывает на то, что перечисленные элементы необходимы или обязательны, и что другие элементы не могут присутствовать. Под формулировкой «состоящий по существу из» подразумевают включение любых элементов, перечисленных после указанной формулировки, и ограничение такими другими элементами, которые не препятствуют или способствуют активности или действию, указанным в настоящем описании для перечисленных элементов. Таким образом, формулировка «состоящий по существу из» указывает на то, что перечисленные элементы необходимы или обязательны, но что другие элементы необязательны и могут присутствовать или не присутствовать в зависимости от того, оказывают ли они или не оказывают существенного влияния на активность или действие перечисленных элементов.

[0090] При осуществлении настоящего изобретения будут применяться, если конкретно не указано противоположное, обычные способы молекулярной биологии и технологии рекомбинантных ДНК, находящиеся в рамках компетенции в данной области, множество из которых описано ниже с целью иллюстрирования. Такие методики полностью объяснены в литературе. См., например, Sambrook, el al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Зе издание, 2000); DNA Cloning: A Practical Approach, тома 1 и II (D. Glover, ред.); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait, ред., 1984); Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications (P. Herdewijn, ред., 2004); Nucleic Acid Hybridization (B. Hames & S. Higgins, ред., 1985); Nucleic Acid Hybridization: Modern Applications (Buzdin и Lukyanov, ред., 2009); Transcription and Translation (B. Hames & S. Higgins, ред., 1984); Animal Cell Culture (R. Freshney, ред., 1986); Freshney, R.I. (2005) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, 5oe изд. Hoboken NJ, John Wiley & Sons; B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (Зе издание, 2010); Farrell, R., RNA Methodologies: A Laboratory Guide for Isolation and Characterization (3e издание, 2005).

10091] Термин «чистота» любого данного вещества, соединения или материала в данной заявке относится к фактической представленности вещества, соединения или материала по сравнению с ожидаемой представленностью. Например, вещество, соединение или материал может быть по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% чистым, включая все десятичные доли между указанными значениями. На чистоту могут влиять нежелательные примеси, включая, но не ограничиваясь побочными продуктами, изомерами, энантиомерами, продуктами деградации, растворителем, носителем, средой или примесями, или любой их комбинацией. Чистоту можно измерить с помощью технологий, включая, но не ограничиваясь хроматографией, жидкостной хроматографией, газовой хроматографией, спектроскопией, спектрометрией в УФ и видимом диапазонах, инфракрасной спектрометрией, масс-спектрометрией, ядерным магнитным резонансом, гравиметрией или титрованием, или любой их комбинацией.

[0092] Термины «функция» и «функциональный» в данной заявке относятся к биологической, ферментативной или терапевтической функции.

[0093] Формулировки «эффективное количество» или «эффективная доза» в данной заявке относятся к количеству, достаточному, чтобы добиться желательного результата и, соответственно, будут зависеть от ингредиента и желательного результата. Тем не менее, после того как станет известен желательный эффект, определение эффективного количества находится в рамках компетенции специалиста в данной области техники.

[0094] Обычно «планки погрешностей», приведенные на фигурах, представляют собой стандартную ошибку среднего значения.

[0095] Термины «состав» и «композиция», используемые взаимозаменяемо в данной заявке, представляют собой эквивалентные термины, относящиеся к смеси химически связанных веществ для введения субъекту.

[0096] Термин «выделенный/изолированный» в данной заявке относится к материалу, который главным образом или по существу свободен от компонентов, которые обычно сопутствуют ему в природном состоянии. Например, «выделенная клетка» в данной заявке включает клетку, которая была очищена из окружения или организмов в ее встречающемся в природе состоянии, клетку, которая была удалена из субъекта или из культуры, например, она в значительной мере не связана с веществами in vivo или in vitro.

[0097] Термин «субъект» в данной заявке имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и относится к животному, которое является объектом лечения, ингибирования или улучшения, наблюдения или эксперимента. Термин «животное» имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и включает холоднокровных и теплокровных позвоночных и/или беспозвоночных, таких как рыбы, моллюски или пресмыкающиеся и, в частности, млекопитающие. Термин «млекопитающее» имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и включает, но не ограничен мышами, крысами, кроликами, морскими свинками, собаками, кошками, овцами, козами, коровами, лошадьми, приматами, такими как люди, обезьяны, шимпанзе или человекообразные обезьяны. В некоторых вариантах реализации субъект представляет собой человека.

[0098] В некоторых вариантах реализации, описанных в данной заявке, предложен выбор нуждающегося субъекта или пациента. В некоторых вариантах реализации выбирают пациента, который нуждается в лечении вирусной инфекции. В некоторых вариантах реализации выбирают пациента, который ранее получал лечение от вирусной инфекции. В некоторых вариантах реализации выбирают пациента, который ранее получал лечение от риска возникновения вирусной инфекции. В некоторых вариантах реализации выбирают пациента, у которого развился рецидив вирусной инфекции. В некоторых вариантах реализации выбирают пациента, у которого развилась устойчивость к методам лечения вирусной инфекции. В некоторых вариантах реализации выбирают пациента, у которого может быть любая комбинация указанных выше критериев селекции.

[0099] Термины «лечить», «лечение», «терапевтический» или «терапия» в данной заявке имеют обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и не обязательно означают полное излечение или устранение заболевания или состояния. Термин «лечить» или «лечение» (и что хорошо известно в данной области техники) также означает подход к получению полезных или желательных результатов в отношении состояния субъекта, включая клинические результаты. Полезные или желательные клинические результаты могут включать, но не ограничены перечисленными: облегчение или снижение выраженности одного или более симптомов или состояний, уменьшение масштаба заболевания, стабилизацию (т.е., отсутствие ухудшения) состояния заболевания, предотвращение передачи или распространения заболевания, отсрочивание или замедление прогрессирования заболевания, снижение выраженности или временное облегчение болезненного состояния, уменьшение повторной встречаемости заболевания и ремиссию, либо частично, либо полностью и либо детектируемо, либо не детектируемо. Термины «лечить» и «лечение» в данной заявке также включают профилактическое лечение. Способы лечения включают введение субъекту терапевтически эффективного количества активного агента. Этап введения может состоять из однократного введения или может включать серию введений. Композиции вводят субъекту в количестве и в течение периода времени, достаточного для лечения пациента. Протяженность периода лечения зависит от различных факторов, таких как тяжесть состояния, возраст и генетический профиль пациента, концентрация активного агента, активность композиций, применяемых для лечения, или их комбинация. Также будет понятно, что эффективная дозировка агента, применяемого для лечения или профилактики, может повышаться или снижаться в ходе конкретного режима лечения или профилактики. Изменения в дозировке могут являться результатом и становиться ясными после стандартных диагностических анализов, известных в данной области техники. В некоторых случаях может потребоваться постоянное введение.

[0100] Термин «ингибировать» в данной заявке имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и может относиться к снижению или предотвращению вирусной инфекции. Снижение может быть на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%, или на величину, которая находится в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше значений. В данной заявке термин «отсрочивать» имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и относится к замедлению, отсрочке или откладыванию явления, такого как вирусная инфекция, на более позднее время, чем ожидаемое в противном случае. Отсрочивание может представлять собой отсрочивание на 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или величину в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше значений. Термины ингибировать и отсрочивать не обязательно указывают на 100% ингибирование или отсрочивание. Может осуществляться частичное ингибирование или отсрочивание.

[0101] Термин «иммуногенная композиция» в данной заявке относится к веществу или смеси веществ, включая, но не ограничиваясь перечисленными: антигены, эпитопы, нуклеиновые кислоты, пептиды, полипептиды, белки, полисахариды, липиды, гаптены, токсоиды, инактивированные организмы или аттенуированные организмы, или любую их комбинацию, предназначенным для того, чтобы вызвать иммунный ответ при введении хозяину. Иммунный ответ включает как врожденный, так и приобретенный иммунный ответ, последний из которых создает продолжительную иммунологическую память посредством клеток, таких как Т-клетки памяти и В-клетки памяти. Антитела, созданные во время первичного иммунного ответа на иммуногенную композицию, можно получить при последующих провокациях теми же антигенами, эпитопами, нуклеиновыми кислотами, пептидами, полипептидами, белками, полисахаридами, липидами, гаптенами, токсоидами, инактивированными организмами или аттенуированными организмами, или живым организмом или патогеном, на котором выставлены указанные антигены, эпитопы, нуклеиновые кислоты, пептиды, полипептиды, белки, полисахариды, липиды, гаптены или токсоиды, или любая их комбинация. Таким образом, иммуногенная композиция может служить в качестве вакцины против определенного патогена. Иммуногенные композиции также могут содержать один или более адъювантов, чтобы стимулировать иммунный ответ и повысить эффективность защитного иммунитета.

[0102] Термин «комбинация продуктов» в данной заявке относится к набору из двух или более отдельных соединений, веществ, материалов или композиций, которые можно применять совместно для единой функции. В некоторых вариантах реализации комбинация продуктов содержит по меньшей мере одну композицию нуклеиновых кислот и по меньшей мере одну композицию полипептидов, которые применяют совместно, чтобы вызвать иммунный ответ при введении хозяину, необязательно в большей степени, чем был бы вызван, если бы только один тип композиции подлежал введению.

[0103] Термины «нуклеиновая кислота» или «молекула нуклеиновой кислоты» в данной заявке относятся к полинуклеотидам, таким как дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) или рибонуклеиновая кислота (РНК), олигонуклеотидам, фрагментам, полученным в результате полимеразной цепной реакции (ПЦР), и фрагментам, полученным с помощью любого из способов лигирования, расщепления, действия эндонуклеаз и действия экзонуклеаз. Молекулы нуклеиновых кислот могут состоять из мономеров, которые представляют собой встречающиеся в природе нуклеотиды (такие как ДНК и РНК), или аналоги встречающихся в природе нуклеотидов (например, энантиомерные формы встречающихся в природе нуклеотидов), или комбинацию обоих. Модифицированные нуклеотиды могут иметь изменения в сахарных группах и/или в группах пиримидинового или пуринового основания. Модификации сахара включают, например, замену одной или более гидроксильных групп на галогены, алкильные группы, амины и азидогруппы, или сахара могут быть функционализированы с образованием простых или сложных эфиров. Более того, всю сахарную группу можно заменить на стерически и электронно близкие структуры, такие как азасахара и карбоциклические аналоги сахара. Примеры модификаций в группе основания включают алкилированные пурины и пиримидины, ацилированные пурины или пиримидины или другие хорошо известные гетероциклические заместители. Мономеры нуклеиновых кислот могут быть связаны фосфодиэфирными связями или аналогами таких связей. Аналоги фосфодиэфирных связей включают фосфоротиоатную, фосфородитиоатную, фосфороселеноатную, фосфородиселеноатную, фосфороанилотиоатную, фосфоранилидатную или фосфорамидатную связь. Термин «молекула нуклеиновой кислоты» также включает так называемые «пептид-нуклеиновые кислоты», которые содержат встречающиеся в природе или модифицированные основания нуклеиновых кислот, присоединенные к полиамидному остову. Нуклеиновые кислоты могут быть либо одноцепочечными, либо двухцепочечными. Термин «олигонуклеотид» можно использовать взаимозаменяемо с термином «нуклеиновая кислота», и он может относиться либо к двухцепочечной, либо к одноцепочечной ДНК или РНК. Нуклеиновая кислота или нуклеиновые кислоты могут содержаться в векторе нуклеиновых кислот или конструкции нуклеиновых кислот (например, плазмиде, вирусе, бактериофаге, космиде, фосмиде, фагмиде, бактериальной искусственной хромосоме (ВАС), дрожжевой искусственной хромосоме (YAC) или искусственной хромосоме человека (НАС)), которые можно применять для амплификации и/или экспрессии нуклеиновой кислоты или нуклеиновых кислот в различных биологических системах. Обычно, вектор или конструкция также будут содержать элементы включая, но не ограничиваясь перечисленными: промоторы, энхансеры, терминаторы, индукторы, участки связывания рибосомы, сайты инициации трансляции, инициирующие кодоны, стоп-кодоны, сигналы полиаденилирования, точки начала репликации, сайты клонирования, сайты множественного клонирования, сайты ферментов рестрикции, эпитопы, репортерные гены, маркеры селекции, маркеры селекции антибиотиком, нацеливающие последовательности, метки для очистки пептидов или вспомогательные гены, или любую их комбинацию.

[0104] Нуклеиновая кислота или молекула нуклеиновой кислоты может содержать одну или более последовательностей, кодирующих различные пептиды, полипептиды или белки. Такие одна или более последовательностей могут быть соединены в одной и той же нуклеиновой кислоте или молекуле нуклеиновой кислоты рядом друг с другом или с дополнительными нуклеиновыми кислотами между ними, например, линкерами, повторами или сайтами ферментов рестрикции, или любой другой последовательностью, длина которой составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200 или 300 оснований, или любую длину в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше длин. Термин «по ходу транскрипции» на нуклеиновой кислоте в данной заявке относится к последовательности, которая расположена после 3'-конца предыдущей последовательности, на цепи, содержащей кодирующую последовательность (смысловой цепи), если нуклеиновая кислота двухцепочечная. Термин «против хода транскрипции» на нуклеиновой кислоте в данной заявке относится к последовательности, которая расположена перед 5'-концом следующей последовательности на цепи, содержащей кодирующую последовательность (смысловой цепи), если нуклеиновая кислота двухцепочечная. Термин «сгруппированные» на нуклеиновой кислоте в данной заявке относится к двум или более последовательностям, которые находятся вблизи либо непосредственно, либо с дополнительными нуклеиновыми кислотами между ними, например, линкерами, повторами или сайтами ферментов рестрикции, или любой другой последовательностью, длина которой составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200 или 300 оснований, или любую длину в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше длин, но, как правило, не с последовательностью между ними, которая кодирует функционирующий или каталитический полипептид, белок или домен белка.

[0105] Термин «кодон-оптимизированный», относящийся к нуклеиновой кислоте, в данной заявке относится к замене кодонов нуклеиновой кислоты, чтобы усилить или максимизировать трансляцию в хозяине конкретного вида без изменения полипептидной последовательности, на основании видоспецифичных предпочтений к использованию кодонов и относительной доступности каждой аминоацил-тРНК в цитоплазме целевой клетки. Оптимизация кодонов и методики осуществления такой оптимизации известны в данной области техники. Программы, содержащие алгоритмы для оптимизации кодонов, известны специалистам в данной области техники. Программы могут включать, например, алгоритмы OptimumGene, GeneGPS® и т.д. Кроме того, синтетические кодон-оптимизированные последовательности можно получить из коммерческих источников, например, от Integrated DNA Technologies и других коммерчески доступных сервисов секвенирования ДНК. Для специалиста в данной области понятно, что уровни экспрессии генов зависят от множества факторов, таких как последовательности промотора и регуляторные элементы. Обнаружили, что у большинства бактерий виды тРНК узнают небольшие подгруппы кодонов, что приводит к трансляционной селекции, которая может послужить важным ограничением экспрессии белка. В данном аспекте, множество синтетических генов можно разработать таким образом, чтобы повысить уровень экспрессии белка с них.

[0106] Нуклеиновые кислоты, описанные в данной заявке, содержат нуклеооснования. Первичные, канонические, природные или немодифицированные основания представляют собой аденин, цитозин, гуанин, тимин и урацил. Другие нуклеооснования включают, но не ограничены перечисленными: пурины, пиримидины, модифицированные нуклеооснования, 5-метилцитозин, псевдоуридин, дигидроуридин, инозин, 7-метилгуанозин, гипоксантин, ксантин, 5,6-дигидроурацил, 5-гидроксиметилцитозин, 5-бромурацил, изогуанин, изоцитозин, аминоаллил-основания, меченые красителем основания, флуоресцентные основания или меченые биотином основания.

[0107] Термины «пептид», «полипептид» и «белок» в данной заявке относятся к макромолекулам, состоящим из аминокислот, связанных пептидными связями. Множество функций пептидов, полипептидов и белков известно в данной области, и они включают, но не ограничены функциями ферментов, структурной, транспортной, защитной функциями, функциями гормонов или сигнальными функциями. Пептиды, полипептиды и белки часто, но не всегда, получают биологическим способом с помощью рибосомного комплекса с применением матрицы нуклеиновой кислоты, хотя способы химического синтеза также доступны. Путем манипуляций над матрицей нуклеиновой кислоты, пептидом, полипептидом и белком можно осуществить мутации, такие как замены, делеции, укорачивания, добавления, дупликации или слияния более чем одного пептида, полипептида или белка. Такие слияния более чем одного пептида, полипептида или белка можно осуществить в одной и той же молекуле рядом друг с другом или с дополнительными аминокислотами между ними, например, линкерами, повторами, эпитопами или метками, или любой другой последовательностью, длина которой составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200 или 300 оснований, или любую длину в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше длин.

[0108] В некоторых вариантах реализации последовательности нуклеиновых кислот или пептидов, представленные в данной заявке и используемые в примерах, функциональны в различных биологических системах, включая, но не ограничиваясь клетками человека, мыши, кролика, Е. coli, дрожжей и млекопитающих. В других вариантах реализации последовательности нуклеиновых кислот или пептидов, подобные на 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%, или любой процент в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше процентов подобия, последовательностям нуклеиновых кислот или пептидов, представленным в данной заявке и используемым в примерах, также можно применять, не влияя на функцию последовательностей в биологических системах. В данной заявке термин «подобие» относится к последовательности нуклеиновой кислоты или пептида, имеющей такой же общий порядок нуклеотидов или аминокислот, соответственно, как и в опорной последовательности нуклеиновой кислоты или пептида, с определенными изменениями, такими как замены, делеции, повторы или вставки внутри последовательности. В некоторых вариантах реализации две последовательности нуклеиновых кислот, подобные настолько мало как на 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, могут кодировать такой же полипептид благодаря содержанию различных кодонов, которые кодируют одну и ту же аминокислоту во время трансляции.

[0109] Термин «экспрессирован рекомбинантным способом» в данной заявке относится к получению белков в оптимизированных или приспособленных биологических системах. Эти системы имеют преимущества над экспрессией белка в природном хозяине, включая, но не ограничиваясь высокой экспрессией (сверхэкспрессией), легкостью очистки, легкостью трансформации, способностью к индуцированию, низкой стоимостью или стабильностью белка. В некоторых вариантах реализации белки экспрессируют в системах экспрессии в млекопитающем, бактериях, дрожжах, насекомых или в бесклеточных системах экспрессии рекомбинантных белков. У каждой системы есть свои преимущества или недостатки. Например, бактериальные системы экспрессии сильно оптимизированы для сверхэкспрессии, но могут вызывать неправильное сворачивание или агрегацию полученного белка, дрожжевые системы пригодны, когда требуются посттрансляционные модификации, и системы экспрессии в насекомом и млекопитающем пригодны для правильного сплайсинга РНК, который происходит в организмах более высокого уровня. В некоторых вариантах реализации Δ-7, Δ-8 и другие рекомбинантные полипептиды получают и очищают из клеток млекопитающего, человека, первичных, иммортал изо ванных клеток, клеток рака, стволовых клеток, фибробластов, клеток эмбриональной почки человека (HEK) 293, клеток яичника китайского хомячка (СНО), бактериальных клеток, клеток Escherichia coli, дрожжей, Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, насекомого, Spodoptera frugiperda SJ9 или S. frugiperda Sf21l, или из бесклеточной системы. В некоторых вариантах реализации гены, векторы или конструкции для экспрессии доставляют в рекомбинантные системы экспрессии в виде плазмид, бактериофагов, вирусов, аденоассоциированных вирусов (AAV), бакуловируса, космид, фосмид, фагмид, ВАС, YAC или НАС. Более подробное обсуждение рекомбинантных систем экспрессии см. в Gomes et al. «An Overview of Heterologous Expression Host Systems for the Production of Recombinant Proteins» ((2016) Adv. Anim. Vet. Sci. 4(7):346-356), которая настоящим явно полностью включена в данную заявку посредством ссылки.

[0110] Термин «HDAg» в данной заявке относится к гену или белку антигена гепатита D. Существуют малая (24 кДа) и большая (27 кДа, 213 аминокислот, исключая инициирующий кодон-метионин) изоформы HDAg, и они транслируются с одной открытой рамки считывания в геноме HDV. Дезаминирование аденозина в стоп-кодоне UAG в кодоне 196 кодирующей последовательности позволяет трансляции продолжаться, в результате чего образуется большая изоформа. Если явно не указано иное, варианты реализации, описанные в данной заявке, включают большую изоформу HDAg. В некоторых вариантах реализации последовательности HDAg содержат по меньшей мере одну из четырех различных последовательностей штамма HDAg: «HDAg генотипа 1 А», «HDAg генотипа 1 В», «HDAg генотипа 2 А» или «HDAg генотипа 2 В». В некоторых вариантах реализации последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая по меньшей мере один полипептид HDAg, содержит последовательность нуклеиновой кислоты HDAg генотипа 1 A (SEQ ID NO: 1), HDAg генотипа 1 В (SEQ ID NO: 2), HDAg генотипа 2 A (SEQ ID NO: 3) или HDAg генотипа 2 В (SEQ ID NO: 4). В некоторых вариантах реализации полипептид, содержащий по меньшей мере один полипептид HDAg, содержит полипептидную последовательность HDAg генотипа 1 A (SEQ ID NO: 5), HDAg генотипа 1 В (SEQ ID NO: 6), HDAg генотипа 2 A (SEQ ID NO: 7) или HDAg генотипа 2 В (SEQ ID NO: 8).

[0111] Термин «PreS1» в данной заявке относится к фрагменту N-концевого домена на большом поверхностном антигене HBV (HBsAg). Фрагмент PreS1 длиной 47 аминокислот из N-концевого домена длиной 108-119 аминокислот из большого HBsAg эффективно вызывает иммунный ответ и индуцирует высокий титр антител против PreS1/против HBV в моделях у млекопитающих. В некоторых вариантах реализации последовательности PreS1 содержат по меньшей мере одну из двух различных консенсусных последовательностей PreS1: «PreS1 А» и/или «PreS1 В». В некоторых вариантах реализации последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая по меньшей мере один полипептид PreS1, содержит последовательность нуклеиновой кислоты PreS1A (SEQ ID NO: 9) или PreS1 В (SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах реализации полипептид, содержащий по меньшей мере один полипептид PreS1, содержит полипептидную последовательность PreS1 A (SEQ ID NO: 11) или PreS1 В (SEQ ID NO: 12).

[0112] В некоторых вариантах реализации консенсусные последовательности PreS1А и PreS1 В HBV получают или выводят из подобия последовательностей PreS1 в известных генотипах HBV. Существует десять известных или распространенных генотипов HBV (генотипы А, В, С, D, Е, F, G, Н, I и J), имеющих до или приблизительно 8% различий нуклеотидов в геномной последовательности. Среди них существуют дополнительные субгенотипы, у которых выявляют до или приблизительно 4%-8% отличий нуклеотидов в геномной последовательности. Субгенотипы HBV включают, но не ограничены перечисленными: Al, А2, A3, А4, А5, А6, А7, В2, ВЗ, В4, В5, В6, В7, В9, C1, С2, С3, С4, С5, С6, С7, С8, С9, С10, D1, D2, D3, D4, D5, D6, D7, Fl, F2, F2a, F3 или F4. Более подробное обсуждение генотипов HBV, см. в Sunbul «Hepatitis В virus genotypes: Global distribution and clinical importance)) ((2014) World. J. Gastroenterology. 20(18): 5427-5434, которая настоящим явно полностью включена в данную заявку посредством ссылки.

[0113] Термины «сайт аутокаталитического расщепления пептида» или «пептид 2А» в данной заявке относятся к последовательности пептида, в которой происходит расщепление пептидной связи между двумя входящими в его состав аминокислотами, приводящее к разделению двух белков, которые фланкируют последовательность. Полагают, что такое расщепление является результатом «проскока» рибосомы через образованную пептидную связь между С-концевым пролином и глицином в последовательности пептида 2А. Четыре последовательности сайта аутокаталитического расщепления пептида, идентифицированные на данный момент, находят фактическое применение в биомедицинских исследованиях: 2А вируса ящура (F2A); 2А вируса ринита лошадей A (ERAV) (Е2А); 2А тешовируса-1 свиньи (Р2А) и 2А вируса Thosea asigna (Т2А). В некоторых вариантах реализации используют последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 13) и полипептида (SEQ ID NO: 14) сайта аутокаталитического расщепления пептида Р2А.

[0114] Термин «HBeAg» в данной заявке относится к белку антигена HBV, находящегося между нуклеокапсидным кором и липидной оболочкой вируса. HBeAg, продуцированный в хозяине, секретируется в сыворотку крови и является надежным маркером активной инфекции HBV. Количественный анализ секреции HBeAg in vitro в модели культуры клеток можно использовать для оценки действия биологических или фармацевтических соединений или композиций на инфекционность HBV.

[0115] Термин «вспомогательное вещество» имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и относится к другим веществам, соединениям или материалам, находящимся в иммуногенной композиции или вакцине. Вспомогательные вещества с желательными свойствами включают, но не ограничены перечисленными: консерванты, адъюванты, стабилизаторы, растворители, буферы, разбавители, солюбилизирующие агенты, детергенты, поверхностно-активные вещества, хелатирующие агенты, антиоксиданты, спирты, кетоны, альдегиды, этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), лимонную кислоту, соли, хлорид натрия, бикарбонат натрия, фосфат натрия, борат натрия, цитрат натрия, хлорид калия, фосфат калия, сульфат магния, сахара, декстрозу, фруктозу, маннозу, лактозу, галактозу, сахарозу, сорбит, целлюлозу, сыворотку, аминокислоты, полисорбат 20, полисорбат 80, дезоксихолат натрия, тауродезоксихолат натрия, стеарат магния, этоксилат октилфенола, бензетония хлорид, тимеросал, желатин, сложные эфиры, простые эфиры, 2-феноксиэтанол, мочевину или витамины, или любую их комбинацию. Некоторые вспомогательные вещества могут быть в остаточных количествах или быть примесями, оставшимися от процесса производства иммуногенной композиции или вакцины, включая, но не ограничиваясь перечисленными: сыворотку, альбумин, овальбумин, антибиотики, инактивирующие агенты, формальдегид, глутаральдегид, р-пропиолактон, желатин, обломки клеток, нуклеиновые кислоты, пептиды, аминокислоты или компоненты ростовой среды, или любую их комбинацию. Количество вспомогательного вещества может находиться в иммуногенной композиции или вакцине на уровне процентов: 0%, 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% по массе, или любого процента по массе в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше значений.

[0116] Термин «адъювант» в данной заявке относится к веществу, соединению или материалу, который стимулирует иммунный ответ и повышение эффективности защитного иммунитета и который вводят в сочетании с иммуногенным антигеном, эпитопом или композицией. Адъюванты служат для улучшения иммунных ответов, позволяя непрерывное высвобождение антигена, повышающую регуляцию цитокинов и хемокинов, привлечение клеток в место введения, повышенное поглощение антигена и его представление в антигенпредставляющих клетках или активацию антигенпредставляющих клеток и инфламмасом. Широко применяемые адъюванты включают, но не ограничены перечисленными: квасцы, соли алюминия, сульфат алюминия, гидроксид алюминия, фосфат алюминия, гидроксифосфат кальция, алюмосульфат калия, масла, минеральное масло, парафиновое масло, эмульсии типа масло в воде, детергенты, MF59®, сквален, AS03, α-токоферол, полисорбат 80, AS04, монофосфорил-липид А, виросомы, нуклеиновые кислоты, полиинозиновая:полицитидиловая кислота, сапонины, QS-21, белки, флагеллин, цитокины, хемокины, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15, IL-21, имидазохинолины, олигонуклеотиды CpG, липиды, фосфолипиды, диолеоил-фосфатидилхолин (DOPC), димиколят трегалозы, пептид о гликаны, экстракты бактерий, липополисахариды или адъювант Фрейнда, или любую их комбинацию.

[0117] Термины «примирование» и «стимулирование» в данной заявке относятся к отдельным иммуногенным композициям, применяемым в гетерологичном подходе иммунизации путем примирования-стимулирования. Иммунизациям или вакцинам обычно требуется более чем одно введение иммуногенной композиции, чтобы вызвать эффективный иммунитет к целевому патогену у хозяина. По сравнению с этим гомологичным подходом, в котором для всех введений предоставляется одна и та же композиция, проведение гетерологичного примирования-стимулирования может более эффективно создавать сильный иммунитет с большими уровнями антител и улучшенным клиренсом или устойчивостью к некоторым патогенам, таким как HBV или HDV. При проведении гетерологичного примирования-стимулирования сначала предоставляют по меньшей мере одну примирующую дозу, содержащую один тип иммуногенной композиции. После предоставления указанной по меньшей мере одной примирующей дозы затем предоставляют по меньшей мере одну стимулирующую дозу, содержащую другой тип иммуногенной композиции. Введение по меньшей мере одной стимулирующей дозы осуществляют по меньшей мере через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель после введения по меньшей мере одной примирующей дозы или в пределах диапазона времени, заданного любыми двумя из указанных выше временных точек, например, в пределах 1-48 дней или 1-48 недель. В некоторых вариантах реализации примирующая доза содержит нуклеиновую кислоту (например, ДНК или РНК), которая кодирует один или более антигенов или эпитопов, и стимулирующая доза содержит полипептид, который содержит один или более антигенов или эпитопов. В хозяине примирующая нуклеиновая кислота транслируется in vivo, чтобы вызвать иммунную реакцию, и вызывает больший ответ против последующего стимулирования полипептидом. В некоторых вариантах реализации примирующая нуклеиновая кислота содержит последовательности, которые кодируют по меньшей мере один полипептид HDAg, по меньшей мере один пептид PreS1 и по меньшей мере один сайт аутокаталитического расщепления пептида. В некоторых вариантах реализации стимулирующий полипептид содержит по меньшей мере один полипептид HDAg и по меньшей мере один полипептид PreS1.

[0118] В некоторых вариантах реализации введение примирующей нуклеиновой кислоты и стимулирующего полипептида, содержащих компоненты HBV и HDV, экспериментальному организму приводит к большему титру антител против HDAg, против PreS1, против HBV или против HDV при отношении, составляющем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 5000, 10000, 100000 или 1000000, или любом отношении в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше отношений, к таковому для иммунизированного только нуклеиновой кислотой или только полипептидом или не иммунизированного контрольного организма, что анализировали количественно с помощью методик, известных в данной области техники, таких как ELISA. В некоторых вариантах реализации введение примирующей нуклеиновой кислоты и стимулирующего полипептида, содержащих компоненты HBV и HDV, экспериментальному организму приводит к тому, что сыворотка нейтрализует инфекционность HBV или HDV in vitro более эффективно и снижает частоту инфицирования до отношения, составляющего 0,00001, 0,00005, 0,0001, 0,0005, 0,001, 0,005, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или 1,0, или любого отношения в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше отношений, по сравнению с сыворотками из иммунизированного только нуклеиновой кислотой или только полипептидом или неиммунизированного контрольного организма. В некоторых вариантах реализации введение примирующей нуклеиновой кислоты и стимулирующего полипептида, содержащих компоненты HBV и HDV, экспериментальному организму приводит к большему количеству положительных по интерферону гамма (IFNγ) клеток (например, Т-клеток) при отношении, составляющем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 5000 или 10000, или любом отношении в пределах диапазона, заданного любыми двумя из указанных выше отношений, по сравнению с иммунизированным только нуклеиновой кислотой или только полипептидом или неиммунизированным контрольным организмом.

[0119] В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов вводят с адъювантом. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов вводят энтерально, перорально, интраназально, парентерально, подкожно, внутримышечно, внутрикожно или внутривенно, или любой комбинацией перечисленных путей. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов вводят в сочетании с соединением для противовирусной терапии, у которого есть известное действие против HBV или HDV, включая, но не ограничиваясь перечисленными соединениями: энтекавир, тенофовир, ламивудин, адефовир, телбивудин, эмтрицитабин, интерферон-α, пегилированный интерферон-α или интерферон альфа-2b, или любую их комбинацию.

[0120] Термины «электропорация in vivo», «электропорация» и «ЭП» в данной заявке относятся к доставке генов, нуклеиновых кислот, ДНК, РНК, белков или векторов в клетки живых тканей или организмов с помощью электрических токов, применяя методики, известные в данной области техники. Электропорацию можно использовать в качестве альтернативы другим способам переноса генов, таким как вирусы (трансдукция), липофекция, генная пушка (биолистика), микроинъекция, слияние везикул или химическая трансформация. Электропорация ограничивает риск иммуногенности и неблагоприятного встраивания или мутагенеза генома клетки. ДНК-векторы, такие как плазмиды, способны проникнуть в ядро клетки, позволяя транскрипцию и трансляцию составляющих их генов. В некоторых вариантах реализации гены, нуклеиновые кислоты, ДНК, РНК, белки или векторы вводят в целевую ткань или целевой организм путем подкожной, внутримышечной или внутрикожной инъекции. Электропоратор затем доставляет короткие электрические импульсы посредством электродов, размещенных внутри или вблизи от введенного путем инъекции образца. В данной заявке термин «вм/ЭП» относится к электропорации in vivo образца, доставленного внутримышечно («вм»).

[0121] Термин «uPA^+/+-SCID» в данной заявке относится к модели иммунодефицита у мышей, используемой для исследования заболеваний печени, включая инфекции вирусами гепатита. Эти мыши гомозиготны по Prkdc^, что вызывает недостаточность функциональных Т- и В-лимфоцитов. Сверхэкспрессия активатора плазминогена урокиназного типа (иРА) также вызывает тяжелую цитотоксичность печени и печеночную недостаточность в процессе развития. Последующая трансплантация и прививка ткани печени человека этим мышам приводит к получению модели, идеальной для исследования болезней печени у людей. Дополнительные сведения о мышах uPA^+/+-SCID см. в Meuleman и др. «The human liver-uPA-SCID mouse: A model for the evaluation of antiviral compounds against HBV and HCV» ((2008) Antiviral Research 80(3): 231-238), которая настоящим явно полностью включена в данную заявку посредством ссылки.

[0122] Термин «% по массе» или «% масса/масса» в данной заявке имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и относится к проценту, выраженному в виде массы ингредиента или агента от общей массы композиции, умноженной на 100. Термин «% по объему» или «% об/об» в данной заявке имеет обычное значение, которое понятно в свете настоящего описания, и относится к проценту, выраженному в виде объема жидкости соединения, вещества, ингредиента или агента от общего объема жидкости композиции, умноженного на 100.

[0123] Настоящее изобретение описано в данной заявке в общих чертах с использованием утвердительной терминологии для описания множества вариантов реализации. В объем настоящего изобретения также входят варианты реализации, в которых предмет рассмотрения исключен, полностью или частично, например, вещества или материалы, этапы способа и условия, протоколы или процедуры.

Иммуногенные композиции и комбинации продуктов.

[0124] В данной заявке предложены иммуногенные композиции или комбинации продуктов. В некоторых вариантах реализации указанные иммуногенные композиции или комбинации продуктов предназначены для индукции иммуногенного ответа на конкретный антиген. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов содержат (а) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и (b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая HDAg, содержит SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая PreS1, содержит SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или обе. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота сконструирована таким образом, что каждая последовательность нуклеиновой кислоты HDAg сгруппирована с последовательностью нуклеиновой кислоты PreS1, и что последовательность нуклеиновой кислоты PreS1 расположена непосредственно по ходу транскрипции от последовательности нуклеиновой кислоты HDAg. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов дополнительно содержат по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт аутокаталитического расщепления пептида, причем сгруппированные последовательности нуклеиновых кислот HDAg и PreS1 разделены по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сайт аутокаталитического расщепления пептида. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновых кислот 2А тешовируса свиней-1 (Р2А), 2А вируса ящура (F2A), 2А вируса ринита лошадей A (ERAV) (Е2А) и 2А вируса Thosea asigna (Т2А), и при этом каждый кодируемый сайт аутокаталитического расщепления пептида необязательно может содержать мотив GSG (глицин-серин-глицин) на своем N-конце. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота кодон-оптимизирована для экспрессии у человека. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 15-24 или 35-36. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 35-36. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один полипептид HDAg содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 содержит SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12, или обе. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 расположена по ходу транскрипции от по меньшей мере одной последовательности полипептида HDAg. В некоторых вариантах реализации полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 25-34 или 37. В некоторых вариантах реализации полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 29, 31, 32 или 37. В некоторых вариантах реализации полипептид экспрессирован рекомбинантным способом. В некоторых вариантах реализации полипептид экспрессирован рекомбинантным способом в системе млекопитающего, бактерии, дрожжей, насекомого или в бесклеточной системе. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов дополнительно содержат адъювант.В некоторых вариантах реализации адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота содержит ДНК. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота предоставлена в рекомбинантном векторе.

[0125] Также в данной заявке предложены способы индуцирования иммунного ответа у субъекта с применением иммуногенной композиции или комбинации продуктов. В некоторых вариантах реализации иммуногенная композиция или комбинация продуктов представляет собой любую из иммуногенных композиций или комбинаций продуктов, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации указанные способы включают введение указанному субъекту по меньшей мере одной примирующей дозы, содержащей нуклеиновую кислоту; и введение указанному субъекту по меньшей мере одной стимулирующей дозы, содержащей полипептид. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна стимулирующая доза дополнительно содержит адъювант.В некоторых вариантах реализации адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одну стимулирующую дозу вводят по меньшей мере через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель после введения по меньшей мере одной примирующей дозы или в пределах диапазона времени, заданного любыми двумя из указанных выше временных точек, например, в пределах 1-48 дней или 1-48 недель. В некоторых вариантах реализации введение осуществляют энтерально, перорально, интраназально, парентерально, подкожно, внутримышечно, внутрикожно или внутривенно, или любой комбинацией перечисленных путей. В некоторых вариантах реализации введение осуществляют в сочетании с противовирусной терапией. В некоторых вариантах реализации противовирусная терапия включает введение энтекавира, тенофовира, ламивудина, адефовира, телбивудина, эмтрицитабина, интерферона-а, пегилированного интерферона-а или интерферона альфа-2b, или любой их комбинации.

[0126] Также в данной заявке предложены иммуногенные композиции или комбинации продуктов для применения для лечения или ингибирования гепатита В или гепатита D. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов представляют собой любую из иммуногенных композиций или комбинаций продуктов, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов содержат (а) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и (b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая HDAg, содержит SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая PreS1, содержит SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или обе. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота сконструирована таким образом, что каждая последовательность нуклеиновой кислоты HDAg сгруппирована с последовательностью нуклеиновой кислоты PreS1, и что последовательность нуклеиновой кислоты PreS1 расположена непосредственно по ходу транскрипции от последовательности нуклеиновой кислоты HDAg. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов дополнительно содержат по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт аутокаталитического расщепления пептида, причем сгруппированные последовательности нуклеиновых кислот HDAg и PreS1 разделены по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сайт аутокаталитического расщепления пептида. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновых кислот 2А тешовируса свиней-1 (Р2А), 2А вируса ящура (F2A), 2А вируса ринита лошадей A (ERAV) (Е2А) и 2А вируса Thosea asigna (Т2А), и при этом каждый кодируемый сайт аутокаталитического расщепления пептида необязательно может содержать мотив GSG (глицин-серин-глицин) на своем N-конце. В некоторых вариантах реализации указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота кодон-оптимизирована для экспрессии у человека. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 15-24 или 35-36. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 18, или SEQ ID NO: 35-36. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один полипептид HDAg содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 содержит SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12, или обе. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 расположена по ходу транскрипции от по меньшей мере одной последовательности полипептида HDAg. В некоторых вариантах реализации полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 25-34 или 37. В некоторых вариантах реализации полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 29, 31, 32 или 37. В некоторых вариантах реализации полипептид экспрессирован рекомбинантным способом. В некоторых вариантах реализации полипептид экспрессирован рекомбинантным способом в системе млекопитающего, бактерии, дрожжей, насекомого или в бесклеточной системе. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции или комбинации продуктов дополнительно содержат адъювант.В некоторых вариантах реализации адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота содержит ДНК. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота предоставлена в рекомбинантном векторе.

ПРИМЕРЫ

[0127] Некоторые аспекты вариантов реализации, обсуждаемые выше, описаны более подробно в следующих примерах, которые ни коим образом не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Специалистам в данной области будет понятно, что множество других вариантов реализации также входят в объем настоящего изобретения, описанного в данной заявке выше и в формуле изобретения.

Пример 1. Методика.

Животные.

[0128] Самок мышей C57BL/6 (Н-2b) получали от Charles River Laboratories.

Трансгенных по человеческому лейкоцитарному антигену А2 (HLA-A2) мышей HHD выводили самостоятельно. Все мыши были в возрасте 8-10 недель в начале экспериментов, и их содержали при стандартных условиях. Получали и содержали мышеи uPA^+/+-SCID с гуманизированной печенью. Новозеландских белых кроликов приобретали у коммерческих поставщиков.

Плазмиды ДНК.

[0129] Плазмиды, кодирующие генотипы 1 и 2 L-HDAg и домен PreS1 (АК 2 -48) HBsAg, использовали в этом исследовании в виде слитых конструкций, необязательно расщепляемых посредством Р2А, состоящих из различных комбинаций последовательностей HDAg/PreS1. Последовательности HDAg генотипов 1 и 2 получали из четырех различных клинических изолятов; US-2 и СВ, и 7/18/83 и TW2476, соответственно. Все гены клонировали в остов pVAXl (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния), используя сайты рестрикции EcoR I и HindIII. Плазмиды наращивали в клетках ТОР10 E.coli (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) и очищали для инъекции in vivo, применяя набор для очистки ДНК Qiagen Endofree (Qiagen GmbH), следуя инструкциям производителя. Правильность размера гена подтверждали с помощью расщепления ферментами рестрикции, применяя EcoR I и HindIII (Fast Digest, Thermo Fisher Scientific).

Вестерн-блоттинг.

[0130] Вестерн-блоттинг проводили по существу как широко известно в данной области техники. Клетки Hela трансфицировали каждой из плазмидных ДНК pVAXl Dl-D10 и pVAX1 с репортерным геном GFP в качестве контроля, применяя реагент для трансфекции липофектамин® 3000 (Thermo Fisher Scientific). Для детектирования белка использовали сыворотку из вакцинированных D4 кроликов, разбавленную 1:1000 (первичное антитело), и антитело козы против иммуноглобулинов кролика-HRP, 0,25 г/л (DAKO), разбавленное 1:4000 (вторичное антитело). Для детектирования хемилюминесценции применяли субстрат Pierce™ ECL Plus Western Blotting Substrate, и изображения накапливали с помощью системы Gel Doc XR+ (Biorad).

Пептиды.

[0131] Всего 168 15-мерных пептидов HDAg с перекрыванием 10 АК приобретали у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури). Указанные 168 пептидов разделяли на 8 пулов, каждый из которых содержал 20 или 21 пептид. Четыре пула соответствовали генотипу 1 (пул 1_1-21, пул 2_22-42, пул 3_43-63 и пул 4_64-84) и четыре пула соответствовали генотипу 2 (пул 1_1-21, пул 2_22-42, пул 3_43-63 и пул 4_64-84) Для последовательностей А, В, С и D, причем каждая последовательность относится к каждому клиническому изоляту.

[0132] Две консенсусные последовательности PreS1 HBsAg (PreS1A и PreS1B), состоящие из 47 АК, и 20-мерные пептиды PreS1 с перекрыванием 10 АК для (под-)генотипов HBV A1, А2, В, В2, С, Dl, Е1 и F, приобретали в Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури). Все пептиды прошли контроль качества (КК) (Sigma-Aldrich PEPscreen® Directory) и имели чистоту >70%. Пептиды овальбумина OVA 257-264 CTL (SIINFEKL (SEQ ID NO: 38)) и OVA 323-339 Th (ISQAVHAAHAEINEAGR (SEQ ID NO: 39)) использовали в качестве отрицательных контролей пептидов, тогда как конканавалин А (КонА), приобретенный в Sigma Aldrich (Сент-Луис, Миссури), использовали в качестве положительного контроля в конечной концентрации, равной 0,5 мкг/мкл.

Протоколы иммунизации для оценки иммуногенности плазмид HBV/HDV у мышей и кроликов.

[0133] Для оценки иммуногенности конструкций in vivo, мышей и кроликов иммунизировали по существу как описано, стимулировали с интервалами в один месяц и умерщвляли через две недели для сбора селезенок и крови. Вкратце, самок мышей C57BL/6 (пять на группу) иммунизировали внутримышечно (в/м) в переднюю болыпеберцовую мышцу (ТА) 50 мкг плазмидной ДНК в объеме 50 мкл в стерильном ФБР с помощью обычной инъекции иглой (27G), с последующей электропорацией (ЭП) in vivo с применением устройства Cliniporator2 (IGEA, Карпи, Италия). Во время электропорации in vivo использовали паттерн импульса 1 мс 600 В/см с последующим импульсом 400 мс 60 В/см, чтобы способствовать лучшему поглощению ДНК. Перед инъекцией вакцины мышам давали анальгетик и держали их под анестезией изофлураном во время вакцинаций. Для исследований на кроликах, по два Новозеландских белых кролика на группу иммунизировали 300 мкг вакцин ДНК D3 и D4. Вакцины вводили путем в/м инъекции в 300 мкл стерильного ФБР в правую мышцу ТА, а затем проводили ЭП in vivo.

Детектирование продуцирующих IFNy Т-клеток с помощью анализа методом иммуноферментных пятен (ELISpot).

[0134] Через две недели после последней вакцинации, спленоциты из каждой иммунизированной группы мышей объединяли (по пять мышей/группу) и исследовали их способность индуцировать специфичные к HBV/HDV Т-клетки на основании секреции IFN-y после стимуляции пептидом в течение 48 ч, как известно в данной области техники, применяя доступный для приобретения набор для анализа ELISpot (Mabtech, Нака Странд, Швеция).

Детектирование антитела с помощью ELISA.

[0135] Детектирование IgG мыши и кролика против консенсуса PreS1 и перекрывающихся 20-мерных пептидов (10 мкг/мл) осуществляли, применяя протоколы, известные в данной области техники. Титры антител определяли как конечную точку титрования сывороток, при которой значение ОП на 405 нм по меньшей мере в два раза превышало ОП отрицательного контроля (сыворотки неиммунизированного или контрольного животного) при таком же разведении.

Анализ нейтрализации HBV в модели на мышах uPA-SCID с печенью человека.

[0136] HepG2-NTCP-A3 представляет собой прошедший селекцию клон клеток, происходящий из клетки HepG2, экспрессирующей NTCP человека, как описано ранее. Его культивировали в среде DMEM, дополненной 10% эмбриональной сывороткой крупного рогатого скота, 2 мМ L-глутамином, 50 Ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина. Во время и после инокуляции в среду добавляли 2,5% ДМСО, чтобы улучшить инфицирование и репликацию HBV. Исходный раствор вируса HBV, применяемый для инфекции, получали из клеток HepAD38 путем преципитации ПЭГ, как описано. Собирали культуральную среду между 3 и 6 днем после инфекции и разбавляли 1:5 ФБР для количественного анализа HBeAg с помощью ELISA, применяя доступные для приобретения антитела.

Статистический анализ.

[0137] Результаты анализировали, применяя программное обеспечение GraphPad Prism V.5 и V.8 и Microsoft Excel V. 16.13.1.

Пример 2. Иммуногенные конструкции HBV и HDV.

[0138] Было показано, что применение рекомбинантных конструкций полипептидов HBV и HDV эффективно вызывало образование антител и иммунную защиту от указанных двух вирусов гепатита, например, в WO 2017/132332, которая настоящим явно полностью включена в данную заявку посредством ссылки. Эти рекомбинантные конструкции полипептидов собирали путем объединения HDAg, выбранного из четырех различных генотипов HDV (HDAg генотипа 1 A, HDAg генотипа 1 В, HDAg генотипа 2 А и HDAg генотипа 2 В), PreS1, выбранного из двух генотипов консенсусных последовательностей (PreS1А и PreS1B), и одного или более сайтов аутокаталитического расщепления пептида Р2А. Схематические изображения одиннадцати рекомбинантных конструкций показаны на фигурах 1А и 2, и соответствующие SEQ ID NO последовательностей ДНК и полипептидов, если возможно, представлены в таблице 1. С помощью вестерн-блоттинга подтвердили, что полипептиды правильно экспрессируются с рекомбинантных конструкций Δ-1-Δ-10 (Фигура 1В).

Пример 3. Композиции ДНК HBV/HDV вызывают иммуногенный ответ у мышей.

[0139] Хотя иммуногенные композиции и вакцины традиционно представляли собой либо целые организмы, либо антигенные белки, недавно было показано, что введение ДНК in vivo в живую ткань и последующая транскрипция и трансляция антигенных белков также высоко эффективно запускает иммунный ответ.Такие иммуногенные композиции ДНК исследовались как потенциальные кандидатные вакцины против различных заболеваний.

[0140] Через 2 недели после второго введения композиций конструкций ДНК, оценивали иммунитет мышей против антигенов HBV и HDV. Лейкоциты очищали из образцов цельной крови мышей и инкубировали с очищенными полипептидными антигенами, включая PreS1 A, PreS1 В, HDAg генотипов 1 А, 1 В, 2 А и 2 В. Клетки также инкубировали с конканавалином А («КонА») в качестве положительного контроля и двумя пептидами овальбумина («OVA Th» и «OVA CTL») в качестве отрицательных контролей. Частота встречаемости продуцирующих интерферон гамма (IFNγ) клеток в популяции в ответ на контакт с антигеном оценивали с помощью анализа методом иммуноферментных пятен (ELISpot). Вкратце, лейкоциты инкубировали с антигеном в лунках, покрытых антителами против IFNγ. Затем клетки удаляли и последовательно добавляли в лунки биотинилированные антитела против IFNγ, связанный перекрестными связями с щелочной фосфатазой стрептавидин и субстраты щелочной фосфатазы-колориметрические реагенты, с тщательной промывкой между указанными реагентами. Планшету затем позволяли высохнуть, и оставшиеся окрашенные пятна, которые соответствовали секретирующим IFNγ клеткам, подсчитывали с помощью микроскопии. Подсчитанные общие количества образующих пятна IFNγ клеток на 10⁶ всех клеток в ответ на различные пептидные антигены для каждой из мышей показаны на фигурах 3А (Δ-1 и Δ-2), 3В (Δ-3 и Δ-4),3 (Δ-5 и Δ-6), 3D (Δ-7 и Δ-8) и 3Е (Δ-9 и Δ-10).

[0141] Исследовали реактивность антисывороток против консенсусных пептидов PreS1A и PreS1B (АК 2-48) и их перекрестную реактивность с (под-)типами HBV A1, А2, В, В2, С, D1, Е1 и F, используя пулы 20-мерных пептидов PreS1. Иммуногенные композиции, содержащие Δ-1, Δ-2, Δ-3, Δ-4, Δ-7 и Δ-8, приводили к сильной иммуногенности против обоих антигенов PreS1 HBV (Фигуры 4A-В). Δ-3 и Δ-4 вызывали титры антител >10⁴ у мышей, затем следовали конструкции Δ-1, Δ-2, Δ-7 и Δ-8. Важно отметить, что антисыворотки из иммунизированных Δ-4 и Δ-7 мышей эффективно давали перекрестную реакцию со всеми исследованными типами HBV (Фигура 4С). Иммунный ответ на пептиды HDAg был более изменчивым, вероятно вследствие различий в последовательностях генотипов, но обычно был больше, чем для контрольных овальбуминов. Примечательно, что в группах, которым вводили Δ-3 и Δ-4, наблюдали небольшое снижение ответов Т-клеток на HDV, например, по сравнению с конструкциями, которые содержали только HDAg (Δ-5, Δ-6, Δ-9, Δ-10), что можно объяснить конкурированием за распознавание эпитопа при одновременном примировании специфичных к PreS1 Т-клеток. В целом, это показывает, что активная иммунизация способна индуцировать функциональные Т-клетки против антигенов PreS1 и HDAg, и приводит к предположению, что широко функциональная иммунотерапия должна содержать оба генотипа 1 и 2 HDV, чтобы гарантировать индукцию специфичных Т-клеток.

[0142] Сходные эксперименты проводили с рестриктированными по HLA-A2 Т-клетками, очищенными из трансгенных по HLA-A2 мышей HHD. ELISpot IFNγ для нормальных мышей C57BL/6 (Фигура 5А) и HLA-A2 HHD (Фигура 5В), которым вводили с помощью электропорации композицию, содержащую Δ-4, наряду с непримированными мышами HLA-A2 HHD в качестве контроля (Фигура 5С), подтвердил иммуногенность у трансгенных мышей, позволяя предложить эффективность композиций ДНК для лечения людей.

Пример 4. Композиции ДНК HBV/HDV вызывают иммуногенный ответ у кроликов.

[0143] Эксперименты, соответствующие таковым, описанным в Примере 3, также проводили с кроликами (Oryctolagus cuniculus). Новозеландским белым кроликам вводили путем внутримышечной инъекции солевой раствор, содержащий 900 мкг композиций ДНК, содержащих либо Δ-3, либо Δ-4, и проводили электропорацию. Дозы вводили на 0 и 4 неделях. После иммунизации титры антител против PreS1 в сыворотках кроликов наблюдали для обеих композиций ДНК, содержащих Δ-3 или Δ-4, причем Δ-4 оказался более эффективным (>10³) (Фигуры 6A-В). Также исследовали перекрестную реактивность антисывороток кролика против (под-)типов HBV A1, А2, В, В2, С, D1, Е1 и F, используя пулы 20-мерных пептидов PreS1 (Фигура 6С). Точную специфичность антисывороток кролика против D4 определяли, используя отдельные 20-мерные пептиды PreS1 HBV типа A1, А2, В, В2, С, Dl, Е1 и F (Фигура 6D). Это позволило картировать эпитопы на PreS1, расположенные на участке 22-48 АК в генотипе D1, о чем свидетельствовала более высокая реактивность, за которой следовала более низкая реактивность по отношению к генотипам С, Е1 и А1. Это перекрывается с сайтом связывания NTCP и частично с ранее идентифицированными эпитопами, распознаваемыми нейтрализующими антителами.

[0144] В Таблице 2 сведены действия на иммунитет десяти иммуногенных композиций ДНК. Композиции ДНК, содержащие Д-4, приводили к наибольшему титру антител против PreS1/против HBV как у мышей, так и у кроликов, и их использовали для иммунизаций путем примирования/стимулирования в следующих Примерах. Для Д-4 также выявили наиболее широкую реактивность по отношению к различным генотипам HBV. «н/д» означает низкие или недетектируемые уровни активности антитела, «н/о» означает, что эксперимент не осуществляли.

Пример 5. Подход примирования ДНК/стимулирования белком с помощью конструкций HBV/HDV улучшает иммуногенный ответ у мышей.

[0145] Композиции ДНК, содержащие Δ-4 (SEQ ID NO: 18), и композиции полипептидов, содержащие Δ-7 (SEQ ID NO: 31) или Δ-8 (SEQ ID NO: 32), применяли в подходе иммунизации путем примирования ДНК/стимулирования белком, чтобы создать приобретенный иммунитет и вызвать продукцию антител против HBV и/или HDV in vivo (Фигура 2).

[0146] Мышей C57BL/6 иммунизировали (1) композицией ДНК, содержащей Δ-4 (3 последовательные дозы по 50 мкг ДНК), (2) композицией полипептида, содержащей Δ-7 (3 последовательные дозы по 20 мкг белка с квасцами в качестве адъюванта), или (3) композицией ДНК, содержащей Δ-4, а затем композицией полипептида, содержащей Δ-8 (2 дозы по 50 мкг ДНК, затем 2 дозы по 20 мкг белка с квасцами). После введения соединений исследовали продукцию IFNγ очищенными лейкоцитами в ответ на антигены HBV и HDV с помощью ELISpot (как описано в Примерах 1 и 2). У мышей, которых лечили (1), выявили ответ на антигены гепатита (Фигура 7А), сопоставимый с таковым, наблюдаемым в Примере 3 и на Фигуре 3В, но у мышей, которых лечили композициями для примирования ДНК/стимулирования белком (3), выявили сравнительно более сильный общий ответ иммунных клеток (Фигура 7С). Так как Δ-8 содержит последовательности полипептидов HDAg генотипа 2, проанализированный иммунный ответ особенно улучшился против этих антигенов (Фигура 7С, гтп 2-пул 5, 6, 7 и 8). Напротив, подход только с белком (2) с применением полипептидов Δ-7 не был способен вызвать столь же эффективный иммунный ответ к обоим антигенам HBV и HDV (Фигура 7В). Это демонстрирует, что указанный подход примирования ДНК/стимулирования белком может эффективно вызывать сильный иммуногенный ответ, больший, чем обычные композиции на основе белка или организма, на некоторые патогены, включая HBV и HDV.

[0147] Другие комбинации примирования ДНК/стимулирования белком также оценивали на мышах. Титры IgG против PreS1 у мышей измеряли после иммунизации (1) композицией только ДНК, содержащей Δ-4 («D4»), (2) композициями только белка, содержащими Δ-7 («D7-D7»), Δ-8 («D8-D8»), Δ-9 («D9-D9») или Δ-10 («D10-D10»), или (3) композициями ДНК-белка, содержащими ДНК Δ-4 с белком Δ-7 («D4-D7»), Δ-8 («D4-D8»), Δ-9 («D4-D9») или Δ-10 («D4-D10»). Композиции вводили три раза на 0, 4 и 8 неделях, с введением либо 50 мкг ДНК вм/ЭП, либо 20 мкг белка с квасцами в каждой дозе. Для композиций ДНК-белка (3), вводили 50 мкг ДНК вм/ЭП в качестве первой дозы на 0 неделе и вводили 20 мкг белка с квасцами в качестве второй и третьей дозы на 4 и 8 неделях. Титры IgG против PreS1 в сыворотках оценивали через 2 недели (Фигура 8А), 6 недель (Фигура 8В) и 10 недель (Фигура 8С) после введения первой дозы (т.е., через 2 недели после введения каждой дозы). Композиция для примирования ДНК/стимулирования белком D4-D7 приводила к более высоким титрам против PreS1 после завершения графика введения доз.

Пример 6. Подход примирования ДНК/стимулирования белком с помощью конструкций HBV/HDV улучшал иммуногенный ответ у кроликов.

[0148] Новозеландских белых кроликов иммунизировали (1) композицией только ДНК, содержащей Δ-4, (2) композицией только белка, содержащей Δ-4, или (3) композицией для примирования ДНК/стимулирования белком, содержащей ДНК Δ-4 и белок Δ-4. Композиции вводили четыре раза на 0, 4, 8 и 12 неделях, причем вводили либо 900 мкг ДНК вм/ЭП, либо 300 мкг белка с квасцами в каждой дозе. Для композиций ДНК-белка (3), 900 мкг ДНК вм/ЭП вводили в качестве первой дозы на 0 неделе, и 300 мкг белка с квасцами вводили в качестве второй, третьей и четвертой доз на 4, 8 и 12 неделях. Титры IgG против PreS1 в сыворотках оценивали на 0, 2, 10 и 14 неделях (т.е., через 2 недели после введения каждой дозы) (Фигура 9). Композиция примирования ДНК/стимулирования белком (3) не только приводила к большим общим титрам по сравнению с композициями только ДНК (1) и только белка (2), но и вызывала сильную продукцию антител более быстро, ко 2 неделе, по сравнению с композицией только белка.

Пример 7. Адоптивный перенос сывороток или очищенного IgG из иммунизированных животных защищал гуманизированных мышей от провокаций HBV и HDV.

[0149] Способность индуцированных D4 антител нейтрализовать инфекцию HBV in vivo определяли, применяя химерную модель на мышах uPA^+/+-SCID с печенью человека, как описано. Общий IgG очищали из иммунизированных D4 и неиммунизированных кроликов и вводили путем инъекции мышам uPA^+/+-SCID, которых репопулировали гепатоцитами человека за три дня до провокации HBV. Индуцированные D4 антитела IgG против PreS1 защищали или значительно отсрочивали пик виремии у всех получивших провокацию мышей (Фигура 10А). Из трех получивших провокацию мышей, одна была защищена (недели 1-3), тогда как у других двух выявили уровни HBV в сыворотке <10⁴ МЕ/мл вплоть до ежемесячного скрининга, и они оставались ниже по сравнению с контролями вплоть до 8 недель последующего наблюдения. У всех контрольных мышей, которым вводили IgG из непримированного кролика, достигались уровни ДНК HBV в сыворотке, превышающие 10⁸ МЕ/мл. Не наблюдали значимых различий между группами в отношении уровней в сыворотке аланинтрансферазы, аспарагинтрансферазы, щелочной фосфатазы или билирубина (Фигура 10В). В заключение, пассивная иммунизация специфичными к D4 антителами IgG против PreS1, которую проводили в виде разовой дозы, была способна предотвращать, или значительно отсрочивать инфицирование HBV in vivo у мышей, которых репопулировали гепатоцитами человека (Таблица 3). Важно отметить, что инокулят содержал высокие уровни субвирусных частиц SHBsAg, показывая, что эти антитела в действительности избегали блокирования посредством SHBsAg. Антитела против PreS1, присутствующие при инокуляции и в течение первых недель, явно блокировали инфекцию, или первые раунды инфекции, и ограничивали количество инфицированных гепатоцитов. Это ограничивало распространение вируса и отсрочивало развитие пика виремии.

Пример 8. Провокация пептидными конструкциями HBV/HDV с различными адъювантами.

[0150] Смеси пептидов D-7 и D-8 оценивали, применяя различные адъюванты. Мышам C57BL/6J вводили 2 раундами по 20 мкг смеси пептидов D-7 и D-8 (10 мкг каждого из D-7 и D-8) на 0 неделе и 3 неделе (Фигура 11А). Образцы периферической крови брали на 2 неделе (между двумя раундами), чтобы определить конечные титры реактивности против HBV и HDV с помощью ELISA (Фигура 11А и 11В), и выделяли спленоциты для определения реактивности против HBV и HDV с помощью ELISpot (Фигура 11С-D) на 5 неделе. Пептидные композиции вводили подкожно с адъювантами QS-21, MF59 и квасцами. Непримированных мышей и мышей, которым вводили ДНК-плазмиду D-4 путем внутримышечной электропорации, использовали в качестве контролей. ELISpot IFNγ проводили, как описано выше, используя пулы пептидов HDAg, пептидов PreS1A и PreS1B, с пептидами OVA и конканавалином А в качестве контролей (Фигуры 11С-D). Для композиций, которые вводили с адъювантом QS-21, выявили повышенную реактивность против HDAg по сравнению с другими адъювантами. Исследовали по 5 мышей на группу.

Пример 9. Сравнение типичных конструкций ДНК и/или пептида HBV/HDV.

[0151] Проводили сравнение иммуногенности для 1) только смеси пептидов D-7 и D-8, 2) только слитого пептида D-7+D-8, 3) примирования ДНК D-4 и стимулирования смесью пептидов D-7 и D-8, используя только ДНК D-4 и условия без примирования в качестве контролей. Мышам вводили либо 20 мкг слитого белка D-7+D-8, либо 10 мкг каждого из пептидов D-7 и D-8 в смешанных условиях с адъювантом QS-21, подкожно в основание хвоста в объеме 100 мкл. Проводили 2 раунда введения на 0 и 4 неделях. Контрольную ДНК D-4 вводили в дозе 50 мкг внутримышечно в 50 мкл ФБР с электропорацией. На 6 неделе (после двух раундов введения) определяли ответ Т-клеток на PreS1 и антиген HDV генотипов 1 и 2 с помощью ELISpot IFNγ (Фигура 12А). Кроме того, на 2 неделе (после одного раунда введения) и 6 неделе (после двух раундов введения) оценивали уровни антител против консенсусных пептидов PreS1А (Фигура 12В-С) и PreS1B (Фигура 12D). Наибольшую реактивность по отношению к HBV и HDV наблюдали в условиях примирования ДНК и стимулирования пептидом.

Пример 10. Иммунизация путем примирования ДНК или белком со стимулированием ДНК или белком против HBV и/или HDV в клинических испытаниях на людях.

[0152] В следующем примере описаны варианты реализации с применением иммуногенной композиции или комбинации продуктов, необязательно состоящих из компонента нуклеиновой кислоты и компонента полипептида, для лечения или предотвращения вирусных инфекций, вызванных такими вирусами, как HBV и HDV.

[0153] Композиции для примирования ДНК/стимулирования белком, описанные в Примере 5, вводят пациентам-людям энтерально, перорально, интраназально, парентерально, подкожно, внутримышечно, внутрикожно или внутривенно. Эти пациенты-люди могут быть на данный момент инфицированы HBV и/или HDV, ранее инфицированы HBV и/или HDV, иметь риск инфицирования HBV и/или HDV или не инфицированы HBV и/или HDV.

[0154] Сначала вводят дозы примирования ДНК в количестве, составляющем 1, 10, 100, 1000 нг, или 1, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 мкг, или 1, 10, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 мг, или в любом количестве в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше количеств, или в любом другом количестве, подходящем для оптимальной эффективности у людей. После первой примирующей дозы ДНК можно вводить 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных примирующих доз ДНК через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель, или через любое время в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше времен, после введения предыдущей примирующей дозы ДНК, например, в пределах 1-48 дней или 1-48 недель. Дозы стимулирования белком вводят после доз примирования ДНК в количестве, составляющем 1, 10, 100, 1000 нг, или 1, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 мкг, или 1, 10, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 мг, или в любом количестве в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше количеств, или в любом другом количестве, подходящем для оптимальной эффективности у людей. Первую стимулирующую дозу белка вводят через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель или через любое время в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше времен, после введения последней примирующей дозы ДНК. После первой стимулирующей дозы белка можно вводить 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных стимулирующих доз белка через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель или через любое время в диапазоне, заданном любыми двумя из указанных выше времен, после введения предыдущей стимулирующей дозы белка.

[0155] Пациентов будут отслеживать для выявления успешного ответа, направленного против HBV и/или HDV, например, продукции антител против HBV, против HDV, против PreS1 или против HDAg в сыворотках, быстрой активации Т-клеток и других иммунных клеток после контакта с антигенами HBV и/или HDV, и защиты от будущих инфекций HBV и/или HDV.

[0156] У пациентов, на данный момент инфицированных, ранее инфицированных или имеющих риск инфицирования HBV и/или HDV, введение композиций для примирования ДНК/стимулирования белком можно осуществить в сочетании с противовирусной терапией. Потенциальные лекарства противовирусной терапии, у которых выявили эффективность против HBV или HDV, включают, но не ограничены перечисленными лекарствами: энтекавир, тенофовир, ламивудин, адефовир, телбивудин, эмтрицитабин, интерферон-а, пегилированный интерферон-а или интерферон альфа-2b, или любой их комбинацией. У пациентов будут отслеживать побочные действия, такие как головокружение, тошнота, диарея, депрессия, нарушение сна, головные боли, зуд, сыпь, жар или другие известные побочные действия предложенных противовирусных лекарств.

[0157] В по меньшей мере некоторых из ранее описанных вариантов реализации один или более элементов, используемых в некотором варианте реализации, можно взаимозаменяемо применять в другом варианте реализации, кроме тех случаев, когда такая замена технически невозможна. Для специалистов в данной области должно быть понятно, что можно осуществить различные другие опущения, добавления и модификации способов и структур, описанных выше, не отклоняясь от объема заявленного объекта изобретения. Предполагается, что все такие модификации и изменения входят в объем объекта изобретения, который определяется прилагаемой формулой изобретения.

[0158] Касательно использования в настоящей заявке по существу любых терминов во множественном и/или единственном числе, специалисты в данной области техники могут перейти от множественного числа к единственному числу и/или от единственного числа к множественному числу, если это уместно для данного контекста и/или применения. Различные преобразования единственного числа во множественное число и наоборот могут быть явно указаны в данной заявке для полной ясности.

[0159] Специалистам в данной области техники будет понятно, что в общем термины, используемые в данной заявке и особенно в прилагаемой формуле изобретения (например, в ограничительной части прилагаемой формулы изобретения), как правило, считают «открытыми» терминами (например, термин «включающий» следует понимать как «включающий, но не ограниченный этим», термин «обладающий» следует понимать как «обладающий по меньшей мере», термин «включает» следует понимать как «включает, но не ограничен этим», и т.д.). Специалистам в данной области техники дополнительно будет понятно, что если предполагается перечисление определенного числа пунктов формулы изобретения, то такое число пунктов будет практически перечислено в формуле изобретения, а отсутствие такого перечисления указывает на то, что данное намерение отсутствовало. Например, для облегчения понимания, в следующей прилагаемой формуле изобретения могут использоваться вводные фразы «по меньшей мере один» и «один или более», чтобы представить перечисленные пункты формулы изобретения. Тем не менее, использование таких фраз не должно истолковываться как подразумевающее, что представление в форме единственного числа перечисленного пункта формулы изобретения ограничивает какой-либо конкретный пункт формулы изобретения, содержащий такое перечисление пункта формулы изобретения, альтернативными вариантами реализации, содержащими только одно такое перечисление, даже если тот же пункт формулы изобретения содержит вводные фразы «один или более» или «по меньшей мере один» и формы единственного числа (например, форму единственного числа следует истолковывать как «по меньшей мере один» или «один или более») для перечисления пунктов формулы изобретения. Кроме того, даже при указании в явном виде конкретного номера перечисленного пункта формулы изобретения специалисты в данной области техники поймут, что такое перечисление следует понимать, как по меньшей мере перечисленный номер (например, простое перечисление «двух перечислений», без других модификаторов, обычно означает по меньшей мере два перечисления или два или более двух перечислений). Более того, в случаях, когда используют устоявшееся выражение, аналогичное «по меньшей мере один из А, В и С, и т.д.», обычно такая формулировка подразумевается в смысле, который поймет специалист в данной области техники (например, формулировка «система, содержащая по меньшей мере один из А, В и С» будет включать, но не будет ограничена системами, которые содержат А отдельно, В отдельно, С отдельно, А и В вместе, А и С вместе, В и С вместе и/или А, В и С вместе, и т.д.). В случаях, когда используют устоявшееся выражение, аналогичное «по меньшей мере один из А, В или С, и т.д.», обычно такая формулировка подразумевается в смысле, который поймет специалист в данной области техники (например, формулировка «система, содержащая по меньшей мере один из А, В или С» будет включать, но не будет ограничена системами, которые содержат А отдельно, В отдельно, С отдельно, А и В вместе, А и С вместе, В и С вместе и/или А, В и С вместе, и т.д. Специалисты в данной области техники дополнительно поймут, что практически любое разделительное слово и/или формулировка, представляющие два или более альтернативных терминов, либо в описании, либо в формуле изобретения, либо на фигурах, следует понимать как возможность включения одного из терминов, любого из данных терминов или обоих терминов. Например, следует понимать, что формулировка «А или В» включает возможные варианты «А» или «В» или «А и В».

[0160] Кроме того, если свойства или аспекты настоящего описания представлены в виде групп Маркуша, то специалисты в данной области техники поймут, что настоящее описание, тем самым, также описано в виде любого отдельного представителя или подгруппы представителей группы Маркуша.

[0161] Специалист в данной области техники поймет, что для любых и всех целей, например, в части предоставления письменного описания, все диапазоны, описанные в данной заявке, также включают любой и все возможные поддиапазоны и комбинации поддиапазонов. Любой перечисленный диапазон может быть легко расценен как описывающий в достаточной степени и позволяющий разбить этот диапазон на по меньшей мере равные половины, трети, четверти, пятые части, десятые части и т.д. В качестве неограничивающего примера, каждый диапазон, обсуждаемый в настоящей заявке, можно легко разбить на нижнюю треть, среднюю треть и верхнюю треть, и т.д. Специалист в данной области техники также поймет, что все формулировки, такие как «вплоть до», «по меньшей мере», «более чем», «менее чем» и тому подобные формулировки, включают указанное число и относятся к диапазонам, которые затем можно разбить на поддиапазоны, как обсуждалось выше. Наконец, специалист в данной области техники поймет, что диапазон содержит каждого отдельного представителя. Таким образом, например, группа, содержащая 1 -3 элемента, относится к группам, содержащим 1, 2 или 3 элемента. Аналогично, группа, содержащая 1-5 элементов, относится к группам, содержащим 1, 2, 3, 4 или 5 элементов, и так далее.

[0162] Хотя различные аспекты и варианты реализации были описаны в данной заявке, другие аспекты и варианты реализации должны быть понятны специалистам в данной области техники. Указанные различные аспекты и варианты реализации, раскрытые в данной заявке, предложены с целью иллюстрирования и не предназначены для ограничения, при этом фактические объем и сущность настоящего изобретения задаются следующей формулой изобретения.

[0163] Все ссылочные материалы, цитированные в данной заявке, включая, но не ограничиваясь опубликованными и неопубликованными заявками на патент, патентами и литературными источниками, полностью включены в данную заявку посредством ссылки и настоящим сделаны частью настоящего описания. В случаях, когда публикации и патенты или заявки на патент, включенные в данную заявку посредством ссылки, противоречат раскрытию, содержащемуся в настоящем описании, предполагается, что настоящее описание замещает и/или имеет преимущественную силу над любым таким противоречащим материалом.

Ссылочные материалы

Razavi-Shearer D, Gamkrelidze I, Nguyen MH, Chen D-S, Van Damme P, Abbas Z, et al. Global prevalence, treatment, and prevention of hepatitis В virus infection in 2016: a modelling study. Lancet Gastroenterol Hepatol 2018; 3:383-403.

Trepo C, Chan HLY, Lok A. Hepatitis В virus infection. Lancet 2014; 384:2053-2063.

WHO I Global hepatitis report, 2017. WHO 2018.

Mitra B, Thapa RJ, Guo H, Block TM. Host functions used by hepatitis В virus to complete its life cycle: Implications for developing host-targeting agents to treat chronic hepatitis B. Antiviral Res 2018; 158:185-198.

Chen H-Y, Shen D-T, Ji D-Z, Han P-C, Zhang W-M, Ma J-F, et al. Prevalence and burden of hepatitis D virus infection in the global population: a systematic review and metaanalysis. Gw?2018;:gutjnl-2018-316601.

Liu J, Li T, Zhang L, Xu A. The Role of Hepatitis В Surface Antigen in Nucleos(t)ide Analogues Cessation among Asian Chronic Hepatitis В Patients: A Systematic Review. Hepatology Published Online First: 18 December 2018. doi: 10.1002/hep.30474

Nassal M. HBV cccDNA: viral persistence reservoir and key obstacle for a cure of chronic hepatitis B. Gut 2015; 64: 1972-1984.

Papatheodoridis G V., Manolakopoulos S, Touloumi G, Vourli G, Raptopoulou-Gigi M, Vafiadis-Zoumbouli I, et al. Virological suppression does not prevent the development of hepatocellular carcinoma in HBeAg-negative chronic hepatitis В patients with cirrhosis receiving oral antiviral(s) starting with lamivudine monotherapy: results of the nationwide HEPNET. Greece cohort study. Gut 2011; 60: 1109-1116.

Zoulim F, Mason WS. Reasons to consider earlier treatment of chronic HBV infections. Gut 2012; 61: 333-336.

Heidrich B, Yurdaydin C, Kabacam G, Ratsch BA, Zachou K, Bremer B, et al. Late HDV RNA relapse after peginterferon alpha-based therapy of chronic hepatitis delta. Hepatology 2014; 60: 87-97.

Wedemeyer H, Yurdaydin C, Dalekos GN, Erhardt A, Cakaloglu Y, Degertekin H, et al. Peginterferon plus Adefovir versus Either Drug Alone for Hepatitis Delta. N Engl J Med 2011; 364: 322-331.

Feld JJ, Terrault NA, Lin HS, Belle SH, Chung RT, Tsai N, et al. Entecavir and peginterferon alfa-2a in adults with HB eAg-positive immune tolerant chronic hepatitis В virus infection. Hepatology 2018;:hep. 30417.

Chen M, Sallberg M, Thung SN, Hughes J, Jones J, Milich DR. Nondeletional T-cell receptor transgenic mice: model for the CD4(+) T-cell repertoire in chronic hepatitis В virus infection. J Virol 2000; 74: 7587-99.

Chen M, Sallberg M, Hughes J, Jones J, Guidotti LG, Chisari F V., et al. Immune Tolerance Split between Hepatitis В Virus Precore and Core Proteins. J Virol 2005; 79: 3016-3027.

Chen MT, Billaud J-N, Sallberg M, Guidotti LG, Chisari F V., Jones J, et al. A function of the hepatitis В virus precore protein is to regulate the immune response to the core antigen. Proc NatlAcadSci 2004; 101: 14913-14918.

Mason WS, Gill US, Litwin S, Zhou Y, Peri S, Pop O, et al. HBV DNA Integration and Clonal Hepatocyte Expansion in Chronic Hepatitis В Patients Considered Immune Tolerant. Gastroenterology 2016; 151: 986-998.e4.

Milich DR. The Concept of Immune Tolerance in Chronic Hepatitis В Virus Infection Is Alive and Well. Gastroenterology 2016; 151: 801-804.

Short JM, Chen S, Roseman AM, Butler PJG, Crowther RA. Structure of Hepatitis В Surface Antigen from Subviral Tubes Determined by Electron Cryomicroscopy. J Mol Biol 2009; 390: 135-141.

Rydell GE, Prakash K, Norder H, Lindh M. Hepatitis В surface antigen on subviral particles reduces the neutralizing effect of anti-HBs antibodies on hepatitis В viral particles in vitro. Virology 2017; 509: 67-70.

Dryden KA, Wieland SF, Whitten-Bauer C, Gerin JL, Chisari F V., Yeager M. Native Hepatitis В Virions and Capsids Visualized by Electron Cryomicroscopy. Mol Cell 2006; 22: 843-850.

Ni Y, Sonnabend J, Seitz S, Urban S. The Pre-S2 Domain of the Hepatitis В Virus Is Dispensable for Infectivity but Serves a Spacer Function for L-Protein-Connected Virus Assembly. J Virol 2010; 84: 3879-3888.

Ni Y, Lempp FA, Mehrle S, Nkongolo S, Kaufman C, Faith M, et al. Hepatitis В and D Viruses Exploit Sodium Taurocholate Co-transporting Polypeptide for Species-Specific Entry into Hepatocytes. Gastroenterology 2014; 146:1070-1083.e6.

Chen A, Allien G, Brenndorfer ED, Brass A, Holmstrom F, Chen M, et al. Heterologous T Cells Can Help Restore Function in Dysfunctional Hepatitis С Virus Nonstructural 3/4A-Specific T Cells during Therapeutic Vaccination. J Immunol 2011; 186: 5107-5118.

Mancini-Bourgine M, Fontaine H, Scott-Algara D, Pol S, Brechot C, Michel M-L. Induction or expansion of T-cell responses by a hepatitis В DNA vaccine administered to chronic HBV carriers. Hepatology 2004; 40: 874-882.

Kosinska AD, Zhang E, Johrden L, Liu J, Seiz PL, Zhang X, et al. Combination of DNA Prime Adenovirus Boost Immunization with Entecavir Elicits Sustained Control of Chronic Hepatitis В in the Woodchuck Model. PLoSPathog 2013; 9:el003391.

Brass A, Frelin L, Milich DR, Sallberg M, Ahlen G. Functional Aspects of Intrahepatic Hepatitis В Virus-specific T Cells Induced by Therapeutic DNA Vaccination. Mol Ther 2015; 23: 578-590.

Yuen MF, Gane EJ, Kim DJ, Weilert F, Chan HLY, Lalezari J, et al. Antiviral Activity, Safety, and Pharmacokinetics of Capsid Assembly Modulator NVR 3-778 in Patients with Chronic HBV Infection. Gastroenterology Published Online First: 6 January 2019. doi: 10.1053/J.GASTRO.2018.12.023

Liang TJ, Block TM, McMahon BJ, Ghany MG, Urban S, Guo J-T, et al. Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure. Hepatology 2015; 62: 1893-1908.

Meuleman P, Vanlandschoot P, Leroux-Roels G. A simple and rapid method to determine the zygosity of uPA-transgenie SCID mice, doi: 10.1016/S0006-291X(03)01388-3

Meuleman P, Libbrecht L, De Vos R, de Hemptirme B, Gevaert K, Vandekerckhove J, et al. Morphological and biochemical characterization of a human liver in a uPA-SCID mouse chimera. Hepatology 2005; 41: 847-856.

Levander S, Holmstrom F, Frelin L, Ahlen G, Rupp D, Long G, et al. Immune-mediated effects targeting hepatitis С virus in a syngeneic replicon cell transplantation mouse model. Gut 2018; 67: 1525-1535.

Tjelle T, Kjeken R, Frelin L, Hoglund U, et al. hi vivo electroporation enhances the immunogenicity of hepatitis С virus nonstructural 3/4A DNA by increased local DNA uptake, protein expression, inflammation, and infiltration of CD3+T cells. J Immunol 2007; 179: 4741-53.

Ni Y, Urban S. Hepatitis В Virus Infection of HepaRG Cells, HepaRG-hNTCP Cells, and Primary Human Hepatocytes. In: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.).; 2017. pp. 15-25.

Donkers JM, Zehnder B, van Westen GJP, Kwakkenbos MJ, IJzerman AP, Oude Elferink RPJ, et al. Reduced hepatitis В and D viral entry using clinically applied drugs as novel inhibitors of the bile acid transporter NTCP. Sci Rep 2017; 7: 15307.

Meuleman P, Lerouxroels G. The human liver-uPA-SCID mouse: A model for the evaluation of antiviral compounds against HBV and HCV. Antiviral Res 2008; 80: 231-238.

Wi J, Jeong MS, Hong HJ. Construction and characterization of an anti-hepatitis В virus preS 1 humanized antibody that binds to the essential receptor binding site. J Microbiol Biotechnol 2017; 27: 1336-1344.

Lok ASF, McMahon BJ, Brown RS, Wong JB, Ahmed AT, Farah W, et al. Antiviral therapy for chronic hepatitis В viral infection in adults: A systematic review and metaanalysis. Hepatology 2016; 63: 284-306.

Revill PA, Chisari F V, Block JM, Dandri M, Gehring AJ, Guo H, et al. A global scientific strategy to cure hepatitis B. Lancet Gastroenterol Hepatol Published Online First: 10 April 2019. doi:10.1016/S2468-1253(19)30119-0

Neurath AR, Kent SB, Strick N, Parker K. Identification and chemical synthesis of a host cell receptor binding site on hepatitis В virus. Cell 1986; 46: 429 36.

Gripon P, Le Seyec J, Rumin S, Guguen-Guillouzo C. Myristylation of the Hepatitis В Virus Large Surface Protein Is Essential for Viral Infectivity. Virology 1995; 213: 292-299.

Hong HJ, Ryu CJ, Hur H, Kim S, Oh HK, Oh MS, et al. In vivo neutralization of hepatitis В virus infection by an anti-preSl humanized antibody in chimpanzees. Virology 2004; 318: 134-141.

Bogomolov P, Alexandrov A, Voronkova N, Macievich M, Kokina K, Petrachenkova M, et al. Treatment of chronic hepatitis D with the entry inhibitor myrcludex B: First results of a phase lb/Па study. J Hepatol 2016; 65: 490-498.

Blank A, Eidam A, Haag M, Hohmann N, Burhenne J, Schwab M, et al. The NTCP-inhibitor Myrcludex B: Effects on Bile Acid Disposition and Tenofovir Pharmacokinetics. Clin Pharmacol Ther 2018; 103: 341-348.

Passioura T, Watashi K, Fukano K, Sureau C, Suga H, Correspondence TW. De Novo Macrocyclic Peptide Inhibitors of Hepatitis В Virus Cellular Entry. Cell Chem Biol 2018; 25:906-915.

Bian Y, Zhang Z, Sun Z, Zhao J, Zhu D, Wang Y, et al. Vaccines Targeting PreS1 Domain Overcome Immune Tolerance in HBV Carrier Mice HHS Public Access. 2017; 66: 1067-1082.

Chen M, Jagya N, Bansal R, Frelin L, Sallberg M. Prospects and progress of DNA vaccines for treating hepatitis B. Expert Rev Vaccines 2016; 15:629-640.

Yalcin K, Danis R, Degertekin H, Alp MN, Tekes S, Budak T. The lack of effect of therapeutic vaccination with a pre-S2/S HBV vaccine in the immune tolerant phase of chronic HBV infection. J Clin Gastroenterol 2003; 37: 330-5.

Zhao H-J, Han Q-J, Wang G, Lin A, Xu D-Q, Wang Y-Q, et al. I:C-based rHBVvac therapeutic vaccine eliminates HBV via generatioPolyn of HBV-specific CD8+ effector memory T cells. Gut20l9;:gutjnl-2017-315588.

Suslov A, Boldanova T, Wang X, Wieland S, Heim MH. Hepatitis В Virus Does Not Interfere With Innate Immune Responses in the Human Liver. Gastroenterology 2018; 154: 1778-1790.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Svenska Vaccinfabriken Produktion AB

<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ГЕПАТИТА B И

D

<130> SVF.005WO

<150> US 62/966970

<151> 2020-01-28

<160> 39

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК HDAg генотипа 1 A

<400> 1

agccgcagcg aaagcaaaaa aaaccgcggc ggccgcgaag aaattctgga acagtgggtg

60

ggcgcgcgca aaaaactgga agaactggaa cgcgatctgc gcaaaattaa aaaaaaaatt

120

aaaaaactgg aagaagaaaa cccgtggctg ggcaacatta aaggcattct gggcaaaaaa

180

gatcgcgaag gcgaaggcgc gccgccggcg aaacgcgcgc gcgcggatca gatggaagtg

240

gatagcggcc cgcgcaaacg cccgtttcgc ggcgaattta ccgataaaga acgccgcgat

300

catcgccgcc gcaaagcgct ggaaaacaaa cgcaaacagc tgagcagcgg cggcaaaagc

360

ctgagcaaag aagaagaaga agaactgcgc aaactgaccg aagaagatga acgccgcgaa

420

cgccgcgtgg cgggcccgcg cgtgggcggc gtgaacccgc tggaaggcgg cacccgcggc

480

gcgccgggcg gcggctttgt gccgagcatg cagggcgtgc cggaaagccc gtttgcgcgc

540

accggcgaag gcctggatgt gcgcggcaac cagggctttc cgtgggatat tctgtttccg

600

gcggatccgc cgtttagccc gcagagctgc cgcccgcag

639

<210> 2

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК HDAg генотипа 1 B

<400> 2

agccgcagcg aaagcaaaaa aaaccgcggc ggccgcgaag aagtgctgga acagtgggtg

60

aacggccgca aaaaactgga agaactggaa cgcgaactgc gccgcgcgcg caaaaaaatt

120

aaaaaactgg aagatgataa cccgtggctg ggcaacgtga aaggcattct gggcaaaaaa

180

gataaagatg gcgaaggcgc gccgccggcg aaacgcgcgc gcaccgatca gatggaaatt

240

gatagcggcc cgcgcaaacg cccgctgcgc ggcggcttta ccgatcgcga acgccaggat

300

catcgccgcc gcaaagcgct gaaaaacaaa aaaaaacagc tgagcgcggg cggcaaaagc

360

ctgagcaaag aagaagaaga agaactgaaa cgcctgaccc gcgaagatga agaacgcaaa

420

aaagaagaac atggcccgag ccgcctgggc gtgaacccga gcgaaggcgg cccgcgcggc

480

gcgccgggcg gcggctttgt gccgagcatg cagggcattc cggaaagccg ctttacccgc

540

accggcgaag gcctggatgt gcgcggcagc cgcggctttc cgcaggatat tctgtttccg

600

agcgatccgc cgtttagccc gcagagctgc cgcccgcag

639

<210> 3

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК HDAg генотипа 2 A

<400> 3

agccagagcg aaacccgccg cggccgccgc ggcacccgcg aagaaaccct ggaaaaatgg

60

attaccgcgc gcaaaaaagc ggaagaactg gaaaaagatc tgcgcaaaac ccgcaaaacc

120

attaaaaaac tggaagaaga aaacccgtgg ctgggcaaca ttgtgggcat tattcgcaaa

180

ggcaaagatg gcgaaggcgc gccgccggcg aaacgcccgc gcaccgatca gatggaagtg

240

gatagcggcc cgggcaaacg cccgcataaa agcggcttta ccgataaaga acgcgaagat

300

catcgccgcc gcaaagcgct ggaaaacaaa aaaaaacagc tgagcgcggg cggcaaaatt

360

ctgagcaaag aagaagaaga agaactgcgc cgcctgaccg atgaagatga agaacgcaaa

420

cgccgcgtgg cgggcccgcg cgtgggcgat gtgaacccga gccgcggcgg cccgcgcggc

480

gcgccgggcg gcggctttgt gccgcagatg gcgggcgtgc cggaaagccc gtttagccgc

540

accggcgaag gcctggatat tcgcggcacc cagggctttc cgtgggtgag cccgagcccg

600

ccgcagcagc gcctgccgct gctggaatgc accccgcag

639

<210> 4

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК HDAg генотипа 2 B

<400> 4

agccagagcg aaagcaaaaa aaaccgccgc ggcggccgcg aagatattct ggaaaaatgg

60

attaccaccc gccgcaaagc ggaagaactg gaaaaagatc tgcgcaaagc gcgcaaaacc

120

attaaaaaac tggaagatga aaacccgtgg ctgggcaaca ttattggcat tattcgcaaa

180

ggcaaagatg gcgaaggcgc gccgccggcg aaacgcccgc gcaccgatca gatggaaatt

240

gatagcggca ccggcaaacg cccgcataaa agcggcttta ccgataaaga acgcgaagat

300

catcgccgcc gcaaagcgct ggaaaacaaa aaaaaacagc tgagcagcgg cggcaaaaac

360

ctgagccgcg aagaagaaga agaactgggc cgcctgaccg tggaagatga agaacgccgc

420

cgccgcgtgg cgggcccgcg caccggcgat gtgaacctga gcggcggcgg cccgcgcggc

480

gcgccgggcg gcggctttgt gccgcgcatg gaaggcgtgc cggaaagccc gtttacccgc

540

accggcgaag gcctggatat tcgcggcaac cagggctttc cgtgggtgcg cccgagcccg

600

ccgcagcagc gcctgccgct gctggaatgc accccgcag

639

<210> 5

<211> 213

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность HDAg генотипа 1 A

<400> 5

Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Ile Leu

1 5 10 15

Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Asp

20 25 30

Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro

35 40 45

Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg Glu Gly

50 55 60

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met Glu Val

65 70 75 80

Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr Asp Lys

85 90 95

Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Arg Lys

100 105 110

Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu

115 120 125

Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg Val Ala

130 135 140

Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg Gly

145 150 155 160

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro Glu Ser

165 170 175

Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn Gln Gly

180 185 190

Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln

195 200 205

Ser Cys Arg Pro Gln

210

<210> 6

<211> 213

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность HDAg генотипа 1 B

<400> 6

Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu

1 5 10 15

Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu

20 25 30

Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro

35 40 45

Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly

50 55 60

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile

65 70 75 80

Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg

85 90 95

Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys

100 105 110

Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu

115 120 125

Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu Glu Arg Lys Lys Glu Glu His

130 135 140

Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly

145 150 155 160

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser

165 170 175

Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly

180 185 190

Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln

195 200 205

Ser Cys Arg Pro Gln

210

<210> 7

<211> 213

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность HDAg генотипа 2 A

<400> 7

Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu Glu Thr

1 5 10 15

Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys

20 25 30

Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn

35 40 45

Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly

50 55 60

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Val

65 70 75 80

Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys

85 90 95

Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys

100 105 110

Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu

115 120 125

Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ala

130 135 140

Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro Arg Gly

145 150 155 160

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro Glu Ser

165 170 175

Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr Gln Gly

180 185 190

Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu

195 200 205

Glu Cys Thr Pro Gln

210

<210> 8

<211> 213

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность HDAg генотипа 2 B

<400> 8

Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg Gly Gly Arg Glu Asp Ile

1 5 10 15

Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys

20 25 30

Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Asp Glu Asn

35 40 45

Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly

50 55 60

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile

65 70 75 80

Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys

85 90 95

Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys

100 105 110

Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu Ser Arg Glu Glu Glu Glu Glu

115 120 125

Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala

130 135 140

Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn Leu Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly

145 150 155 160

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Arg Met Glu Gly Val Pro Glu Ser

165 170 175

Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly

180 185 190

Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu

195 200 205

Glu Cys Thr Pro Gln

210

<210> 9

<211> 141

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК PreS1 A

<400> 9

ggcaccaacc tgagcaccag caacccgctg ggcttttttc cggatcatca gctggatccg

60

gcgtttcgcg cgaacagcgc gaacccggat tgggatttta acccgaacaa agatacctgg

120

ccggatgcga acaaagtggg c

141

<210> 10

<211> 141

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК PreS1 B

<400> 10

ggccagaacc tgagcaccag caacccgctg ggcttttttc cggatcatca gctggatccg

60

gcgtttcgcg cgaacaccgc gaacccggat tgggatttta acccgaacaa agatacctgg

120

ccggatgcga acaaagtggg c

141

<210> 11

<211> 47

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность PreS1 A

<400> 11

Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

1 5 10 15

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp

20 25 30

Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

35 40 45

<210> 12

<211> 47

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность PreS1 B

<400> 12

Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

1 5 10 15

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp

20 25 30

Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

35 40 45

<210> 13

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность ДНК сайта автокаталитического расщепления

пептида P2A

<400> 13

ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct

60

ggacct

66

<210> 14

<211> 22

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность сайта автокаталитического

расщепления пептида P2A

<400> 14

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 15

<211> 3198

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-1

<400> 15

atggccagca gaagtgaatc aaaaaagaat cggggagggc gggaagaaat cctggaacag

60

tgggtcggag cacggaagaa actggaagaa ctggagaggg acctgcgcaa gatcaagaag

120

aagatcaaga agctggagga ggagaacccc tggctgggca atatcaaggg catcctgggc

180

aagaaggatc gggagggaga gggagcacca cctgcaaaga gggccagagc cgaccagatg

240

gaggtggata gcggaccaag gaagcgccct ttcagaggag agtttaccga caaggagcgg

300

agagatcaca ggcgccggaa ggccctggag aacaagagga agcagctgag ctccggcggc

360

aagtccctgt ctaaggagga ggaggaggag ctgcgcaagc tgacagagga ggacgagaga

420

agggagagga gggtggcagg acctagggtg ggaggcgtga acccactgga gggaggaacc

480

agaggagcac ctggaggagg attcgtgcca tccatgcagg gagtgcccga gtctcctttt

540

gcccggacag gcgagggcct ggatgtgaga ggcaatcagg gcttcccctg ggacatcctg

600

tttcctgccg atccaccctt ctctcctcag agctgccggc cacagagcag atccgagtct

660

aagaagaaca ggggaggaag agaggaggtg ctggagcagt gggtgaatgg ccggaagaag

720

ctggaggagc tggagcggga gctgagaagg gccagaaaga agatcaagaa gctggaagac

780

gataatcctt ggctgggcaa tgtgaaaggc atcctgggca agaaggacaa ggatggagag

840

ggagcacctc cagcaaagag ggcaagaacc gaccagatgg agatcgattc tggaccaagg

900

aagcgccccc tgagaggagg cttcacagac cgggagagac aggatcaccg ccggagaaag

960

gccctgaaga acaagaagaa gcagctgtcc gccggaggca agagcctgtc caaagaagag

1020

gaagaggagc tgaagaggct gacccgcgag gacgaggaga ggaagaagga ggagcacgga

1080

ccaagcaggc tgggagtgaa tccttccgag ggaggaccta ggggagcacc aggaggaggc

1140

ttcgtgccat ctatgcaggg catccccgag agccggttta ccagaacagg agagggcctg

1200

gacgtgaggg gctcccgcgg ctttcctcag gacatcctgt tcccatctga tccccctttt

1260

tccccccagt cttgtaggcc tcagggcacc aacctgtcta caagcaatcc actgggcttc

1320

tttcccgacc accagctgga tcctgccttc cgcgccaaca gcgccaatcc cgactgggac

1380

ttcaacccaa ataaggacac ctggccagat gccaacaagg tcggcggcca gaacctgtcc

1440

acatctaatc ctctgggctt ctttccagac caccagctgg atccagcctt ccgggccaac

1500

acagctaacc ctgactggga cttcaacccc aataaggata cttggcccga cgccaacaag

1560

gtcggcggaa gcggagctac taacttcagc ctgctgaagc aggctggaga cgtggaggag

1620

aaccctggac ctatgagcca gtccgagaca aggaggggcc ggagaggaac cagggaggag

1680

acactggaga agtggatcac agcccgcaag aaggccgagg agctggagaa ggacctgcgg

1740

aagaccagaa agacaatcaa gaagctggaa gaagagaacc catggctggg caatatcgtg

1800

ggcatcatca gaaagggcaa ggacggcgag ggagcaccac cagcaaagag gcccaggact

1860

gatcagatgg aagtcgatag cggaccaggc aagcggcctc acaagtccgg cttcacagac

1920

aaggagagag aggaccatag gcgccggaag gccctggaaa acaagaagaa gcaattatcc

1980

gccggcggca agatcctgtc caaagaggaa gaagaggagc tgagaaggct gaccgacgag

2040

gatgaggaga ggaaaagaag ggtggcagga ccaagggtgg gcgacgtgaa tcccagcagg

2100

ggaggaccaa gaggcgcccc tggcggcggc ttcgtgccac agatggcagg agtgccagag

2160

agcccctttt ccaggacagg agagggcctg gatatcagag gcacccaggg ctttccttgg

2220

gtgtctccaa gccctccaca gcagcggctg ccactgctgg agtgcacccc tcagtcccag

2280

tctgagagca agaagaacag aaggggcggc agagaggaca tcctggagaa gtggatcacc

2340

acacgcagaa aagctgaaga actggaaaag gacctgagga aggcccgcaa aacaatcaag

2400

aagctggagg atgaaaatcc atggctggga aacatcatcg gcatcatcag gaagggcaag

2460

gacggggaag gcgcaccacc tgcaaagcgg cctagaacag atcagatgga aatcgattct

2520

ggcaccggca agaggccaca caagagcggc ttcaccgaca aggagcgcga ggatcacaga

2580

aggcgcaagg ccctggagaa caagaagaag caattaagca gcggcggcaa gaatctgtcc

2640

agagaagaag aggaggagct gggccgcctg accgtggagg acgaggagcg gagaaggcgc

2700

gtggcaggac cacgcacagg cgatgtgaac ctgtccggag gaggaccaag gggagcacct

2760

ggaggcggct tcgtgcctag aatggaggga gtgcctgagt cccccttcac ccgcaccgga

2820

gagggcctgg acatcagagg caatcaggga ttcccatggg tgaggcccag cccaccacag

2880

cagcgcctgc cactgctgga gtgtaccccc cagggcacaa acctgtccac ctctaatccc

2940

ctgggcttct ttcctgatca tcagctggac ccagccttca gggccaactc cgccaatcca

3000

gattgggact tcaacccgaa taaggatact tggccagatg caaacaaggt cggaggacag

3060

aacctgagca catccaaccc tctgggcttc tttcctgacc atcagctgga tcccgccttt

3120

cgcgccaata ccgccaaccc tgattgggac ttcaacccta ataaggatac ttggcctgat

3180

gctaataagg tcgggtga

3198

<210> 16

<211> 3198

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-2

<400> 16

atggccggca ctaacctgtc tacatcaaac cctctgggat ttttccccga tcatcagctg

60

gaccccgcat ttcgcgctaa ctctgctaac cctgactggg atttcaaccc taataaggac

120

acatggccag atgccaacaa ggtcggcggc cagaacctgt ccacctctaa tcccctgggc

180

ttctttcctg accaccagct ggatcctgcc ttcagggcca acaccgccaa tcccgactgg

240

gacttcaacc caaataagga tacctggcct gacgctaaca aggtcggcag ccggtccgag

300

tctaagaaga ataggggagg aagggaggag atcctggagc agtgggtggg cgccagaaag

360

aagctggagg agctggagcg ggacctgaga aagatcaaga agaagatcaa gaagctggag

420

gaggagaacc cctggctggg caatatcaag ggcatcctgg gcaagaagga tcgggaggga

480

gagggagcac cacctgcaaa gagggccaga gccgaccaga tggaggtgga ttccggccct

540

aggaagcgcc cattcagagg cgagtttaca gacaaggagc ggagagatca caggcgccgg

600

aaggccctgg agaacaagag gaagcagctg agctccggcg gcaagagcct gtccaaggag

660

gaggaggagg agctgcgcaa gctgaccgag gaggacgaga gaagggagag gagggtggca

720

ggacctaggg tgggaggcgt gaacccactg gagggaggaa caagaggagc acccggagga

780

ggcttcgtgc cttctatgca gggcgtgcct gagagcccat ttgccaggac cggagagggc

840

ctggacgtga gaggcaatca gggcttccca tgggacatcc tgtttcccgc cgatccaccc

900

ttcagcccac agtcctgcag gccccagtct cgcagcgagt ccaagaagaa cagaggcgga

960

agggaggagg tgctggagca gtgggtgaat ggcaggaaga agctggaaga actggagagg

1020

gagctgagaa gggcccgcaa gaagatcaag aagctggaag acgataatcc ttggctgggc

1080

aatgtgaaag gcatcctggg caagaaggac aaggatggag agggagcacc tccagcaaag

1140

agggcaagaa cagaccagat ggagatcgat tccggaccaa ggaagcgccc tctgagggga

1200

ggcttcaccg accgggagag acaggatcac cgccggagaa aggccctgaa gaacaagaag

1260

aagcagctga gcgccggcgg caagtctctg agtaaagaag aagaggagga gctgaagcgg

1320

ctgacaagag aggacgagga gaggaagaag gaggagcacg gaccatccag gctgggagtg

1380

aatccttctg agggaggacc aaggggcgcc cctggcggag gcttcgtgcc tagcatgcag

1440

ggcatcccag agtccaggtt taccaggaca ggcgaaggcc tggacgtgcg gggctctaga

1500

ggctttcccc aggacatcct gttccctagc gatccccctt tttctcctca gagctgtaga

1560

ccacagggaa gcggagctac taacttcagc ctgctgaagc aggctggaga cgtggaggag

1620

aaccctggac ctatgggcac caacctgtcc acatctaacc ctctgggctt ctttccagat

1680

catcagctgg acccagcctt cagggccaac agcgccaatc cagactggga cttcaacccc

1740

aataaggaca catggcctga cgcaaacaag gtcggaggac agaacctgag cacctccaat

1800

ccactgggct tctttcccga ccaccagctg gatccagcct tccgcgccaa cactgctaac

1860

cctgattggg acttcaaccc taataaggat acatggcctg atgccaataa ggtcggctct

1920

cagagcgaga caaggagggg ccggagagga accagggagg agacactgga gaagtggatc

1980

accgcccgca agaaggccga ggagctggag aaggacctga ggaagacccg caagacaatc

2040

aagaagctgg aagaagagaa cccatggctg ggcaatatcg tgggcatcat cagaaagggc

2100

aaggacggcg agggagcacc accagcaaag aggccccgca cagatcagat ggaagtggat

2160

tccggacctg gcaagcggcc acacaagtct ggcttcaccg acaaggagag agaggaccat

2220

aggcgccgga aggccctgga aaacaagaag aagcaattat ctgccggcgg caagatcctg

2280

agtaaagaag aggaagagga gctgagaagg ctgaccgacg aggatgagga gaggaagcgc

2340

cgggtggccg gcccacgcgt gggcgacgtg aatccctcca ggggaggacc aagaggagca

2400

cctggaggcg gcttcgtgcc ccagatggcc ggcgtgcccg agtccccttt ttctcggacc

2460

ggcgagggcc tggatatcag aggcacacag ggctttccat gggtgtcccc ctctcctcca

2520

cagcagaggc tgccactgct ggagtgcaca ccccagagcc agagcgaatc taagaagaac

2580

agaaggggag gccgcgagga catcctggaa aaatggatca ccacacgcag aaaagctgaa

2640

gaactggaaa aggacctgcg gaaggccaga aagaccatca agaagctgga ggatgaaaat

2700

ccatggctgg gaaacatcat cggcatcatc cggaagggca aggacgggga aggcgcacca

2760

cctgcaaagc ggcctagaac cgatcagatg gaaatcgata gcggcacagg caagaggcca

2820

cacaagtccg gcttcaccga taaagagcgc gaggatcaca gaaggcgcaa ggccctggag

2880

aacaagaaga agcaattaag cagcggcggc aagaatctgt ccagagaaga ggaggaagag

2940

ctgggccgcc tgacagtgga ggacgaggag cggagaaggc gcgtggcagg acccagaacc

3000

ggcgatgtga acctgtccgg aggaggacct aggggagcac caggaggcgg cttcgtgcct

3060

agaatggagg gcgtgccaga gtctcccttt acccggacag gcgagggcct ggacatcaga

3120

ggcaatcagg gctttccctg ggtccgcccc tccccccctc agcagagact gccactgctg

3180

gaatgcacac cacagtga

3198

<210> 17

<211> 3762

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-3

<400> 17

atggccggca ccaatctgtc tacctcaaat cccctgggct tcttccccga tcatcagctg

60

gaccctgcct tccgagcaaa ttccgctaat cctgattggg atttcaaccc aaataaggac

120

acatggccag atgccaacaa ggtcggcggc cagaacctgt ccacctctaa tcctctgggc

180

ttctttccag accaccagct ggatcccgcc ttcagggcca acacagccaa tcccgactgg

240

gacttcaacc ctaataagga cacctggcct gacgccaaca aggtcggcag caggtccgag

300

tctaagaaga ataggggagg aagggaggag atcctggagc agtgggtggg agcacgcaag

360

aagctggagg agctggagcg ggacctgaga aagatcaaga agaagatcaa gaagctggag

420

gaggagaacc cctggctggg caatatcaag ggcatcctgg gcaagaagga tcgggaggga

480

gagggagcac cacctgcaaa gagggccaga gccgaccaga tggaggtgga ttccggacca

540

aggaagcgcc ctttcagagg agagtttaca gacaaggagc ggagagatca caggcgccgg

600

aaggccctgg agaacaagcg gaagcagctg agctccggcg gcaagagcct gtccaaggag

660

gaggaggagg agctgagaaa gctgaccgag gaggacgaga gaagggagag gagggtggcc

720

ggccccaggg tgggcggcgt gaaccctctg gagggaggaa caaggggagc accaggagga

780

ggcttcgtgc cttccatgca gggcgtgccc gagtctcctt ttgccaggac cggagagggc

840

ctggacgtgc gcggcaatca gggcttccca tgggacatcc tgtttcccgc cgatccaccc

900

ttctctcccc agagctgcag gcctcagtct cgcagcgagt ccaagaagaa cagaggcgga

960

agggaggagg tgctggagca gtgggtgaat ggcaggaaga agctggaaga actggagagg

1020

gagctgagaa gggcccgcaa gaagatcaag aagctggaag acgataatcc ttggctgggc

1080

aatgtgaaag gcatcctggg caagaaggac aaggatggag agggagcacc tccagcaaag

1140

agggcaagaa cagaccagat ggagatcgat tctggaccaa ggaagcgccc cctgagggga

1200

ggcttcaccg accgggagag acaggatcac cgccggagaa aggccctgaa gaacaagaag

1260

aagcagctga gcgccggcgg caagtctctg agtaaagaag aagaggagga gctgaagcgg

1320

ctgaccagag aggacgagga gcggaagaag gaggagcacg gcccaagcag actgggagtg

1380

aatccatccg agggaggacc tagaggcgcc cctggcggcg gcttcgtgcc ttctatgcag

1440

ggcatcccag agagcaggtt taccaggaca ggcgaaggcc tggacgtgcg gggctccaga

1500

ggctttcccc aggacatcct gttcccttct gatccccctt tttccccaca gtcttgtagg

1560

ccccagggca ccaacctgtc cacatctaac ccactgggct tctttcctga tcaccagctg

1620

gatccagcct tccgcgccaa ctccgccaat ccagactggg acttcaaccc caataaggac

1680

acatggcctg atgctaacaa ggtcggaggc cagaacctga gcacctccaa tcccctgggc

1740

ttctttcctg accaccagct ggatcctgcc ttccgcgcca acacagctaa ccctgattgg

1800

gacttcaacc caaataagga tacctggcct gatgcaaaca aggtcggagg aagcggagct

1860

actaacttca gcctgctgaa gcaggctgga gacgtggagg agaaccctgg acctatgggc

1920

accaacctgt ctacaagcaa tccactgggc ttctttcccg accatcagct ggacccagcc

1980

ttcagggcca acagcgccaa ccctgactgg gacttcaacc caaataagga cacgtggcct

2040

gatgccaaca aggtcggagg acaaaacctg tccacctcta accccctggg cttctttccc

2100

gatcatcaat tagacccagc cttccgcgct aacactgcta accctgactg ggacttcaac

2160

ccgaataagg atacttggcc tgatgccaat aaggtcggca gccagtccga gacaaggagg

2220

ggccggagag gaaccaggga ggagacactg gagaagtgga tcaccgccag aaagaaggcc

2280

gaggagctgg agaaggacct gaggaagacc cgcaagacaa tcaagaagct ggaagaagag

2340

aacccttggc tgggcaatat cgtgggcatc atcagaaagg gcaaggacgg cgagggagca

2400

ccaccagcca agaggccacg cacagatcag atggaagtgg atagcggacc aggcaagagg

2460

cctcacaagt ccggcttcac cgacaaggag agggaggacc ataggcgccg gaaggccctg

2520

gaaaacaaga agaagcaatt atccgccggc ggcaagatcc tgtctaaaga agaggaagaa

2580

gagctgagaa ggctgaccga cgaggatgag gagaggaaga ggagggtggc aggacctaga

2640

gtgggcgacg tgaatccatc caggggagga ccaagaggag caccaggagg cggcttcgtg

2700

ccacagatgg caggagtgcc agagagcccc ttttccagga caggagaggg cctggatatc

2760

aggggaaccc agggctttcc ttgggtgtct ccaagccctc cacagcagcg gctgccactg

2820

ctggagtgca caccccagtc ccagtctgag agcaagaaga acagaagggg cggcagagag

2880

gacatcctgg aaaaatggat caccacacgc agaaaagctg aagaactgga aaaggacctg

2940

cggaaggcca gaaagaccat caagaagctg gaggatgaaa atccatggct gggaaatatc

3000

atcggcatca tccggaaggg caaggacggg gaaggcgcac cacctgcaaa gcggcccagg

3060

accgatcaga tggaaatcga ttctggaacc ggcaagcggc ctcacaagag tggcttcacc

3120

gataaggaga gagaggatca cagaaggcgc aaggccctgg agaacaagaa gaagcaatta

3180

agcagcggcg gcaagaatct gtccagagaa gaggaagagg agctgggcag actgacagtg

3240

gaggacgagg agcggagaag gcgcgtggca ggaccaagaa ccggcgatgt gaacctgtcc

3300

ggaggaggac caaggggagc acctggggga ggcttcgtgc caaggatgga gggagtgcct

3360

gagtccccct tcaccagaac cggcgaaggc ctggacatca ggggcaatca gggattccca

3420

tgggtgcggc cctccccacc ccagcagaga ctgcctctgc tggagtgtac cccacagggc

3480

actaacctgt ccacctctaa cccgttaggc ttctttcctg accatcaatt agatcccgcc

3540

ttccgggcca acagcgccaa tcctgattgg gacttcaacc cgaataagga cacctggccc

3600

gacgcaaaca aggtcggagg gcaaaacctg agcacctcca accctttagg cttctttcca

3660

gatcatcagc tggatccagc ctttagagcc aataccgcca accctgactg ggatttcaac

3720

cctaacaaag atacctggcc cgacgctaac aaagtgggat ga

3762

<210> 18

<211> 3900

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-4

<400> 18

atggccagtc ggagcgaatc aaagaaaaat aggggagggc gggaagaaat cctggagcag

60

tgggtcggag cacgaaagaa actggaagaa ctggagaggg acctgcgcaa gatcaagaag

120

aagatcaaga agctggagga ggagaacccc tggctgggca atatcaaggg catcctgggc

180

aagaaggatc gggagggaga gggagcacca cctgcaaaga gggccagagc cgaccagatg

240

gaggtggata gcggccctag gaagcgccca ttcagaggcg agtttacaga caaggagcgg

300

agagatcaca ggcgccggaa ggccctggag aacaagcgga agcagctgag ctccggcggc

360

aagtccctgt ctaaggagga ggaggaggag ctgagaaagc tgaccgagga ggacgagaga

420

agggagagga gggtggcagg acctagggtg ggaggcgtga acccactgga gggaggaaca

480

aggggagcac ctggaggagg attcgtgcca tccatgcagg gagtgcctga gtctccattt

540

gccaggaccg gagagggcct ggatgtgcgc ggaaatcagg gcttcccctg ggacatcctg

600

tttcctgccg atccaccctt ctccccacag tcttgcaggc cacagggaac caacctgagc

660

acatccaatc ctctgggctt ctttccagac caccagctgg atcctgcctt cagagccaac

720

tccgccaatc cagactggga cttcaacccc aataaggaca catggcctga tgccaacaag

780

gtcggcggcc agaacctgtc taccagcaat cccctgggct tctttcctga ccaccagctg

840

gatccagcct tccgggccaa cactgctaac cctgattggg acttcaaccc taataaggat

900

acctggccag acgccaacaa ggtcggcgga agcggagcta ctaacttcag cctgctgaag

960

caggctggag acgtggagga gaaccctgga cctatgtcca ggtctgagag caagaagaat

1020

aggggaggaa gagaggaggt gctggagcag tgggtgaacg gccgcaagaa gctggaggag

1080

ctggagaggg agctgagaag ggcccgcaag aagatcaaga agctggaaga cgataatcct

1140

tggctgggca atgtgaaagg catcctgggc aagaaggaca aggatggaga gggagcacct

1200

ccagcaaaga gggcaagaac agaccagatg gagatcgatt ctggaccaag gaagcgccct

1260

ctgaggggag gcttcaccga ccgggagaga caggatcacc gccggagaaa ggccctgaag

1320

aacaagaaga agcagctgtc cgccggcggc aagtccctga gcaaagaaga ggaagaggag

1380

ctgaagaggc tgacccgcga ggacgaggag cggaagaagg aggagcacgg accaagcaga

1440

ctgggagtga atccttccga gggaggacca agaggagcac ccggaggagg cttcgtgcca

1500

tctatgcagg gcatccccga gagccggttt accagaacag gagagggcct ggacgtgagg

1560

ggctcccgcg gctttcctca ggacatcctg ttcccatctg atcccccttt tagcccacag

1620

tcctgtaggc cccagggcac taacctgagc acatccaacc cactgggctt ctttcctgat

1680

catcagctgg acccagcctt ccgcgccaac agcgccaacc ctgactggga cttcaaccca

1740

aataaggaca catggccaga tgctaacaag gtcggaggac aaaacctgtc taccagcaac

1800

cctctgggct tctttcccga tcatcagctg gaccccgcct tcagggccaa cacagccaat

1860

cccgactggg acttcaaccc gaataaggac acctggccag atgcaaacaa ggtcggagga

1920

agcggagcta ctaacttcag cctgctgaag caggctggag acgtggagga gaaccctgga

1980

cctatgagcc agtctgagac aaggaggggc cggagaggaa ccagggagga gacactggag

2040

aagtggatca ccgccagaaa gaaggccgag gagctggaga aggacctgcg gaagaccaga

2100

aagacaatca agaagctgga agaagagaac ccatggctgg gcaatatcgt gggcatcatc

2160

cgcaagggca aggacggcga gggagcacca ccagcaaaga ggccccgcac agatcagatg

2220

gaagtggata gcggccctgg caagaggcca cacaagtccg gcttcaccga caaggagagg

2280

gaggaccata ggcgccggaa ggccctggaa aacaagaaga agcaattatc cgccggcggc

2340

aagatcctgt ccaaagagga agaagaggag ctgagaaggc tgaccgacga ggatgaggag

2400

aggaaaagaa gggtggcagg accaagagtg ggcgacgtga atcccagcag aggcggacca

2460

agaggagcac ctggaggcgg cttcgtgccc cagatggccg gcgtgcccga gtctcctttt

2520

agcagaactg gagagggcct ggatatcagg ggaacacagg gctttccatg ggtgagccca

2580

tcccctccac agcagaggct gccactgctg gagtgcaccc ctcagggaac caacctgtct

2640

accagcaacc cgctgggctt ctttcccgac catcagctgg accctgcctt ccgcgccaac

2700

tccgccaacc ctgattggga cttcaacccg aataaggata cctggcccga cgctaacaag

2760

gtcggaggcc agaacctgtc cacctctaac cccttaggct tctttcccga tcaccagctg

2820

gatcccgcct tcagagccaa cactgctaac cccgattggg acttcaaccc gaataaggac

2880

acgtggccag acgctaacaa ggtcggggga agcggagcta ctaacttcag cctgctgaag

2940

caggctggag acgtggagga gaaccctgga cctatgtcgc agtccgagtc taagaagaat

3000

agaaggggcg gccgggagga tatcctggaa aaatggatca ccacacgcag aaaagctgaa

3060

gaactggaaa aggacctgag gaaggcccgc aagaccatca agaagctgga ggatgaaaat

3120

ccatggctgg gaaacatcat cggcatcatc agaaagggca aggacgggga aggcgcccca

3180

cctgcaaagc ggcctagaac cgatcagatg gaaatcgatt ctggcacagg caagcggcca

3240

cacaagagtg gcttcaccga taaggagaga gaggatcaca gaaggcgcaa ggccctggag

3300

aacaagaaga agcaattaag cagcggcggc aagaatctgt ccagagaaga agaggaggag

3360

ctgggcagac tgacagtgga ggacgaggag cggagaaggc gcgtggcagg accaaggacc

3420

ggcgatgtga acctgagcgg aggaggacct aggggagcac caggaggcgg cttcgtgcct

3480

aggatggagg gagtgccaga gtcccccttt accaggactg gcgagggcct ggacatcagg

3540

ggaaatcagg gattcccatg ggtgcggcct agcccaccac agcagagact gccactgctg

3600

gagtgtacac cccagggcac aaacctgagc acatccaatc cgctgggctt ctttccagat

3660

catcaattag atccagcctt cagggccaac tccgccaatc cggattggga cttcaacccg

3720

aataaggaca cttggcccga cgcaaacaag gtcggagggc aaaacctgtc taccagcaat

3780

ccacttggct tctttcctga ccatcagctg gatcccgcct ttcgcgccaa taccgccaat

3840

cctgactggg acttcaatcc taacaaagac acctggcccg acgcaaacaa agtgggatga

3900

<210> 19

<211> 2634

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-5

<400> 19

atggcctcac ggtcagagtc aaagaaaaat aggggggggc gggaagaaat cctggaacag

60

tgggtcggag cacggaaaaa actggaagag ctggagaggg acctgcgcaa gatcaagaag

120

aagatcaaga agctggagga ggagaacccc tggctgggca atatcaaggg catcctgggc

180

aagaaggatc gggagggaga gggagcacca cctgcaaaga gggccagagc cgaccagatg

240

gaggtggata gcggccctag gaagcgccca ttcagaggcg agtttaccga caaggagcgg

300

agagatcaca ggcgccggaa ggccctggag aacaagcgga agcagctgag ctccggcggc

360

aagtccctgt ctaaggagga ggaggaggag ctgagaaagc tgacagagga ggacgagaga

420

agggagcgcc gggtggccgg cccaagggtg ggcggcgtga accccctgga gggaggaacc

480

aggggagcac ctggaggagg cttcgtgcca tctatgcagg gcgtgcctga gagcccattt

540

gccaggacag gagagggcct ggatgtgcgc ggcaatcagg gcttcccctg ggacatcctg

600

tttcctgccg atccaccctt cagcccacag tcctgcaggc ctcagagcag atccgagtct

660

aagaagaaca ggggaggaag agaggaggtg ctggagcagt gggtgaatgg ccggaagaag

720

ctggaggagc tggagcggga gctgagaagg gccagaaaga agatcaagaa gctggaagac

780

gataatcctt ggctgggcaa tgtgaaaggc atcctgggca agaaggacaa ggatggagag

840

ggagcacctc cagcaaagag ggcaagaacc gaccagatgg agatcgatag cggaccaagg

900

aagcgccctc tgagaggagg cttcacagac cgggagagac aggatcaccg ccggagaaag

960

gccctgaaga acaagaagaa gcagctgtcc gccggaggca agagcctgtc caaagaagag

1020

gaagaggagc tgaagaggct gacccgcgag gacgaggagc ggaagaagga ggagcacggc

1080

ccttccagac tgggcgtgaa tccatctgag ggaggaccaa ggggagcacc aggcggcggc

1140

ttcgtgccaa gcatgcaggg catccccgag tcccggttta ccagaacagg agagggcctg

1200

gacgtgaggg gctctcgcgg ctttcctcag gacatcctgt tcccaagcga tccccctttt

1260

tctccacaga gctgtcgccc ccagggaagc ggagctacta acttcagcct gctgaagcag

1320

gctggagacg tggaggagaa ccctggacct atgtctcaga gcgagacaag gaggggccgg

1380

agaggaacca gggaggagac actggagaag tggatcacag ccagaaagaa ggccgaggag

1440

ctggagaagg acctgcggaa gaccagaaag acaatcaaga agctggaaga agaaaatcca

1500

tggctgggaa atatcgtggg catcatcagg aagggcaagg acggcgaggg agcaccacca

1560

gccaagaggc ctcgcactga tcagatggag gtggattccg gccctggcaa gaggccacac

1620

aagtctggct tcacagacaa ggagagggag gaccataggc gccggaaggc cctggaaaac

1680

aagaagaagc aattatctgc cggcggcaag atcctgagca aagaggaaga ggaggagctg

1740

agaaggctga ccgacgagga tgaggagagg aagaggaggg tggcaggacc aagagtgggc

1800

gacgtgaatc ctagcagagg cggaccaaga ggcgccccag gcgggggctt cgtgccacag

1860

atggcaggag tgccagagtc ccctttttct aggaccggag agggcctgga tatcagggga

1920

acacagggct ttccatgggt gtccccatct cctccacagc agaggctgcc actgctggag

1980

tgcacccctc agagccagtc cgagtctaag aagaatagaa ggggcggccg cgaggacatc

2040

ctggagaagt ggatcaccac acgcagaaaa gctgaagaac tggaaaagga cctgaggaag

2100

gcccgcaaaa caatcaagaa gctggaggat gagaaccctt ggctgggcaa tatcatcgga

2160

attatcagga agggcaagga tggcgaaggc gccccacctg caaagcggcc aaggactgat

2220

cagatggaaa tcgatagcgg aacaggcaag cggccccaca agtccggctt caccgacaag

2280

gagagagagg atcacagaag gcgcaaggcc ctggagaaca agaagaagca attaagcagc

2340

ggcggcaaga atctgtccag agaagaagag gaggagctgg gcagactgac cgtggaggac

2400

gaggagcgga gaaggcgcgt ggcaggacct cgcacaggcg atgtgaacct gtccggagga

2460

ggacctaggg gagcaccagg aggcggcttc gtgccacgca tggagggcgt gccagagtct

2520

ccctttaccc gcaccggaga gggcctggac atcaggggca atcagggctt tccctgggtc

2580

cgcccctccc cccctcagca gagactgccc ctgctggaat gcacaccaca gtga

2634

<210> 20

<211> 2772

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-6

<400> 20

atggcctcac ggtcagagtc aaagaagaac agaggcggaa gagaagaaat cctggagcag

60

tgggtcggag cacggaaaaa gctggaagaa ctggagaggg acctgcgcaa gatcaagaag

120

aagatcaaga agctggagga ggagaacccc tggctgggca atatcaaggg catcctgggc

180

aagaaggata gggagggaga gggagcacca cctgcaaaga gggccagagc cgaccagatg

240

gaggtggata gcggaccaag gaagcgcccc ttccgcggag agtttaccga caaggagcgg

300

agagatcaca ggcgccggaa ggccctggag aacaagagga agcagctgag ctccggcggc

360

aagtccctgt ctaaggagga ggaggaggag ctgcgcaagc tgacagagga ggacgagaga

420

agggagagga gggtggcagg accaagggtg ggaggagtga atcctctgga gggaggaacc

480

agaggagcac caggaggagg cttcgtgcca agcatgcagg gagtgccaga gtcccccttt

540

gccaggacag gagagggcct ggacgtgaga ggcaaccagg gcttcccttg ggacatcctg

600

tttccagccg atccaccctt cagccctcag tcctgcaggc cacagggaag cggagctact

660

aacttcagcc tgctgaagca ggctggagac gtggaggaga accctggacc tatgagccgg

720

tccgagtcta agaagaatag gggaggaaga gaggaggtgc tggagcagtg ggtgaacggc

780

agaaagaagc tggaggagct ggagagggag ctgagaaggg cccgcaagaa gatcaagaag

840

ctggaagacg ataatccttg gctgggcaat gtgaaaggca tcctgggcaa gaaggacaag

900

gatggagagg gagcacctcc agcaaagagg gcaagaaccg accagatgga gatcgatagc

960

ggacctagga agcgcccact gaggggaggc tttacagacc gggagagaca ggatcaccgc

1020

cggagaaagg ccctgaagaa caagaagaag cagctgtccg ccggaggcaa gagcctgtcc

1080

aaagaagagg aagaggagct gaagaggctg acccgcgagg acgaggagag gaagaaggag

1140

gagcacggac catctaggct gggagtgaat cccagcgagg gaggaccaag gggagcacct

1200

ggaggaggct tcgtgccctc catgcagggc atccctgagt ctcggtttac cagaaccggc

1260

gagggcctgg acgtgagggg cagccgcggc tttccacagg acatcctgtt cccctccgat

1320

cccccttttt ctccccagag ctgtcgccct caaggaagcg gagctactaa cttcagcctg

1380

ctgaagcagg ctggagacgt ggaggagaac cctggaccta tgtctcagag cgagacaagg

1440

aggggccgga gaggaaccag ggaggagaca ctggagaagt ggatcacagc ccgcaagaag

1500

gccgaggagc tggagaagga cctgcggaag accagaaaga caatcaagaa gctggaagaa

1560

gagaaccctt ggctgggcaa tatcgtgggc atcatcagga agggcaagga cggcgaggga

1620

gcaccaccag ccaagaggcc acgcactgat cagatggagg tggattctgg accaggcaag

1680

cggccccaca agagcggctt cacagacaag gagagagagg accataggcg ccggaaggcc

1740

ctggaaaaca agaagaagca attaagcgcc ggcggcaaga tcctgtccaa agaggaagag

1800

gaggagctga gaaggctgac cgacgaggat gaggagagga aaagaagggt ggcaggacct

1860

agggtgggcg acgtgaatcc aagcagggga ggacctagag gagcaccagg aggcggcttc

1920

gtgccacaga tggcaggagt gcctgagtcc ccattttctc ggaccggcga gggcctggat

1980

atcagaggca cacagggctt cccctgggtg tccccttctc ctccacagca gcggctgcct

2040

ctgctggagt gcacccctca gggaagcgga gctactaact tcagcctgct gaagcaggct

2100

ggagacgtgg aggagaaccc tggacctatg tcgcagagcg aatctaagaa gaatagaagg

2160

ggcggcagag aggatatcct ggagaagtgg atcaccacac gcagaaaagc tgaagaactg

2220

gaaaaggacc tgaggaaggc ccgcaagacc atcaagaagc tggaggatga aaatccatgg

2280

ctgggaaata tcatcggcat catccggaag ggcaaggacg gggaaggcgc cccacctgca

2340

aagcggccca ggactgatca gatggaaatc gattccggca caggcaagag gcctcacaag

2400

tctggcttca cagataaaga gcgcgaggat cacagaaggc gcaaggccct ggagaacaag

2460

aagaagcaat tatctagcgg cggcaagaat ctgtccagag aagaagagga ggagctgggc

2520

cgcctgaccg tggaggacga ggagcggaga aggcgcgtgg caggaccaag aacaggcgat

2580

gtgaacctgt ctggaggcgg cccaaggggc gcccccggcg gaggcttcgt gccaagaatg

2640

gaaggcgtgc cagagtcccc ttttacccgg acaggggaag gcctggacat tagaggcaat

2700

cagggctttc cctgggtgcg accaagcccc cctcagcagc gactgcctct gctggagtgt

2760

acccctcagt ga

2772

<210> 21

<211> 1569

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-7

<400> 21

atggcctcac ggtctgagtc aaagaagaat cgggggggaa gagaagaaat cctggaacag

60

tgggtcggcg cacggaaaaa actggaagaa ctggagcggg acctgagaaa gatcaagaag

120

aagatcaaga agctggagga agagaacccc tggctgggca atatcaaggg catcctgggc

180

aagaaggatc gggagggcga gggagcacca cctgcaaaga gggcaagggc agaccagatg

240

gaggtggatt ccggacctag gaagcggccc ttccggggag agtttaccga caaggagcgg

300

agagatcaca ggcgccggaa ggccctggag aacaagcgga agcagctgag ctccggcggc

360

aagtctctga gcaaggagga ggaggaggag ctgagaaagc tgacagagga ggacgagaga

420

agggagcgcc gggtggccgg cccaagggtg ggcggcgtga accccctgga gggaggaacc

480

aggggagcac caggaggagg cttcgtgcct tctatgcagg gcgtgccaga gagccccttt

540

gccaggacag gagagggcct ggatgtgcgc ggcaatcagg gcttcccatg ggacatcctg

600

tttcccgccg atccaccctt ctcccctcag tcttgcaggc cacagtcccg ctctgagagc

660

aagaagaaca ggggaggaag ggaggaggtg ctggagcagt gggtgaatgg caggaagaag

720

ctggaggagc tggagcggga gctgagaagg gccagaaaga agatcaagaa gctggaagac

780

gataatcctt ggctgggcaa tgtgaaaggc atcctgggca agaaggacaa ggatggagag

840

ggagcacctc cagcaaagag ggcacgcacc gaccagatgg agatcgattc cggaccaagg

900

aagcggcccc tgaggggagg cttcacagac agggagcgcc aggatcaccg ccggagaaag

960

gccctgaaga acaagaagaa gcagctgtct gccggcggca agtccctgtc taaagaagag

1020

gaggaggagc tgaagcggct gaccagagag gacgaggagc ggaagaagga ggagcacggc

1080

ccttccagac tgggcgtgaa tccatctgag ggaggaccaa gaggcgcccc tggcggaggc

1140

ttcgtgccta gcatgcaggg catcccagag tccaggttta ccagaaccgg agagggcctg

1200

gacgtgcggg gctctagagg ctttccccag gacatcctgt tccctagcga tccccctttt

1260

agcccccagt cctgtaggcc tcagggcacc aacctgagca catccaatcc actgggcttc

1320

tttccagacc accagctgga tccagccttc cgcgccaaca gcgccaatcc agactgggac

1380

ttcaacccca ataaggacac ctggcctgat gccaacaagg tcggcggcca gaacctgtct

1440

acaagcaatc ctctgggctt ctttcctgat caccagctgg atcctgcctt tcgggccaat

1500

acagccaacc ctgactggga cttcaatcct aacaaagaca cttggcccga tgctaataag

1560

gtcggctga

1569

<210> 22

<211> 1569

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-8

<400> 22

atggccagtc agagcgagac ccgcagagga cggagaggaa cacgagaaga gacactggag

60

aaatggatta cagcacggaa gaaggcagaa gagctggaga aggacctgag gaagacccgc

120

aagacaatca agaagctgga ggaggagaac ccctggctgg gcaatatcgt gggcatcatc

180

aggaagggca aggatggaga gggagcacca cctgccaaga ggcctcgcac agaccagatg

240

gaggtggata gcggaccagg caagcggcct cacaagtccg gcttcaccga caaggagaga

300

gaggatcacc ggagaaggaa ggccctggag aacaagaaga agcagctgtc cgccggcggc

360

aagatcctgt ctaaggagga ggaggaggag ctgcgccggc tgacagacga ggatgaggag

420

aggaagagaa gggtggcagg accaagggtg ggcgacgtga atccttctag gggaggacca

480

aggggagcac caggaggagg cttcgtgcct cagatggccg gcgtgccaga gtctcccttt

540

agccggacag gcgagggcct ggatatcaga ggcacccagg gctttccttg ggtgtctcca

600

agcccaccac agcagcggct gccactgctg gagtgcacac cccagtccca gtctgagagc

660

aagaagaaca ggaggggagg aagagaggac atcctggaga agtggatcac cacaagaagg

720

aaggccgagg agctggagaa ggacctgcgg aaggccagaa agaccatcaa gaagctggag

780

gatgaaaatc cttggctggg aaatatcatc ggaattatta gaaaaggcaa ggacggagag

840

ggagcacctc cagcaaagcg gccaagaaca gaccagatgg agatcgattc tggaaccggc

900

aagaggcccc acaagagtgg cttcaccgat aaggagcgcg aggatcaccg ccggagaaag

960

gccctggaaa acaagaagaa gcaattaagc tccggcggca agaatctgag cagagaagaa

1020

gaggaggagc tgggccgcct gacagtggag gacgaggaga ggcgccggag agtggcagga

1080

cctagaaccg gcgatgtgaa cctgtccgga ggcggcccaa ggggagcacc tggaggcggc

1140

ttcgtgccac gcatggaggg cgtgcctgag tctcccttca ccaggacagg agagggcctg

1200

gacatcagag gcaatcaggg attcccatgg gtgcggccca gcccacctca gcagagactg

1260

cctctgctgg agtgtacccc acagggcaca aacctgtcca cctctaatcc tctgggcttc

1320

tttccagacc accagctgga tccagccttc agggccaact ccgccaaccc tgactgggac

1380

ttcaacccta ataaggacac atggccagat gccaacaagg tcggcggcca gaacctgagc

1440

acctccaatc ccctgggctt ctttcctgac caccagctgg atcccgcctt tcgcgccaat

1500

accgccaatc ccgactggga cttcaatcca aataaggaca cctggcccga tgctaacaaa

1560

gtgggatga

1569

<210> 23

<211> 1287

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-9

<400> 23

atggccagtc ggagcgaatc aaagaaaaat agagggggaa gagaagaaat cctggagcag

60

tgggtcgggg cacggaaaaa actggaagaa ctggagcggg acctgagaaa gatcaagaag

120

aagatcaaga agctggagga agagaacccc tggctgggca atatcaaggg catcctgggc

180

aagaaggata gggagggcga gggagcacca cctgcaaaga gggcaagggc agaccagatg

240

gaggtggatt ccggaccaag gaagcggccc ttccggggag agtttaccga caaggagcgg

300

agagatcaca ggcgccggaa ggccctggag aacaagcgga agcagctgag ctccggcggc

360

aagtctctga gcaaggagga ggaggaggag ctgagaaagc tgacagagga ggacgagaga

420

agggagagga gggtggcagg acctagggtg ggaggcgtga acccactgga gggaggaacc

480

aggggagcac ctggaggagg ctttgtgcca tctatgcagg gagtgccaga gagccctttc

540

gccaggacag gagagggcct ggatgtgcgc ggcaatcagg gcttcccctg ggacatcctg

600

tttcctgccg atccaccctt cagcccacag tcctgcaggc cacagtcccg ctctgagagc

660

aagaagaaca ggggaggaag ggaggaggtg ctggagcagt gggtgaatgg ccggaagaag

720

ctggaggagc tggagcggga gctgagaagg gccagaaaga agatcaagaa gctggaagac

780

gataatcctt ggctgggcaa tgtgaaaggc atcctgggca agaaggacaa ggatggagag

840

ggagcacctc cagcaaagag ggcacgcacc gaccagatgg agatcgattc tggacctagg

900

aagcggcccc tgagaggagg ctttacagac agggagcgcc aggatcaccg ccggagaaag

960

gccctgaaga acaagaagaa gcagctgagc gccggcggca agtccctgtc taaagaagag

1020

gaggaggagc tgaagcggct gaccagagag gacgaggagc ggaagaagga ggagcacgga

1080

ccatccagac tgggagtgaa tccttctgag ggaggaccaa gaggcgcccc aggcggcggc

1140

tttgtgccaa gcatgcaggg catccccgag tccaggttca ccagaaccgg cgaaggcctg

1200

gatgtgcggg gcagcagagg cttcccccag gatattctgt ttccctccga cccccccttc

1260

agtccccagt cttgccgacc tcagtga

1287

<210> 24

<211> 1287

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность ДНК Дельта-10

<400> 24

atggcctcac agagcgaaac acggcggggg cggaggggaa ctagagagga aacactggaa

60

aaatggatta cagcacggaa aaaggcagag gaactggaga aggacctgag gaagacccgc

120

aagacaatca agaagctgga ggaggagaac ccatggctgg gcaatatcgt gggcatcatc

180

cggaagggca aggatggaga gggagcacca cctgcaaaga ggccccgcac cgaccagatg

240

gaggtggatt ctggccctgg caagaggcca cacaagagcg gcttcacaga caaggagcgc

300

gaggatcacc ggagaaggaa ggccctggag aacaagaaga agcagctgag cgccggcggc

360

aagatcctgt ccaaggagga ggaggaggag ctgcgccggc tgaccgacga ggatgaggag

420

cggaagagaa gggtggcagg accaagagtg ggcgacgtga atccctctag gggaggacca

480

aggggagcac ctggaggagg cttcgtgcct cagatggcag gagtgccaga gtcccctttt

540

tctaggaccg gagagggcct ggatatcagg ggaacacagg gctttccatg ggtgtctcca

600

agcccaccac agcagaggct gccactgctg gagtgcaccc ctcagtccca gtctgagagc

660

aagaagaaca ggaggggagg aagggaggac atcctggaga agtggatcac cacaagaagg

720

aaggccgagg agctggagaa ggacctgcgg aaggccagaa aaacaatcaa gaagctggaa

780

gatgagaacc cctggctggg caatatcatc ggcatcatca gaaaaggcaa ggacggcgag

840

ggagcacctc cagcaaagcg gcctagaacc gaccagatgg agatcgattc cggcacaggc

900

aagcggccac acaagtctgg cttcaccgac aaggagagag aggatcaccg ccggagaaag

960

gccctggaaa acaagaagaa gcaattaagc tccggcggca agaatctgag cagagaagaa

1020

gaggaggagc tgggcagact gaccgtggag gacgaggaga ggcgccggag agtggcagga

1080

cccagaacag gcgatgtgaa cctgagcgga ggaggaccta ggggagcacc aggaggcggc

1140

ttcgtgccta gaatggaggg cgtgccagag tcccccttta ccaggacagg agagggcctg

1200

gacatcaggg gcaatcaggg ctttccctgg gtccgccctt caccaccaca gcagagactg

1260

cccctgctgg aatgcacacc acagtga

1287

<210> 25

<211> 1065

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-1

<400> 25

Met Ala Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu

1 5 10 15

Ile Leu Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu

20 25 30

Arg Asp Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

35 40 45

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Arg Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser

195 200 205

Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg

210 215 220

Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys

225 230 235 240

Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys

245 250 255

Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu

260 265 270

Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala

275 280 285

Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu

290 295 300

Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys

305 310 315 320

Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu

325 330 335

Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu

340 345 350

Glu Arg Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro

355 360 365

Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser

370 375 380

Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu

385 390 395 400

Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser

405 410 415

Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Thr Asn Leu

420 425 430

Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

435 440 445

Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn

450 455 460

Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser

465 470 475 480

Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

485 490 495

Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys

500 505 510

Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn

515 520 525

Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro

530 535 540

Met Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu Glu

545 550 555 560

Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu Glu

565 570 575

Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

580 585 590

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp

595 600 605

Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu

610 615 620

Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp

625 630 635 640

Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys

645 650 655

Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu

660 665 670

Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val

675 680 685

Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro Arg

690 695 700

Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro Glu

705 710 715 720

Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr Gln

725 730 735

Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu

740 745 750

Leu Glu Cys Thr Pro Gln Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg

755 760 765

Gly Gly Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys

770 775 780

Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys

785 790 795 800

Lys Leu Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile

805 810 815

Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg

820 825 830

Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His Lys

835 840 845

Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala

850 855 860

Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu Glu

885 890 895

Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn Leu Ser

900 905 910

Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Arg Met

915 920 925

Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp

930 935 940

Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro Gln

945 950 955 960

Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser

965 970 975

Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

980 985 990

Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys

995 1000 1005

Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser

1010 1015 1020

Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

1025 1030 1035

Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro

1040 1045 1050

Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

1055 1060 1065

<210> 26

<211> 1065

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-2

<400> 26

Met Ala Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro

1 5 10 15

Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp

20 25 30

Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val

35 40 45

Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp

50 55 60

His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

85 90 95

Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Ile Leu

100 105 110

Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Asp

115 120 125

Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro

130 135 140

Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg Glu Gly

145 150 155 160

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met Glu Val

165 170 175

Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr Asp Lys

180 185 190

Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Arg Lys

195 200 205

Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu

210 215 220

Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg Val Ala

225 230 235 240

Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg Gly

245 250 255

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro Glu Ser

260 265 270

Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn Gln Gly

275 280 285

Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln

290 295 300

Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly

305 310 315 320

Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys Leu Glu

325 330 335

Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys Lys Leu

340 345 350

Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu Gly Lys

355 360 365

Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Thr

370 375 380

Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu Arg Gly

385 390 395 400

Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu

405 410 415

Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys

420 425 430

Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu Glu Arg

435 440 445

Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro Ser Glu

450 455 460

Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln

465 470 475 480

Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val

485 490 495

Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser Asp Pro

500 505 510

Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Ser Gly Ala Thr Asn

515 520 525

Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro

530 535 540

Met Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp

545 550 555 560

His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp

565 570 575

Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

580 585 590

Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

595 600 605

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp

610 615 620

Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Ser

625 630 635 640

Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu Glu Thr Leu

645 650 655

Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp

660 665 670

Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro

675 680 685

Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu

690 695 700

Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Val Asp

705 710 715 720

Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu

725 730 735

Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln

740 745 750

Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu

755 760 765

Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ala Gly

770 775 780

Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro Arg Gly Ala

785 790 795 800

Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro Glu Ser Pro

805 810 815

Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr Gln Gly Phe

820 825 830

Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu

835 840 845

Cys Thr Pro Gln Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg Gly Gly

850 855 860

Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys Ala Glu

865 870 875 880

Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu

885 890 895

Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile Arg Lys

900 905 910

Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp

915 920 925

Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly

930 935 940

Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu

945 950 955 960

Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu Ser Arg Glu

965 970 975

Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu Glu Arg Arg

980 985 990

Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn Leu Ser Gly Gly

995 1000 1005

Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Arg Met Glu

1010 1015 1020

Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp

1025 1030 1035

Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro

1040 1045 1050

Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln

1055 1060 1065

<210> 27

<211> 1253

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-3

<400> 27

Met Ala Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro

1 5 10 15

Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp

20 25 30

Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val

35 40 45

Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp

50 55 60

His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

85 90 95

Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Ile Leu

100 105 110

Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Asp

115 120 125

Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro

130 135 140

Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg Glu Gly

145 150 155 160

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met Glu Val

165 170 175

Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr Asp Lys

180 185 190

Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Arg Lys

195 200 205

Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu

210 215 220

Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg Val Ala

225 230 235 240

Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg Gly

245 250 255

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro Glu Ser

260 265 270

Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn Gln Gly

275 280 285

Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln

290 295 300

Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly

305 310 315 320

Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys Leu Glu

325 330 335

Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys Lys Leu

340 345 350

Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu Gly Lys

355 360 365

Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Thr

370 375 380

Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu Arg Gly

385 390 395 400

Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu

405 410 415

Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys

420 425 430

Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu Glu Arg

435 440 445

Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro Ser Glu

450 455 460

Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln

465 470 475 480

Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val

485 490 495

Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser Asp Pro

500 505 510

Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr

515 520 525

Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe

530 535 540

Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp

545 550 555 560

Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser

565 570 575

Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg

580 585 590

Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr

595 600 605

Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser

610 615 620

Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Gly

625 630 635 640

Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln

645 650 655

Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe

660 665 670

Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln

675 680 685

Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu

690 695 700

Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn

705 710 715 720

Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Ser Gln Ser

725 730 735

Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu Glu Thr Leu Glu Lys

740 745 750

Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg

755 760 765

Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro Trp Leu

770 775 780

Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala

785 790 795 800

Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Val Asp Ser Gly

805 810 815

Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu

820 825 830

Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser

835 840 845

Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Arg Arg

850 855 860

Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg

865 870 875 880

Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly

885 890 895

Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Ser

900 905 910

Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr Gln Gly Phe Pro Trp

915 920 925

Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr

930 935 940

Pro Gln Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg Gly Gly Arg Glu

945 950 955 960

Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys Ala Glu Glu Leu

965 970 975

Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Asp

980 985 990

Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys

995 1000 1005

Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln

1010 1015 1020

Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly

1025 1030 1035

Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu

1040 1045 1050

Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu Ser

1055 1060 1065

Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu

1070 1075 1080

Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn

1085 1090 1095

Leu Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val

1100 1105 1110

Pro Arg Met Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly

1115 1120 1125

Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg

1130 1135 1140

Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro

1145 1150 1155

Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro

1160 1165 1170

Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro

1175 1180 1185

Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn

1190 1195 1200

Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe

1205 1210 1215

Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala

1220 1225 1230

Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp

1235 1240 1245

Ala Asn Lys Val Gly

1250

<210> 28

<211> 1299

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-4

<400> 28

Met Ala Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu

1 5 10 15

Ile Leu Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu

20 25 30

Arg Asp Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

35 40 45

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Arg Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser

195 200 205

Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro

210 215 220

Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn

225 230 235 240

Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro

245 250 255

Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu

260 265 270

Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr

275 280 285

Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp

290 295 300

Ala Asn Lys Val Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys

305 310 315 320

Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ser Arg Ser Glu

325 330 335

Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val

340 345 350

Asn Gly Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala

355 360 365

Arg Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn

370 375 380

Val Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro

385 390 395 400

Pro Ala Lys Arg Ala Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro

405 410 415

Arg Lys Arg Pro Leu Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp

420 425 430

His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala

435 440 445

Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu

450 455 460

Thr Arg Glu Asp Glu Glu Arg Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg

465 470 475 480

Leu Gly Val Asn Pro Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly

485 490 495

Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg

500 505 510

Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp

515 520 525

Ile Leu Phe Pro Ser Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro

530 535 540

Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp

545 550 555 560

His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp

565 570 575

Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

580 585 590

Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

595 600 605

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp

610 615 620

Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly

625 630 635 640

Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu

645 650 655

Glu Asn Pro Gly Pro Met Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg

660 665 670

Gly Thr Arg Glu Glu Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys

675 680 685

Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys

690 695 700

Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile

705 710 715 720

Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg

725 730 735

Thr Asp Gln Met Glu Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys

740 745 750

Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala

755 760 765

Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser

770 775 780

Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu

785 790 795 800

Arg Lys Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser

805 810 815

Arg Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met

820 825 830

Ala Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp

835 840 845

Ile Arg Gly Thr Gln Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln

850 855 860

Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser

865 870 875 880

Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

885 890 895

Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys

900 905 910

Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr

915 920 925

Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe

930 935 940

Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp

945 950 955 960

Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe

965 970 975

Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met

980 985 990

Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg Gly Gly Arg Glu Asp Ile

995 1000 1005

Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys Ala Glu Glu Leu Glu

1010 1015 1020

Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Asp

1025 1030 1035

Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile Arg Lys Gly

1040 1045 1050

Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp

1055 1060 1065

Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His Lys Ser

1070 1075 1080

Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala

1085 1090 1095

Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu

1100 1105 1110

Ser Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp

1115 1120 1125

Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val

1130 1135 1140

Asn Leu Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe

1145 1150 1155

Val Pro Arg Met Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr

1160 1165 1170

Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val

1175 1180 1185

Arg Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr

1190 1195 1200

Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe

1205 1210 1215

Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn

1220 1225 1230

Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala

1235 1240 1245

Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly

1250 1255 1260

Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr

1265 1270 1275

Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro

1280 1285 1290

Asp Ala Asn Lys Val Gly

1295

<210> 29

<211> 877

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-5

<400> 29

Met Ala Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu

1 5 10 15

Ile Leu Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu

20 25 30

Arg Asp Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

35 40 45

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Arg Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser

195 200 205

Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg

210 215 220

Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys

225 230 235 240

Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys

245 250 255

Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu

260 265 270

Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala

275 280 285

Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu

290 295 300

Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys

305 310 315 320

Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu

325 330 335

Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu

340 345 350

Glu Arg Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro

355 360 365

Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser

370 375 380

Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu

385 390 395 400

Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser

405 410 415

Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Ser Gly Ala

420 425 430

Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro

435 440 445

Gly Pro Met Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg

450 455 460

Glu Glu Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu

465 470 475 480

Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu

485 490 495

Glu Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly

500 505 510

Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln

515 520 525

Met Glu Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe

530 535 540

Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn

545 550 555 560

Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu

565 570 575

Glu Glu Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg

580 585 590

Arg Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly

595 600 605

Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val

610 615 620

Pro Glu Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly

625 630 635 640

Thr Gln Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu

645 650 655

Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn

660 665 670

Arg Arg Gly Gly Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg

675 680 685

Arg Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr

690 695 700

Ile Lys Lys Leu Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly

705 710 715 720

Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg

725 730 735

Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro

740 745 750

His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg

755 760 765

Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn

770 775 780

Leu Ser Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp

785 790 795 800

Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn

805 810 815

Leu Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro

820 825 830

Arg Met Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly

835 840 845

Leu Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro

850 855 860

Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln

865 870 875

<210> 30

<211> 923

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-6

<400> 30

Met Ala Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu

1 5 10 15

Ile Leu Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu

20 25 30

Arg Asp Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

35 40 45

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Arg Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser

195 200 205

Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu

210 215 220

Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ser Arg

225 230 235 240

Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln

245 250 255

Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg

260 265 270

Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu

275 280 285

Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly

290 295 300

Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser

305 310 315 320

Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg

325 330 335

Gln Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu

340 345 350

Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys

355 360 365

Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu Glu Arg Lys Lys Glu Glu His Gly Pro

370 375 380

Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro

385 390 395 400

Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe

405 410 415

Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro

420 425 430

Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys

435 440 445

Arg Pro Gln Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala

450 455 460

Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ser Gln Ser Glu Thr Arg

465 470 475 480

Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu Glu Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr

485 490 495

Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg

500 505 510

Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile

515 520 525

Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala

530 535 540

Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys

545 550 555 560

Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg

565 570 575

Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly

580 585 590

Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp

595 600 605

Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp

610 615 620

Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe

625 630 635 640

Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly

645 650 655

Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr Gln Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro

660 665 670

Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Gly

675 680 685

Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu

690 695 700

Glu Asn Pro Gly Pro Met Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg

705 710 715 720

Gly Gly Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys

725 730 735

Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys

740 745 750

Lys Leu Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile

755 760 765

Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg

770 775 780

Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His Lys

785 790 795 800

Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala

805 810 815

Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu Ser

820 825 830

Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu Glu

835 840 845

Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn Leu Ser

850 855 860

Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Arg Met

865 870 875 880

Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp

885 890 895

Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro Gln

900 905 910

Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln

915 920

<210> 31

<211> 522

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-7

<400> 31

Met Ala Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu

1 5 10 15

Ile Leu Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu

20 25 30

Arg Asp Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

35 40 45

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Arg Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser

195 200 205

Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg

210 215 220

Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys

225 230 235 240

Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys

245 250 255

Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu

260 265 270

Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala

275 280 285

Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu

290 295 300

Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys

305 310 315 320

Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu

325 330 335

Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu

340 345 350

Glu Arg Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro

355 360 365

Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser

370 375 380

Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu

385 390 395 400

Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser

405 410 415

Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Thr Asn Leu

420 425 430

Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

435 440 445

Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn

450 455 460

Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser

465 470 475 480

Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

485 490 495

Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys

500 505 510

Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

515 520

<210> 32

<211> 522

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-8

<400> 32

Met Ala Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu

1 5 10 15

Glu Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu

20 25 30

Glu Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu

35 40 45

Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys

50 55 60

Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro

195 200 205

Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg

210 215 220

Arg Gly Gly Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg

225 230 235 240

Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile

245 250 255

Lys Lys Leu Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile

260 265 270

Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro

275 280 285

Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His

290 295 300

Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys

305 310 315 320

Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu

325 330 335

Ser Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu

340 345 350

Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn Leu

355 360 365

Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Arg

370 375 380

Met Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu

385 390 395 400

Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro

405 410 415

Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Gly Thr Asn Leu

420 425 430

Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

435 440 445

Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn

450 455 460

Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser

465 470 475 480

Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

485 490 495

Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys

500 505 510

Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

515 520

<210> 33

<211> 428

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-9

<400> 33

Met Ala Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu

1 5 10 15

Ile Leu Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu

20 25 30

Arg Asp Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu

35 40 45

Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Arg Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser

195 200 205

Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg

210 215 220

Gly Gly Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys

225 230 235 240

Leu Glu Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys

245 250 255

Lys Leu Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu

260 265 270

Gly Lys Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala

275 280 285

Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu

290 295 300

Arg Gly Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys

305 310 315 320

Ala Leu Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu

325 330 335

Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu

340 345 350

Glu Arg Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro

355 360 365

Ser Glu Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser

370 375 380

Met Gln Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu

385 390 395 400

Asp Val Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser

405 410 415

Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln

420 425

<210> 34

<211> 428

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность Дельта-10

<400> 34

Met Ala Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly Arg Arg Gly Thr Arg Glu

1 5 10 15

Glu Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg Lys Lys Ala Glu Glu Leu

20 25 30

Glu Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Glu

35 40 45

Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys

50 55 60

Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met

65 70 75 80

Glu Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr

85 90 95

Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile Leu Ser Lys Glu Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp Glu Glu Arg Lys Arg Arg

130 135 140

Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn Pro Ser Arg Gly Gly Pro

145 150 155 160

Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Gln Met Ala Gly Val Pro

165 170 175

Glu Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Thr

180 185 190

Gln Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro

195 200 205

Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Ser Gln Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg

210 215 220

Arg Gly Gly Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys Trp Ile Thr Thr Arg Arg

225 230 235 240

Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Ala Arg Lys Thr Ile

245 250 255

Lys Lys Leu Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gly Ile

260 265 270

Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Pro

275 280 285

Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Thr Gly Lys Arg Pro His

290 295 300

Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg Lys

305 310 315 320

Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Asn Leu

325 330 335

Ser Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg Leu Thr Val Glu Asp Glu

340 345 350

Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Thr Gly Asp Val Asn Leu

355 360 365

Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Arg

370 375 380

Met Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu

385 390 395 400

Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro

405 410 415

Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln

420 425

<210> 35

<211> 3434

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность нуклеиновой кислоты слитых

Дельта-7/Дельта-8 дикого типа

<400> 35

aagcttgcac catggccggc accaacctga gcaccagcaa cccgctgggc ttttttccgg

60

atcatcagct ggatccggcg tttcgcgcga acagcgcgaa cccggattgg gattttaacc

120

cgaacaaaga tacctggccg gatgcgaaca aagtgggcgg ccagaacctg agcaccagca

180

acccgctggg cttttttccg gatcatcagc tggatccggc gtttcgcgcg aacaccgcga

240

acccggattg ggattttaac ccgaacaaag atacctggcc ggatgcgaac aaagtgggca

300

gccgcagcga aagcaaaaaa aaccgcggcg gccgcgaaga aattctggaa cagtgggtgg

360

gcgcgcgcaa aaaactggaa gaactggaac gcgatctgcg caaaattaaa aaaaaaatta

420

aaaaactgga agaagaaaac ccgtggctgg gcaacattaa aggcattctg ggcaaaaaag

480

atcgcgaagg cgaaggcgcg ccgccggcga aacgcgcgcg cgcggatcag atggaagtgg

540

atagcggccc gcgcaaacgc ccgtttcgcg gcgaatttac cgataaagaa cgccgcgatc

600

atcgccgccg caaagcgctg gaaaacaaac gcaaacagct gagcagcggc ggcaaaagcc

660

tgagcaaaga agaagaagaa gaactgcgca aactgaccga agaagatgaa cgccgcgaac

720

gccgcgtggc gggcccgcgc gtgggcggcg tgaacccgct ggaaggcggc acccgcggcg

780

cgccgggcgg cggctttgtg ccgagcatgc agggcgtgcc ggaaagcccg tttgcgcgca

840

ccggcgaagg cctggatgtg cgcggcaacc agggctttcc gtgggatatt ctgtttccgg

900

cggatccgcc gtttagcccg cagagctgcc gcccgcagag ccgcagcgaa agcaaaaaaa

960

accgcggcgg ccgcgaagaa gtgctggaac agtgggtgaa cggccgcaaa aaactggaag

1020

aactggaacg cgaactgcgc cgcgcgcgca aaaaaattaa aaaactggaa gatgataacc

1080

cgtggctggg caacgtgaaa ggcattctgg gcaaaaaaga taaagatggc gaaggcgcgc

1140

cgccggcgaa acgcgcgcgc accgatcaga tggaaattga tagcggcccg cgcaaacgcc

1200

cgctgcgcgg cggctttacc gatcgcgaac gccaggatca tcgccgccgc aaagcgctga

1260

aaaacaaaaa aaaacagctg agcgcgggcg gcaaaagcct gagcaaagaa gaagaagaag

1320

aactgaaacg cctgacccgc gaagatgaag aacgcaaaaa agaagaacat ggcccgagcc

1380

gcctgggcgt gaacccgagc gaaggcggcc cgcgcggcgc gccgggcggc ggctttgtgc

1440

cgagcatgca gggcattccg gaaagccgct ttacccgcac cggcgaaggc ctggatgtgc

1500

gcggcagccg cggctttccg caggatattc tgtttccgag cgatccgccg tttagcccgc

1560

agagctgccg cccgcagggc accaacctga gcaccagcaa cccgctgggc ttttttccgg

1620

atcatcagct ggatccggcg tttcgcgcga acagcgcgaa cccggattgg gattttaacc

1680

cgaacaaaga tacctggccg gatgcgaaca aagtgggcgg ccagaacctg agcaccagca

1740

acccgctggg cttttttccg gatcatcagc tggatccggc gtttcgcgcg aacaccgcga

1800

acccggattg ggattttaac ccgaacaaag atacctggcc ggatgcgaac aaagtgggca

1860

gccagagcga aacccgccgc ggccgccgcg gcacccgcga agaaaccctg gaaaaatgga

1920

ttaccgcgcg caaaaaagcg gaagaactgg aaaaagatct gcgcaaaacc cgcaaaacca

1980

ttaaaaaact ggaagaagaa aacccgtggc tgggcaacat tgtgggcatt attcgcaaag

2040

gcaaagatgg cgaaggcgcg ccgccggcga aacgcccgcg caccgatcag atggaagtgg

2100

atagcggccc gggcaaacgc ccgcataaaa gcggctttac cgataaagaa cgcgaagatc

2160

atcgccgccg caaagcgctg gaaaacaaaa aaaaacagct gagcgcgggc ggcaaaattc

2220

tgagcaaaga agaagaagaa gaactgcgcc gcctgaccga tgaagatgaa gaacgcaaac

2280

gccgcgtggc gggcccgcgc gtgggcgatg tgaacccgag ccgcggcggc ccgcgcggcg

2340

cgccgggcgg cggctttgtg ccgcagatgg cgggcgtgcc ggaaagcccg tttagccgca

2400

ccggcgaagg cctggatatt cgcggcaccc agggctttcc gtgggtgagc ccgagcccgc

2460

cgcagcagcg cctgccgctg ctggaatgca ccccgcagag ccagagcgaa agcaaaaaaa

2520

accgccgcgg cggccgcgaa gatattctgg aaaaatggat taccacccgc cgcaaagcgg

2580

aagaactgga aaaagatctg cgcaaagcgc gcaaaaccat taaaaaactg gaagatgaaa

2640

acccgtggct gggcaacatt attggcatta ttcgcaaagg caaagatggc gaaggcgcgc

2700

cgccggcgaa acgcccgcgc accgatcaga tggaaattga tagcggcacc ggcaaacgcc

2760

cgcataaaag cggctttacc gataaagaac gcgaagatca tcgccgccgc aaagcgctgg

2820

aaaacaaaaa aaaacagctg agcagcggcg gcaaaaacct gagccgcgaa gaagaagaag

2880

aactgggccg cctgaccgtg gaagatgaag aacgccgccg ccgcgtggcg ggcccgcgca

2940

ccggcgatgt gaacctgagc ggcggcggcc cgcgcggcgc gccgggcggc ggctttgtgc

3000

cgcgcatgga aggcgtgccg gaaagcccgt ttacccgcac cggcgaaggc ctggatattc

3060

gcggcaacca gggctttccg tgggtgcgcc cgagcccgcc gcagcagcgc ctgccgctgc

3120

tggaatgcac cccgcagggc accaacctga gcaccagcaa cccgctgggc ttttttccgg

3180

atcatcagct ggatccggcg tttcgcgcga acagcgcgaa cccggattgg gattttaacc

3240

cgaacaaaga tacctggccg gatgcgaaca aagtgggcgg ccagaacctg agcaccagca

3300

acccgctggg cttttttccg gatcatcagc tggatccggc gtttcgcgcg aacaccgcga

3360

acccggattg ggattttaac ccgaacaaag atacctggcc ggatgcgaac aaagtgggct

3420

gatgagaatt ccgt

3434

<210> 36

<211> 3431

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная последовательность нуклеиновой кислоты

слитых Дельта-7/Дельта-8

<400> 36

aagcttgcac catggcaggc accaatctgt caacctctaa ccctctgggc tttttccccg

60

accatcagct ggaccccgca ttccgagcaa actccgctaa ccctgactgg gatttcaacc

120

caaataagga cacctggccc gatgccaata aggtcggcgg ccagaacctg tccacatcta

180

atccactggg cttctttccc gaccaccagc tggatcctgc cttccgggcc aacacagcca

240

atcctgactg ggacttcaac cctaataagg atacctggcc cgatgccaac aaggtcggca

300

gcaggtccga gtctaagaag aataggggag gaagggagga gatcctggag cagtgggtgg

360

gagcacgcaa gaagctggag gagctggagc gggacctgag aaagatcaag aagaagatca

420

agaagctgga ggaggagaac ccctggctgg gcaatatcaa gggcatcctg ggcaagaagg

480

atcgggaggg agagggagca ccacctgcaa agagggccag agccgaccag atggaggtgg

540

attccggccc taggaagcgc ccattcagag gcgagtttac cgacaaggag cggagagatc

600

acaggcgccg gaaggccctg gagaacaagc ggaagcagct gagctccggc ggcaagagcc

660

tgtccaagga ggaggaggag gagctgagaa agctgacaga ggaggacgag agaagggaga

720

ggagggtggc aggacctagg gtgggaggcg tgaacccact ggagggagga accaggggag

780

cacctggagg aggattcgtg ccatccatgc agggagtgcc tgagtctcca tttgccagga

840

caggagaggg cctggacgtg cgcggaaatc agggcttccc ctgggacatc ctgtttcctg

900

ccgatccacc cttctcccct cagtcttgca ggccacagtc tcgcagcgag tccaagaaga

960

acagaggcgg aagggaggag gtgctggagc agtgggtgaa tggccggaag aagctggaag

1020

aactggagag ggagctgaga agggcccgca agaagatcaa gaagctggaa gacgataatc

1080

cttggctggg caatgtgaaa ggcatcctgg gcaagaagga caaggatgga gagggagcac

1140

ctccagcaaa gagggcaaga accgaccaga tggagatcga ttctggacca aggaagcgcc

1200

ctctgagagg aggcttcaca gaccgggaga gacaggatca ccgccggaga aaggccctga

1260

agaacaagaa gaagcagctg agcgccggcg gcaagtctct gagtaaagaa gaagaggagg

1320

agctgaagcg gctgaccaga gaggacgagg agcggaagaa ggaggagcac ggaccaagca

1380

gactgggagt gaatccttcc gagggaggac caagaggagc acccggagga ggcttcgtgc

1440

catctatgca gggcatcccc gagagcaggt ttaccagaac cggcgaaggc ctggacgtgc

1500

ggggctccag aggctttcct caggacatcc tgttcccatc tgatccccct tttagccccc

1560

agtcctgtag gcctcagggc accaacctgt ccacatctaa ccctctgggc ttctttcctg

1620

atcatcagct ggacccagcc ttccgcgcca acagcgccaa tcccgattgg gacttcaacc

1680

caaataagga tacctggcca gacgctaaca aggtcggagg acagaacctg agcacatcca

1740

atcctctggg cttctttcca gaccaccagc tggatccagc cttcagggct aatacagcca

1800

atcccgactg ggacttcaac ccaaataagg acacgtggcc agacgcaaac aaggtcggct

1860

ctcagagcga gacaaggagg ggccggagag gaaccaggga ggagacactg gagaagtgga

1920

tcaccgccag aaagaaggcc gaggagctgg agaaggacct gaggaagacc cgcaagacaa

1980

tcaagaagct ggaagaagag aacccatggc tgggcaatat cgtgggcatc atccgcaagg

2040

gcaaggacgg cgagggagca ccaccagcaa agaggcccag gactgatcag atggaggtgg

2100

atagcggccc tggcaagagg ccacacaagt ccggcttcac agacaaggag agggaggacc

2160

ataggcgccg gaaggccctg gaaaacaaga agaagcaatt atccgccggc ggcaagatcc

2220

tgtctaaaga agaggaagaa gagctgagaa ggctgaccga cgaggatgag gagaggaaaa

2280

gaagggtggc aggaccaaga gtgggcgacg tgaatccctc cagaggcgga ccaagaggag

2340

cacctggagg cggcttcgtg ccccagatgg ccggcgtgcc cgagtctcct tttagcagaa

2400

ccggagaggg cctggatatc aggggaaccc agggctttcc atgggtgtcc ccatctcctc

2460

cacagcagcg gctgccactg ctggagtgca cccctcagag ccagagcgaa tctaagaaga

2520

acagaagggg cggcagagag gacatcctgg aaaaatggat caccacacgc agaaaagctg

2580

aagaactgga aaaggacctg cggaaggcca gaaaaacaat caagaagctg gaggatgaaa

2640

atccatggct gggaaacatc atcggcatca tcagaaaggg caaggacggg gaaggcgcac

2700

cacctgcaaa gcggcctaga acagatcaga tggaaatcga ttctggaacc ggcaagcggc

2760

cacacaagag cggcttcacc gacaaggaga gagaggatca cagaaggcgc aaggccctgg

2820

agaacaagaa gaagcaatta agcagcggcg gcaagaatct gtccagagaa gaggaagagg

2880

agctgggcag actgaccgtg gaggacgagg agcggagaag gcgcgtggca ggacccagga

2940

caggcgatgt gaacctgagc ggaggaggac ctaggggagc accaggaggc ggcttcgtgc

3000

ctaggatgga gggagtgcca gagtccccct ttaccagaac cggcgagggc ctggacatca

3060

ggggaaatca gggattccca tgggtgcggc cttccccacc acagcagaga ctgccactgc

3120

tggagtgtac cccccagggc acaaacctga gcacctccaa tcccctgggc ttctttcctg

3180

accatcagct ggaccctgcc ttcagggcca acagcgccaa cccagattgg gacttcaacc

3240

ctaataagga cacctggcca gatgcaaaca aggtcggcgg ccaaaacctg tctacaagca

3300

accccctggg cttctttcca gatcaccagc tggatcccgc ctttcgcgcc aataccgcca

3360

accctgattg ggatttcaac cctaacaaag acacttggcc tgacgctaat aaggtcggct

3420

gatgagaatt c

3431

<210> 37

<211> 1136

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептидная последовательность слитых Дельта-7/Дельта-8

<400> 37

Met Ala Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro

1 5 10 15

Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp

20 25 30

Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val

35 40 45

Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp

50 55 60

His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

85 90 95

Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly Arg Glu Glu Ile Leu

100 105 110

Glu Gln Trp Val Gly Ala Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Arg Asp

115 120 125

Leu Arg Lys Ile Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro

130 135 140

Trp Leu Gly Asn Ile Lys Gly Ile Leu Gly Lys Lys Asp Arg Glu Gly

145 150 155 160

Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Ala Asp Gln Met Glu Val

165 170 175

Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Phe Arg Gly Glu Phe Thr Asp Lys

180 185 190

Glu Arg Arg Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Arg Lys

195 200 205

Gln Leu Ser Ser Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu

210 215 220

Leu Arg Lys Leu Thr Glu Glu Asp Glu Arg Arg Glu Arg Arg Val Ala

225 230 235 240

Gly Pro Arg Val Gly Gly Val Asn Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg Gly

245 250 255

Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln Gly Val Pro Glu Ser

260 265 270

Pro Phe Ala Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val Arg Gly Asn Gln Gly

275 280 285

Phe Pro Trp Asp Ile Leu Phe Pro Ala Asp Pro Pro Phe Ser Pro Gln

290 295 300

Ser Cys Arg Pro Gln Ser Arg Ser Glu Ser Lys Lys Asn Arg Gly Gly

305 310 315 320

Arg Glu Glu Val Leu Glu Gln Trp Val Asn Gly Arg Lys Lys Leu Glu

325 330 335

Glu Leu Glu Arg Glu Leu Arg Arg Ala Arg Lys Lys Ile Lys Lys Leu

340 345 350

Glu Asp Asp Asn Pro Trp Leu Gly Asn Val Lys Gly Ile Leu Gly Lys

355 360 365

Lys Asp Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg Ala Arg Thr

370 375 380

Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly Pro Arg Lys Arg Pro Leu Arg Gly

385 390 395 400

Gly Phe Thr Asp Arg Glu Arg Gln Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu

405 410 415

Lys Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ser Leu Ser Lys

420 425 430

Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Thr Arg Glu Asp Glu Glu Arg

435 440 445

Lys Lys Glu Glu His Gly Pro Ser Arg Leu Gly Val Asn Pro Ser Glu

450 455 460

Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro Ser Met Gln

465 470 475 480

Gly Ile Pro Glu Ser Arg Phe Thr Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Val

485 490 495

Arg Gly Ser Arg Gly Phe Pro Gln Asp Ile Leu Phe Pro Ser Asp Pro

500 505 510

Pro Phe Ser Pro Gln Ser Cys Arg Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr

515 520 525

Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe

530 535 540

Arg Ala Asn Ser Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp

545 550 555 560

Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser

565 570 575

Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg

580 585 590

Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr

595 600 605

Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly Ser Gln Ser Glu Thr Arg Arg Gly

610 615 620

Arg Arg Gly Thr Arg Glu Glu Thr Leu Glu Lys Trp Ile Thr Ala Arg

625 630 635 640

Lys Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Lys Thr Arg Lys Thr

645 650 655

Ile Lys Lys Leu Glu Glu Glu Asn Pro Trp Leu Gly Asn Ile Val Gly

660 665 670

Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala Pro Pro Ala Lys Arg

675 680 685

Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Val Asp Ser Gly Pro Gly Lys Arg Pro

690 695 700

His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu Asp His Arg Arg Arg

705 710 715 720

Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser Ala Gly Gly Lys Ile

725 730 735

Leu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Asp

740 745 750

Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg Val Gly Asp Val Asn

755 760 765

Pro Ser Arg Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly Gly Gly Phe Val Pro

770 775 780

Gln Met Ala Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Ser Arg Thr Gly Glu Gly

785 790 795 800

Leu Asp Ile Arg Gly Thr Gln Gly Phe Pro Trp Val Ser Pro Ser Pro

805 810 815

Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu Cys Thr Pro Gln Ser Gln Ser

820 825 830

Glu Ser Lys Lys Asn Arg Arg Gly Gly Arg Glu Asp Ile Leu Glu Lys

835 840 845

Trp Ile Thr Thr Arg Arg Lys Ala Glu Glu Leu Glu Lys Asp Leu Arg

850 855 860

Lys Ala Arg Lys Thr Ile Lys Lys Leu Glu Asp Glu Asn Pro Trp Leu

865 870 875 880

Gly Asn Ile Ile Gly Ile Ile Arg Lys Gly Lys Asp Gly Glu Gly Ala

885 890 895

Pro Pro Ala Lys Arg Pro Arg Thr Asp Gln Met Glu Ile Asp Ser Gly

900 905 910

Thr Gly Lys Arg Pro His Lys Ser Gly Phe Thr Asp Lys Glu Arg Glu

915 920 925

Asp His Arg Arg Arg Lys Ala Leu Glu Asn Lys Lys Lys Gln Leu Ser

930 935 940

Ser Gly Gly Lys Asn Leu Ser Arg Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Arg

945 950 955 960

Leu Thr Val Glu Asp Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ala Gly Pro Arg

965 970 975

Thr Gly Asp Val Asn Leu Ser Gly Gly Gly Pro Arg Gly Ala Pro Gly

980 985 990

Gly Gly Phe Val Pro Arg Met Glu Gly Val Pro Glu Ser Pro Phe Thr

995 1000 1005

Arg Thr Gly Glu Gly Leu Asp Ile Arg Gly Asn Gln Gly Phe Pro

1010 1015 1020

Trp Val Arg Pro Ser Pro Pro Gln Gln Arg Leu Pro Leu Leu Glu

1025 1030 1035

Cys Thr Pro Gln Gly Thr Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly

1040 1045 1050

Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser

1055 1060 1065

Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro

1070 1075 1080

Asp Ala Asn Lys Val Gly Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro

1085 1090 1095

Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala

1100 1105 1110

Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr

1115 1120 1125

Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

1130 1135

<210> 38

<211> 8

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Овальбумин 257-264 CTL

<400> 38

Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu

1 5

<210> 39

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Овальбумин 323-339 Th

<400> 39

Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly

1 5 10 15

Arg

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к комбинации продуктов, содержащей (a) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и (b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1, причем предпочтительно компоненты (a) и (b) указанной комбинации продуктов обеспечены в виде отдельных композиций в составе указанной комбинации продуктов. Изобретение эффективно для индуцирования иммунного ответа на вирус гепатита В и вирус гепатита D у субъекта. 3 н. и 46 з.п. ф-лы, 12 ил., 3 табл., 10 пр.

1. Комбинация продуктов, подходящая для индукции иммунного ответа на вирус гепатита В и вирус гепатита D, которая содержит:

(a) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и

(b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1, причем предпочтительно компоненты (a) и (b) указанной комбинации продуктов обеспечены в виде отдельных композиций в составе указанной комбинации продуктов.

2. Комбинация продуктов по п. 1, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая HDAg, содержит SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, или любую их комбинацию.

3. Комбинация продуктов по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая PreS1, содержит SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или обе.

4. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота сконструирована таким образом, что каждая последовательность нуклеиновой кислоты HDAg сгруппирована с последовательностью нуклеиновой кислоты PreS1, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты PreS1 расположена непосредственно по ходу транскрипции от последовательности нуклеиновой кислоты HDAg.

5. Комбинация продуктов по п. 4, дополнительно содержащая по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт аутокаталитического расщепления пептида, причем указанные сгруппированные последовательности нуклеиновых кислот HDAg и PreS1 разделены указанной по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сайт аутокаталитического расщепления пептида.

6. Комбинация продуктов по п. 5, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновых кислот 2A тешовируса свиней-1 (P2A), 2A вируса ящура (F2A), 2A вируса ринита лошадей A (ERAV) (E2A) и 2A вируса Thosea asigna (T2A), и при этом каждый кодируемый сайт аутокаталитического расщепления пептида необязательно может содержать мотив GSG (глицин-серин-глицин) на своем N-конце.

7. Комбинация продуктов по п. 5 или 6, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит SEQ ID NO: 13.

8. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота кодон-оптимизирована для экспрессии у человека.

9. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 15-24 или 35-36.

10. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-9, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 35-36.

11. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-10, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один полипептид HDAg содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или любую их комбинацию.

12. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-11, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 содержит SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12, или обе.

13. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 расположена по ходу транскрипции от указанной по меньшей мере одной последовательности полипептида HDAg.

14. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-13, отличающаяся тем, что указанный полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 25-34 или 37.

15. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-14, отличающаяся тем, что указанный полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 29, 31, 32 или 37.

16. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-15, отличающаяся тем, что указанный полипептид экспрессирован рекомбинантным образом.

17. Комбинация продуктов по п. 16, отличающаяся тем, что указанный полипептид экспрессирован рекомбинантным образом в системе на основе млекопитающего, бактерии, дрожжей, насекомого или в бесклеточной системе.

18. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-17, дополнительно содержащая адъювант.

19. Комбинация продуктов по п. 18, отличающаяся тем, что указанный адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию.

20. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-19, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота включает ДНК.

21. Комбинация продуктов по любому из пп. 1-20, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота обеспечена в рекомбинантном векторе.

22. Способ индуцирования иммунного ответа на вирус гепатита В и вирус гепатита D у субъекта с применением комбинации продуктов согласно любому из пп. 1-21, включающий:

введение указанному субъекту по меньшей мере одной примирующей дозы, содержащей указанную нуклеиновую кислоту; и

введение указанному субъекту по меньшей мере одной стимулирующей дозы, содержащей указанный полипептид.

23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна стимулирующая доза дополнительно содержит адъювант.

24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что указанный адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию.

25. Способ по любому из пп. 22-24, отличающийся тем, что указанную по меньшей мере одну стимулирующую дозу вводят по меньшей мере через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36 или 48 дней или недель после введения указанной по меньшей мере одной примирующей дозы или в пределах диапазона времени, заданного любыми двумя из указанных выше временных точек, например, в пределах 1-48 дней или 1-48 недель.

26. Способ по любому из пп. 22-25, отличающийся тем, что указанное введение обеспечивают энтерально, перорально, интраназально, парентерально, подкожно, внутримышечно, внутрикожно или внутривенно, или любой комбинацией перечисленных путей.

27. Способ по любому из пп. 22-26, отличающийся тем, что указанное введение осуществляют в сочетании с противовирусной терапией.

28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что указанная противовирусная терапия включает введение энтекавира, тенофовира, ламивудина, адефовира, телбивудина, эмтрицитабина, интерферона-α, пегилированного интерферона-α или интерферона альфа-2b, или любой их комбинации.

29. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции вирусом гепатита B (HBV) и вирусом гепатита D (HDV), содержащая:

(a) нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген гепатита D (HDAg), и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую PreS1; и

(b) полипептид, содержащий по меньшей мере одну последовательность полипептида HDAg и по меньшей мере одну последовательность полипептида PreS1.

30. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 29, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая HDAg, содержит SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, или любую их комбинацию.

31. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 29 или 30, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая PreS1, содержит SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или обе.

32. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-31, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота сконструирована таким образом, что каждая последовательность нуклеиновой кислоты HDAg сгруппирована с последовательностью нуклеиновой кислоты PreS1, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты PreS1 расположена непосредственно по ходу транскрипции от указанной последовательности нуклеиновой кислоты HDAg.

33. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 32, дополнительно содержащая по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт аутокаталитического расщепления пептида, причем указанные сгруппированные последовательности нуклеиновых кислот HDAg и PreS1 разделены указанной по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сайт аутокаталитического расщепления пептида.

34. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 33, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновых кислот 2A тешовируса свиней-1 (P2A), 2A вируса ящура (F2A), 2A вируса ринита лошадей A (ERAV) (E2A) и 2A вируса Thosea asigna (T2A), и при этом каждый кодируемый сайт аутокаталитического расщепления пептида необязательно может содержать мотив GSG (глицин-серин-глицин) на своем N-конце.

35. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 33 или 34, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сайт аутокаталитического расщепления пептида, содержит SEQ ID NO: 13.

36. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-35, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота кодон-оптимизирована для экспрессии у человека.

37. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-36, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 15-24 или 35, 36.

38. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-37, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 35, 36.

39. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-38, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один полипептид HDAg содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или любую их комбинацию.

40. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-39, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 содержит SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12, или обе.

41. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-40, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна последовательность полипептида PreS1 расположена по ходу транскрипции от указанной по меньшей мере одной последовательности полипептида HDAg.

42. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-41, отличающаяся тем, что указанный полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 25-34 или 37.

43. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-42, отличающаяся тем, что указанный полипептид содержит последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 29, 31, 32 или 37.

44. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-43, отличающаяся тем, что указанный полипептид экспрессирован рекомбинантным образом.

45. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 44, отличающаяся тем, что указанный полипептид экспрессирован рекомбинантным образом в системе на основе млекопитающего, бактерии, дрожжей, насекомого или в бесклеточной системе.

46. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-45, дополнительно содержащая адъювант.

47. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по п. 46, отличающаяся тем, что указанный адъювант представляет собой квасцы, QS-21 или MF59, или любую их комбинацию.

48. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-47, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота включает ДНК.

49. Комбинация продуктов для применения при лечении или предотвращении инфекции HBV и HDV по любому из пп. 29-48, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота обеспечена в рекомбинантном векторе.