Определение полисорбата 80 в биологических лекарственных препаратах Российский патент 2024 года по МПК G01N30/06 G01N30/74 G01N30/34 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение применяется в химии, биологии, биотехнологии, медицине, а именно, при определении вспомогательных веществ, содержащихся в биологических лекарственных средствах. Заявленное изобретение может быть использовано в производственной биотехнологии и фармацевтической промышленности, а также в смежных областях.

Уровень техники

Полисорбат 80 (полиоксиэтилен-20 сорбитан моноолеат) - неионогенное поверхностно-активное вещество, состоящее из эфира жирной кислоты (гидрофобная часть) и полиоксиэтиленовой цепи (гидрофильная часть). Полисорбат 80 является вспомогательным веществом и используется для обеспечения стабильности лекарственных препаратов при их разработке и в течение заявленного срока годности.

Из уровня техники известен спектрофотометрический способ определения полисорбата 80, основанный на образовании комплексов с тиоцианатами кобальта [1], железа [2] и последующей экстракции образовавшегося комплекса органическими растворителями или с использованием метода твердофазной экстракции и определением оптической плотности. Недостатком данного способа является длительность и сложность пробоподготовки (при экстракции достаточно часто образуются эмульсии, которые плохо разделяются при центрифугировании), низкая специфичность, высокая трудоемкость. Образующиеся окрашенные комплексы часто нестабильны, что приводит к низкой воспроизводимости способа.

Из уровня техники известен способ определениия полисорбата 80 методами обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при помощи детекторов заряженного аэрозоля (CAD-детекторы) [3, 4] и испарительных детекторов по светорассеянию (ELSD - детекторы) [5, 6]. К недостаткам этого способа можно отнести нелинейный отклик детектора: в случае с ELSD - детектором наблюдается экспоненциальная зависимость, в случае с CAD-детектором - параболическая. Нелинейное отклик детектора на ввод разных количеств полисорбата-80 усложняет построение калибровочной кривой и сужает аналитический диапазон способа.

Из уровня техники известен другой способ определения полисорбата 80 методами обращенно-фазной ВЭЖХ при помощи масс-спектрометрических детекторов [7, 8]. Данный способ обладает высокой чувствительностью. К недостаткам этого способа следует отнести использование градиентного элюирования, высокую стоимость оборудования, трудности в эксплуатации прибора, а, следовательно, и значительной себестоимости одного анализа.

Из уровня техники известен способ определения полисорбата 80, включающий на щелочной гидролиз проб, с образованием олеиновой кислоты и последующего количественного определения олеиновой кислоты методом обращенно-фазной ВЭЖХ с УФ - детектированием сигнала [9, 10]. Недостатком данного способа является длительность и сложность пробоподготовки. Кроме того содержание олеиновой кислоты в полисорбате 80 различных производителей варьируется от 40 до 98%, использование данного метода для оценки содержания полисорбата 80 в большинстве лекарственных препаратов ограничено необходимостью использовать полисорбат 80 той же марки и даже партии, которая применялась при производстве препарата.

Прототипом заявляемого изобретения является известный из уровня техники способ определения полисорбата 80 методом эксклюзионной ВЭЖХ [11]. В данном способе применяется изократическое элюирование буферным раствором, содержащим полисорбат 80 в концентрациях, превышающих критическую концентрацию мицеллообразования. Наличие мицеллярного ПАВ (полисорбата 80) в подвижной фазе сокращает время элюирования полисорбата 80 и улучшает разделение полисорбата 80 и белков с молекулярной массой менее 50 кДа. Кроме того для удаления белков перед хроматографической колонкой устанавливалась предколонка с сорбентом CL-4B сефароза с привитым белком А. К недостаткам данного способа следует отнести сложную пробоподготовку, связанную с необходимостью удаления белка; высокую трудоемкость, связанную с длительностью и сложностью подбора состава подвижной фазы, а именно концентрации полисорбата 80 в подвижной фазе для белков с различной молекулярной массой, а также подбору предколонки, специфичной к определенному виду белка, невысокую чувствительность.

Авторами была выявлена потребность в разработке способа определения полисорбата 80 эксклюзионной ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием (УФ-детектирование) сигнала в биологически активных лекарственных препаратах.

Раскрытие сущности изобретения

Технической задачей является разработка способа определения полисорбата 80 эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым- детектированием (УФ - детектирование) сигнала в биологически активных лекарственных препаратах.

Техническим результатом является разработанный способ определения полисорбата 80 эксклюзионной ВЭЖХ с УФ - детектированием сигнала в биологически активных лекарственных препаратах.

Достижение технического результата обеспечивается благодаря:

- использованию эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (УФ - детектирование) сигнала;

- проведению процедуры пробоподготовки;

- использованию стандартного образца;

- хроматографической колонки, позволяющей обеспечить эффективное отделение полисорбата 80 от веществ, входящих в состав образца;

- линейной аналитической области, соответствующей содержанию полисорбата 80 в биологически активных лекарственных препаратах.

Способ определения полисорбата 80 в биологически активных лекарственных препаратах эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией с ультрафиолетовым детектированием сигнала, включающий хроматографирование в изократическом режиме разведенных биологически активного лекарственного препарата и исходного стандартного раствора до концентрации полисорбата 80 в диапазоне от 0,02 мг/мл до 0,2 мг/мл, с использованием хроматографической колонки, далее проведение расчетов.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что биологически активные лекарственные препараты, содержащие полисорбат 80, могут быть фактор свертывания крови VIII или вакцины.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что биологически активные лекарственные препараты, содержащим полисорбат 80, могут быть адсорбированные вакцины.

Способ, дополнительно характеризующийся тем, что биологически активные лекарственные препараты, содержащие полисорбат 80, могут центрифугировать перед разведением.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что биологически активный лекарственный препарат, содержащий полисорбат 80 и исходный стандартный раствор разведены водой и фосфатным буфером с рН 6,7 соответвенно.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что исходный стандартный раствор имеет концентрацию полисорбата 80 1,0 мг/мл.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что хроматографируют при длине волны 234 нм и скорости потока 1,0 мл/мин.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что для хроматографирования используют колонку с размером 300 мм × 7,8 мм.

Способ, дополнительно характеризующийся, тем, что для хроматографирования используют подвижную фазу в виде фосфатного буфера с рН 6,7.

Краткое описание чертежей и иных материалов (Приложение 1-2)

Фиг. 1 Калибровочный график регрессионной зависимости площадей пиков полисорбата 80 от концентрации полисорбата 80 в стандартных растворах, полученный при воспроизведении способа и отражающий зависимость величины оптической плотности от концентрации полисорбата 80 в стандартном растворе. График носит линейный характер. Коэффициент корреляции R² = 1,0.

Фиг. 2 Хроматограмма образца препарата рекомбинантного фактора свертывания крови VIII, где 1 - пик неидентифицированной примеси , 2 - пик полисорбата 80 со временем время удерживания 7,15 мин.

В описании под терминами правильность и прецизионность подразумевается следующее.

Термин «правильность» характеризует степень близости среднего арифметического значения результатов измерений к истинному или принятому опорному значению, термин «прецизионность» - степень близости результатов измерений друг к другу [12].

Определение правильности методики связано с оценкой линейности. Линейность методики - это наличие линейной зависимости аналитического сигнала от концентрации или количества определяемого вещества в анализируемой пробе в пределах аналитической области.

Аналитическая область - это интервал между верхним и нижним значениями аналитических характеристик определяемого компонента в объекте анализа. Для представления прецизионности используют результаты, полученные в условиях «повторяемости (сходимости)» и в условиях «воспроизводимости».

Адсорбированная вакцина - представляет собой суспензию, где антиген адсорбирован на фармацевтически приемлемых сорбентах, например, алюминия гидроксид, гель алюминия гидроксида или алюминия фосфат или на любых других известных специалисту из области техники фармацевтически приемлемых сорбентах" [Иммунофармакология: руководство для врачей и провизоров/ В.В. Юшков, А.Н. Миронов, В.А. Меркулов. - М.; Ростов н/Д: Феликс, 2012. - 592с.:ил.; Медицинские иммунобиологические препараты: справочник. В 2 т. Т.1 Вакцины./ гл. редактор Н.В. Медуницин. - М.: Издательство " Гелла-принт", 2010. - 352 с.]

Метод добавок, как один из способов определения концентрации вещества, основан на сравнении оптической плотности исследуемого раствора и этого же раствора с добавкой известного количества определяемого вещества [Bader, Morris (1980). "A systematic approach to standard addition methods in instrumental analysis". Journal of Chemical Education. 57(10): 703.doi:10.1021/ed057p703].

Осуществление изобретения

Заявленный способ характеризуется тем, что используют эксклюзионную хроматографию с ультрафиолетовым детектированием (УФ-детектирование) сигнала. Проводят пробоподготовку стандартных растворов и биологически активного лекарственного препарата, хроматографируют полученные растворы, а затем проводят расчеты.

Для проведения пробоподготовки используют стандартные растворы, приготовленные из исходного стандартного раствора, представляющего собой водный раствор с концентрацией полисорбата 80 2,0 мг/мл путем его разведения подвижной фазой до концентрации полисорбата 80 в диапазоне от 0,02 мг/мл до 0,20 мг/мл: 0,02 мг/мл, 0,04 мг/мл , 0,08 мг/мл, 0,16 мг/мл, 0,20 мг/мл.

Аналитический диапазон от 0,02 до 0,2 мг/мл имеет зависимость от концентрации полисорбата 80 в биологически активных лекарственных препаратах.

Для осуществления заявленного способа используют биологически активные лекарственные препараты, содержащих полисорбат 80.

Для осуществления заявленного способа, биологически активные лекарственные препараты, содержащие полисорбат 80 разводят водой до концентрации полисорбата 80 в диапазоне от 0,02 мг/мл до 0,2 мг/мл, при этом биологически активные лекарственные препараты, относящиеся к адсорбированным вакцинам, перед разведением водой центрифугируют.

Подвижная фаза, используемая для разведения исходного стандартного раствора и для проведения хроматографирования, представляет собой фосфатный буфер с рН 6,7.

Для регистрации аналитического сигнала полисорбата 80 используют ультрофиалетовый детектор (УФ- детектор).

После хроматографического разделения определяют количественное содержание полисорбата 80 в испытуемых биологических лекарственных препаратах в сравнении со стандартными растворами, содержащими полисорбат 80 в диапазоне концентраций от 0,02 мг/мл до 0,2 мг/мл.

Концентрация полисорбата 80 в испытуемых биологических лекарственных препаратах рассчитывалась с учетом разведения способами и методами известными специалисту из области техники.

Условия проведения эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии:

- хроматографическая колонка размером 300 мм × 7,8 мм; комнатная температура;

- изократический режим элюирования;

- подвижная фаза, представляющая собой фосфатный буфер с рН 6,7, имеет следующий состав: 0,1 М фосфатный буфер с рН 6,7, содержащий 0,1 М натрия сульфата, 0,1% натрия додецилсульфата; 0,05 % натрия азида;

- скорость потока - 1,0 мл/мин;

- УФ-детектор;

- длина волны - 234 нм.

Расчет содержания полисорбата 80 производят, используя график регрессионной зависимости относительных площадей пика полисорбата 80 от концентрации полисорбата 80 в стандартных растворах.

где:

Y - средняя площадь пика полисорбата 80 на хроматограммах испытуемого раствора;

a - угловой коэффициент графика регрессионной зависимости;

b - свободный член графика регрессионной зависимости;

c - разведение испытуемого образца.

Возможность осуществления заявляемого изобретения раскрыта в следующих примерах.

Пример 1. Оценка линейности способа количественного определения полисорбата 80

Приготовление растворов для построения калибровочного графика.

Готовят исходный стандартный раствор. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают по 0,2 г (точная навеска) полисорбата 80 и растворяют в воде. Доводят объем полученного раствора до метки водой и перемешивают. Концентрация полисорбата 80 в полученном растворе 2 мг/мл. В 5 мерных колб вместимостью 10 мл помещают по 0,1 мл; 0,2 мл; 0,4 мл; 0,6 мл, 1,0 мл исходного стандартного раствора и доводят объемы полученных растворов водой до метки и перемешивают. Концентрации полисорбата 80 в полученных калибровочных растворах 0,02 мг/мл, 0,04 мг/мл, 0,08 мг/мл, 0,16 мг/мл, 0,2 мг/мл соответственно.

Анализируют полученные растворы на хроматографе, фиксируя аналитический сигнал.

Линейность способа в диапазоне концентраций полисорбата 80 от 0,02 мг/мл до 0,2 мг/мл подтверждается:

графиком линейной зависимости площади пика полисорбата 80 от концентрации полисорбата 80 в стандартном растворе (Фиг. 1);

регрессионным уравнением y = 2372059,17х - 7834,52

коэффициентом корреляции R² = 1,0

Выводы. Полученная линейная зависимость аналитического сигнала от концентрации полисорбата 80 (фиг. 1) может быть использована в качестве калибровочной при анализе проб с неизвестной концентрацией полисорбата 80.

Пример 2. Оценка правильности способа количественного определения полисорбата 80 на образцах плацебо методом добавок (Таблица 1).

Подготовка образцов растворов для оценки правильности заявляемого способа проводится в соответствии с описанием изобретения.

Вычисляют процент выявления полисорбата 80 (открываемость) в образце относительно теоретического (истинного) значения. За теоретическое содержание полисорбата 80 в пробе принимают количество полисорбата 80, добавленного в плацебо.

Рассчитывают значения открываемости в процентах для каждой из взятых концентраций. Правильность заявляемого способа подтверждается оценкой открываемости полисорбата 80, добавленного в плацебо: диапазон средних значений процента открываемости для трех концентраций: 98,0 - 105,0 %; среднее значение процента открываемости - 101,0 %. Результаты определения правильности заявляемого способа приведены в Таблице 1.

Таблица 1. Оценка правильности методики определения полисорбата 80 методом эксклюзионной ВЭЖХ (n = 3). Исследования проводили на растворах плацебо с концентрацией полисорбата 80 0,04, 0,1, 0,16 мг/мл.

Теоретическая концентрация полисорбата 80 в образце, мг/мл Измеренная концентрация полисорбата 80 в образце, мг/мл Степень извлечения, % 0,04 0,041 102,5 0,041 102,5 0,042 105,0 0,1 0,103 103,0 0,098 98,0 0,101 101,0 0,16 0,158 98,8 0,161 100,6 0,157 98,1 Среднее значение, % 101,0 Относительное стандартное отклонение, % 2,39 %

Вывод. Данный пример демонстрирует, что заявляемый способ обладает правильностью.

Пример 3. Оценка прецизионности в условиях повторяемости способа количественного определения полисорбата 80 на стандартном образце полисорбата 80 с концентрацией 0,1 мг/мл.

Подготовка образцов растворов для оценки прецизионности заявляемого способа проводится в соответствии с описанием изобретения.

Прецизионность подтверждается оценкой величины относительного стандартного отклонения площадей пиков полисорбата 80, полученной на 6 образцах стандартного раствора: RSD менее 2% (0,4 %).

Вывод. Данный пример демонстрирует, что заявляемый способ обладает прецизионностью.

Пример 4. Оценка валидационных параметров способа количественного определения полисорбата 80 методом эксклюзионной ВЭЖХ (Таблица 2).

Таблица 2. Валидационные параметры способа количественного определения полисорбата 80 методом эксклюзионной ВЭЖХ.

Параметр Мера Критерий приемлемости Результат Линейность Визуальная оценка графика Линейная регрессия R²=1 Коэффициент корреляции R² >0,99 Аналитическая область - - 0,02 - 0,2 мг/мл Повторяемость (n = 6) Относительное стандартное отклонение ≤ 5,0 % 0,4 % Правильность (n = 3) Среднее значение выявления 95,0 - 105,0 % 98,0 - 105,0 %

Пример 5. Определение количественного содержания полисорбата 80 в вакцине пневмококковой полисахаридной конъюгированной адсорбированной тринадцативалентной (препарат 1) заявленным способом (Таблица 3).

0,5 мл суспензии вакцины помещают в центрифужную пробирку объёмом 1,5 мл и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 20 минут до получения надосадочной жидкости, свободной от взвешенных частиц (8000 об/мин в течение 20 минут).

20 мкл надосадочной жидкости анализируют на хроматографе, фиксируя аналитический сигнал полисорбата 80.

Полученное значение аналитического сигнала пересчитывают по калибровочному графику с учетом степени разведения.

Вывод. Полученное значение, 0,18 мг/мл полисорбата 80 находится в диапазоне, определенном нормативной документацией на препарат: 0,14 - 0,24 мг/мл.

Пример 6. Определение количественного содержания полисорбата 80 в препарате рекомбинантного фактора свертывания крови VIII (препарат 2) заявленным способом (Таблица 3).

Содержимое флакона с лиофилизатом восстанавливают в 5 мл воды очищенной.

20 мкл анализируют на хроматографе, фиксируя аналитический сигнал полисорбата 80.

Полученное значение аналитического сигнала пересчитывают по калибровочному графику с учетом степени разведения.

Вывод. Полученное значение, 0,4 мг/флакон полисорбата 80 находится в диапазоне, определенном нормативной документацией на препарат: 0,2 - 0,6 мг/флакон.

Пример 7. Определение количественного содержания полисорбата 80 в комбинированной векторной вакцине для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-2 (препарат 3) заявленным способом (Таблица 3).

20 мкл вакцины анализируют на хроматографе, фиксируя аналитический сигнал полисорбата 80.

Вывод. Полученное значение, 0,6 мг/мл полисорбата 80. Нормы содержания полисорбата 80 в нормативной документации на препарат не приведены.

Таблица 3. Определение полисорбата 80 в биологических лекарственных препаратах (n = 3).

Номинальная концентрация, мг/мл Найденная концентрация, мг/мл Препарат 1 0,14 - 0,24 0.18 Препарат 2 0,04 - 0,12 0,08 Препарат 3 - 0,6

Заявленное техническое решение раскрыто достаточно подробно, с целью ясности понимания, и не должно рассматриваться, как ограничивающее объем притязаний.

Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат только для цели иллюстрации и раскрытия заявленного способа.

Промышленная применимость

Все представленные примеры подтверждают возможность применения заявленного способа в химии, биологии, биотехнологии, медицине, при определении вспомогательных веществ, содержащихся в биологически активных лекарственных препаратах. Способ может применяться в производственной биотехнологии и фармацевтической промышленности, а также в смежных областях.

Поставленная техническая задача, а именно, разработка способа определения полисорбата 80 эксклюзионной ВЭЖХ с УФ - детектированием сигнала в биологически активных лекарственных препаратах, содержащих полисорбат 80 выполнена.

Список литературы

Kim J, Qiu J. Quantitation of low concentrations of polysorbates in high protein concentration formulations by solid phase extraction and cobalt-thiocyanate derivatization. 2014, 806,144-151.

Use of ferric thiocyanate derivatization for quantification of polysorbate 80 in high concentration protein formulations. Savjani N, Babcock E, Khor H.K, Raghani A. Talanta. 2014, 130, 542-546.

Fast and sensitive determination of Polysorbate 80 in solutions containing proteins. Fekete S, Ganzler K, Fekete J. J Pharm Biomed Anal. 2010, 52(5), 672-679.

Fatty acid composition analysis in polysorbate 80 with high performance liquid chromatography coupled to charged aerosol detection. Ilko D, Braun A, Germershaus O, Meinel L, Holzgrabe U. Eur J Pharm Biopharm. 2015, 94, 569-574.

Evaporative light scatteringdetection based HPLC method for the determination of polysorbate 80 in therapeutic protein formulations. Nayak V.S, Tan Z, Ihnat P.M, Russell R.J, Grace M.J. J. Chromatogr Sci. 2012, 50(1), 21-25.

Determination of polysorbate 80 in parenteral formulations by high-performance liquid chromatography and evaporative light scattering detection Nair L.M, Stephens N.V, Vincent S, Raghavan N, Sand P.J. J Chromatogr A. 2003, 1012(1), 81-86.

Stability of the non-ionic surfactant polysorbate 80 investigated by HPLC-MS and charged aerosol detector. Christiansen A, Backensfeld T, Kühn S, Weitschies W. Pharmazie. 2011, 66(9), 666-71.

Rapid characterization of commercial polysorbate 80 by ultra-high performance supercritical fluid chromatography combined with quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Pan J, Ji Y, Du Z, Zhang J. J Chromatogr A. 2016, 1465, 190-196

A simple reversed phase high-performance liquid chromatography method for polysorbate 80 quantitation in monoclonal antibody drug products. Adamo M, Dick L.W. Jr, Qiu D, Lee A.H, Devincentis J, Cheng K.C. Journal of chromatography B. 2010. 878(21), 1865-1870.

Способ измерения количества полисорбата-80 с применением щелочного гидролиза образца с последующей ВЭЖХ. Дегтерев М.Б. 2018, RU2670965C9.

Single step method for the accurate concentration determination of polysorbate 80 Tani T.H, Moore J.M, Patapoff T.W. Journal of Chromatography A. 1997, 786 (1), 99- 106.

Государственная фармакопея РФ, Валидация аналитических методик ОФС.1.1.0012.15 [Электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/ v14 /vol1/275/ (дата обращения 04.07.2023 г.)

Изобретение относится к определению вспомогательных веществ, содержащихся в биологических лекарственных средствах. Раскрыт способ количественного определения полисорбата 80 в биологически активных лекарственных препаратах, выбранных из конъюгированной адсорбционной вакцины, комбинированной векторной вакцины, рекомбинантного фактора крови VIII, с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий разведение биологически активных лекарственных препаратов и исходного стандартного раствора полисорбата 80 с концентрацией 1 мг/мл водой и подвижной фазой, соответственно, до концентрации полисорбата 80 в них от 0,02 до 0,2 мг/мл, далее хроматографируют с использованием подвижной фазы, ультрафиолетового детектора в изократическом режиме при длине волны 234 нм со скоростью потока 1,0 мл/мин, затем проводят количественное определение полисорбата 80, при этом подвижная фаза представляет собой фосфатный буфер с концентрацией 0,1 М и рН 6,7, содержащий 0,1 М натрия сульфата, 0,1% натрия додецилсульфата, 0,05% натрия азида. Изобретение обеспечивает точный и чувствительный способ определения полисорбата 80 методом эксклюзионной ВЭЖХ с УФ-детектированием сигнала в биологически активных лекарственных препаратах. 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 7 пр.

1. Способ количественного определения полисорбата 80 в биологически активных лекарственных препаратах, выбранных из конъюгированной адсорбционной вакцины, комбинированной векторной вакцины, рекомбинантного фактора крови VIII, с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий разведение биологически активных лекарственных препаратов и исходного стандартного раствора полисорбата 80 с концентрацией 1 мг/мл водой и подвижной фазой, соответственно, до концентрации полисорбата 80 в них от 0,02 до 0,2 мг/мл, далее хроматографируют с использованием подвижной фазы, ультрафиолетового детектора в изократическом режиме при длине волны 234 нм со скоростью потока 1,0 мл/мин, затем проводят количественное определение полисорбата 80, при этом подвижная фаза представляет собой фосфатный буфер с концентрацией 0,1 М и рН 6,7, содержащий 0,1 М натрия сульфата, 0,1% натрия додецилсульфата, 0,05% натрия азида.

2. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся тем, что конъюгированную адсорбционную вакцину перед разведением водой центрифугируют при 8000 об/мин в течение 20 мин до получения надосадочной жидкости, свободной от взвешенных частиц.

3. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся тем, что для проведения хроматографирования используют колонку с размером 300×7,8 мм.

4. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся относительным стандартным отклонением 2,39%.