Способ очистки протеолитического комплекса Советский патент 1986 года по МПК C12N9/76 

Изобретение относится к пищевой промышленности и-медицине, в част

ности к способам получения протео- литическик ферментов, и может быть использовано в биотехнологии, а по лученньш комплекс трипсина и химо- трипсина - в- пищевой промьшшенности, медицине, научных исследованиях. Цель изобретения - повьшение активности целевого продукта, содержащего трипсин и химотрипсин с повышенной протеолотической активностью, и снижение себестоимости целевого продукта.

Сущность изобретения заключается в -подборе более мягких условий вцце- ления этих ферментов, испо льзуя фосфатный буфер низкой молярности . для сорбции, а для десррбции целевого продукта слабую соляную кислоту с немедленным доведением рН- элюата до 7,6-7,8., Раствор протеолитическргх ферментов, полученных из непищевых отходов - пилорических придатков лососевых рыб, наносят на колонку, заполненную овомукоид-сефарозой. Колонку выдерживают в перекрытом состоянии в течение 20-30 мин, затем осутДествляют промывку буфером для удаления несорбировавшегося материал и проводят десорбцию целевого продукта 0,001-0,003 М раствором соляной кислоты с последующим быстрым подще- лачиванием элюата до рН 7,6-7,8 с помощью фосфатного буфера.

Пример 1. На колонку, заполненную 10 мл овомукоид-сефарозы 4Б, наносят 80 мг протеолитического комплекса из пилорических придатков лососевых рыб, растворенного в 4 мл 0,04 М фосфа тного буфера рН 7,8 при 4°С, с удельной активностью - трип- синовой 365 ед./мг белка (субстрат БАЮ - бензоил-аргинин метиловый эфир), химотрипсиновой - 343 ед./мг белка (субстрат АТМЭ - ацетил-тирозрш метиловый эфир). Колонку выдерживают в перекрытом состоянии в течение 20 мин, после чего смывают несорбировавшийся материал 50 мл указан- ного буфера, а затем проводят десорб цию целевого продукта с помощью 0,001 М соляной кислоты ( скорость элюции 20 мл/ч) с последующим быст

ВНИИПИ Заказ 1234/36 Тираж 490 Подписное Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

рым (в течение 1-8 мин) подщелачива- нием элюата до рН 7,6 с помощью 1 М . фосфатного буфера. Удельная активность полученного препарата - трипсиновая 1000 ед. /мг белка, химотрипсиновая 2625 ед./мг белка.

Пример 2. На колонку, заполненную 12 мл овомукоид-сефарозы 4Б, наносят 100 мг протеолитического комплекса из пилорических придатков

лососевых, растворенного в 5 мл

0,05 М фосфатного буфера рН /,7 при

4С, с удельной активностью - трип- синовой 380 ед./мг белка (субстрат

), химотрипсиновой 394 ед./мг белка (субстрат АТМЭ). Колонку выдерживают в перекр)1том состоянии в течение 30 мин, после чего проводят смывку балластного материала

60 мл указанного буфера. Десорбцию целевого продукта осуществляют с помощью 0,002 М раствора соляной кислоты с последующим быстрьм под- щелачиванкем элюата ДО рН 7,7 с

помощью 1 М сЬосфатного буфера

рН 7,7, Удельная активность полученного препарата - трипсиновая 1100 ед./мг (субстрат БАМЭ), химотрипсиновая 2200 ед./мг белка.

Пример 3. На колонку, заполненную 15 мл овомукоид-сефарозы 2В, к:аносят 120 мг протеолитического комплекса и пилорических придатков лососевых, растворенного в 4,2 мл

0,06 М фосфатного буфера рН 7,8 при

5С. Удельная активность исходного препарата -трипсиновая 429 ед,/мг белка (субстрат БАМЭ), химотрипсиновая 443 ед./мг белка (субстрат

АТМЭ).

Коло.нку промывают 70 мг указанного буфера, проводят десорбцию целевого продукта с помощью 0,003 М НСЬ и быстро доводят рП элюата до 758 с помощью 1 М фосфатного буфера рН 7,8. Удельная активность полученного пррдукта - трипсиновая 1000 ед./мг белка, химотрипсиновая 4000 ед./мг белка.

Таким образом, обеспечивается повьшение активности целевого продукта по сравнению с исходной - по трипсину в 2,5-3 раза, по химотрип- сину в 5-9 раз.