Способ получения производных @ -фталидил-5-фторурацила Советский патент 1986 года по МПК C07D239/545 A61K31/513 A61P35/00 C07D307/88 C07D405/04 

Изобретение относится к способу получения производных Н-фталиднл-5- -фторурацила - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в меллцине,

Цель изобретения - способ получения новых производных Ы-фталидил-З -фторурацила S обладающих более Sbsco™ кой противоопухолевой актквностьгэ и низкой токсичностью.

П р и м е р 1. N,-фталид1- л-5 -фторурацил (А).

К раствору в 10 мл диметилформами ,да (ДМФА) 1j30 г 5-фторурацила добавляют 0,80 г гидрида натрия (содержание 60%) при перемешивании и охлаждении. Затем по каплям в смесь вводят раствор 4,69 г 3 бромфталида 5 мл ДЩФА, После завершения этой стадии смесь перемешивают 15 мин при охлаждении льдом, а затем - 3 ч при комнатной температуре после чего до бавляют 100 №1 ВОДЬ и продукт экстра гнрутот хлороформом Слой хлороформа промывают водой, .сушат над безвод1-Н1И сульфатом натрия, затем растворитель отгоняют. Остаток дваядсцл промывают 50 мя N-гексана и в него добавляют 20 мл хлороформа. Образовавшиеся кристаллы отфильтровьюают, получают 0,26 г (tO%) бесцветных кристаллов N -фталидйл-5-фторурадила, После перекристаллизации из смеси метанол - этилацетат получают бесцветные иглы., именщие т.пл, 292-296 С (разложение)

Найдено, %: С 55,09; Н 2,89;; N 10,55.

C,H FNj04 ,

Вычислено, %: С 54,97; Н

N 10,68,

I

При хроматографировании в тонком слое кизельгеля 60 системе этилацетат хлррофо рм : гексан- 3:3; t R, 0,19.

ИК-спектр, см (КВг):1790, 1700 и 1660 ( и ) .

Я iP-cпeктpг S (CDCl,,,+dg -DMCK) : : 7,43.--8,17 (бН, м, Аг-Н и Аг-СН) .

П р и м е р 2, К -фталидил-5- -фторурацил (Б).

(1). В раствор 3,44 г .1-ш-5- -фторурацила в 8 мл ДША при перемешивании и охлазвдении добавляют 80 г гидрида натрия (60% содержание). Затем в смесь по каплям добавляют раствор 4,69 г 3-бромфталида в 7 мл ДМФА После завершения этой операции смесь перемеВшвают 3,5 ч прн комнатной тем583252

пературе, добавляют 100 мл воды и продукт экстрагируют хлороформом. Слой хлороформа отделяют и промывают водойS сушат над безводньм сульфатом

5 натрия, растворитель отгоняют. Остаток дважды гфомьшают н-гексаном. по 25 мл, получают неочищенный N,-аце- тил-К2,-фталидш1-5 фторурацил. В этот продукт добавляют 50 мл 0,5 N раство10 ра соляной кислоты и 50 мп эт-анола, а затем смесь дефлегмируют 15 мин. Далее растворитель отгоняют,, в остаток добавляю т воду а образующиеся бесцветные кристаллы собирают фильт15 рацией. После проьшвки водой и сушки продукт нагревают в 15 f-ш хлороформа и выдерживает при дефлегг«фовании в течение 3 мин. После фильтрации в горячем состоянии получают 2,65 г (50%)

20 бесцветньгх кристаллов (Б). После перекристаллизации из метанола, получают бесцветные иглы, имеющие т.Ш1.234 237°С,

Нййд,ено, %: С 55,21j Н 2,96;

25 N 10,42,

.

ВычисленоS %г С 54,97; Н 2,69j N 10,68.

При хроматографировании в тонком

30 слое кизельгеля 60 Fg в системе этилацетат: хлороформ: гвк-сан 3:3:1

R.f -- 0,14.

ЙК-спектр, (КВг) : 1780, 71725 и 1675 ( и ). . ЯМР-спектр: S (CDC1, + dg - DMCK)г I 7,38 8,05 (м, 6Н, Аг-Н и Аг-СН).

(2), Смесь 0,65 г 5-фторурацила, 1,17 г 3-бромфталида, 1,00 г карбоната калия Н 40 мл Д№ перемешивают при д 100-110 С в течение 1,5 ч. Затем растворитель отгоняют при пониженном давлении, В Остаток добавляют воду и продукт экстрагируют этнлацетатом. Слой этиладетата промывают водой и f сушат над безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют. Остаток пере кристаллизовывают из метанола, получают 0,29 г (22%) бесцветных игл, имевяцйЕХ T.toi 234-237 С. Этот продукт полностью идентичен соединению (Б), полученному в ( 1) что устанавливают яри помощи ИК-спактра и тонкослойной хроматографии.

Прим.ер 3. NJ -фталидил-5- 5 -фторурацил (А).

К раствору 4,68 г К9 бензоил-5- -фторурацила в 5 мл ДМФА при п реме- шмванин и охлаждении льдом добавляют

0

0,80 г гидрида натрия (содержание 60%). Затем в смесь по каплям вводят раствор 4,67 г 3-бромфталида в 10 мл ДМФА. Смесь перемешивают при охлаждении льдом в течение 15 мин, а за- тем - еще 1 ч при комнатной температуре.. Полученную реакционную смесь вливают в 200 мл воды и продукт экстрагируют хлороформом. Органический слой проюявают водой и сушат над безводным сульфатом натрия. Далее растворитель отгоняют и остаток промывают петролейным эфиром. Остаток перекристаллизовывают из этилацетата получают 3,63 г (50%) бесцветного порошка с т.пл. 207-210°С. Маточный раствор подвергают обработке на хро- матографической колонке на силикаге- ле, в результате получают 0,67 г (9% кристал лов. выход К -бензоил- -Н|-фталиДил-5-фторурацила 4,30 г

(59%).

ИК спектр, см- (КВг):1780,1750, 1710, 1680 и 1660 ( и ),

ЯМР-спектр: 8(CDC1,) : 6,85(1Н, д, , 6-Н), 7,43 - 8,26 (ЮН, м, Аг-Н и Аг-СН).

Затем смесь 3,0 г упомянутого соединения, 450 МП этанола и 25 мл ук- ,сусной кислоты нагревают до темпера- туры дефлегмирования и выдерживают при этой температуре 35 ч. Выпавший при охлаждении продукт отфильтровывают промывают простым эфиром, полу- чают 0,69 г N, -фталидил-5-фторурацил (А). Кроме того, 0,48 г того же сое- днмеиня получают из маточного раствора. Общий выход составляет 1,07 г (54%). После перекристаллизации из смеси метанол - этилацетат, получают бесцветные иглы с т.пл. 292-296 С (разложение). Этот продукт идентичен продукту (А), полученному в примере 1, по ИК- и ЯМР-спектрам и результа там тонкослойной хроматографии.

Пример 4. Н,-фталидил-5-фторурацил (А). I

(1). В 250 мл диметилформамида (ДМФА) растворяют 19,5 г 5-фторура- цила и 25,87 г 3-хлорфталида и затем добавляют к полученному раствору при перемешивании небольшими порциями 10,35 г карбоната калия (,). После добавления последней порции карбоната калия смесь перемешивают 3,5 ч. Смесь оставляют на ночь, после чего нейтрализуют ее разбавленным раствором соляной кислоты при перемешивани

и охлаждении льдом. Вьтадающий твердый осадок отфильтровывают, промываю последовательно водой и метанолом и высушивают в вакууме. В результате получают 34,14 г (выход 86,9%) целевого соединения в виде белых кристаллов. После перекристаллизации из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные иглы с т.пл. 292-296°С (с разложением). ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1.

(2). В 35 мл диметилацетамида (ДМА) растворяют 2,6 г 5-фторурацила и 3,37 г 3-хлорфталида. К полученному раствору при перемешивании при комнатной температуре добавляют небольшими порциями 1,06 г карбоната натрия. После добавления последней порции карбоната натрия реакционную смесь перемешивают 3,5 ч и затем выливают ее в воду. Выпадающий осадок отфильтровывают и промлвают его последовательно водой и этанолом. Получают 4,01 г (выход 76,5%) бесцветног кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл. 292-29б с (с разложением). ИК-, ЯМР- спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1.

(3). Процесс проводят аналогично примеру 7(2), с той разницей, что вместо 35 мл ДМА используют 30 мл диметилсульфоксида (ДОСО). Реакционн смесь обрабатывают по примеру 4 (2), в результате получают 3,81 г (выход 72,7%) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата пол чают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл. 292-29б С (с разложением). ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1 .

(4). 2,6 г 5-фторурацнла суспендируют в 20 мл ДМФА, добавляют к суспензии 15 мин при перемешивании и

охлаждении ее. льдом 0,96 г 50%-ного гидрида натрия, а затем по каплям - раствор 3,37 г 3-хлорфталида в 10 мл flNKt. После окончания добавления указанного раствора смесь перемешивают 15 мин, охлаждая ее льдом, а затем перемешивание продолжают еще 3 ч при комнатной температуре. После окончания реакции смесь выливают в воду со льдом и перемешивают. Выпадающий оса- док после отделения промывают водой и высушивают в вакууме. В результате получают 4,5 г (выход 85,9%) бесцвет- ного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бес

12

цветные игольчатые кристаллы, имеющи -Т.Ш1. 292-296 С (с разложением). ИКЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1.

(5). Растворяют в 30 мл ДМСО 2,6 г 5-фторурацила и 4,26 г 3-бром- фталида и добавляют к полученному раствору при комнатной температуре 2,76 г карбоната калия. Далее процес проводят аналогично примеру 7(1) После окончания реакции реакционную смесь обрабатывают также по примеру 7(1). Получают 3,54 г (67,6%) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные иголй 1атые кристаллы, имеющие т.пл. 292-296°С (с разложением) , ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1.

(6). Повторяют процесс, описанный в примере 4(2), с той разницей, что вместо 3,37 г 3-хлорфталида используют 4,26 г 3-бромфталида. После окончания реакции смесь обрабатьшают по примеру 4(2). Получают 3,61 г (выход 68,9%) бесцветного кристалли- ;чёского продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные иголчатые кристаллы, имеющие т.пл. 292- 296 С (с разложением), ИК-,-ЯМР- спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта иден- тичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру I .

JQ

f5

35

2583254

Пример 5. Н5-фталидил-5- -фторурацил (Б).

(1). Процесс проводят по примеру 2(1), с той разницей, что вместо 4,69 г 3-бромфталида используют 3,37 г 3-хлорфталида, После окончания реак- .ции реакционную смесь обрабатьшают смесью 0,05 и. НС1 и этанола, а дальнейшую обработку проводят, как в примере 2(1). В результате получают 3,27 г (выход 62,4%) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из метанола получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл. 234-237 С. ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (Б), полученного по примеру 2(1).

(2) Растворяют в 27 мл ДМСО 3,44 г Ы,-ацётил-5-фторурацила и 3,37 г 3- -хлорфталида. После добавления к полученному раствору 2,76 г карбоната калия нeбoльaIи ш порциями реакционную смесь перемеиэгвают 6 ч при комнатной темцературе. После окончания реакции реакционную смесь выливают в воду и проводят Э(кстракдию хлороформом. Хло- роформенньй экстракт промывают водой и высушивают над безводным сульфатом натрия, после чего растворитель отгоняют. К остатку добавляют 50 мл С,05 и. НС1 и 50 мл этанола, а дальнейшую обработку проводят, как в примере 2(1). В результате получают 3,18 г (выход 60,7%) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из метанола

20

25

30

получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл. 234-237 С. По ИК-j ЯMP-cпeктpaм и данным тонкослойной хроматографии полученный продукт полностью идентичен соединению (Б), полученному по примеру 2(1).

Проведены биологические испытания соединений.

Противоопухолевая активность.

(1). Р-388 (1x10 клеток) имплан- тируют в брюшную полость самки-мьшш BDF:, (достигшей возраста 6 нед.). Испытываемый материал суспендируют или растворяют в 0,3Z-HOM водном растворе КМЦ и применяют стоматическим способом один раз в день в течение 9 дн. через день после имплантации. Противоопухолевую активность оценивают отношением количества дней жизни обработанной мыши к аналогичному показателю для контрольной мьшш. В каждой группе содержится пять мышей.

(2). Мет-А (5x10 клеток) и МН- 134 (31x10 клеток) имплантируют подкожным способом Б область бркш.кой но- лости мьшш Babb и СЗН/Не соотв- тст- вённо. Испытываемый материал, сус пенднрованньш или растворенный в ОрЗ%--йом водном растворе КМЦ{ приме- кйют стоматическим способом дважды в день в течение 20 дн. спустя 1 дн по имплантации; вес опухоли о тредепя- ют на 21--Й день после нкплактациио

Противоопухолевая активность против Р--388, Мет-А и МН-134

Тегафур

N-Фталидил- 5- торурац1-ш (соединение А)

N 3-Фталидил- 5-фторуращт (соединение Б)

МН-134

Наблюдалось снижение веса мыши.

Острая токсичность.

Образуют группу из десяти самок мыши 1СР, достигших возраста 6-7 над. Каждый испытываемый материал применяют стоматическим способом. Фиксируют смертность спустя 3 нед и с по- - мощью этих результатов рассчитьшают LDcjj-значение. Получены следующие результаты.

Протквоопухоледую активность оценивают отношением веса опухоли обработанной мьшт к нему опухоли контрольной мыши. Используют 5-6 мышей в каждой группе. С целью сравнения осуществляют ту же процедуру, что была описана для ;N-(2-тeтpaгидpoфypa иKJ)фтopypaцилa (тегаф ф),

Полученные результаты приведены в табл. 1.

Описываемые соединения обладают исключительной активностью по отношению .к твердым опухолям.

Таблица 1

106

136 104

115

124

129

116

118

102

120

104

111

LD5)j-значения (мг/кг): тегафур 1630; соединение А 2500 или более; соединение УБ 2500 или более.

Концентрация в крови.

(самкам) BDF, , достигшим возраста 6 нед, стоматическим способом вводят каждьй испытьгоаемьй материал в дозе 1 ммоль/кг. Спустя некоторое время у мышей берут кровь. После отделения сьторотки от крови кровь разделяют на фракции: на неизменный материал и 5-фторурацил, который участвует в обмене веществ. Далее измеряют концентрацию З-фторурацила и твгафура с использованием метода тонкого слоя в чашке и штамма Staphy- lococcus aureus 209Р в половине количества культурной среды чувствитель Концентрация метаболита (5-фторурацила) в крови ( pi г/мл)

Испытываеиый 0,5 1,0 2,0 4,0 f 7,0 материал

Тегафур 0,33 ± 0,05 0,24 ± 0,01 0,21 ± 0,01 0,10 ± 0,02 0,06 ± 0,01 Соединение А 2,00 ± 0,14 1,14 ± 0,12 0,65 ± 0,04 0,14 ± 0,01 0,10 ± 0,01 Соединение Б 1,95 ± 0,38 3,55 ± 0,24 1,96 t П,23 0,45 + 0,11 0,09 ± 0,01

Таблица 3 Концентрация неизменного материала в крови ( шг/мл)

Испытываемой 0,5 1,0 2,0 4,0 7,0 материал

Тегафур 232,5+37,5 245+25,0 190+10 0 70,3+6,3 60,5+12,5 Соединение А 5,0+0,3 4,1+0,2 2,3±0,3 0,5i+0,1 0,5+0,1 Соединение Б 92,5+5,8 162,5+10,6 11,3+9,3 35,5+4,8 5,3+1,9

Составитель В. Волкова Редактор М. Келемеш Техред М.Ходанич Корректор М. Самборская

Заказ 5043/60-Тираж 379Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

ного диска (Эйкен). Неизменные соединения А и Б определяют при помощи высокоскоростной жидкостной хроматографии. Эксперимент осуществляют с использованием 3-4 влпeй в каждой группе.

Полученные результаты приведены в табл. 2 и 3.

Таблица 2